全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA摇 41(4): 411鄄420(2011)
收稿日期: 2010鄄04鄄13; 修回日期: 2011鄄04鄄25
基金项目: 公益性行业(农业)科研专项(200903040)和国家自然基金国际合作项目资助(30921140411)
通讯作者: 彭德良,研究员,主要从事植物线虫分子生物学及控制技术研究; E鄄mail: dlpeng@caas. net. cn
第一作者: 欧师琪,(1980 - ),女,吉林长春人,博士,主要从事植物线虫分子研究。
青海、陕西部分地区禾谷孢囊线虫
rDNA鄄ITS鄄RFLP的特征分析
欧师琪1,2, 彭德良1*, 李 玉2
( 1中国农业科学院植物保护研究所 植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193;
2吉林农业大学, 长春 130118)
摘要: 采自我国青海、陕西等省地 11 个寄生小麦的孢囊线虫群体经形态学鉴定为禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)。 用
PCR技术扩增获得的 rDNA鄄ITS片段长度约为 1 060 bp。 用 Hinf 玉、Taq 玉、Hpa 域、Hae 芋、Pst 玉、Alu 玉 等 6 种限制性
内切酶酶切 ITS扩增产物;青海 10 群体 YBT10A、HY65A、HY61B、ZHZ162B、HY5B、HHX8A、GH132A、HY92A、HY127B、
DT142A 的 6 个酶的 RFLP图谱完全一致;陕西 YL4A群体的 Hae 芋、Hinf 玉和 Hpa 域酶切结果与青海群体的上述 3 种酶
切结果相同,但 Alu 玉和 Pst 玉的酶切结果比青海孢囊线虫群体都多 1 条 1 060 bp片段,而 YL4A群体 Taq 玉酶切结果较
为复杂。 对比已知 Avenae组成员 RFLP图谱,青海群体与北京房山 H. avenae群体的 RFLP图谱一致;而陕西 YL4A的 Alu
玉图谱与 H. avenae法国群体一致,Pst 玉和 Taq 玉却与 Avenae组成员已知酶切结果均不一致。 河南 3 个禾谷孢囊线虫群
体除 Taq 玉酶切结果比青海 CCN群体多 1 条 520 bp片段以外,其他 5 种酶的 RFLP都一致,而与澳大利亚的禾谷孢囊线虫
H. avenae群体的 RFLP图谱一致。
关键词: 禾谷孢囊线虫; 核糖体基因; 限制性片段长度多态性
rDNA鄄ITS restriction fragment length polymorphism of cereal cyst nematodes in
some regions of Qinghai, Shaanxi and Henan Province, China 摇 OU Shi鄄qi1,2, PENG
De鄄liang2, LI Yu1 摇 ( 1State Key Laboratory for Biology of Plant Diseases and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chi鄄
nese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China; 2 Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China)
Abstract: Eleven populations of cereal cyst nematode (CCN) from wheat were collected in collected in
Qinghai and Shaanxi Provinc, all morphologically identified as Heterodera avenae. The rDNA鄄ITS regions of
the populations were amplified with the universal primers AB28 and TW81, a fragment of approximately 1 060
bp was yielded. The fragments were digested with Hinf 玉, Taq玉, Hpa 域, Hae 芋, Pst 玉 and Alu 玉. The
identical digestion patterns were obtained from CCN populations (YBT10A, HY65A, HY61B, ZHZ162B,
HY5B, HHX8A, GH132A, HY92A, HY127B and DT142A) of Qinghai and which were the same species.
The digestion patterns were the same between YL4A population of Shaanxi and the ones of Qinghai by Hae
芋,Hinf 玉 and Hpa 域. The digestion patterns of Pst 玉 and Alu 玉 showed that the YL4A CCN population
was differed from the ones of Qinghai, because it had an extra 1 060 bp fragment. The Taq 玉 restriction pat鄄
tern of YL4A CCN population was complex. The obvious difference could be observed in the Taq 玉 RFLP
pattern, a 520 bp fragment was not presented in the Qinghai CCN populations but in the Henan populations.
