全 文 ：植物病理学报
ACTA PHYTOPATHOLOGICA SINICA摇 41(3): 240鄄246(2011)
收稿日期: 2010鄄03鄄11; 修回日期: 2011鄄03鄄15
基金项目: 科技部国际合作项目 (2009DFB30230); 国家自然基金国际合作项目 (30921140411); 公益性行业 (农业)科研专项
(200903040)资助
通讯作者: 彭德良, 研究员,博士生导师,主要从事植物线虫分子生物学及生物安全研究; E鄄mail: dlpeng@ippcaas. cn
第一作者: 顾晓川(1984 - ),男,河南南乐人,硕士,主要从事植物线虫分子生物学研究; E鄄mail: gxc55@163. com。
禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)纤维素结合
蛋白基因(Ha鄄cbp鄄1)的克隆和序列分析
顾晓川1,2, 彭德良1, 彭 焕1,2, 龙海波1, 王高峰1, 黄文坤1, 何月秋2
( 1中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室, 北京 100193;
2云南农业大学农业生物多样性与病虫害控制教育部重点实验室, 昆明 650201)
摘要: 禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)是中国小麦上的重要病原线虫。 纤维素结合蛋白基因是一种重要的植物线虫寄
生和致病相关基因。 用同源克隆的方法从禾谷孢囊线虫寄生前二龄幼虫中克隆出一种纤维素结合蛋白新基因 Ha鄄cbp鄄1
(GenBank 注册号 GQ178086)cDNA序列。 Ha鄄cbp鄄1 基因 cDNA包含 1 个开放阅读框,编码 131 个氨基酸残基的蛋白质,预
测蛋白由 1 个长度为 18 氨基酸残基的信号肽和 1 个纤维素结合区域(CBD)组成。 Ha鄄cbp鄄1 的基因组 DNA序列含有 2 个
内含子。 预测的禾谷孢囊线虫纤维素结合蛋白(HA鄄CBP鄄1)序列与大豆孢囊线虫纤维素结合蛋白(HG鄄CBP鄄1)序列有
60%的同一性和 76%的相似性,与甜菜孢囊线虫纤维素结合蛋白(HS鄄CBP鄄1)序列有 60%的同一性和 75%的相似性。 本
研究首次从禾谷孢囊线虫中成功克隆出 CBP蛋白基因。
关键词: 禾谷孢囊线虫; 纤维素结合蛋白基因(Ha鄄cbp鄄1); 基因克隆
Molecular cloning and sequencing of cellulose binding protein gene (Ha鄄cbp鄄1)
from the cereal cyst nematode(Heterodera avenae) 摇 GU Xiao鄄chuan1,2, PENG De鄄liang1,
PENG Huan1,2, LONG Hai鄄bo1, WANG Gao鄄feng1, HUANG Wen鄄kun1, HE Yue鄄qiu2 摇 ( 1The State Key La鄄
boratory for Biology of Disease and Insect Pests, Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing
100193, China; 2Key Laboratory of Agricultural Biodiversity and Pests Control, Ministry of Education, Yunnan Agricultural U鄄
niversity, Kunming 650201, China)
Abstract: The cereal cyst nematode,Heterodera avenae,is an important nematode pathogen of wheat in Chi鄄
na. The cellulose binding protein genes are the important parasitism genes for invasion of plant parasitic nema鄄
todes. The cDNA sequence of Ha鄄cbp鄄1 (GenBank accession GQ178086 ) was cloned by RACE kit based on
homologous cloning method. The results showed that the cDNA sequence of Ha鄄cbp鄄1 contained an open rea鄄
ding frame, which encoding 131 amino acids with a predicted signal peptide sequence for secretion and a cellu鄄
lose鄄binding domain. The DNA sequence of Ha鄄cbp鄄1 contained two introns with the length of 932 bp. The
predicted HA鄄CBP鄄1 amino acid sequence had 60% identity and 75% 鄄76% similarity with HS鄄CBP鄄1 and HG鄄
CBP鄄1.
