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Immunocytochemical Identification of Vegetative Storage Proteins in the Branch of Ginkgo biloba

银杏枝条营养贮藏蛋白质的免疫细胞化学鉴定


依据银杏枝条中32和36 ku蛋白质含量的明显季节变化,推测它们是银杏的营养贮藏蛋白质。采用间接免疫组织细胞化学定位技术,对这2种蛋白质进行细胞化学定位。32和36 ku蛋白质具有一定的免疫相关性,它们分布在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中,存在于这些细胞的小液泡里。研究结果揭示这2种蛋白质的组织分布式样,为这2种蛋白质是银杏的营养贮藏蛋白质提供有力证据。

Both 32 ku and 36 ku proteins had been in speculated as the vegetative storage proteins the branches of Ginkgo biloba based on the obvious seasonal changes in their contents. The cytochemical localization of the two proteins was studied with the indirect immuohistochemistry localization technigue. The proteins with a certain immune correlation, were distributed in the vacuole of the parenchyma cells of cortex and the parenchyma cells of phloem. The results revealed tissue distribution pattern of the two kinds of protein, and in the meantime the results provided strong evidence to support the two kinds of protein as the vegetative storage proteins of G. biloba.


全 文 :第 源苑 卷 第 员 期
圆 园 员 员 年 员 月
林 业 科 学
杂悦陨耘晕栽陨粤 杂陨蕴灾粤耘 杂陨晕陨悦粤耘 灾燥造郾 源苑袁晕燥郾 员允葬灶援 袁圆 园 员 员
银杏枝条营养贮藏蛋白质的免疫细胞化学鉴定鄢
郭红彦员袁圆 摇 彭方仁圆 摇 吴青霞圆 摇 白晋华员
渊员郾 山西农业大学林学院摇 太谷 园猿园愿园员曰 圆郾 南京林业大学森林资源与环境学院摇 南京 圆员园园猿苑冤
摘摇 要院摇 依据银杏枝条中 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质含量的明显季节变化袁推测它们是银杏的营养贮藏蛋白质遥 采用间
接免疫组织细胞化学定位技术袁对这 圆 种蛋白质进行细胞化学定位遥 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质具有一定的免疫相关性袁
它们分布在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中袁存在于这些细胞的小液泡里遥 研究结果揭示这 圆 种蛋
白质的组织分布式样袁为这 圆 种蛋白质是银杏的营养贮藏蛋白质提供有力证据遥
关键词院摇 银杏曰 营养贮藏蛋白质曰 免疫细胞化学定位
中图分类号院 杂苑员愿郾 源猿摇 摇 摇 文献标识码院粤摇 摇 摇 文章编号院员园园员 原 苑源愿愿渊圆园员员冤园员 原 园园远愿 原 园缘
收稿日期院 圆园园怨 原 员员 原 圆远曰 修回日期院圆园员园 原 园员 原 园缘遥
基金项目院国家自然科学基金项目渊 猿园愿苑圆园缘缘 冤尧高校博士点基金渊圆园园苑园圆怨愿园园愿冤尧山西农大科技创新基金项目渊圆园园愿园圆怨冤和山西农业大学
博士科研启动基金遥
鄢彭方仁为通讯作者遥