According to the known conclusions, the analysis results restriction profiles showed that 10 populations of
Qinghai were the identical RFLP patterns of H. avenae from China. Alu 玉 profile of YL4A population was the
摇
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same as H. avenae from France, then digestion of YL4A population by Pst 玉 and Taq 玉 were different with
either members of Avenae group because of its complex profiles. The Henan CCN populations were the similar
as Qinghai ones except RFLP profile by Taq 玉, and identical with H. avenae from Australia.
Key words: cereal cyst nematode; Heterodera avenae; rDNA; ITS鄄RFLP
中图分类号: S432. 45摇 摇 摇 摇 摇 文献标识码: A摇 摇 摇 摇 摇 文章编号: 0412鄄0914(2011)04鄄0411鄄10
摇 摇 中国是世界最大的小麦生产国,每年产量超过
120Mt,平均产量大约 4t / ha。 我国 1989 年首次在
湖北省天门县岳口镇采集和分离禾谷孢囊线虫
(Heterodera avenae Wollenweber) [1,2],随后在河
南、河北、北京、内蒙古、青海、山东、山西、甘肃、安
徽、陕西和江苏等 13 个省市发现,发生面积达 20
Mha,约占全国小麦种植面积的 10% [3 ~ 9],减产
10% ~ 40% ,冬小麦上尤为严重[10],已成为我国小
麦粮食生产中的重大病害[11]。 国内外大量研究表
明 H. avenae还可侵染的大麦、燕麦等禾本科作物
和杂草[12 ~ 15]。
禾谷孢囊线虫组 ( Avenae group ) 包 括:
H. avenae、 H. arenaria、 H. ustinovi、 H. mani、
H. iri[16]、 H. filipjevi [17]、 H. aucklandica [18]、
H. pratensis[19]和H. australis[20]、俄罗斯远东地区
的 H. riparia[21]、 H. latipons、 H. hordecalis、 H.
bifenestra、H. spinicauda 和 H. turcomanica。 其中
H. latipons、H. hordecalis、 H. bifenestra 、H. filipje鄄
vi 与 H. avenae 形成复合种群[22 ~ 24]。
广义禾谷孢囊线虫 ( cereal cyst nematode,
CCN)组的孢囊线虫种类在孢囊和二龄幼虫( J2)
的形态学和形态测量值方面只有微弱的差异。
Handoo[24]对禾谷孢囊线虫组进行了详细的研究,
编制了 H. avenae组部分种的形态鉴定检索表,随
着组内种类的增加,依靠形态学鉴定越来越困难。
分子技术为鉴定线虫的种类和群体提供有效的途
径,近些年来研究 rDNA鄄ITS鄄RFLP 可快速的鉴定
出孢囊线虫的种类[25],国内外对禾谷孢囊线虫组
rDNA鄄ITS鄄RFLP进行了详细研究[26 ~ 29]。
研究世界各地 H. avenae群体发现其 ITS存在
种内分子多态性,如 Rsa 玉和 Alu 玉可以区分形态
学无差异的狭义禾谷孢囊线虫(H. avenae sensu
stricto)不同群体:1)Alu 玉不能酶切,而 Rsa 玉酶
切后片段大于 1 000 bp 的来自欧洲 H. avenae 群
体; 2)可被 Alu 玉和 Rsa 玉酶切的来自亚洲 H.
avenae群体; 3)前两种谱图的合并型—法国 H.
