全 文 ：书犇犗犐：１０．１１６８６／犮狔狓犫２０１５０３２３ 犺狋狋狆：／／犮狔狓犫．犾狕狌．犲犱狌．犮狀
潘龙，卜登攀，王加启，程建波，孙先枝，王秀敏，秦俊杰，袁耀明，张幸开．柴胡中草药对奶牛瘤胃菌群多样性及纤维分解菌的影响．草业学报，
２０１５，２４（３）：２１９２２５．
ＰａｎＬ，ＢｕＤＰ，ＷａｎｇＪＱ，ＣｈｅｎｇＪＢ，ＳｕｎＸＺ，ＷａｎｇＸＭ，ＱｉｕＪＪ，ＹｕａｎＹＭ，ＺｈａｎｇＸＫ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｒａｄｉｘｂｕｐｌｅｕｒｉｈｅｒｂａｌｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎ
ｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｄｉｖｅｒｓｉｔｙｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎｏｆｌａｃｔａｔｉｎｇｄａｉｒｙｃｏｗｓ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１５，２４（３）：２１９２２５．
柴胡中草药对奶牛瘤胃菌群多样性及
纤维分解菌的影响
潘龙１，卜登攀１，王加启１，程建波１，孙先枝１，王秀敏２，秦俊杰２，袁耀明３，张幸开３
（１．中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，动物营养学国家重点实验室，北京１００１９３；２．北京生泰尔生物科技有限公司，
北京１０２２０６；３．上海光明荷斯坦牧业有限公司，上海２００４３６）
摘要：通过ＤＧＧＥ和ＲＴ－ＰＣＲ技术研究日粮中添加不同剂量的柴胡中草药对奶牛瘤胃细菌多样性和主要纤维分
解菌（琥珀酸丝状杆菌、黄色瘤胃球菌和白色瘤胃球菌）的影响。根据产奶量（３７．５±１．８）ｋｇ／ｄ、泌乳天数（７５±１５）
ｄ以及胎次（１．７±０．４）等相近的原则，将４０头健康的中国荷斯坦泌乳奶牛随机分为４组（狀＝１０），分别饲喂４种不
同的处理日粮，即在基础日粮中分别添加０，０．２５，０．５０和１．００ｇ／ｋｇ的柴胡中草药（ＤＭ 基础）。试验持续１０周，
并在第６周口腔采集瘤胃液，通过变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和实时定量ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）对瘤胃细菌进行分析。
ＤＧＧＥ图谱显示，中草药添加组和空白对照组并没有显著的差异条带，但其指纹图谱相似性并不高，均低于０．５４，
且１．００ｇ／ｋｇ的添加量显著降低了瘤胃液细菌香农多样性指数，而０．５０和１．００ｇ／ｋｇ的添加量则提高了菌群优势
度指数（犘＜０．０５）；ＲＴ－ＰＣＲ结果显示，柴胡中草药对奶牛瘤胃主要纤维分解菌并没有显著的影响。因此，柴胡中
草药在一定程度上影响了瘤胃细菌的多样性，但差异并不显著，可能由于瘤胃微生物适应了柴胡中草药的添加。
关键词：柴胡中草药；奶牛；细菌多样性；纤维分解菌　　
犈犳犳犲犮狋狊狅犳狉犪犱犻狓犫狌狆犾犲狌狉犻犺犲狉犫犪犾狊狌狆狆犾犲犿犲狀狋犪狋犻狅狀狅狀犫犪犮狋犲狉犻犪犾犮狅犿犿狌狀犻狋狔犱犻狏犲狉狊犻狋狔犻狀
狋犺犲狉狌犿犲狀狅犳犾犪犮狋犪狋犻狀犵犱犪犻狉狔犮狅狑狊
ＰＡＮＬｏｎｇ１，ＢＵＤｅｎｇｐａｎ１，ＷＡＮＧＪｉａｑｉ１，ＣＨＥＮＧＪｉａｎｂｏ１，ＳＵＮＸｉａｎｚｈｉ１，ＷＡＮＧＸｉｕｍｉｎ２，ＱＩＮＪｕｎｊｉｅ２，
ＹＵＡＮＹａｏｍｉｎｇ３，ＺＨＡＮＧＸｉｎｇｋａｉ３
１．犛狋犪狋犲犓犲狔犔犪犫狅狉犪狋狅狉狔狅犳犃狀犻犿犪犾犖狌狋狉犻狋犻狅狀，犐狀狊狋犻狋狌狋犲狅犳犃狀犻犿犪犾犛犮犻犲狀犮犲，犆犺犻狀犲狊犲犃犮犪犱犲犿狔狅犳犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犛犮犻犲狀犮犲狊，犅犲犻犼犻狀犵
１００１９３，犆犺犻狀犪；２．犅犲犻犼犻狀犵犆犲狀狋狉犲犅犻狅犾狅犵狔犆狅．，犔狋犱．，犅犲犻犼犻狀犵１０２２０６，犆犺犻狀犪；３．犛犺犪狀犵犺犪犻犅狉犻犵犺狋犎狅狊狋犪狀犆狅．，犔狋犱．，犛犺犪狀犵犺犪犻
２００４３６，犆犺犻狀犪
犃犫狊狋狉犪犮狋：Ｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｅｆｆｅｃｔｏｆｒａｄｉｘｂｕｐｌｅｕｒｉ（犅狌狆犾犲狌狉狌犿犮犺犻狀犲狀狊犻狊）
ｈｅｒｂａｌｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ（ＲＢＨ）ｏｎｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｃｅｌｕｌｏｌｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａｉｎｃｌｕｄｉｎｇ犉犻犫狉狅犫犪犮狋犲狉犳狌犮犮犻狀狅犵犲狀犲，犚狌
犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犪犾犫狌狊ａｎｄ犚狌犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犳犾犪狏犲犳犪犮犻犲狀狊ｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎｏｆｌａｃｔａｔｉｎｇｄａｉｒｙｃｏｗｓ．ＦｏｒｔｙＨｏｌｓｔｅｉｎｃｏｗｓ
ｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙａｓｓｉｇｎｅｄｔｏ４ｄｉｅｔｇｒｏｕｐｓ（狀＝１０）ａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｍｉｌｋｙｉｅｌｄ（３７．５±１．８）ｋｇ／ｄａｎｄｌａｃｔａｔｉｏｎｌｅｎｇｔｈ
（７５±１５）ｄａｙｓ．Ｆｏｕｒｔｒｅａｔｍｅｎｔｄｉｅｔｓｃｏｎｓｉｓｔｅｄｏｆ０，０．２５，０．５０ｏｒ１．００ｇ／ｋｇｏｆＲＨＢｄｒｙｍａｔｔｅｒ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．
Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｌａｓｔｅｄｆｏｒ１０ｗｅｅｋｓ；ｒｕｍｅｎｆｌｕｉｄｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｃｏｌｅｃｔｅｄｕｓｉｎｇａｓｔｏｍａｃｈｔｕｂｅｄｕｒｉｎｇｗｅｅｋ６ｏｆ
第２４卷　第３期
Ｖｏｌ．２４，Ｎｏ．３
草　业　学　报
ＡＣＴＡＰＲＡＴＡＣＵＬＴＵＲＡＥＳＩＮＩＣＡ
２０１５年３月
Ｍａｒｃｈ，２０１５
收稿日期：２０１４０２２８；改回日期：２０１４０４２１
基金项目：“十二五”科技支撑计划（２０１２ＢＡＤ１２Ｂ０２５）和中国农业科学院科技创新工程（ＡＳＴＩＰＩＡＳ０７）资助。