Key words: cereal cyst nematode; cellulose鄄binding protein(Ha鄄cbp鄄1); gene clone
中图分类号: S432. 45摇 摇 摇 摇 摇 文献标识码: A摇 摇 摇 摇 摇 文章编号: 0412鄄0914(2011)03鄄0240鄄07
摇 摇 禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae Wol1. , Ce鄄 real cyst nematode, 简称 CCN)又称燕麦孢囊线
摇
摇 3 期 顾晓川,等:禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)纤维素结合蛋白基因(Ha鄄cbp鄄1)的克隆和序列分析
虫,是危害小麦、大麦、燕麦、黑麦等禾谷类作物和
牧草的世界性重要病原线虫[1,2]。 自 1874 年在德
国发现以来,已在世界上 40 多个国家发生危害,在
澳大利亚的维多利亚和南澳大利亚一般减产 23%
~ 50% ,严重时减产 73% ~ 89% ,年经济损失
7 000 万美元[3,4]。 我国自 1989 年 7 月在湖北省
天门县岳口镇首次发现以来,至今已经发现在湖
北、河南、河北、山东、山西、青海、内蒙古、北京、安
徽、陕西、甘肃、宁夏等 132 个省(市)均有发生分
布,发生面积约 200 万公顷[5]。
孢囊线虫侵染期二龄幼虫通过口针穿刺寄主
细胞壁进入植物根部,寻找适合的细胞建立取食位
点,进行定居阶段的寄生生活。 为了维持它们在根
部侵入后的固定内寄生,孢囊线虫分泌物要刺激并
诱导寄主细胞形成复杂的取食位点———合胞体,从
而引起细胞质和细胞核的改变及大量的细胞壁重
组和溶合[6]。 孢囊线虫在植物根部的穿刺、迁移、
形成合胞体及寄生和取食,均与口针分泌物中食道
腺细胞致病基因的表达蛋白相关[7,8]。 为了防御
病原线虫的侵染,植物细胞壁的机械韧度和硬度发
生了相应的进化,形成纤维素和果胶质等结构阻止
病原线虫的入侵。 纤维素结合区域 (Cellulose鄄
binding domain, CBD) 是线虫分泌的纤维素酶与
跟植物纤维素底物结合的功能区域,单独由 CBD
组成的蛋白为纤维素结合蛋白 (Cellulose鄄binding
proteins, CBPs)。 CBDs 可以分成 13 个不同的家
族,不同家族的糖基水解酶和非水解蛋白各不相
同。 CBPs通过在底物表面增加有效酶浓度来介导
纤维素酶和难溶底物的互作结合,促进纤维素的水
解) [9]。 此外,CBPs 也能促进纤维素的非水解分
解[10]。 至今已经从线虫亚腹食道腺细胞和背食道
腺细胞分泌物中分离鉴定了许多种纤维素结合蛋
白及其他致病蛋白[6,7,11 ~ 13]。 在已克隆的植物寄
生线虫的纤维素酶和扩展蛋白中均含有和 CBP高
度同源的纤维素结合域(CBD),到目前为止已从
大豆孢囊线虫,甜菜孢囊线虫和根结线虫中克隆出
5 个 CBP蛋白基因[14 ~ 17],但禾谷孢囊线虫中 CBP
蛋白基因还没有见报道。
本文通过同源克隆的方法克隆了禾谷孢囊线
虫二龄幼虫纤维素结合蛋白基因 Ha鄄cbp鄄1 的 cD鄄
NA及 DNA序列并进行了序列分析,期望为探索
禾谷孢囊线虫与小麦等寄主植物的互作关系奠定
基础。
1摇 材料与方法
1. 1摇 孢嚢收集和二龄幼虫孵化
禾谷孢囊线虫成熟孢囊采集于河南省濮阳市
南乐县近德固乡佛善村菜园南地块。 用蔗糖离心
法从土壤中分离孢囊,挑取孢囊置于 4益低温下处
理 1 个月,然后放于 16益温箱中孵化二龄幼虫。
1. 2摇 试剂
Trizol Reagent、反转录试剂盒 (SuperScriptTM
芋 First鄄strand Synthesis System for RT鄄PCR)、5忆
RACE试剂盒(5忆RACE System for Rapid Amplifi鄄
cation of cDNA Ends, Version 2. 0 kit) 均购自 In鄄
vitrogen公司;3忆RACE试剂盒(3忆鄄Full RACE Core
Set Ver. 2. 0)购自 Takara 公司;pGEM鄄Teasy 试剂
盒购自 Promega 公司;DNA Marker、DH5a 感受态
细胞、凝胶回收试剂盒均购自天根生化公司。
1. 3摇 总 RNA和基因组 DNA提取
