全 文 ：植物病理学报
ＡＣＴＡ ＰＨＹＴＯＰＡＴＨＯＬＯＧＩＣＡ ＳＩＮＩＣＡ ４６(１): １４０￣１４４(２０１６)
收稿日期: ２０１４￣１１￣０９ꎻ 修回日期: ２０１５￣０７￣３１
基金项目: 河北省现代农业产业技术体系蔬菜创新团队
通讯作者: 乜兰春ꎬ教授ꎬ从事蔬菜生理生态及生长调控研究工作ꎻＴｅｌ: ０３１２￣７５２８３１２ꎬＥ￣ｍａｉｌ: ｎｌｃｈ６６＠１２６.ｃｏｍꎮ
ｄｏｉ:１０.１３９２６ / ｊ.ｃｎｋｉ.ａｐｐｓ.２０１６.０１.０１８
研究简报
茎枯病菌毒素制备及对芦笋愈伤组织抗性诱导的研究
李俊萍ꎬ 乜兰春∗ꎬ 王珊珊ꎬ 刘 孟
(河北农业大学 园艺学院ꎬ保定 ０７１０００)
Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ａｓｐａｒａｇｉ ｔｏｘｉｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ ｏｎ ａｓｐａｒａｇｕｓ
ｃａｌｌｕｓ ｂｙ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｔｏｘｉｎ ＬＩ Ｊｕｎ￣ｐｉｎｇꎬ ＮＩＥ Ｌａｎ￣ｃｈｕｎꎬ ＷＡＮＧ Ｓｈａｎ￣ｓｈａｎꎬ ＬＩＵ Ｍｅｎｇ (Ｃｏｌｌｅｇｅ
ｏｆ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅꎬ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｈｅｂｅｉꎬ Ｂａｏｄｉｎｇ ０７１０００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏｘｉｎ￣ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉｕｍ ａｎｄ ｃｕｌｔｕｒｅ ｔｉｍｅ ｆｏｒ Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ａｓｐａｒａｇｉ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄꎬ ａｎｄ ｔｈｅ
ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｔｏｘｉｎ ｏｎ ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃａｌｌｕｓ ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙ. Ｉｔ ｗａｓ ｆｏｕｎｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｔｏｘｉｎ ｐｒｏ￣
ｄｕｃｅｄ ｆｒｏｍ ｃｕｌｔｕｒｅ ｆｏｒ １２ ｄａｙｓ ｉｎ ｔｈｅ Ｆｒｉｅｓ ｍｅｄｉｕｍ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｎ ａｓｐａｒａｇｕｓ ｒａｄｉｃｌｅ.
Ｔｏｘｉｎ ｃａｕｓｅｄ ｃａｌｌｕｓ ｏｆ ‘Ａｐｏｌｌｏ’ꎬ ‘Ｃｈａｍｐｉｏｎ’ ａｎｄ ‘ＮＪ９８７’ ｂｒｏｗｎｉｎｇ. Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｏｆ ｔｈｅ ｃａｌｌｕｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｈｒｅｅ
ｖａｒｉｅｔｉｅｓ ｔｏ ｔｏｘｉｎ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｏｘｉｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ. Ｔｏｘｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｃａｌｌｕｓ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｗａｓ
３０％￣４０％.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ａｓｐａｒａｇｉꎻ ｔｏｘｉｎꎻ ｒａｄｉｃｌｅ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｅꎻ ｃａｌｌｕｓꎻ ｂｒｏｗｎｉｎｇ
文章编号: ０４１２￣０９１４(２０１６)０１￣０１４０￣０５
芦笋(Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ Ｌ.)又名石刁柏ꎬ是
百合科天门冬属多年生宿根植物ꎬ是世界公认的高
级保健蔬菜ꎮ 我国是芦笋第一大生产和出口大国ꎬ
但茎枯病的危害严重影响了芦笋的产量与质量ꎮ
芦笋茎枯病是由天门冬拟茎点霉菌(Ｐｈｍｏｐｓｉｓ ａｓ￣
ｐａｒａｇｉ (Ｓａｓｓ. ) Ｂｕｂａｋ)引起的一种真菌性病害ꎬ因
气候原因ꎬ我国 ３年以上笋田发病率几乎 １００％ꎬ而
欧美芦笋主产区均为冷凉气候ꎬ基本不发生茎枯
病ꎬ相应的研究报道也很少[１]ꎮ 利用病原菌毒素
作为选择压力对植物离体组织进行筛选可以得到
相应的抗性材料[２~５]ꎬ目前国内外在芦笋茎枯病菌
毒素及抗性突变体方面尚未见研究报道ꎮ 本文对
芦笋茎枯病菌产毒培养基和培养时间进行了筛选ꎬ
研究了毒素对芦笋愈伤组织的影响ꎬ以期为建立芦
笋抗茎枯病突变体的离体筛选体系奠定基础ꎮ
１ 试验方法
１.１ 病原菌的分离纯化和鉴定
自芦笋发病茎段的病健交界处取小块组织ꎬ接
种在添加有 ４０ μｇｍＬ￣１链霉素的 ＰＤＡ 平板培养
基上ꎬ按照常规病菌分离法中的组织分离法对茎枯
病菌进行分离ꎬ再用稀释纯化法[２ꎬ４]进行纯化ꎬ得
到芦笋茎枯病菌的单孢菌落ꎮ 对病原菌的生长情
况、菌落形态、颜色以及孢子形态等进行观察ꎬ并参
照 Ｙａｎｇ 等[１]的方法对分离得到的菌株进行分子
生物学鉴定ꎮ
１.２ 产毒培养基的筛选
切取芦笋茎枯病菌菌丝片(直径 ０.５ ｃｍ)ꎬ分
别接入装有 １００ ｍＬ Ｆｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈａｒｄ、Ｃｚａｐｅｋ、ＰＤ 和
１期 李俊萍ꎬ等:茎枯病菌毒素制备及对芦笋愈伤组织抗性诱导的研究
ＰＳ液体培养基[３ꎬ４]的三角瓶内ꎬ每种培养基接种
１８瓶ꎬ每瓶 １０块ꎮ 在 ２７℃下ꎬ１２０ ｒｐｍ连续震荡黑
暗培养ꎬ分别于第 ３、６、９、１２、１５ 和 １８ ｄ 时各取 ３
瓶ꎮ 培养液用 ８ 层纱布过滤ꎬ菌丝体置于 ６０℃下
烘干ꎬ称重ꎮ 滤液在 １０ ０００ ｒｐｍ下离心 １０ ｍｉｎꎬ上
清液用 ０.０２ μｍ微孔滤膜过滤ꎬ得到不同培养基不
同培养时间的毒素液ꎬ分别稀释为原浓度的 ４０％ꎮ
按照 Ｔａｎｇ等[４]的方法采用针刺法将浸有 １ ｍＬ 毒
素液的脱脂棉覆盖在芦笋茎伤口上ꎬ２５℃保湿培
养ꎬ观察处理部位的病变ꎬ以确定毒素的致病性ꎮ
利用胚根抑制法[２]进行生物活性测定ꎮ
１.３ 毒素液对芦笋愈伤组织的影响
利用 Ｆｒｉｅｓ 培养基在 ２７℃ꎬ１２０ ｒｐｍ 连续震荡
条件下黑暗培养芦笋茎枯病菌ꎬ在第 １２ ｄ 时制备
毒素液ꎮ 将‘阿波罗’、‘冠军’和‘ＮＪ９８７’３ 个芦笋