作者简介：潘龙（１９８８），男，江苏邳州人，在读硕士。Ｅｍａｉｌ：ｐａｎｌｏｎｇ８８０９＠１６３．ｃｏｍ
通讯作者Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ．Ｅｍａｉｌ：ｂｕｒｄｅｎｐａｎ＠ｇｍａｉｌ．ｃｏｍ
ｔｈｅｔｒｉａｌ．Ｔｈｅｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎｗａｓａｓｓｅｓｓｅｄｕｓｉｎｇｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅ
ｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＤＧＧＥ）ａｎｄｒｅａｌｔｉｍｅｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ（ＲＴ－ＰＣＲ）ａｎａｌｙｓｉｓ．ＴｈｅＤＧＧＥ
ａｎａｌｙｓｉｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｒｅｗｅｒｅｎｏｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓａｍｏｎｇｔｈｅｔｒｅａｔｍｅｎｔｇｒｏｕｐｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅＳｈａｎｎｏｎ－Ｗｅｉｎｅｒｉｎｄｅｘｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ（犘＜０．０５）ｉｎｔｈｅ１．０ｇ／ｋｇＲＢＨｇｒｏｕｐ，ｗｈｉｌｅｔｈｅ
ｄｏｍｉｎａｎｃｅｉｎｄｅｘｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（犘＜０．０５）ｉｎｔｈｅ０．５０ａｎｄ１．００ｇ／ｋｇｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ．ＲＴ－ＰＣＲａｎａｌ
ｙｓｉｓａｌｓｏｓｈｏｗｅｄｔｈａｔＲＢＨｈａｄｎｏｅｆｆｅｃｔｏｎｃｅｌｕｌｏｌｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ．ＩｔｗａｓｃｏｎｃｌｕｄｅｄｔｈａｔＲＢＨｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｈａｄｌｉｔｔｌｅｅｆｆｅｃｔｏｎｄｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆｔｈｅｂａｃｔｅｒｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎｏｆｌａｃｔａｔｉｎｇｄａｉｒｙｃｏｗｓ，ｐｏｓｓｉｂｌｙｄｕｅｔｏ
ｇｒａｄｕａｌａｄａｐｔａｔｉｏｎｔｏｔｈｅＲＢＨｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｂｙｒｕｍｅｎｂａｃｔｅｒｉａ．
犓犲狔狑狅狉犱狊：ｒａｄｉｘｂｕｐｌｅｕｒｉ（犅狌狆犾犲狌狉狌犿犮犺犻狀犲狀狊犻狊）ｈｅｒｂａｌ；ｄａｉｒｙｃｏｗ；ｂａｃｔｅｒｉａｌｄｉｖｅｒｓｉｔｙ；ｃｅｌｕｌｏｌｙｔｉｃｂａｃｔｅｒｉａ
日粮或营养因素是调控奶牛瘤胃发酵的有效措施［１］。然而，中草药及其提取物调节瘤胃发酵越来越受到关
注［２］。黄芪（Ｌｅｇｕｍｉｎｏｓａｅ）根和多糖的添加可以提高瘤胃丙酸含量，改变瘤胃发酵模式［３］；山楂（犆狉犪狋犪犲犵狌狊狆犻狀
狀犪狋犻犳犻犱犪）和黄芩（犛犮狌狋犲犾犾犪狉犻犪狆狉狅狊狋狉犪狋犪）等复方中草药可以改善瘤胃发酵功能，并促进乳酸杆菌和淀粉分解菌数
量增加［４］；蓝蓟（犈犮犺犻狌犿狏狌犾犵犪狉犲）属提取物可以提高瘤胃微生物蛋白合成及降低原虫数量，从而调控瘤胃发
酵［５］；凤仙花（犐犿狆犪狋犻犲狀狊犱犻狏犪狉犻犮犪狋犪）明显降低甲烷生成，促进氨态氮（ＮＨ３Ｎ）向微生物蛋白（ＭＣＰ）转化，改变
了瘤胃代谢模式［６］等。目前，虽然中草药及其提取物逐渐被开发利用于调控奶牛的瘤胃发酵，但是可以代替饲料
添加剂利用的中草药并不是很多［７］；因此，寻求有效调节瘤胃微生态的新型中草药备受期待［８］。
柴胡（犅狌狆犾犲狌狉狌犿犮犺犻狀犲狀狊犻狊）是传统中药，含有丰富的化学成分，包括柴胡皂苷、挥发油和多糖等［９１１］，具有解
热退烧、镇静安神、抗炎抗病毒、提高免疫力等多种生物活性［１２１３］，因此，具有很高的营养和药用双重价值［１４］。现
代药理学证明，柴胡对人工发热的家兔有显著的解热作用［１５］，其有效成分为挥发油和皂苷［１６］，且柴胡皂苷不仅
能使发烧的动物降温，而且口服大剂量皂苷（２００～８００ｍｇ／ｋｇ），也能使大鼠正常体温下降［１７］；此外，柴胡皂苷和
挥发油也有显著的抗炎作用和免疫调节功能［１８］。临床上，柴胡具有良好的降温退烧效果，常用于治疗感冒和发
烧导致的体温升高［１９］。柴胡解热是多方面综合的原因，包括抗菌抗病毒，增强抵抗力；扩张皮肤血管增加散热、
促使血液流向体表加强蒸发散热等［２０］。目前，柴胡中草药应用于畜牧生产不是很多，但从其药用和营养的双重
作用来看，其应用于缓解畜禽热应激和提高机体免疫力有着广泛的应用前景［２１］。
本课题已研究表明柴胡中草药可以缓解奶牛热应激，提高夏季奶牛的产奶量［２２］；但柴胡中草药能否通过影
响瘤胃菌群的变化而调控瘤胃发酵，目前暂没有报道。因此，该试验研究柴胡中草药对奶牛瘤胃细菌多样性及纤
维分解菌的影响，为柴胡中草药进一步应用于缓解奶牛热应激提供参考依据。
１　材料与方法
１．１　试验地点与材料
２０１２年６—９月在上海光明荷斯坦牧业有限公司—胡桥奶牛场进行饲养试验；２０１３年５—８月在实验室进行
样品分析。柴胡中草药为柴胡根，主要成分为皂苷和挥发油等，来源于北京生态尔生物科技有限公司。
１．２　试验设计与管理
根据产奶量（３７．５±１．８）ｋｇ／ｄ、泌乳天数（７５±１５）ｄ以及胎次（１．７±０．４）等相近的原则将４０头健康的荷斯
坦奶牛随机分为４组（狀＝１０），分别饲喂４种不同处理日粮，即在基础日粮中分别添加０，０．２５，０．５０，１．００ｇ／ｋｇ
的柴胡中草药（ＤＭ基础），试验基础日粮的组成参照奶牛营养需要（２００１）推荐标准，满足奶牛营养需要（表１）。
试验牛只饲喂基础日粮１周（预饲期），然后饲喂相应处理日粮９周（正饲期），共持续１０周。试验牛群采用传统
的先粗料后精料的栓系式饲养，每天饲喂３次，自由饮水，挤奶３次。
１．３　样品采集与制备
１．３．１　瘤胃液样品采集与制备　　在试验第６周奶牛饲喂后２ｈ左右，通过口腔采样器采集瘤胃液２００ｍＬ，采
０２２ 草　业　学　报 第２４卷
集时弃掉最先采集的２００ｍＬ瘤胃液，采集样品后用４层纱布过滤，然后分装至１０ｍＬ离心管，－２０℃冻存备用。