取 0. 2 mL二龄线虫,采用 Trizol 法提取线虫
总 RNA[18];采用酚氯仿抽提法提取线虫基因组
DNA。[19]
1. 4摇 目的基因片段克隆和 RACE
根据已报道的大豆孢囊线虫和甜菜孢囊线虫
纤维素结合蛋白基因序列自主设计了简并引物
CBP鄄3B和 CBP鄄4(表 1),以第一链 cDNA 为模板
进行 PCR 扩增,克隆目的基因 cDNA 核心片段。
反应参数为:94益预变性 5 min;94益变性 30 s,
55益退火 30 s,72益延伸 30 s;35 个循环;72益延伸
10 min。 PCR产物经电泳、切胶、回收、连接转化、
挑选阳性克隆, 送上海生工生物工程技术服务有
限公司测序。 根据获得的基因片段序列分别设计
3忆RACE 引物 GSP鄄1、 GSP鄄M 和 5忆 RACE 引物
GSP鄄1、GSP鄄2、nGSP1,进行 3忆和 5忆末端扩增,具体
步骤参照 Takara和 Invitrogen 公司试剂盒手册。
1. 5摇 cDNA 全长和基因组 DNA全长克隆
根据已测序获得的 cDNA 拼接全长序列,设
计全长引物 Se鄄2 和 CBPL鄄A2,分别以 cDNA 和基
因组 DNA 为模板进行 PCR 扩增。 反应参数为:
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植物病理学报 41 卷
94益预变性 5 min;94益变性 30 s,53益退火 30 s,
72益延伸 1 min;35 个循环;72益延伸 10 min。
1. 6摇 序列分析
分别使用 DNAMAN 和 ClustalW 软件进行核
苷酸序列的翻译和氨基酸序列的比对分析,使用在
线工具 http: / / www. expasy. ch / tools / pi_tool. html
进行蛋白质等电点和分子量的预测,使用 SignalP
3. 0 Server 在线工具 http: / / www. cbs. dtu. dk /
services / SignalP /预测蛋白质前体信号肽,使用在
线工具 http: / / www. cbs. dtu. dk / services /对蛋白
质序列中可能存在的糖基化位点和磷酸化位点进
行预测。 使用 MEGA 4. 0 采用 ME 法进行分子系
统树的构建。
2摇 结果与分析
2. 1摇 Ha鄄cbp鄄1 基因克隆结果
通过同源克隆方法扩增得到禾谷孢囊线虫纤
维素结合蛋白 Ha鄄cbp鄄1 目的基因的 cDNA 片段
(图 1鄄A),测序获得片段大小为 115 bp。 通过
BLAST比对分析表明, 该片段与已报道的 Hg鄄
cbp鄄1 和 Hs鄄cbp鄄1 基因有较高的同源性。 经过
RACE技术分别获得其 3忆末端序列为 641 bp(图 1鄄
B)、5忆末端序列为 375 bp (图 1鄄C)。 利用全长引
物从禾谷孢囊线虫 cDNA 和基因组 DNA 模板中
分别克隆得到 cDNA全长为 464 bp(图 1鄄D),基因
组 DNA全长为 932 bp (图 1鄄E)。
Table 1摇 Oligonucleotide primers designed in experiments
Number of primer Primer sequence(5忆寅3忆)
CBP鄄3B G(C)CCAATTCCTGACACCTGT(C)
CBP鄄4 TCACATTCGGCTTCCCATC(T)
GSP鄄1 CAGTACGCATTGGACAACACTT
GSP鄄M CTTGCTTCCAGGCGAAACTT
GSP鄄1 CCCACTGCCAACCAAT
GSP鄄2 GGCATCAAAAGTTTCGCCTGGAAGCAAG
nGSP1 TCCAATGCGTACTGACCACA
Se2 GTCTTACTTTTTTTGCTATGATTTGGAT
CBPL鄄A2 ATGGCAATCCATCTTTGAATATGA
Fig. 1摇 PCR product of cDNA fragment (A), 3忆 terminal(B), 5忆 terminal(C),
cDNA (D) and DNA sequence (E) of CBP gene of Heterodera avenae
M: DL 2000 plus marker in Fig. 1鄄A, C, D, E; DL 2000 marker in Fig. 1鄄B.