avenae群体; 4)不能被 Alu 玉酶切而被 Rsa 玉切
成 3 个片段的摩洛哥群体[30]。 Zheng等[31]Hinf 玉
酶切后发现欧洲群体(A 型)和来自印度 H. ave鄄
nae群体(B型)不同于山西太谷的禾谷孢囊群体,
称其为“C 型冶,即亚洲禾谷孢囊群体被 Hinf 玉分
成印度 H. avenae群体和来自北京房山的 H. ave鄄
nae群体。 作者在研究河南郑州禾谷孢囊线虫群
体时发现 Hinf 玉的图谱与山西太谷群体一致[32]。
Subbotin等[20]在澳大利亚采集的禾谷孢囊线
虫群体中发现了一种形态大小与 H. avenae 相似,
但 ITS 产物经 Taq玉酶切后与 H. avenae 有所差
别,命名为 H. australis 新种,并根据 ITS序列构建
了禾谷孢囊线虫组的系统关系,此后 Subbotin
等[33]再次通过 ITS序列和 RAPD分析等分子手段
试图证实 H. australis为新种,但是目前关于 H. au鄄
stralis作为新种的分类仍然存在分歧。
本文通过 rDNA鄄ITS 的 RFLP 方法研究我国
青海、陕西等地小麦上孢囊线虫种群分子特性,分
析我国禾谷孢囊线虫的发育关系。
1摇 材料与方法
1. 1摇 禾谷孢囊线虫的来源和分离
所有孢囊线虫群体由中国农业科学院植物保
护研究所线虫组采集保存:包括河南省郑州市须水
镇和石佛镇的 3 个群体,青海省大通县、湟中县和
湟源县共 12 个群体,陕西省杨凌 1 个群体,内蒙古
鄂尔多斯、临河县共 2 个群体,比利时 2 个甜菜孢
囊线虫 (H. schachtii) 群体 (由比利时 Maurice
Moens 教授提供)。 参见表 1。
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摇
摇 4 期 摇 欧师琪,等:青海、陕西部分地区禾谷孢囊线虫 rDNA鄄ITS鄄RFLP的特征分析
Table 1摇 Sample codes and origin of cereal cyst nematode used in the studies
Codes Origin of sample Species
YBT10A 10A, Yebatai village of Datong county, Qinghai, China Heterodera avenae
HY65A 65A Xinsi village of Huangyuan county, Qinghai, China H. avenae
HY61B 61B Xinsi village of Huangyuan county, Qinghai, China H. avenae
ZHZ162B 162B, Zhuanzui village of Huangzhong county, Qinghai, China H. avenae
HY5B 5B, Xialangwan village of Huangyuan county, Qinghai, China H. avenae
HHX8A 8A, Honghexian village of Datong county, Qinghai, China H. avenae
GH132A 132A, Sujier village of Huangzhong county, Qinghai, China H. avenae
HY92A 92A, Huajian village of Huangyuan county, Qinghai, China H. avenae
HY127B 127B, Changling village of Huangyuan county, Qinghai, China H. avenae
DT142A 142A, Xiegou village of Datong county, Qinghai, China H. avenae
YL4A Yangling 4A, Shanxi, China H. avenae
XS2 2 Xushui village of Zhengzhou, Henan, China H. avenae
SF2 2 Shifu county of ZhengZhou, Henan, China H. avenae
XS3 3 Xushui village of Zhengzhou, Henan, China H. avenae
HZXZA AXinzhuang village of Huangzhong county, Qinghai, China H. geottingiana.
HZXZB BXinzhuang village of Huangzhong county, Qinghai, China H. geottingiana.
HG24 24 Shuanghe village of Linhe county, Inner Mongolian H. glycines
CE18 18 Bainijing village of Oerhtossu, Inner Mongolian Cactodera estonia
HS鄄GL Belgium H. schachtii
HS鄄HN Belgium H. schachtii
摇 摇 分离供试土壤中孢囊线虫,所有供试孢囊群体
经形态学观察鉴定,内蒙古 HG24 是大豆孢囊线虫
H. glycines,CE18 为棘皮孢囊线虫 Cactodera esto鄄
nia,比利时 2 个孢囊线虫群体为甜菜孢囊线虫 H.