品种的愈伤组织切块(直径 ６ ｍｍ)分别接种于含
有 ２５％、３０％、３５％和 ４０％毒素液的 ＭＳ培养基中ꎬ
每处理 ５０瓶ꎬ每瓶接 ３块ꎬ调查愈伤组织的褐化率
和褐化指数ꎮ 褐化程度的分级标准如下ꎬ０ 级:几
乎无褐化ꎬ生长情况类似于正常培养的愈伤组织ꎻ１
级:褐化部分少于 ２５％ꎻ２ 级:褐化部分占整块愈伤
组织的 ２５％~５０％ꎻ３ 级:褐化部分占整块愈伤组织
的 ５０％~７５％ꎻ４ 级:褐化部分大于 ７５％ꎬ整块组织
几乎全部褐化死亡ꎮ
愈伤组织褐化指数＝ １００×∑(各级愈伤组织块
数×相应级数) / (供试愈伤组织总块数×最高级数)
１.４ 芦笋愈伤组织对茎枯病菌毒素的抗性
将经毒素处理后存活的愈伤组织转入无毒素
培养基中继代培养 １个月后ꎬ再转入含毒素培养基
上培养ꎬ第 １０ ｄ调查愈伤组织褐化程度ꎮ
１.５ 数据处理
原始数据利用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２０１０ 进行整理
和图表制作ꎬ利用 ＤＰＳ７.０５ 统计软件进行方差分
析ꎬ采用邓肯氏新复极差法进行差异显著性多
重比较ꎮ
２ 结果与分析
２.１ 芦笋茎枯病菌的分离鉴定及其毒素的致病性
芦笋茎枯病菌菌落如图 １￣Ａꎬ初生菌丝呈透明
状平铺在培养基表面ꎬ中心位置菌丝层较厚ꎬ白色ꎬ
后期变为灰白色ꎮ 培养过程中菌丝会产生分泌物ꎬ
使培养基变成黄褐色ꎬ如图 １￣Ｂꎮ 后期产孢后制备
分生孢子悬浮液ꎬ在显微镜下可观察到大量 α 型
分生孢子ꎬ长椭圆形至梭形ꎬ无色ꎬ单胞ꎬ两端各有
１ 个油球ꎬ大小为 ２. ０ ~ ３. ５ μｍ × ６. ５ ~ １２ μｍ
(图 １￣Ｃ)ꎬ具芦笋茎枯病菌典型特征[１]ꎮ 将提纯得
到的菌株 ＤＮＡ 经 ＰＣＲ 扩增ꎬ得到 ６００ ｂｐ 左右的
条带(图 １￣Ｅ)ꎬＢＬＡＳＴ 比对结果显示该菌株与芦
笋茎枯病菌 Ｐｈｍｏｐｓｉｓ ａｓｐａｒａｇｉ 的相似度为 ９９％ꎮ
且其毒素能引起芦笋植株茎枯病田间发病典型症
状(图 １￣Ｄ)ꎬ表明毒素具有致病力ꎮ
２.２ 不同培养基和培养时间对茎枯病菌生长及产
毒的影响
从图 ２ 可以看出ꎬ茎枯病菌在 Ｆｒｉｅｓ、Ｒｉｃｈａｒｄ、
Ｃｚａｐｅｋ、ＰＤ 和 ＰＳ 培养基中随着培养时间的延长
菌丝干重逐渐增加ꎬ分别在达到最大值之后又呈下
降趋势ꎮ 在 Ｒｉｃｈａｒｄ 培养基培养 １５ ｄꎬＦｒｉｅｓ 或 ＰＤ
培养基培养 １２ ｄ 菌丝干重最大ꎬ说明这 ３ 种培养
基适宜茎枯病菌菌丝生长ꎮ
Ｆｉｇ. １ Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｏｆ ａｓｐａｒａｇｕｓ ｓｔｅｍ ｂｌｉｇｈｔ
Ａ: Ｓｉｎｇｌｅ ｓｐｏｒｅ ｃｏｌｏｎｙꎻ Ｂ: Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｈｙｐｈａｅ ｄｉｓｃｏｌｏｒｉｎｇ ｔｈｅ ｍｅｄｉｕｍꎻ Ｃ: Ｔｈｅ ｓｐｏｒｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎꎻ
Ｄ: Ａｓｐａｒａｇｕｓ ｓｔｅｍ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｔｙｐｉｃａｌ ｓｙｍｐｔｏｍ ｏｆ ｓｔｅｍ ｂｌｉｇｈｔ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ｆｉｅｌｄꎻ
Ｅ: ＰＣＲ ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｔｒａｉｎ ｗｉｔｈ ＩＴＳ４/ ５ ｐｒｉｍｅｒｓ.