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摇
摇 3 期 顾晓川,等:禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)纤维素结合蛋白基因(Ha鄄cbp鄄1)的克隆和序列分析
2. 2摇 Ha鄄cbp鄄1 基因序列分析
Ha鄄cbp鄄1 基因(GenBank 登录号 GQ178086)
cDNA全长为 964 bp(不包含多聚腺苷酸尾),其中
5忆端非编码区 (UTR) 为 55 bp, 3忆端非编码区
(UTR)为 513 bp (图 2)。 开放阅读为 393 bp,编
码一个长度为 131 个氨基酸残基的蛋白,其理论分
子量为 14. 5 kD, 理论等电点为 8. 27。 Ha鄄cbp鄄1
基因组 DNA 全长包含 932 bp 核苷酸,利用 NCBI
在线 Spidey分析,显示该基因含有 2 个内含子(图
3),长度分别为 117 bp和 419 bp,它们都符合真核
生物基因剪接位点 GT鄄AG规则。
Fig. 2摇 Complete nucleotide and deduced amino acid sequences of the
cDNA of cellulose binding protein gene
The predicted 18 amino acid signal peptide for secretion is indicated in bold type. A putative O鄄linked glycosylation
site (Thr31) is underlined. A putative N鄄linked glycosylation site (Asn114) is underlined. The TAA stop codon
is marked with an asterisk and the putative polyadenylation signal sequence (aaaaaaaa) is underlined.
Fig. 3摇 The genomic sequence of cellulose binding protein gene which contained two introns
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2. 3摇 蛋白质比对分析
预测的禾谷孢囊线虫纤维素结合蛋白 HA鄄
CBP鄄1 与大豆孢囊线虫纤维素结合蛋白 HG鄄CBP鄄
1 有 60%的一致性和 76%的相似性,与甜菜孢囊
线虫纤维素结合蛋白 HS鄄CBP鄄1 有 60%的一致性
和 75%的相似性,但 HA鄄CBP鄄1 比 HG鄄CBP鄄1 和
HS鄄CBP鄄1 均少 1 个氨基酸残基。 比对结果显示
HA鄄CBP鄄1 与已报道的孢囊线虫 CBP 一样,仅有 1
个信号肽和 1 个 CBD[17,20],没有保守的色氨酸,但
具有大部分 CBD的保守特征,如含有少量带电荷
的氨基酸残基,含有大量的羟氨基酸残基、保守的
天冬酰胺和甘氨酸残基。 而根结线虫的 CBP 均有
1 个信号肽、1 个 C端 CBD和 N端 71 个未知功能
的氨基酸残基[14,16] (图 4)。 同 HG鄄CBP鄄1 一样,
HA鄄CBP鄄1 含有 7 个芳香族氨基酸,其中有 4 个酪
氨酸(Y44、Y53、Y74 和 Y87) 和 3 个苯丙氨酸
(F48、F61 和 F101),它们在 CBD与纤维素酶互作
中可能起关键作用。 根据在线工具预测,该氨基酸
序列存在 1 个潜在的 O位糖基化修饰位点和 1 个
N位糖基化修饰位点,它们分别是第 31 个苏氨酸
和第 114 个天冬酰胺(图 2)。
系统发育树分析显示 3 个根结线虫 CBP 聚为
一支,3 个孢囊线虫 CBP 聚为一支,明显地分辨出
属、种间的亲缘关系;在孢囊线虫分支上大豆孢囊
线虫和甜菜孢囊线虫处于同 1 个分支,禾谷孢囊线
虫单独 1 个分支,说明大豆孢囊线虫与甜菜孢囊线
虫的亲缘关系较近,而与禾谷孢囊线虫的亲缘关系
相对较远(图 5)。
Fig. 4摇 Sequence alignment between deduced amino acid sequence of cellulose binding
protein HA鄄CBP鄄1 from Heterodera avenae (GenBank Accession No. GQ178086)
with a cellulose binding protein from other nematodes
MA鄄CBP鄄1,cellulose binding protein from Meloidogyne arenaria (AM491768); MJ鄄CBP鄄1,cellulose binding protein from
Meloidogyne javanica (AM491771); MI鄄CBP鄄1,cellulose binding protein from Meloidogyne incognita (AF049139);HS鄄CBP鄄1,
cellulose binding protein from Heterodera schachtii (EU328302); HG鄄CBP鄄1,cellulose binding protein from Heterodera glycines
(AF469058) . Identical residues between HA鄄CBP鄄1 with other nematode cellulose binding protein are marked with black shadow.