１．３．２　ＤＮＡ提取与１６ＳｒＤＮＡＶ３区域ＰＣＲ扩增　　采用十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）结合珠磨法提取
ＤＮＡ［２３］；１６ＳｒＤＮＡＶ３区域ＰＣＲ扩增体系５０μＬ：１μＬ模板ＤＮＡ，２５μＬ２×ＨｉＦｉＴａｑＳｔａｒＭｉｘ（ＧｅｎＳｔａｒ），１μＬ
５３３ｒ／ＧＣ３３８ｆ（ＧＣ３３８ｆ：ＣＧＣＣＣＧＣＣＧＣＧＣＧＣＧＧＣＧＧＧＣＧＧＧＧＣＧＧＧＧＧＣＡＣＧＧＧＧＧＧＡＣＴＣＣＴＡＣＧＧＧＡＧ
ＧＣＡＧＣＡ；５３３ｒ：ＴＴＡＣＣＧＣＧＧＣＴＧＣＴＧＧＣＡＣ），剩余体积用ｄｄＨ２Ｏ补齐。
表１　奶牛基础日粮组成及营养水平（犇犕基础）
犜犪犫犾犲１　犐狀犵狉犲犱犻犲狀狋犪狀犱犮犺犲犿犻犮犪犾犮狅犿狆狅狊犻狋犻狅狀狅犳狋犺犲犫犪狊犪犾犱犻犲狋（犇犕犫犪狊犻狊）
原料Ｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔ 比例 Ｒａｔｉｏ 营养成分Ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ 含量Ｃｏｎｔｅｎｔ
苜蓿 Ａｌｆａｌｆａｈａｙ（％） １２．７ 泌乳净能ＬａｃｔａｔｉｎｇｎｅｔｅｎｅｒｇｙＮＥＬ（ＭＪ／ｋｇＤＭ）２ ６．７
羊草Ｃｈｉｎｅｓｅｗｉｌｄｒｙｅ（％） ９．４ 中性洗涤纤维 Ｎｅｕｔｒａｌｄｅｔｅｒｇｅｎｔｆｉｂｅｒ（％） ３９．９
青贮玉米Ｃｏｒｎｓｉｌａｇｅ（％） １２．６ 酸性洗涤纤维Ａｃｉｄｄｅｔｅｒｇｅｎｔｆｉｂｅｒ（％） ２５．１
燕麦草 Ｏａｔｇｒａｓｓ（％） ３．７ 粗蛋白质Ｃｒｕｄｅｐｒｏｔｅｉｎ（％） １７．２
棉籽粕Ｃｏｔｔｏｎｓｅｅｄｍｅａｌ（％） ８．９ 粗脂肪Ｃｒｕｄｅｆａｔｅｔｈｅｒｅｘｔｒａｃｔ（％） ４．１
甜菜粕Ｂｅｅｔｐｕｌｐ（％） ７．１ 钙Ｃａ（％） １．０
玉米Ｃｏｒｎ（％） ２３．０ 磷Ｐ（％） ０．５
酒糟 Ｄｒｙｄｉｓｔｉｌｅｒｓｇｒａｉｎ（％） ３．７
大麦Ｂａｒｌｅｙ（％） ９．４
大豆Ｓｏｙｂｅａｎ（％） ７．４
碳酸氢钠 ＮａＨＣＯ３（％） ０．６
磷酸氢钙ＣａＨＰＯ４（％） ０．５
盐 ＮａＣｌ（％） ０．５
预混料Ｐｒｅｍｉｘ１（％） ０．４
合计 Ｔｏｔａｌ（％） １００．０
　１．每ｋｇ预混料中含有Ｏｎｅｋｉｌｏｇｒａｍｏｆｐｒｅｍｉｘｃｏｎｔａｉｎｅｄｔｈｅｆｏｌｏｗｉｎｇ：ＶＡ２００００００ＩＵ，ＶＤ４５００００ＩＵ，ＶＥ１００００ＩＵ，烟酸 Ｎｉｃｏｔｉｎｉｃａｃｉｄ３０００
ｍｇ，Ｃｕ４５６０ｍｇ，Ｍｎ４５９０ｍｇ，Ｚｎ１２１００ｍｇ，Ｓｅ２００ｍｇ，Ｉ２７０ｍｇ，Ｃｏ６０ｍｇ。
　２．泌乳净能根据各原料能量计算所得，其余为实测值。ＮＥＬｉｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄｖａｌｕｅａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｉｎｇｒｅｄｉｅｎｔｓｅｎｅｒｇｙ，ｗｈｉｌｅｏｔｈｅｒｓａｒｅｍｅａｓｕｒｅｄｖａｌｕｅｓ．
１．３．３　变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）　　ＤＧＧＥ采用Ｄｃｏｄｅ突变检测系统（ＢｉｏＲａｄ）进行［２４］，其中聚丙烯酰胺浓
度为８％，尿素浓度范围为５０％～６５％；恒定电压８５Ｖ，６０℃条件下电泳１４ｈ；采用银染法染色，用Ｕｍａｘ扫描仪
（ＧＳ８００，ＢｉｏＲａｄ）扫描凝胶；扫描图谱用ＱｕａｎｔｉｔｙＯｎｅ（ＢｉｏＲａｄ）软件进行聚类分析。
１．３．４　ＲＴ－ＰＣＲ引物与扩增程序　　标准品与引物均为本实验室课题组先前制备的冻存样品［２５］；利用引物和
标准品在ＡＢＩ７５００ＲｅａｌＴｉｍｅＰＣＲＳｙｓｔｅｍ上进行ｑＰＣＲ绝对定量。
１．４　数据处理与统计分析
基于ＤＧＧＥ图谱分析结果［２６］，根据公式 犎＝－∑［犘犻ｌｎ（犘犻）］；犆＝∑（犘犻）２。其中，犎 代表香浓指数（Ｓｈａｎ
ｎｏｎ－ＷｅｉｎｅｒＩｎｄｅｘ），犘犻＝狀犻／狀，狀犻代表第犻个条带的光密度峰值，狀代表泳道中所有条带的光密度峰值之和，犆
代表优势度指数。分别计算处理组样品的香浓多样性指数和优势度指数；绝对定量的数据通过对数转换后，采用
广义线性（ＧＬＭ）模型（ＳＡＳ９．２）进行方差分析。
２　结果与分析
２．１　细菌多样性研究
２．１．１　ＤＧＧＥ指纹图谱　　ＤＧＧＥ图谱中每一个条带代表一种细菌且各泳道相同位置的条带代表同一种细
菌，条带的亮度越大反应该细菌的数量越多。从ＤＧＧＥ图谱（图１）可以看出每个处理组均含有丰富的电泳条带，
１２２第３期 潘龙　等：柴胡中草药对奶牛瘤胃菌群多样性及纤维分解菌的影响
直观反映了瘤胃细菌的多样性；条带数量虽然没有显
图１　奶牛瘤胃细菌犇犌犌犈图谱
犉犻犵．１　犇犌犌犈狆狉狅犳犻犾犲狊狅犳狋狅狋犪犾犫犪犮狋犲狉犻犪
　
图２　犘犆犚－犇犌犌犈指纹图谱聚类分析
犉犻犵．２　犜犺犲犱犲狀犱狉狅犵狉犪犿狅犳狋犺犲犇犌犌犈犳犻狀犵犲狉狆狉犻狀狋
　　　条带１～３，４～６，７～９和１０～１２分别代表柴胡的添加量为０，０．２５，
０．５０和１．００ｇ／ｋｇ。Ｂａｎｄｓ１－３，４－６，７－９ａｎｄ１０－１２ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇｒｅ
ｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｒａｄｉｘｂｕｐｌｅｕｒｉｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎａｔ０，０．２５，０．５０ａｎｄ１．００ｇ／
ｋｇｌｅｖｅｌｓ．
著的变化，但是颜色深浅却稍有差异，如：条带ａ和ｂ
在空白对照组清晰明显，但在柴胡添加组却模糊不清；
条带ｃ和ｄ在空白对照组颜色暗淡，但在柴胡添加组，
尤其是０．５和１．０ｇ／ｋｇ的剂量组却清晰明显。因此，
柴胡中草药没有显著导致条带的差异，但是在某种程
度上却引起了菌群的变化。
２．１．２　聚类分析　　将ＤＧＧＥ电泳图谱通过Ｑｕａｎ
ｔｉｔｙＯｎｅ软件进行处理并比较各个泳道之间的相似
性，进行非加权组平均法（ＵＰＧＡＭＡ）聚类分析。每
个处理组内相似性较高，均达到５０％以上；而柴胡添
加组，尤其是０．５和１．０ｇ／ｋｇ的剂量组与对照组相似
性较差，相似性低于４２％（图２）。因此，聚类分析进一
步说明柴胡中草药对瘤胃微生物具有一定的影响。
２．１．３　瘤胃细菌多样性分析　　通过ＱｕａｎｔｉｔｙＯｎｅ
软件输出的光强度数据计算细菌多样性指数和优势度
指数，并通过ＳＡＳ９．２进行单因素方差统计分析。柴
胡的添加有降低细菌多样性指数的趋势，且１．００
ｇ／ｋｇ的添加量显著降低了细菌多样性指数（犘＜
０．０５）；但是０．５和１．０ｇ／ｋｇ的添加量显著提高了菌
群优势度指数（犘＜０．０５）。因此，１．０ｇ／ｋｇ的柴胡中
草药降低了细菌多样性指数，却增加菌群优势度指数，
即细菌的种类可能减少，但是优势菌的数量却增加
（图３）。
２．２　纤维分解菌分析