１４１
植物病理学报 ４６卷
Ｆｉｇ. ２ Ｄｒｙ ｗｅｉｇｈｔ ｏｆ ｔｈｅ ｈｙｐｈａｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ｍｅｄｉａ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｔｉｍｅ ｐｏｉｎｔｓ
从表 １可以看出ꎬ茎枯病菌在 ５种培养基中产
生的毒素对芦笋胚根生长均具有抑制作用ꎬ随着处
理时间延长ꎬ抑制率增加ꎬ达到最大值后ꎬ稍有下
降ꎮ 以在 Ｆｒｉｅｓ培养基中所产毒素对芦笋胚根的抑
制率最高ꎬ且培养 １２ ｄ 时产生的毒素对胚根的抑
制率可达 ９７.６９％ꎮ 因此ꎬＦｒｉｅｓ 培养基是芦笋茎枯
病菌产毒的最佳培养基ꎬ２７℃ꎬ１２０ ｒｐｍ 连续震荡
黑暗培养 １２ ｄ所产毒素活性最强ꎮ
２.３ 茎枯病菌毒素不同处理浓度和时间对芦笋愈
伤组织的影响
毒素导致芦笋愈伤组织褐变(图 ３)ꎬ３ 个品种
愈伤组织的褐化程度均随毒素浓度增加和处理时
间延长而加重(表 ２、表 ３)ꎮ ３０％、３５％和 ４０％毒素
液处理 ５ ｄꎬ３ 个品种的愈伤组织褐化率在 ４５％ ~
７６％ꎬ褐化指数在 １８~４６ꎻ处理 １０ ｄꎬ褐化率达 ９１％
~１００％ꎬ褐化指数在 ３１ ~ ８５ꎮ 而 ２５％浓度处理褐
化率和褐化指数均较低ꎮ 因此抗性愈伤组织筛选
的适宜毒素浓度为毒素液的 ３０％~４０％ꎮ
Ｔａｂｌｅ １ Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｒａｔｉｏ ｔｏ ａｓｐａｒａｇｕｓ ｒａｄｉｃｌｅ ｂｙ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｔｏｘｉｎ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｕｌｔｕｒｅ ｍｅｄｉａ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈｓ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｅ ｐｅｒｉｏｄｓ
Ｍｅｄｉｕｍ
Ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｔｉｍｅ ｌｅｎｇｔｈ / ｄ
３ ６ ９ １２ １５ １８
Ｆｒｉｅｓ ３１.７５±１.６６ａ ５３.４３±１.５ａ ７４.５ ±２.９７ａ ９７.６９±１.６４ａ ９２.９１±１.０４ａ ８７.５６±０.８６ａ
Ｒｉｃｈａｒｄ ２２.９５±１.６４ｂ ４３.２７±１.７４ｂ ６４.３３±１.９９ｂ ８５.９６±１.６２ｂ ８８.２１±２.００ｂ ８３.６３±０.６０ｂ
Ｃｚａｐｅｋ ２０.７３±２.３９ｂｃ ３５.０８±１.４６ｃ ４７.４９±３.３２ｂ ５０.９６±３.２９ｂ ５１.８５±１.９６ｃ ４８.１３±１.０４ｃ
ＰＤ ２７.３１±１.７２ｃｄ ４４.２３±２.５８ｃ ６７.４１±２.４９ｃ ８３.５７±２.５７ｃ ７９.６１±１.５１ｄ ７４.４４±１.５１ｄ
ＰＳ ２４.３ ±１.７７ｄ ４９.１７±１.６７ｄ ５８.４２±３.９７ｄ ６６.３４±２.２３ｄ ６３.０７±０.９６ｅ ５９.８９±０.２４ｅ
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ (Ｐ<０.０５)
Ｆｉｇ. ３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｘｉｎ ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｂｙ Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ａｓｐａｒａｇｉ ｏｎ ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃａｌｌｕｓ
Ａ: Ｃｏｎｔｒｏｌꎻ Ｂ: Ｃａｌｌｕｓ ｂｅｇａｎ ｔｏ ｇｏ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ ２ ｄａｙｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｂｙ ３５％ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｔｏｘｉｎꎻ
Ｃ: Ｃａｌｌｕｓ ａｌｍｏｓｔ ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ａｆｔｅｒ １０ ｄａｙｓ ｏｆ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｂｙ ３５％ ｔｏｘｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ.
２４１
１期 李俊萍ꎬ等:茎枯病菌毒素制备及对芦笋愈伤组织抗性诱导的研究
２.４ 芦笋愈伤组织对茎枯病菌毒素的抗性
从表 ４可以看出ꎬ经 ３５％毒素液处理后存活下
来的‘阿波罗’、‘冠军’和‘ＮＪ９８７’愈伤组织第 ２
次再用 ３５％的毒素处理后ꎬ褐化指数显著低于第 １
次处理ꎮ 第 ２次用 ４０％毒素ꎬ褐化指数仍低于第 １
次 ３５％处理后的结果ꎮ 第 ３ 次用 ４０％毒素处理ꎬ
褐化指数显著低于第 ２次 ４０％处理ꎻ第 ３次用 ４５％
毒素处理ꎬ与第 ２ 次 ４０％处理褐化指数差异不显
著ꎮ 可见ꎬ经过毒素处理后存活的愈伤组织对茎枯
病菌毒素的抗性增强ꎮ
Ｔａｂｌｅ ２ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｏｘｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｌｅｎｇｔｈｓ(ｄ) ｏｎ
ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃａｌｌｕｓ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｒａｔｅ
Ｃｏｎｃｅｎ￣
ｔｒａｔｉｏｎ / ％
Ａｐｏｌｌｏ Ｃｈａｍｐｉｏｎ ＮＪ９８７
５ ｄ １０ ｄ ５ ｄ １０ ｄ ５ ｄ １０ ｄ
２５ ３９.１１±１.２１ｄ ６８.２７±２.５８ｃ ２８.４２±１.６６ｄ ５０.４３±１.９９ｄ ４０.７７±１.７７ｄ ７４.２５±１.６４ｃ
３０ ４７.７５±２.０７ｃ ８３.５４±１.６７ｂ ４５.０５±１.６４ｃ ７８.８１±３.３２ｃ ４９.８０±１.５０ｃ ８８.９３±１.６２ｂ
３５ ５６.７８±１.１２ｂ ９７.３３±２.０７ａ ５５.３７±２.３９ｂ ９１.８９±２.４９ｂ ６１.１５±１.７４ｂ １００ ±０.００ａ
４０ ６６.３１±３.０１ａ １００ ±０.００ａ ６７.２５±１.７２ａ １００ ±０.００ａ ７５.６５±１.４６ａ １００ ±０.００ａ
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ (Ｐ<０.０５)
Ｔａｂｌｅ ３ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｔｏｘｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｔｉｍｅ ｌｅｎｇｔｈｓ (ｄ) ｏｎ
ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃａｌｌｕｓ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｉｎｄｅｘ
Ｃｏｎｃｅｎ￣
ｔｒａｔｉｏｎ / ％
Ａｐｏｌｌｏ Ｃｈａｍｐｉｏｎ ＮＪ９８７
５ ｄ １０ ｄ ５ ｄ １０ ｄ ５ ｄ １０ ｄ