陨皂皂怎灶燥糟赠贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 陨凿藻灶贼蚤枣蚤糟葬贼蚤燥灶 燥枣 灾藻早藻贼葬贼蚤增藻 杂贼燥则葬早藻 孕则燥贼藻蚤灶泽
蚤灶 贼澡藻 月则葬灶糟澡 燥枣 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬
郧怎燥 匀燥灶早赠葬灶员袁圆 摇 孕藻灶早 云葬灶早则藻灶圆 摇 宰怎 匝蚤灶早曾蚤葬圆 摇 月葬蚤 允蚤灶澡怎葬员
渊员援 悦燥造造藻早藻 燥枣 云燥则藻泽贼则赠袁 杂澡葬灶曾蚤 粤早则蚤糟怎造贼怎则葬造 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠摇 栽葬蚤早怎 园猿园愿园员曰
圆援 悦燥造造藻早藻 燥枣 云燥则藻泽贼 砸藻泽燥怎则糟藻泽 葬灶凿 耘灶增蚤则燥灶皂藻灶贼袁 晕葬灶躁蚤灶早 云燥则藻泽贼则赠 哉灶蚤增藻则泽蚤贼赠摇 晕葬灶躁蚤灶早 圆员园园猿苑冤
粤遭泽贼则葬糟贼院摇 月燥贼澡 猿圆 噪怎 葬灶凿 猿远 噪怎 责则燥贼藻蚤灶泽 澡葬凿 遭藻藻灶 蚤灶 泽责藻糟怎造葬贼藻凿 葬泽 贼澡藻 增藻早藻贼葬贼蚤增藻 泽贼燥则葬早藻 责则燥贼藻蚤灶泽 贼澡藻 遭则葬灶糟澡藻泽 燥枣
郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬 遭葬泽藻凿 燥灶 贼澡藻 燥遭增蚤燥怎泽 泽藻葬泽燥灶葬造 糟澡葬灶早藻泽 蚤灶 贼澡藻蚤则 糟燥灶贼藻灶贼泽援 栽澡藻 糟赠贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 贼澡藻 贼憎燥 责则燥贼藻蚤灶泽
憎葬泽 泽贼怎凿蚤藻凿 憎蚤贼澡 贼澡藻 蚤灶凿蚤则藻糟贼 蚤皂皂怎燥澡蚤泽贼燥糟澡藻皂蚤泽贼则赠 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 贼藻糟澡灶蚤早怎藻援 栽澡藻 责则燥贼藻蚤灶泽 憎蚤贼澡 葬 糟藻则贼葬蚤灶 蚤皂皂怎灶藻 糟燥则则藻造葬贼蚤燥灶袁
憎藻则藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼藻凿 蚤灶 贼澡藻 增葬糟怎燥造藻 燥枣 贼澡藻 责葬则藻灶糟澡赠皂葬 糟藻造造泽 燥枣 糟燥则贼藻曾 葬灶凿 贼澡藻 责葬则藻灶糟澡赠皂葬 糟藻造造泽 燥枣 责澡造燥藻皂援 栽澡藻 则藻泽怎造贼泽 则藻增藻葬造藻凿
贼蚤泽泽怎藻 凿蚤泽贼则蚤遭怎贼蚤燥灶 责葬贼贼藻则灶 燥枣 贼澡藻 贼憎燥 噪蚤灶凿泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶袁 葬灶凿 蚤灶 贼澡藻 皂藻葬灶贼蚤皂藻 贼澡藻 则藻泽怎造贼泽 责则燥增蚤凿藻凿 泽贼则燥灶早 藻增蚤凿藻灶糟藻 贼燥 泽怎责责燥则贼
贼澡藻 贼憎燥 噪蚤灶凿泽 燥枣 责则燥贼藻蚤灶 葬泽 贼澡藻 增藻早藻贼葬贼蚤增藻 泽贼燥则葬早藻 责则燥贼藻蚤灶泽 燥枣 郧援 遭蚤造燥遭葬援
运藻赠 憎燥则凿泽院摇 郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬曰 增藻早藻贼葬贼蚤增藻 泽贼燥则葬早藻 责则燥贼藻蚤灶泽渊灾杂孕泽冤曰 蚤皂皂怎灶燥糟赠贼燥糟澡藻皂蚤糟葬造 造燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶
摇 摇 营养器官中的季节性氮素贮藏是树木氮代谢的
显著特征袁在树木的生长发育及对逆境的反应方面
起重要作用 渊田维敏等袁圆园园猿曰 栽蚤葬灶 藻贼 葬造援袁 圆园园圆曰
圆园园猿冤遥 圆园 世纪 愿园 年代中期以来袁在温带和热带硬
材树木的营养器官中发现一类专门的贮藏蛋白质袁
称为营养贮藏蛋白质 渊 增藻早藻贼葬贼蚤增藻 泽贼燥则葬早藻 责则燥贼藻蚤灶泽袁
灾杂孕泽冤渊杂贼藻责蚤藻灶 藻贼 葬造援袁 员怨怨源冤遥 有关木本植物 灾杂孕泽
的分类和定位尧生化特性尧生理功能尧合成与降解机
制尧基因表达与调控等方面进行过系统而深入的研
究袁积累了丰富的资料渊彭方仁等袁圆园园员曰 田维敏等袁
员怨怨怨曰 圆园园圆曰 郭红彦等袁圆园园远冤遥 对营养贮藏蛋白质