柴胡中草药并没有显著增加（犘＞０．０５）单位瘤胃
液中主要纤维降解菌的拷贝数（表２）。因此，柴胡中
草药对瘤胃液中主要的３种纤维降解菌没有显著的影
响。
图３　瘤胃细菌的多样性指数（犃）和优势度指数（犅）
犉犻犵．３　犛犺犪狀狀狅狀－犠犲犻狀犲狉犻狀犱犲狓（犃）犪狀犱犇狅犿犻狀犪狀犮犲犻狀犱犲狓（犅）狅犳狉狌犿犲狀犫犪犮狋犲狉犻犪
２２２ 草　业　学　报 第２４卷
表２　柴胡中草药对瘤胃纤维降解菌的影响
犜犪犫犾犲２　犈犳犳犲犮狋狅犳狉犪犱犻狓犫狌狆犾犲狌狉犻犺犲狉犫犪犾狅狀狉狌犿犲狀犱狅犿犻狀犪狀狋犮犲犾狌犾狅犾狔狋犻犮犫犪犮狋犲狉犻犪 ｌｇ（拷贝数Ｃｏｐｉｅｓ／ｍＬ）
细菌种类
Ｓｐｅｃｉｅｓ
处理 Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ
０ｇ／ｋｇ ０．２５ｇ／ｋｇ ０．５０ｇ／ｋｇ １．００ｇ／ｋｇ
标准误
ＳＥＭ
犘值
犘ｖａｌｕｅ
黄色瘤胃球菌犚狌犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犳犾犪狏犲犳犪犮犻犲狀狊 ５．８２ ６．４７ ６．０２ ６．３８ ０．５５ ０．３３
产琥珀酸丝状杆菌犉犻犫狋狅犫犪犮狋犲狉狊狌犮犮犻狀狅犵犲狀犲 ７．１２ ７．７９ ７．０４ ８．１０ ０．７２ ０．３０
白色瘤胃球菌犚狌犿犻狀狅犮狅犮犮狌狊犪犾犫狌狊 ６．５６ ６．６０ ６．４３ ６．５１ ０．３２ ０．９２
３　讨论
植物次级代谢产物可以通过改变细胞膜的通透性，从而引起细胞质中离子流失，导致细胞死亡［２７］；这主要取
决于植物的种类及其主要的活性次级代谢产物［２］。柴胡根含有丰富的次级代谢产物，其中最主要的就是皂苷，约
占干物质的７％［１８］。皂苷在瘤胃中被水解成皂苷元，氧化后，在十二指肠和空肠等被吸收，然后通过胆汁以结合
或者游离的皂苷元分泌出去［２８］。然而，由于皂苷在瘤胃中与微生物相互作用，因此皂苷作用较为复杂［６］。一方
面，皂苷可以选择性影响瘤胃微生物［２９］；另一方面，皂苷可以被微生物降解成皂苷元［３０］。研究表明，瘤胃中的皂
苷生物活性比皂苷元高，因此瘤胃微生物将皂苷去糖基化将降低皂苷的抗微生物活性［３１］。
低剂量皂苷（０．２ｇ／Ｌ）可以选择性刺激细菌生长，可能由于增加了细胞膜的通透性，从而增加了细菌细胞的
营养吸收；而高剂量皂苷（０．６ｇ／Ｌ）可以抑制细菌的生长，这可能与抑制原虫的数量与活力有关［３２］。关于皂苷对
瘤胃微生物的研究效果也报道各异，茶皂苷（０．４ｇ／Ｌ）显著降低了瘤胃真菌的数量，但并没有影响黄色瘤胃球
菌［３３］；皂树苷和丝兰皂苷（０～０．６ｇ／Ｌ）对白色瘤胃球菌的丰富度没有显著影响，但皂树苷降低了黄色瘤胃球菌，
而丝兰皂苷却增加了黄色瘤胃球菌的丰富度［３１］；无患子皂苷对瘤胃纤维降解菌的影响却不相一致，或降低［３４］、
或升高［３５］、或没有显著影响［３６］。然而，该试验中，柴胡中草药的添加并没有显著改变瘤胃微生物的种类，对主要
的纤维分解菌也没有显著影响，但是较高剂量（０．５和１．０ｇ／ｋｇ）的中草药提高了优势菌的数量，这与其他研究结
果不甚一致，可能与皂苷的种类及其微生物降解有关。进一步研究表明，无患子皂苷对绵羊和山羊瘤胃中白色瘤
胃球菌和黄色瘤胃球菌的负面效应并不是长久有效，当饲喂到１０５ｄ时抑制效应消失，也许由于微生物适应了皂
苷的添加［３５］。因此，这也从侧面反映了为什么皂苷对微生物的影响结论不尽一致。
体外研究苜蓿皂苷对纤维菌的影响，持续作用１４ｈ后白色瘤胃球菌和黄色瘤胃球菌的数量并没有减少，但
是活性显著降低［３７］；因此，并不能根据某些纤维菌的数量简单判断皂苷对微生物的影响，因为纤维菌的活性与数
量相关性并不是很高［３８］。因而，本试验只能表明柴胡对３种主要纤维降解菌的数量没有显著影响，但是否影响
其活性仍有待进一步研究。
挥发油可以短时间抑制原虫和真菌的生长［８］，也可以通过选择性作用于特定瘤胃微生物，尤其是蛋白质和淀
粉分解菌［７］，从而调控瘤胃发酵。挥发油可以短期抑制细菌的生长［２７］，改变瘤胃菌群的多样性［３９］，但对总菌活性
没有显著影响［４０］。然而，挥发油作用时间过长也容易导致微生物的适用，降低应用效果［７］。因此，不管是挥发油
还是皂苷作用时间过长，均会引起瘤胃微生物的适应，从而导致试验效果不尽一致，从而也增加了提取物开发利
用的难度。
本试验中的结果与研究报道不完全相同，这种差异可能由于皂苷在瘤胃中被微生物降解产生的皂苷元类型
和剂量等不同导致，同时发挥生物活性的有效成分也仍不确定，是否具有皂苷和皂苷元协同作用仍旧是个未知
数［３２］。然而，这些因素在瘤胃灰箱中无法控制，这也许就是中草药及提取物的一大综合治理的特色。当然，中草
药及其提取物的药效也与植物自身生长因素有关，比如光周期、植物生理、环境因素以及加工等过程有关；另一方
面也可能是试验周期过长，瘤胃微生物已经适应了皂苷和挥发油等次级代谢产物的环境，从而使应用效果不显
著［４１］。因此，中草药调节瘤胃微生态环境是多种因素的结果，不但与中草药的植物化学有关，而且与瘤胃中微生
物有关，并且它们之间也存在着复杂的相互关系；这也就是为什么中草药调节瘤胃微生物代谢的结果不尽一致，
３２２第３期 潘龙　等：柴胡中草药对奶牛瘤胃菌群多样性及纤维分解菌的影响
同时也因此增加了中草药的研究难度。
４　结论
柴胡中草药并没有影响主要纤维分解菌的数量，也没有导致条带的差异性变化，但是其指纹图谱与对照组相
似性并不高，且１．０ｇ／ｋｇ的添加量显著降低了瘤胃液香农多样性指数，而０．５和１．０ｇ／ｋｇ的添加量则提高了菌
群优势度指数。因此，柴胡中草药在一定程度上影响了瘤胃细菌的多样性，但差异并不十分显著，可能由于瘤胃
微生物适应了外源性柴胡中草药的添加。
犚犲犳犲狉犲狀犮犲：
［１］　ＷａｎｇＨＦ，ＹａｎｇＷＲ，ＹａｎｇＹＸ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｓｔｕｄｙｏｎｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｈｉｎｅｓｅｈｅｒｂａｌｍｉｘｔｕｒｅｓｏｎｇｒｏｗｔｈ，ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｏｓｔｒｕｍｉｎａｌｄｉｇｅｓｔｉｖｅｅｎ
ｚｙｍｅｓａｎｄｓｅｒｕｍａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔａｔｕｓｏｆｂｅｅｆｃａｔｔｌｅ．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｉｎＣｈｉｎａ，２０１１，１０（３）：４４８４５５．
［２］　ＢｏｄａｓＲ，ＰｒｉｅｔｏＮ，ＧａｒｃｉａＧｏｎｚａｌｅｚＲ，犲狋犪犾．Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄｍｅｔｈａｎｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｉｔｈｐｌａｎｔｓｅｃｏｎｄａｒｙｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ．
ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，１７６：７８９３．
［３］　ＺｈｏｎｇＲＺ，ＹｕＭ，ＬｉｕＨ Ｗ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｄｉｅｔａｒｙ犃狊狋狉犪犵犪犾狌狊狆狅犾狔狊犪犮犮犺犪狉犻犱犲ａｎｄ犃狊狋狉犪犵犪犾狌狊犿犲犿犫狉犪狀犪犮犲狌狊ｒｏｏｔｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎ
ｇｒｏｗｔｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ，ｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｓ，ａｎｄａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓｔａｔｕｓｏｆｌａｍｂｓ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，
１７４：６０６７．
［４］　ＬｉｕＱＨ，ＬｉｕＣＴ，ＬｉｎＸ，犲狋犪犾．Ｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎａｎｄｂａｃｔｅｒｉａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｏａｔｕｎｄｅｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｍｐｏｕｎｄｈｅｒｂａｌｍｅｄｉｃｉｎｅｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔｉｎｇ
Ｌｅｖｅｌ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＥｃｏｎｏｍｉｃＡｎｉｍａｌ，２０１３，１７（２）：７８８１．
［５］　ＳｏｒｏｏｒＥＮ，ＲｏｕｚｂｅｈａｎＹ，ＡｌｉｐｏｕｒＤ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆ犈犮犺犻狌犿犪犿狅犲狀狌犿ｅｘｔｒａｃｔｏｎｔｈｅｇｒｏｗｔｈｒａｔｅａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆＭｅｈｒａｂａｎｌａｍｂｓ．
ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，１８４：１４９１５７．
［６］　ＷａｎｇＤＳ，ＨｕａｎｇＪＬ，ＺｈａｎｇＺＨ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｐｌａｎｔｓｏｌｉｄｐｏｗｅｒａｎｄｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆ犐犿狆犪狋犻犲狀狊犫犪犾狊犪犿犻狀犪ｏｎｍｉｃｒｏｂｉａｌｍｅｔａｂｏｌｉｃｐａｒａｍ
ｅｔｅｒｓｄｕｒｉｎｇｉｎｖｉｔｒｏｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１３，２２（２）：８７９３．
［７］　ＨａｒｔＫＪ，ＹａｎｅｚＲｕｉｚＤＲ，ＤｕｖａｌＳＭ，犲狋犪犾．Ｐｌａｎｔｅｘｔｒａｃｔｓｔｏｍａｎｉｐｕｌａｔｅｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，
１４：８３５．
［８］　ＴａｌｅｂｚａｄｅｈＲ，ＡｌｉｐｏｕｒＤ，ＳａｈａｒｈｉｚＭＪ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｓｏｆ犣犪狋犪狉犻犪犿狌犾狋犻犳犾狅狉犪ｏｎｉｎｖｉｔｒｏｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｐｒｏｔｏｚｏａｌｐｏｐｕｌａ
ｔｉｏｎ，ｇｒｏｗｔｈａｎｄｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｎａｅｒｏｂｉｃｆｕｎｇｕｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ Ｍｅｈｒａｂａｎｓｈｅｅｐ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１２，１７２：１１５
１２４．
［９］　ＴａｎＬＬ，ＣａｉＸ，ＨｕＺＨ，犲狋犪犾．Ｌｏｃａｌｉｚａｔｉｏｎａｎｄｄｙｎａｍｉｃｃｈａｎｇｅｏｆｓａｉｋｏｓａｐｏｎｉｎｉｎｒｏｏｔｏｆ犅狌狆犾犲狌狉狌犿犮犺犻狀犲狀狊犲．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｎｔｅｇｒａｔｉｖｅＰｌａｎｔ
Ｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，５０：９５１９５７．
［１０］　ＡｓｈｏｕｒＭＬ，ＥＩＲｅａｄａｉＭ，ＹｏｕｎｓＭ，犲狋犪犾．Ｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｂｉｏｌｏｇｉｃａｌａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｏｂｔａｉｎｅｄｆｒｏｍ犅狌狆犾犲狌狉狌犿犿犪狉
犵犻狀犪狋狌犿 （Ａｐｉａｃｅａｅ）．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙａｎｄＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００９，６１（８）：１０７９１０８７．
［１１］　ＸｕＨ，ＺｈａｎｇＹＹ，ＺｈａｎｇＪＷ，犲狋犪犾．ＩｓｏｌａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆａｎａｎｔｉｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｒｙｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＤ３Ｓ１ｆｒｏｍｔｈｅｒｏｏｔｓｏｆ犅狌狆犾犲狌
狉狌犿狊犿犻狋犺犻犻．ＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＩｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２００７，７（２）：１７５１８２．