schachtii,以上 4 个群体为参照;青海 HZXZA 和
HZXZB2个群体鉴定为豌豆孢囊线虫H. geottingia鄄
na,其他 14 个孢囊群体形态上鉴定为禾谷孢囊线
虫 H. avenae。
1. 2摇 孢囊线虫 DNA提取
挑取单个可育孢囊放入灭菌的 Eppendorf 管
中,加入 14 滋L灭菌的重蒸水, -20 益冷冻 2 h,研
磨 1 ~ 2 min,再加入 3 滋L蛋白酶 K溶液(600 滋g /
mL) ( Promega, USA) 和 3 滋L 10 伊 PCR buffer
(TakaRa,Dalian,China),继续置于 - 20 益冷冻 2
h,将 Eppendorf 管置 65 益下温育 1 h,95 益 10
min,最后在 15 000 r / min离心 1 min,取上清 DNA
悬浮液, -20 益保存备用[27]。
1. 3摇 PCR扩增
本研究采用 50 滋L 的 PCR 反应体系,10 伊
PCR buffer 5 滋L,dNTPs 4 滋L,MgCl2 0. 3 滋L,引物
TW81 和 AB28 各 0. 2 滋L,TaqDNA 多聚酶(5 U /
滋L)0. 3 滋L,模板 DNA 2 滋L,灭菌重蒸水补足到
50 滋L。 同时设置无线虫 DNA 为阴性对照。 试验
所用引物为 TW81(5忆鄄GTTT CCG TAG GTG AAC
CTG C鄄3忆)和 AB28(5忆鄄ATA TGC TTA AGT TCA
GCG GGT鄄3忆) [28],Eppendorf PCR 扩增仪上进行
扩增。 扩增条件为 94 益 5 min;94 益 30 S,55 益 1
min,72 益 1 min,30 益个循环;72 益 5 min,4 益保
存。 DNA扩增后离心,取 5 滋L 扩增产物加 1 滋L
加样缓冲液在 1%琼脂糖凝胶上电泳,用 1 伊 TAE
作为电泳缓冲液,150 v 下电泳 25 min,用 EB 染
色,电泳后在紫外光下观测并拍照。
1. 4摇 RFLP分析
取 7 滋L PCR 产物用以下 6 种限制性内切酶
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摇
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Alu 玉、Hpa 域、Hae 芋、Hinf 玉、Pst 玉和 Taq 玉酶
切,在 37 益水浴中过夜,酶切后的 DNA 加 1 滋L
加样缓冲液,在 1. 5%琼脂糖凝胶上电泳,用 1 伊
TAE作为电泳缓冲液,150 v下电泳 35 min,用 EB
染色,电泳后在紫外光下观测并拍照[28]。
2摇 结果与分析
2. 1摇 孢囊线虫 rDNA鄄ITS的 PCR扩增结果
所有供试孢囊线虫群体 DNA经 PCR扩增后,
片段约为 1 000 bp,在阴性对照中没有 PCR 扩增
产物(图 1)。
2. 2摇 孢囊线虫 RFLP分析结果
Hinf玉、 Hae 芋、 Hpa 域、 Alu 玉、 Pst 玉和
Taq 玉 6 种酶均可酶切所有供试孢囊线虫群体。
用 Hinf 玉、Hae 芋、Hpa 域酶切的 rDNA鄄ITS
的 PCR 产物,条带单一清晰。 青海 9 个群体
ZHZ162B、 HY5B、 GH132A、 DT142A、 HY127B、
HY92A、HY65A、HY61B 和 YBT10A 经 Hinf 玉酶
切后产生 820 和 200 bp 2 条片段;Hae 芋产生 420、
360 和 200 bp的 3 条 RFLP 片段;Hpa 域产生 920
和 120 bp 的 RFLP 片段,群体间图谱相同;陕西
YL4A群体与青海群体一致;与河南 3 个群体
XS2、XS3、SF2 的图谱片段相同,无明显差异(见图
2鄄A、B、C)。
摇 摇 Alu 玉酶切青海 CCN 群体 ZHZ162B、HY5B、
GH132A、 DT142A、 HY127B、 HY92A、 HY65A、
HY61B和 YBT10A,9 个群体产生相同的 RFLP片
段,分别为 560 和 480 bp。 而陕西杨凌 YL4A线虫
群体除产生与前者相同片段外还多 1 条 1 000 bp
的片段;与青海 9 个群体有明显差异,比较河南 3
个群体的图谱,发现青海与河南 CCN群体一致,只
有陕西 CCN群体有差异(图 3)。 这与观察 Pst 玉
酶切结果一致,同样是 YL4A 群体比青海和河南
CCN 群体所得到的片段多 1 条 1 000 bp 片段
(图 4)。
而 Taq 玉酶切图谱表现出更多差异:青海 10
个 CCN 群 体 YBT10A、 HY65A、 HY61B、
ZHZ162B、 HY5B、 HHX8A、 GH132A、 HY92A、
HY127B、DT142A产生 450、280 和 150 bp条带,10