２５ １３.２３±２.００ｄ ２５.００±２.２３ｄ １０.４６±１.６６ｄ １８.７５±１.５１ｄ １９.１５±１.０４ｄ ３５.５７±２.６０ｄ
３０ ２２.５８±１.９６ｃ ３５.７０±３.０４ｃ １８.９５±１.６４ｃ ３１.３３±２.１６ｃ ２９.４９±１.５１ｃ ４８.１５±１.０４ｃ
３５ ３０.７５±１.５１ｂ ５９.２５±２.１０ｂ ２９.０８±２.３９ｂ ５５.１３±１.６９ｂ ３７.６４±１.６４ｂ ６８.９６±３.２４ｂ
４０ ３９.９６±０.９６ａ ８０.４６±１.９６ａ ３７.２２±１.７２ａ ７６.００±２.８７ａ ４５.７３±１.６２ａ ８４.４８±２.５１ａ
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ (Ｐ<０.０５)
Ｔａｂｌｅ ４ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｏｘｉｎ ｔｒｅａｔｉｎｇ ｔｉｍｅｓ ｏｎ ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｉｎｄｅｘ ｏｆ ａｓｐａｒａｇｕｓ ｃａｌｌｕｓ
Ｔｒｅａｔｉｎｇ ｔｉｍｅｓ
Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ / ％
Ｂｒｏｗｎｉｎｇ ｉｎｄｅｘ
Ａｐｏｌｌｏ Ｃｈａｍｐｉｏｎ ＮＪ９８７
１ ３５ ５９.２５±２.１０ａ ５５.１３±１.６９ａ ６８.９６±３.２４ａ
２ ３５ ４０.５０±１.９８ｃ ３８.９５±３.５８ｃ ４９.２２±２.６２ｃ
２ ４０ ５４.３７±３.３９ａ ５１.８２±２.４６ａ ６６.５３±１.５７ａｂ
３ ４０ ４８.１５±２.７２ｂ ４５.６５±１.７４ｂ ５３.９５±２.２９ｃ
３ ４５ ５６.７１±２.１７ａ ５３.１４±２.６７ａ ６２.３５±３.２３ｂ
Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｌｅｔｔｅｒｓ ｗｉｔｈｉｎ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｃｏｌｕｍｎ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ (Ｐ<０.０５)
３４１
植物病理学报 ４６卷
３ 结论与讨论
国外芦笋主产区很少发生茎枯病ꎬ有关芦笋茎
枯病菌的研究报道也较少ꎬ在毒素及抗性突变体方
面尚未见报道ꎮ 本研究从田间发病的典型病株分离
出茎枯病菌ꎬ病原菌培养性状、分生孢子及分子生物
学鉴定结果与已有报道[１]一致ꎬ为天门冬拟茎点霉
(Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ａｓｐａｒａｇｉ)ꎬ且能够产生有致病力的毒
素ꎮ Ｃｈｅｎｇ等[６](２００４)曾报道 Ｐ. ｖｅｘａｎｓ 粗毒素可
使茄子叶片产生典型的褐纹病病斑ꎬ具有致病性ꎮ
培养基种类、培养时间和培养条件直接影响病
菌的产毒量[３]ꎬ唐菖蒲枯萎病菌[２]在 Ｃｚａｐｅｋ培养基
中培养 １５ ｄ所产毒素活性最强ꎬ大蒜白腐病病菌的
最佳产毒培养条件为在 Ｆｒｉｅｓ 培养基中培养 ６ ｄ[３]ꎬ
Ｒｉｃｈａｒｄ培养基培养 ２０ ｄ 为西瓜炭疽病菌适宜产毒
条件[４]ꎮ 本研究结果表明ꎬ芦笋茎枯病菌最适产毒
培养基和培养时间为 Ｆｒｉｅｓ培养基培养 １２ ｄꎮ
利用病原菌的致病粗毒素筛选抗病突变体ꎬ毒
素剂量和选择次数是关键ꎮ 剂量高易导致一些抗
病材料的丢失ꎻ剂量低ꎬ选择压力太小ꎬ则不易选出
高抗材料ꎮ 不同材料适用的病原菌粗毒素剂量也
不一致[５]ꎮ 本研究表明ꎬ芦笋愈伤组织经茎枯病
菌毒素处理后发生褐化ꎬ随毒素浓度增加和处理时
间延长褐化程度加重ꎮ 抗性愈伤组织筛选的适宜
毒素浓度为毒素液的 ３０％ ~ ４０％ꎮ 经茎枯病菌毒
素处理存活下来的愈伤组织对毒素的抗性增强ꎮ
抗性愈伤组织诱导成苗后ꎬ经抗病性鉴定ꎬ表现出