［１２］　ＹａｎｇＬ，ＷａｎｇＸＹ，ＬｉｕＣ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｂｕｐｌｅｕｒｕｍｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓａｎｄｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｅｆｆｅｃｔｓ．ＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎｏｎＴｒａ
ｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１２，２９（３）：１４３１４５．
［１３］　ＬｕｏＦ，ＭｅｎｇＸＦ．ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｎａｌｙｓｉｓａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｈａｉｈｕ．ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｎｅ，２０１２，２７（７）：８６３８６４．
［１４］　ＳｕｎＳＪ．ＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｎａｌｙｓｉｓａｎｄｃｌｉｎｉｃａｌａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＣｈａｉｈｕ．ＧｕｉｄｅｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃｉｎｅ，２０１０，２９（８）：２１０２１１．
［１５］　ＸｉｅＤＨ，ＪｉａＸＢ，ＣａｉＢＣ，犲狋犪犾．ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｎａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆｎａｐｈｔｈａｉｎｂｕｐｌｅｕｒｕｍｃｈｉｎｅｎｓｅＤＣａｎｄｂｕｐｌｅｕｒｕｍｓｃｏｒｚｏｎｅｒｉｆｏｌｉ
ｕｍｗｉｌｄ．ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＨｏｓｐｉｔａｌＰｈａｒｍａｃｙ，２００７，２７（４）：５０２５０４．
［１６］　ＷａｎｇＳＣ，ＺｈａｏＨＰ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｃｈａｉｈｕｏｎａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃａｎｄａｎｔｉｖｉｒｕｓ．ＳｈｉｚｈｅｎＪｏｕｒｎａｌｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，９（５）：
４１８４１８．
［１７］　ＬｉｕＹＨ，ＣｈｅｎＹＳ，ＸｉｅＷ，犲狋犪犾．Ｓｔｕｄｉｅｓｏｎａｎｔｉｅｎｄｏｔｏｘｉｎａｃｔｉｏｎｏｆｔｏｔａｌｓａｐｏｎｉｎｓｆｒｏｍ犚犪犱犻狓犫狌狆犾犲狌狉犻．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎａｌＭａｔｅ
ｒｉａｌｓ，２００３，２６（６）：４２３４２５．
［１８］　ＡｓｈｏｕｒＭＬ，ＷｉｎｋＭ．Ｇｅｎｕｓ犅狌狆犾犲狌狉狌犿：ａｒｅｖｉｅｗｏｆｉｔｓｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｍｏｄｅｓｏｆａｃｔｉｏｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙａｎｄＰｈａｒ
ｍａｃｏｌｏｇｙ，２０１１，６３：３０５３２１．
［１９］　ＶａｎＷｙｋＢＥ，ＷｉｎｋＭ．ＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｌａｎｔｓｏｆｔｈｅＷｏｒｌｄ：ａｎＩｌｕｓｔｒａｔｅｄＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＧｕｉｄｅｔｏＩｍｐｏｒｔａｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＰｌａｎｔｓａｎｄＴｈｅｉｒＵｓｅｓ［Ｍ］．
ＴｉｍｂｅｒＰｒｅｓｓ：Ｐｏｒｔｌａｎｄ，Ｏｒｅｇｏｎ，２００４．
［２０］　ＺｈａｎｇＹＢ，ＬｉａｎｇＹ，ＸｉａＡＪ．ＴｈｅｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｒｅｓｅａｒｃｈｐｒｏｇｒｅｓｓｏｆｔｈｅａｎｔｉｐｙｒｅｔｉｃｅｆｆｅｃｔｏｆＣｈａｉｈｕ．ＣｈｉｎａＰｈａｅｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，２０１１，
２０（３）：７９８０．
［２１］　ＰａｎＬ，ＢｕＤＰ，ＣｈｅｎｇＪＢ，犲狋犪犾．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎｓｏｆ犚犪犱犻狓犫狌狆犾犲狌狉犻ａｎｄｅｘｔｒａｃｔｓａｎｄｐｒｏｍｉｓｉｎｇｈｅａｔｓｔｒｅｓｓｅｄａｂａｔｅｍｅｎｔａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆｌｉｖｅｓｔｏｃｋａｎｄｐｏｕｌｔｒｙ．ＦｅｅｄＩｎｄｕｓｔｒｙ，２０１３，（Ｓｕｐｐｌ．）：３９４１．
［２２］　ＰａｎＬ，ＢｕＤＰ，ＷａｎｇＪＱ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ犚犪犱犻狓犫狌狆犾犲狌狉犻ｅｘｔｒａｃｔｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｎｌａｃｔａｔｉｏｎｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅａｎｄｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｈｅａｔ
ｓｔｒｅｓｓｅｄｌａｃｔａｔｉｎｇＨｏｌｓｔｅｉｎｃｏｗｓ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１４，１８７：１８．
［２３］　ＢｕｒｇｍａｎｎＨ，ＰｅｓａｒｏＭ，ＷｉｄｍｅｒＦ，犲狋犪犾．ＡｓｔｒａｔｅｇｙｆｏｒｏｐｔｉｍｉｚｉｎｇｑｕａｌｉｔｙａｎｄｑｕａｎｔｉｔｙｏｆＤＮＡｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｓｏｉｌ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉ
４２２ 草　业　学　报 第２４卷
ｃａｌＭｅｔｈｏｄｓ，２００１，４５（１）：７２０．