个群体间无差别;陕西 YL4A 线虫群体被 Taq 玉
酶切呈复杂谱带,与青海 CCN群体存在明显差异。
而青海 CCN群体与河南 3 个 CCN 群体产生的图
谱相比,明显少 1 条 540 bp的片段(图 5)。
青海 HXZXA和 HZXZB群体、比利时 HS鄄HN
和 HS鄄GL 群体、 内蒙古 HG24 和 CE18 等由
Hinf 玉、Hae 芋、Hpa 域、Alu 玉、Pst 玉和 Taq 玉 6
种酶酶切后,可观察到 HXZXA 和 HZXZB 群体产
生相同的片段,但与上述 CCN 群体、HS鄄HN 和
HS鄄GL、HG24 或 CE18 群体具有各不相同的特征
性 RFLP图谱(图 2 ~图 5)。
Fig. 1摇 Amplification products of rDNA鄄ITS of 17 tested cyst nematode populations in China
M:DL2000 marker;Lanes 1鄄17: HY127B, HY65A, ZHZ162B, HY5B, CE18, DT142A, YL4A, GH132A, YBT10A,
HY61B, HZXZA, HY92A, XS3, HG24, SF2, XS2, HHX8A; Lane 18: Negative control.
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摇
摇 4 期 摇 欧师琪,等:青海、陕西部分地区禾谷孢囊线虫 rDNA鄄ITS鄄RFLP的特征分析
Fig. 2摇 Restriction fragments profiles of amplified rDNA鄄ITS regions of
19 tested populations of cyst nematodes
A:Hinf 玉; B:Hae 芋; C:Hpa 域. M: DL2000 marker; Lanes 1鄄19: SF2, XS2, XS3, ZHZ162B, HY5B,
GH132A, DT142A, HY127B, HY92A, HY65A, HY61B, YBT10A, YL4A, HS鄄GL, HS鄄HN, HG24,
HZXZA, HZXZB and CE18; Lane 20: Unrestricted PCR product.
Fig. 3摇 Restriction fragments profiles of amplified rDNA鄄ITS regions of
19 tested populations of cyst nematodes digested by Alu 玉
M: DL2000 marker; Lanes 1鄄19: SF2, XS2, XS3, ZHZ162B, HY5B, GH132A, DT142A, HY127B,
HY92A, HY65A, HY61B, YBT10A, YL4A, HS鄄GL, HS鄄HN, HG24, HZXZA,
HZXZB and CE18; Lane 20: Unrestricted PCR product.
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摇
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Fig. 4摇 Restriction fragments of amplified rDNA鄄ITS regions of 18 tested
populations of cyst nematodes digested by Pst 玉
M:DL2000 marker; Lanes 1鄄18: SF2, XS2, XS3, ZHZ162B, HY5B, GH132A, DT142A,
HY127B, HY92A, HY65A, HY61B, YBT10A, YL4A, HS鄄GL, HS鄄HN, HG24,
HZXZA and CE18; Lane 19: Unrestricted PCR product.
Fig. 5摇 Restriction fragments of amplified rDNA鄄ITS regions of 20 tested
populations of cyst nematodes digested by Taq 玉
M: DL2000 marker; Lanes 1鄄20: SF2, XS2, XS3, ZHZ162B, HY5B, GH132A, DT142A, HY127B,
HY92A, HY65A, HY61B, YBT10A, HY126B, YL4A, HS鄄GL, HS鄄HN, HG24, HZXZA,
HZXZB and CE18; Lane 21: Unrestricted PCR product.