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摇 3 期 顾晓川,等:禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae)纤维素结合蛋白基因(Ha鄄cbp鄄1)的克隆和序列分析
Fig.5摇 Phylogenetic trees of six CBPs based on the CBPs amino acid sequence using ME method
MA鄄CBP鄄1, cellulose binding protein from Meloidogyne arenaria (AM491768); MJ鄄CBP鄄1, cellulose binding protein from
M. javanica (AM491771); MI鄄CBP鄄1, cellulose binding protein from M. incognita (AF049139); HA鄄CBP鄄1,
cellulose binding protein from Heterodera avenae GQ178086); HS鄄CBP鄄1, cellulose binding protein from
H. schachtii (EU328302); HG鄄CBP鄄1, cellulose binding protein from H. glycines (AF469058) .
3摇 讨论
纤维素结合蛋白是一种在植物寄生线虫侵染
植物过程中的重要物质[7,21]。 纤维素结合蛋白最
先从食纤维梭菌中克隆得到,对纤维素的降解活性
不明显,但显示出了较高的亲和力[22],是晶状纤维
素的降解过程中不可缺少的蛋白[23]。 研究证实
CBD可以把纤维素酶的催化区域集中到难溶纤维
素底物的表面,从而决定对难溶纤维素的降解效
率[9,24]。 在南方根结线虫和大豆孢囊线虫的 CBP
研究中均发现 CBP 没有纤维素水解活性,但是具
有纤维素结合能力[15,16],2 个蛋白均在寄生前和寄
生期大量表达,在成虫阶段表达量低,说明该蛋白
主要在线虫形成和维持取食位点的过程中起作
用[14,15]。
本研究从禾谷孢囊线虫中克隆得到的 Ha鄄
cbp鄄1 基因编码的蛋白质具有一个 18 个氨基酸残
基的信号肽和一个 CBD 区,信号肽的存在说明该
蛋白能够分泌到细胞外,CBD 结合区可能的作用
是和寄主细胞壁的纤维素结合,有利于细胞壁的降
解。 禾谷孢囊线虫的 CBP 序列和 NCBI 已登录的
大豆孢囊线虫 Ha鄄cbp鄄1 和甜菜孢囊线虫的蛋白序
列具有较高的同源性,而与 3 个根结线虫的 CBP
的同源性较低,和根结线虫相比,孢囊线虫的 CBP
蛋白在信号肽后缺失一段长约 70 个氨基酸残基的
肽段。 在聚类分析中孢囊线虫和根结线虫明显聚
为两支,这揭示的孢囊线虫和根结线虫的亲缘关
系。 其结果和 Sergei等[25]基于 D2D3 的分析结果
一致。 在序列比对显示 HA鄄CBP鄄1 与 HS鄄CBP鄄1、
HG鄄CBP鄄1 的相似性为 75%和 76% ,而 Hg鄄CBP鄄1
和 Hs鄄CBP鄄1 之间的相似性为 94% [17]。 推测禾谷
孢囊线虫相对大豆孢囊线虫和甜菜孢囊线虫而言
亲缘关系较远。 Haegeman 等[26]推论认为线虫首
先通过水平基因转移获得纤维素酶和扩展蛋白,其
蛋白均含有 CBD结合域,在线虫进化过程中,降解
纤维素的水解糖苷酶和扩展蛋白的扩展结合域发
生丢失而形成了纤维素结合蛋白 CBP。
在内含子比较中,HA鄄CBP鄄1 含有 2 个长度为
117 bp和 419 bp 的内含子序列,而大豆孢囊线虫
含有一个内含子,根结线虫含有长度不等的 3 个内
含子,说明不同种的线虫间内含子的位置和数量具
有多态性。
本文从禾谷孢囊线虫二龄幼虫中克隆到的
Ha鄄cbp鄄1 cDNA 序列,其蛋白序列 HA鄄CBP鄄1 与
HG鄄CBP鄄1、HS鄄CBP鄄1 有 60%的一致性,表明它们
有共同的来源,在线虫侵入植物的过程中可能有同
样的功能。 本研究只研究了禾谷孢囊线虫纤维素
结合蛋白序列信息,并对基因功能进行了预测,后
续研究将通过半定量 RT鄄PCR 明确该基因在禾谷
孢囊线虫不同发育阶段的表达特性,通过 dsRNA
介导的 RNA干涉(RNAi)方法证实该蛋白在线虫形