［２４］　ＷａｎｇＸＦ，ＷａｎｇＷＤ，ＧａｏＬＪ，犲狋犪犾．Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓｏｆａｐｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｄｅｎａｔｕｒｉｎｇｇｒａｄｉｅｎｔｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＤＧＧＥ）ｉｎｓｔｕｄｉｅｓｏｆｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ
ｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００６，１１（５）：１７．
［２５］　ＨｕＸＬ．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｆｏｒａｇｅａｎｄｐｒｏｔｅｉｎｓｏｕｒｃｅｓｏｆｄｉｅｔｏｎｔｈｅｑｕａｎｔｉｔｙｏｆｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｂａｃｔｅｒｉａｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎｏｆｄａｉｒｙｃｏｗｓ［Ｄ］．Ｂｅｉｊｉｎｇ：
ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，２０１３．
［２６］　ＺｈａｎｇＢ，ＬｉＸＬ，ＪｉａｎｇＨ Ｍ，犲狋犪犾．Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙａｎｄｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓｏｆｔｈｅｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃａｃｔｉｎｏｍｙｅｅｔｅｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍ犕犲犱犻犮犪犵狅狉狌狋犺犲狀犻犮犪．
ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１３，２２（５）：１１３１１９．
［２７］　ＣａｌｓａｍｉｇｌｉａＳ，ＢｕｓｑｕｅｔＭ，ＣａｒｄｏｚｏＰＷ，犲狋犪犾．Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｓａｓｍｏｄｉｆｉｅｒｓｏｆｒｕｍｅｎｍｉｃｒｏｂｉａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＤａｉｒｙＳｃｉｅｎｃｅ，２００７，
９０：２５８０２５９５．
［２８］　ＰａｔｒａＡＫ，ＳａｘｅｎａＪ．Ａｒｅｖｉｅｗｏｆｔｈｅｅｆｆｅｃｔａｎｄｍｏｄｅｏｆａｃｔｉｏｎｏｆｓａｐｏｎｉｎｓｏｎｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｏｐｕｌａｔｉｏｎａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎａｎｄｒｕｍｉ
ｎａｎｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．ＮｕｔｒｉｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈＲｅｖｉｅｗｓ，２００９，２２：２０４２１９．
［２９］　ＷａｎｇＹ，ＭｃａｌｉｓｔｅｒＴＡ，ＹａｎｋｅＬＪ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｓｔｅｒｏｉｄａｌｓａｐｏｎｉｎｆｒｏｍ犢狌犮犮犪狊犮犺犻犱犻犵犲狉犪ｅｘｔｒａｃｔｏｎｒｕｍｉｎａｌｍｉｃｒｏｂｅｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄ
Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０００，８８（５）：８８７８９６．
［３０］　ＳｕｎＹ，ＬｏｎｇＲＣ，ＺｈａｎｇＴＪ，犲狋犪犾．Ａｄｖａｎｃｅｓｉｎｔｈｅｓｔｕｄｙｏｆａｌｆａｌｆａｓａｐｏｎｉｎ．ＡｃｔａＰｒａｔａｃｕｌｔｕｒａｅＳｉｎｉｃａ，２０１３，２２（３）：２７４２８３．
［３１］　ＴｅｆｅｒｄｅｇｎｅＢ，ＭｃｉｎｔｏｓｈＦ，ＯｓｕｊｉＰＯ，犲狋犪犾．Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｏｆｆｏｌｉａｇｅｆｒｏｍｄｉｆｆｅｒｅｎｔａｃｃｅｓｓｉｏｎｓｏｆｔｈｅｓｕｂｔｒｏｐｉｃａｌｌｅｇｕｍｉｎｏｕｓｔｒｅｅ，犛犲狊犫犪狀犻犪狊犲狊
犫犪狀，ｏｎｒｕｍｉｎａｌｐｒｏｔｏｚｏａｉｎＥｔｈｉｏｐｉａｎａｎｄＳｃｏｔｔｉｓｈｓｈｅｅｐ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９９，７８：１１２０．
［３２］　ＰａｔｒａＡＫ，ＳｔｉｖｅｒｓｏｎＪ，ＹｕＺ．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｑｕｉｌａｊａａｎｄｙｕｃｃａｓａｐｏｎｉｎｓｏｎｃｏｍｍｕｎｉｔｉｅｓａｎｄｓｅｌｅｃｔｐｏｐｕｌａｔｉｏｎｓｏｆｒｕｍｅｎｂａｃｔｅｒｉａａｎｄａｒｃｈａｅａ，ａｎｄ
ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｉｎｖｉｔｒｏ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２０１２，１１３：１３２９１３４０．
［３３］　ＧｕｏＹＱ，ＬｉｕＪＸ，ＬｕＹ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｅａｓａｐｏｎｉｎｏｎｍｅｔｈａｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，ｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｍｃｒＡｇｅｎｅ，ｉｎｃｕｌ
ｔｕｒｅｓｏｆｒｕｍｅｎｍｉｃｒｏｏｒｇａｎｉｓｍｓ．ＬｅｔｔｅｒｓｉｎＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００８，４７（５）：４２１４２６．
［３４］　ＮｉｎｇｒａｔＲＷＳ，ＧａｒｎｓｗｏｒｔｈｙＰＣ，ＮｅｗｂｏｌｄＣＪ．Ｓａｐｏｎｉｎｆｒａｃｔｉｏｎｓｉｎ犛犪狆犻狀犱狌狊狉犪狉犪犽：ｅｆｆｅｃｔｓｏｎｒｕｍｅｎｍｉｃｒｏｂｅｓ．ＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎＮｕｔｒｉｔｉｏｏｎ
Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，２００２，４２（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ８２．
［３５］　ＴｈａｌｉｂＡ，ＷｉｄｉａｗａｔｉＹ，ＨａｍｉｄＨ，犲狋犪犾．Ｔｈｅｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓａｐｏｎｉｎｆｒｏｍ犛犪狆犻狀犱狌狊狉犪狉犪犽ｏｎｒｕｍｉｎａｌｆｌｏｒａａｎｄｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｉｎ
ｖｉｔｒｏ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＩｌｍｕＴｅｒｎａｋｄａｎＶｅｒｔｉｎｅｒ，１９９６，２：１７２０．
［３６］　ＷｉｎａＥ，ＭｕｅｔｚｅｌＳ，Ｈｏｆｆｍａｎｎｅ，犲狋犪犾．Ｓａｐｏｎｉｎｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｍｅｔｈａｎｏｌｅｘｔｒａｃｔｏｆ犛犪狆犻狀犱狌狊狉犪狉犪犽ａｆｆｅｃｔｍｉｃｒｏｂｉａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，ｍｉｃｒｏｂｉａｌａｃｔｉｖ
ｉｔｙａｎｄｍｉｃｒｏｂｉａｌｃｏｍｍｕｎｉｔｙｓｔｒｕｃｔｕｒｅ犻狀狏犻狋狉狅．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００５，１２１：１５９１７４．
［３７］　ＷａｎｇＹＸ，ＭｃａｌｉｓｔｅｒＴＡ，ＹａｎｋｅＬＪ，犲狋犪犾．犐狀狏犻狋狉狅ｅｆｆｅｃｔｓｏｆｓｔｅｒｏｉｄａｌｓａｐｏｎｉｎｓｆｒｏｍ犢狌犮犮犪狊犮犺犻犱犻犵犲狉犪ｅｘｔｒａｃｔｏｎｒｕｍｅｎｍｉｃｒｏｂｉａｌｐｒｏｔｅｉｎ
ｓｙｎｔｈｅｓｉｓａｎｄｒｕｍｉｎａｌｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆｔｈｅＳｃｉｅｎｃｅｏｆＦｏｏｄａｎｄＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，２０００，８０（１４）：２１１４２１２２．
［３８］　ＷｉｎａＥ，ＭｕｅｔｚｅｌＳ，ＢｅｃｋｅｒＫ．Ｔｈｅｄｙｎａｍｉｃｓｏｆｍａｊｏｒｆｉｂｒｏｌｙｔｉｃｍｉｃｒｏｂｅｓａｎｄｅｎｚｙｍｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｔｈｅｒｕｍｅｎｉｎｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｓｈｏｒｔａｎｄｌｏｎｇｔｅｒｍ
ｆｅｅｄｉｎｇｏｆ犛犪狆犻狀犱狌狊狉犪狉犪犽ｓａｐｏｎｉｎｓ．ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，２００６，１００：１１４１２２．
［３９］　ＳｐａｎｇｈｅｒｏＭ，ＺａｎｆｉＣ，ＦａｂｂｒｏＥ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｂｌｅｎｄｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｓｏｎｓｏｍｅｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓｏｆｉｎｖｉｔｒｏｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄ
ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，１４５：３６４３７４．
［４０］　ＮｅｗｂｏｌｄＣＪ，ＭｃｉｎｔｏｓｈＦＭ，ＷｉｌｉａｍｓＰ，犲狋犪犾．Ｅｆｆｅｃｔｓｏｆａｓｐｅｃｉｆｉｃｂｌｅｎｄｏｆｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｃｏｍｐｏｕｎｄｓｏｎｒｕｍｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄ
ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００４，１１４：１０５１１２．
［４１］　ＢｅｎｃｈａａｒＣ，ＧｒｅａｔｈｅａｄＨ．Ｅｓｓｅｎｔｉａｌｏｉｌｓａｎｄｏｐｐｏｒｔｕｎｉｔｉｅｓｔｏｍｉｔｉｇａｔｅｅｎｔｅｒｉｃｍｅｔｈａｎｅｅｍｉｓｓｉｏｎｓｆｒｏｍｒｕｍｉｎａｎｔｓ．ＡｎｉｍａｌＦｅｅｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄ
Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１１，１６６１６７：３３８３５５．
参考文献：
［４］　刘庆华，刘长桃，林欣，等．复方中草药添加剂对南江黄羊瘤胃代谢和细菌数量的影响．经济动物学报，２０１３，１７（２）：７８８１．
［６］　王东升，黄江丽，张志红，等．凤仙花植株乙醇浸提液和固体粉剂对瘤胃体外发酵代谢参数的影响．草业学报，２０１３，２２（２）：８７９３．
［１２］　杨柳，王雪莹，刘畅，等．北柴胡化学成分与药理作用的研究进展．中医药信息，２０１２，２９（３）：１４３１４５．
［１３］　罗峰，孟肖飞．柴胡的药理分析及应用．中医学报，２０１２，２７（７）：８６３８６４．
［１４］　孙世军．柴胡的药理学分析以及临床应用．中国医药指南，２０１０，２９（８）：２１０２１１．
［１５］　谢东浩，贾晓斌，蔡宝昌，等．北柴胡及春柴胡挥发油的解热作用比较．中国医院药学杂志，２００７，２７（４）：５０２５０４．
［１６］　王胜春，赵慧平．柴胡的清热与抗病毒作用田．时珍国医国药，１９９８，９（５）：４１８４１８．
［１７］　刘云海，陈永顺，谢委，等．柴胡总皂苷抗内毒素活性研究．中药材，２００３，２６（６）：４２３４２５．
［２０］　张云波，梁园，夏爱军．柴胡解热作用的药理研究进展．中国药业，２０１１，２０（３）：７９８０．
［２１］　潘龙，卜登攀，程建波，等．柴胡及其提取物的药理作用及缓解奶牛热应激的应用前景．饲料工业，２０１３，（增刊）：３９４１．
［２４］　王小芬，王伟东，高丽娟，等．变性梯度凝胶电泳在环境微生物研究中的应用详解．中国农业大学学报，２００６，１１（５）：１７．
［２５］　胡小丽．不同粗饲料和蛋白质饲料类型日粮对奶牛瘤胃功能细菌数量的影响［Ｄ］．北京：中国农业科学院，２０１３．
［２６］　张波，李小林，江华明，等．花苜蓿内生放线菌多样性及群落结构．草业学报，２０１３，２２（５）：１１３１１９．
［３０］　孙彦，龙瑞才，张铁军，等．紫花苜蓿皂苷研究进展．草业学报，２０１３，２２（３）：２７４２８３．
５２２第３期 潘龙　等：柴胡中草药对奶牛瘤胃菌群多样性及纤维分解菌的影响