3摇 结论与讨论
应用 rDNA鄄ITS鄄RFLP方法是对于线虫种的鉴
定和区分的重要辅助手段,尤其在孢囊线虫种类鉴
定方面的应用更为广泛。 Subbotin 等[25]用 26 种
限制性内切酶消解 25 种孢囊线虫,通过应用 2 个
限制性内切酶或是多个酶将它们区分开。 Subbotin
等[33]在使用内切酶研究 H. avenae 复合种时,发现
Hinf 玉是区别禾谷孢囊线虫 H. avenae 欧洲群体
和中国房山群体的关键酶,Taq 玉和 Pst 玉可将菲
利普孢囊线虫(H. filipjevi)与禾谷孢囊线虫组内其
他种群分开,Cfo 玉可用于区分 H. mani、H. auck鄄
landica和 H. ustinovi及组内其他种群,目前还没有
一种酶能将禾谷孢囊线虫欧洲 H. avenae 群体与
H. arenaria、及中国房山 H. avenae 群体与 H. prat鄄
ensis 区分开。 有时酶切后片段长度之和大于未酶
切的片段长度,很多线虫种类都存在这种称为异质
性的现象[34 ~ 36]。
为了能直观地鉴别国内小麦上孢囊线虫的种
类,本研究用可区分禾谷孢囊线虫组的关键酶 Hinf
玉、Taq 玉、Hpa 域、Hae 芋、Pst 玉和 Alu 玉来酶切
rDNA鄄ITS 的 PCR 产物。 青海 10 个 CCN 群体
YBT10A、 HY65A、 HY61B、 ZHZ162B、 HY5B、
HHX8A、GH132A、HY92A、HY127B和 DT142A的
所有 6 个酶的 RFLP 图谱是一致的,说明青海 10
个群体间无差异,对比 Subbotin 等[33]归纳的孢囊
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摇 4 期 摇 欧师琪,等:青海、陕西部分地区禾谷孢囊线虫 rDNA鄄ITS鄄RFLP的特征分析
线虫 RFLP 结果,本研究与其所称 H. avenae RFLP
结果一致,这也与形态学鉴定结果一致。 陕西杨凌
群体 YL4A与青海 CCN群体的 Hinf 玉、Hpa 域和
Hae 芋酶切图谱相同,而 Alu 玉和 Pst 玉的酶切结
果明显不同于青海 CCN 群体,对比后发现与 H.
avenae法国群体的 Alu 玉酶切图谱 (566、482、
1044)一致,但又不同于 Avenae 组内任何一种的
Pst 玉结果(704,340 或 713、210、130);当观察 Taq
玉酶切图谱时,YL4A 更表现出其复杂的一面,分
子特征表现出明显的差异性又让 H. avenae 组更
为复杂,陕西杨凌可能是个混合种群,这需要更详
尽的研究。
在研究青海和陕西 H. avenae 的同时,我们发
现河南 3 个 CCN 群体与青海的 CCN 群体除
Taq 玉酶切图谱中比青海 10 个群体的多 1 条 540
bp的片段外,其他 5 种酶结果完全一致,而正是这
一点是区别 Subbotin 等[20]命名的“澳洲孢囊线虫
新种 冶 ( Heterodera australis Subbotion, Sturhan,
Rumpenhorst&Moens,2002)的关键特征。 Subbotin
等[20]通过从澳大利亚征集禾谷孢囊线虫群体,发
现澳大利亚的禾谷孢囊线虫(H. avenae) ITS 产物
经 Taq玉酶切后与欧洲经典的禾谷孢囊线虫(H.