成和维持取食位点的过程中所起的作用,以期能为
将来研究防治禾谷孢囊线虫的对策提供一些参考。
参考文献
[1] 摇 Webster J M. Nematodes and biological control [M] .
London and New York:Academic Press Inc. , 1972.
[2] 摇 Nickle W R. Plant and insect nematodes [M] . New
York&Basel:Marcel Dekker, 1984. 260 -276.
542
摇
植物病理学报 41 卷
[3] 摇 Ou S Q, Peng D L, Li Y. Research progress on mo鄄
lecular diagnosis and resistance genes of the cereal cyst
nematode, Heterodera avenae ( in Chinese)[J] . Plant
Protection (植物保护), 2008, 34(6): 7 -11.
[4] 摇 Peng D L, Li H X, Wang X F,et al. New distribution
of cereal cyst nematode (Heterodera avenae) in China
[A] . Liao J L, Peng D L, Duan Y X: Nematology
Research in China( in Chinese) . Beijing:China Agri鄄
cultural Scientech Press (北京:中国农业科技出版
社), 2008郾 344 -345.
[5] 摇 Peng D L, Subbotin S,Moens M. rDNA restriction
fragment length polymorphism of Heterodera avenae in
China( in Chinese) [ J] . Acta Phyiopathologica Sinica
(植物病理学报),2003,33(4): 323 -329.
[6] 摇 Williamson V M,Hussey R S. Nematode pathogenesis
and resistance in plants[J] . Plant Cell, 1996, 8: 1735
-1745.
[7] 摇 Davis E L, Hussey R S, Baum T J. Getting to the
roots of parasitism by nematodes[J] . Trends of Parasi鄄
tology, 2004, 20: 134 -141.
[8] 摇 Davis E L, Hussey R S, Mitchum M G. et al. Parasit鄄
ism proteins in nematode鄄plant interactions [ J] . Cur鄄
rent Opinion in Plant Biology, 2008, 11: 360 -366.
[9] 摇 Tomme P, Boraston A, McLean B,et al. Characteri鄄
zation and affinity applications of cellulose binding do鄄
mains[J] . Journal of Chromatography B, 1998, 715:
283 -296.
[10] Tormo J, Lamed R, Chirino A J, et al. A crystal
structure of a bacterial family鄄III cellulose binding do鄄
main: a general mechanism for attachment to cellulose
[J] . Europe Molecular Biology Organization, 1996,
15, 5739 -5751.
[11] Vanholme B, De Meutter J, Tygat T, et al. Secretions
of plant鄄parasitic nematodes: a molecular update[ J] .
Gene, 2004, 332: 13 -27.