对 Ｐ. ａｓｐａｒａｇｉ的抗性(另文报道)ꎮ 本研究结果为
建立芦笋抗茎枯病突变体离体筛选体系奠定
了基础ꎮ
参考文献
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[３] Ｚｈａｎｇ Ｌ Ｑꎬ Ｃｈｅｎｇ Ｚ Ｈ. Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｃｏｎ￣
ｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｏｘｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｓｃｌｅｒｏｔｉｕｍ ｃｅｐｉｖｏｒｕｍ
Ｂｅｒｋ. ｏｆ ｇａｒｌｉｃ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ａｃｔａ Ｈｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒａｅ
Ｓｉｎｉｃａ(园艺学报)ꎬ ２００８ꎬ ３５(６): ８４１￣８４６.
[４] Ｔａｎｇ Ｓ Ｓꎬ Ｌｉｕ Ｚ Ｈꎬ Ｙｕ Ｃ Ｇꎬ ｅｔ ａｌ. Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ
ｃｕｌｔｕｒｉｎｇ ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｔｏｘｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ Ｃｏｌｌｅｔｏｔｒｉ￣
ｃｈｕｍ ｏｒｂｉｃｕｌａｒｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [ Ｊ] . Ｃｈｉｎａ Ｖｅｇｅｔａｂｌｅｓ
(中国蔬菜)ꎬ ２０１４ꎬ ０５: １９￣２５.
[５] ＣｈｅｎＺ Ｈꎬ Ｎｉｕ Ｑꎬ Ｍｅｎｇ Ｈ Ｗ. Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ｏｆ
ｇａｒｌｉｃ ｍｕｔａｎｔｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｏ ｌｅａｆ ｂｌｉｇｈｔ ａｎｄ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ
ｔｈｅｉｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｊｏｕｒａｌ ｏｆ Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ
Ａ＆Ｆ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ (Ｎａｔ. Ｓｃｉ. Ｅｄ.) (西北农林科技大学
学报(自然科学版))ꎬ ２０１２ꎬ ４０(２): １０９￣１１５＋１２０.
[６] Ｃｈｅｎｇ Ｙ Ｍꎬ Ｄｕ Ａ Ｌꎬ Ｗｅｉ Ｙ Ｘꎬ ｅｔ ａｌ. Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ
ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃｉｔｙ ｏｆ Ｐｈｏｍｏｐｓｉｓ ｖｅｘａｎｓ ｃｒｕｄｅ ｔｏｘｉｎ ｔｏ ａｕ￣
ｂｅｒｇｉｎｅ ( ｉｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ) [Ｊ] . Ｈｅｎａｎ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
(河南农业科学)ꎬ ２００４ꎬ ０８: ７１￣７５.
责任编辑:李晖
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