avenae)有所差别,据此命名为澳洲孢囊线虫新种
H. australis 新种,并根据 ITS 序列构建了禾谷孢
囊线虫组的系统关系,将 H. australis和 H. praten鄄
sis及中国房山的 H. avenae 群体聚为同一分
支[20]。 此后 Subbotin 等[33]试图再次通过 ITS 序
列和 RAPD 分析等分子手段确立新种的分类地
位。 然而“澳洲孢囊线虫 H. australis冶来源和作为
新种的地位确立一直存在着争议。
关于澳大利亚的禾谷孢囊线虫的来源,研究人
员通常赞成 Meagher [37]和 Brown [38]提出的 19 世
纪晚期,禾谷孢囊线虫从欧洲传入南澳大利亚的假
设[39];1904 年在南澳小麦上发现这种禾谷孢囊线
虫,形态与欧洲的禾谷孢囊线虫一致,这是澳大利
亚有禾谷孢囊线虫发生的的最早证据[40]。 Fisher
[41]的研究表明在澳大利亚本土禾本科植物上还未
发现 CCN。 小麦属(Triticum)、燕麦属(Avena)、大
麦属(Hordeum)、黑麦草属(Lolium)、虉草属(Pha鄄
laris)和黑麦属(Secale)等禾谷孢囊线虫喜好和偏
好的寄主都是 19 世纪引入到澳大利亚 [39]。 在澳
大利亚,科学家通过研究证实其禾谷孢囊线虫
(H. avenae)群体致病型与欧洲致病性不同,命名
为Ha13 [42 ~ 44]。
Thorne[45]观察到澳大利亚和欧洲的禾谷孢囊
线虫群体在形态学上存在一些差异,说明存在地理
变异,甚至可能建立独立的种。 Meagher[46] 和
McLeod &Khair[47]将澳大利亚群体与来自欧洲和
加拿大的 H. avenae 群体比较,发现它们不能代表
独立的种。 他们认为这些个体形态测量值上的差
异的原因是环境影响的结果以及测量方法的差异
引起导致对澳大利亚 H. avenae 鉴定的混乱。
Meagher[46]给出了一份维多利亚海湖镇临近的田
地收集到的一个群体包括绘图和显微照片详细的
说明。 McLeod和 Khair[47]提供了来自维多利亚、
南澳、西澳和新南威尔士的 7 个群体测量和形态详
细数据。
Rumpenhorst[48]发现形态鉴定为 H. avenae 的
3 个澳大利亚群体与欧洲和以色列群体的比较,蛋
白部分有差异。 Ferris 等[49]也证实澳大利亚 H.
avenae群体与瑞典、俄勒冈和爱达荷这 3 个彼此不
同的群体的 2鄄DGE有更大的不同。 但是,Bossis &
Rivoal[50]用同样的方法揭示澳大利亚 H. avenae群
体和法国 H. avenae 群体相似,因此支持澳大利亚
H. avenae的来源于北欧的争论。 根据 Bekal等[27]
的数据,澳大利亚 H. avenae的 ITS 片段 Hinf 玉和
Taq 玉产生的 RFLP图谱和其他 H. avenae 群体一
致。 但 Rivoal等[51]后来报道把澳大利亚 H. ave鄄
nae从 H. avenae sensu stricto中区别出来。
最近,澳大利亚学者不承认这种没有可靠的形
态学和形态测量特征支撑的分类方法,而将澳大利
亚禾谷孢囊线虫(H. avenae)描述为一个新种“澳
洲孢囊线虫新种(Heterodera australis)冶的结论,他
们认为澳大利亚的禾谷孢囊线虫是从欧洲引
入[52,53]。 本研究中来自河南的 3 个禾谷孢囊线虫
群体(SF2、XS2、XS3)的 ITS 的 RFLP 图谱与“澳
大利亚 H australis冶群体相同,将禾谷孢囊线虫
SF2、XS2、XS3 等 3 个群体的 ITS 序列与“H. aust鄄
ralis冶以及欧洲“禾谷孢囊线虫冶(H. avenae)的序
列比对分析,“澳洲孢囊线虫冶(H. australis)与“禾
谷孢囊线虫冶(H. avenae)仅仅存在 6 个碱基的差
异,相似性达到 99% ,形态上没有显著差异。 作者
认为,目前没有更多的数据支持“澳洲孢囊线虫冶
(H. australis),作为独立的新种仍然有待确认,澳
714
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大利亚的禾谷孢囊线虫仍然作为禾谷孢囊线虫
(H. avenae)的一个致病型 Ha13 更合适。
参考文献
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