[12] Qin L, Overmars H, Helder J,et al. An efficient cD鄄
NA鄄AFLP鄄based strategy for the identification of puta鄄
tive pathogenicity factors from the potato cyst nematode
Globodera rostochiensis[ J] . Molecualr Plant Microbe
Interaction, 2000, 13: 830 -836.
[13] Wang X H, Allen R, Ding X F,et al. Signal peptide鄄
selection of cDNA cloned directly from the esophageal
gland cells of the soybean cyst nematode Heterodera
glycines [ J ] . Molecular Plant Microbe Interaction,
2001, 14: 536 -544.
[14] Mohamed A M A, Mark S P, John T J ,et al. Charac鄄
terisation of the cellulose鄄binding protein Mj鄄cbp鄄1 of
the root knot nematode, Meloidogyne javanica [ J] .
Physiological and Molecular Plant Pathology, 2008,
72: 21 -28.
[15] Gao B, Allen R, Davis E L, et al. Molecular charac鄄
terization and developmental expression of a cellulose
binding protein gene in the soybean cyst nematode He鄄
terodera glycines[ J] . International Journal of Parasi鄄
tology, 2004, 34: 1377 -1383.
[16] Ding X, Shields J, Allen R, et al. A secretory cellu鄄
lose binding protein cDNA cloned from root鄄knot nem鄄
atode (Meloidogyne incognita) [ J] . Molecular Plant鄄
Microbe Interaction, 1998, 11, 952 -959.
[17] Tarek H, Peter H, Maier T R,et al. Cellulose Binding
protein from the parasitic nematode Heterodera
schachtii interacts with Arabidopsis pectin methylester鄄
ase: cooperative cell wall modification during parasi鄄
tism[J] . Plant cell, 2008, 1 -14.
[18] Ding Z. Studies on Differential susceptibility and its
mechanisms of different population of Ditylenchus de鄄
structor to acetylcholinesterase inhibitor ( in Chinese)
[D] . Changsha Hunan Agricultural University(长沙:
湖南农业大学), 2007.
[19] Yu H Y, Peng D L, Hu X Q,et al. Molecular cloning
and sequences analysis of 28S rDNA鄄D2 / D3 regions of
Ditylenchus destructor on sweet potato in China ( in
Chinese)[J] . Acta Phytopathologica Sinica(植物病理
学报), 2009, 39 (3): 254 -261.
[20] Gao B, Allen R, Maier T,et al. The parasitome of the
phytonematode Heterodera glycines [ J ] . Molecualr
Plant Microbe Interaction, 2003, 16: 720 -726.
[21] Hussey R S, Grundler F M. Nematode parasitism of
plants[A] . Perry R N, Wright D J. Physiology and
Biochemistry of Freeliving and Plant Parasitic Nema鄄
todes[M] . England: CAB International Press,1998.
[22] Shoseyov O, Doi R H. Essential 170鄄kDa subunit for
degradation of crystalline cellulose by Clustridium cel鄄
lulovorans cellulase[J] . Proceeding of National Acad鄄
emy of Science,1990, 87: 2192 -2195.
[23] Goldstein M A, Takagi M, Hashida S,et al. Character鄄
ization of the cellulose鄄binding domain of Clustridium
cellulovorans cellulose鄄binding protein A[ J] . Journal
of Bacteriology, 1993, 175, 5762 -5768.
[24] Carrard G. , Koivula A, Soderlund H,et al. Cellulose鄄
binding domains promote hydrolysis of different sites
on crystalline cellulose[J] . Proceeding of National A鄄
cademy of Science, 2000, 97: 10342 -10347.
[25] Sergei A S, Dieter S, Vladimir N C ,et al. Phyloge鄄
netic analysis of Tylenchida Thorne, 1949 as inferred
from D2 and D3 expansion fragments of the 28S rRNA
gene sequences[J] . Nematology, 2006, 8(3): 455 -
474.
[26] Haegeman A, Kyndt T, Gheysen G. The role of
Pseudo鄄endoglucanases in the evolution of nematode
cell wall鄄modifying proteins[ J] . Journal of Molecular
Evolution, 2010, 70: 441鄄452.
责任编辑:曾晓葳
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