全 文 :书!"#$%&
,2016,36(8):1522-1527
犃犮狋犪犅狅狋.犅狅狉犲犪犾.犗犮犮犻犱犲狀狋.犛犻狀.
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(20163120,20153048)
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(1982-),2,34,56789,:;<=#$>?@$%78。Email:dingzehong@itbb.org.cn
ABCD:E F,34,G789,:;<=#$>?@$%78。Email:huwei2010916@126.com
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DINGZehong,FULili,TIEWeiwei,YANYan,XIAZhiqiang,WANGWenquan,HU Wei
(InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology,ChineseAcademyofTropicalAgriculturalScience,Haikou571101,China)
犃犫狊狋狉犪犮狋:Cassavacultivar‘Ku50’wasusedasexperimentmaterialsinthisstudy.A HDZipgene,
犕犲犎犅2,wasclonedfromleavesofcassava‘Ku50’byRTPCRmethod.Thisgenecontained882bpopen
readingframe(ORF)encoding293aminoacids.Proteinconserveddomainpredictionshowedthat犕犲犎犅2
proteincontainedseveraldomainssuchasHomeodomain,LeuzipperandHDZip_N,indicatingthisgene
belongedtomembersofHDZipII.Phylogeneticanalysisexhibitedthat犕犲犎犅2hadclosegeneticrelation
shipwithitshomologousgenesin犑犪狋狉狅狆犺犪犮狌狉犮犪狊,犘狅狆狌犾狌狊狋狉犻犮犺狅犮犪狉狆犪and犛犪犾犻狓狆狌狉狆狌狉犲犪.Quantita
tiverealtimePCRanalysisrevealedthatlowtemperature,osmotic,ABAandH2O2treatmentssignificantly
inducedtheexpressionof犕犲犎犅2,butsaltstressdepresseditsexpression.Inaddition,theexpressionof
犕犲犎犅2wasalsoinducedbyshadestress.Theresultsindicatedthat犕犲犎犅2playsimportantrolesin
abioticstressregulationincassava.
犓犲狔狑狅狉犱狊:cassava;HDZip;犕犲犎犅2;cloning;geneexpression
UV(犕犪狀犻犺狅狋犲狊犮狌犾犲狀狋犪Crantz)¿¼;iÀÁ
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nih.gov/gorf/gorf.html)~ GENSCAN (http://
genes.mit.edu/GENSCAN.html)z{jklmn;
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Table1 Primersusedinthisstudy
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Purpose
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Primername
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(5′→3′)
Primersequence
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PCRcondition
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qMeHB2F AATGAATCCACCCACCACCC 95℃30s;95℃10s,55℃10s,72℃20s,40eÖæ
qMeHB2R TATGTGGATGGGGCAGAGGA 95℃30s;95℃10s,55℃10s,72℃20s,40cycles
犃犮狋犻狀qRTPCRÁ$[12]
qRTPCRprimerfor犃犮狋犻狀gene
qActinF TGATGAGTCTGGTCCATCCA 95℃30s;95℃10s,55℃10s,72℃20s,40eÖæ
qActinR CCTCCTACGACCCAATCTCA 95℃30s;95℃10s,55℃10s,72℃20s,40cycles
犕犲犎犅2-fâÑ×Ø
Fullengthamplificationof犕犲犎犅2
MeHB2F CTCAATCCAACGCCACACCT 95℃5min;95℃40s,55℃40s,72℃2min,35eÖæ
MeHB2R ACCAAATCACCCCTACACCC 95℃5min;95℃40s,55℃40s,72℃2min,35cycles
32518Ù /01,:UV犕犲犎犅2)*f?ibc§>
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]ExPASyProtParamÚ-(http://web.
expasy.org/protparam/)>stui>?~
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]CDDÉ.Ð(http://www.ncbi.nlm.nih.
gov/cdd/)lvwxy>。
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2.1 犕犲犎犅2,8:;<
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ê+icDNA 01(Manes.01G084500.1)
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NAWßàl PCR ×Ø,{0ÑáÊeÑ
1191bpia~(â1),{S-fãÓW 犕犲犎犅2。
ú°±128bpi5′UTR、181bpi3′UTR ~
882bpijklmn,S01op293eq-r。
BlastxÜ,犕犲犎犅2PhytozomeUV(ÝÞx
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M.DNAmarker;1.PCR×ØÝ$
â1 犕犲犎犅2-fPCR×ØxÜ
M.DNAmarker;1.ProductofPCR
Fig.1 PCRamplificationresultof犕犲犎犅2
A.éêr01;B.q-r01
â2 犕犲犎犅201î
A.Nucleotidesequence;B.Proteinsequence
Fig.2 Sequencealignmentof犕犲犎犅2
4251 ! " # $ % & 36ë
â3 犕犲犎犅2stuxy>
Fig.3 Proteindomainanalysisof犕犲犎犅2
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â4 犕犲犎犅2¬Ò HB2-fi
>
ThenumberateachnoderepresentstheBootstrapvaluederivedfrom1000replicates,andtheaccessionnumber
ofeachsequenceisgiveninthebracket
Fig.4 Phylogeneticanalysisof犕犲犎犅2andotherHB2genes
6ðÛªW7.54。stuvwxyz{|},
犕犲犎犅2opistgh Homeodomain(cd00086)
~Leuzipper(smart00340)xy,bc±i
犕犲犎犅2-f HDZip>?。®,´ Nñ¯
ÒMd HDZip_N(pfam04618)xy(â3),Ê
ý犕犲犎犅2 HDZipⅡ9。
2.2 犕犲犎犅2,8bcd@A
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Dataareshownasmean±standarddeviation,anddifferentlowercaselettersrepresentsignificantdifferenceamongdifferenttime
points(ortissues)underthesametreatment(犘<0.05)
Fig.5 Expressionpatternsof犕犲犎犅2geneunderdifferentstresstreatments
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