季节变化已有研究报道袁充分肯定了营养贮藏蛋白
质的氮素贮藏功能渊彭方仁等袁圆园园远曰 田维敏等袁
圆园园圆曰 郭红彦等袁圆园园怨 冤遥 有研究发现无患子科
渊杂葬责蚤灶凿葬糟藻葬藻冤树种荔枝渊蕴蚤贼糟澡蚤 糟澡蚤灶藻灶泽蚤泽冤和无患子
渊杂葬责蚤灶凿怎泽 皂怎噪燥则燥泽泽蚤冤的营养贮藏蛋白质是一种有活
性的胰蛋白酶抑制剂渊栽蚤葬灶 藻贼 葬造援袁 圆园园苑曰 蕴蚤怎 藻贼 葬造援袁
圆园园怨冤袁营养贮藏蛋白质可能还有某些特殊的生物
学功能遥 这些研究表明树木 灾杂孕泽 的细胞学和生物
化学性质具有多样性遥 银杏渊郧蚤灶噪早燥 遭蚤造燥遭葬冤为落叶
乔木袁是现存种子植物中最古老的孑遗植物袁是我国
重要的经济林树种遥 有关银杏营养贮藏蛋白质的组
成成分和细胞学已进行了相关报道袁研究发现银杏
中存在有季节变化的 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质渊郭红彦
等袁圆园园苑曰 圆园园怨曰 吴青霞等袁圆园园远冤遥 本文对银杏枝
条中的这 圆 种蛋白质进行免疫组织细胞化学定位袁
旨在鉴定其营养贮藏蛋白质性质袁为进一步研究研
究银杏营养贮藏蛋白质的生物化学性质和生物学功
能打下良好基础遥
摇 第 员 期 郭红彦等院 银杏枝条营养贮藏蛋白质的免疫细胞化学鉴定
员摇 材料与方法
员郾 员摇 试验材料
选自南京林业大学树木园内成年银杏雄株的当
年生枝条袁在树木休眠期 员圆 月中旬采样袁重复 猿 次遥
员郾 圆摇 试验方法
员郾 圆郾 员摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质抗原分离尧纯化和
回收摇 银杏营养贮藏蛋白质干粉制备采用郭红彦等
渊圆园园苑曰 圆园园怨冤方法遥 用制备性 杂阅杂鄄孕粤郧耘 分离银杏
猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质袁上样量员 远园园 滋早袁浓缩胶浓度
源郾 源豫 袁分离胶浓度是 员缘豫 袁在 愿园 灾袁猿园 皂蚤灶曰 猿园园 灾袁
猿郾 缘 澡的电泳条件下分离银杏 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质遥
电泳结束袁剥取凝胶袁移入 员苑 糟皂 培养皿内袁用冰冷
的 园郾 圆缘 皂燥造窑蕴 原员 运悦员 显色 缘 耀 远 皂蚤灶遥 在黑色背景
和透射的日光灯上观察并切下目标谱带袁分别取银
杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质的小块胶带渊胶带长度和上样
槽的宽度一致冤袁放入凝胶的上样槽中袁再次进行
杂阅杂鄄孕粤郧耘遥 用 园郾 圆缘豫考马斯亮蓝 砸鄄圆缘园 染色 圆郾 缘
澡袁脱色至背景干净为止以鉴定抗原的纯度遥 经
月陨韵鄄砸粤阅 匝怎葬灶贼蚤贼赠 燥灶藻 软件分析袁如果在凝胶上 猿圆
和 猿远 噪怎相应位置仅出现 员 条谱带袁则可以用作免
疫的抗原渊栽蚤葬灶 藻贼 葬造郾 袁 圆园园圆曰 郭红彦袁圆园园苑冤遥
员郾 圆郾 圆摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质抗血清制备摇 将切
下的 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质胶带分别在液氮下充分研
磨遥 用 月葬造造 渊员怨愿远冤的方法测定胶粉中蛋白质渊抗
原冤含量遥 胶粉中抗原含量约 员愿园 滋早窑早 原员遥 将胶粉
渊约含 圆缘园 滋早抗原冤溶解在 园郾 怨豫的生理盐水中袁与
弗氏完全佐剂渊加强注射用弗氏不完全佐剂冤按 员颐 员
的比例充分乳化袁在适龄新西兰大白兔渊购于江苏
省农科院种兔中心冤 皮下多点注射免疫袁每点
园郾 员 皂蕴遥 每只注射体积为 圆 皂蕴遥 其中 圆 只注射
猿圆 噪怎蛋白质袁另 圆 只注射 猿远 噪怎蛋白质袁员 只作为对
照遥 第 员 次注射 员缘 天后加强注射一次袁注射抗原量
为第 员 次的 员 辕 缘曰 苑 天后第 圆 次加强注射曰 苑 天自耳
静脉采血 圆 皂蕴袁用双向琼脂扩散试验进行抗血清效
价的测定袁接着第 源 次注射渊直接用 园郾 怨豫生理盐水
溶解抗原冤袁员园 天后从心脏采血遥 猿苑 益下倾斜静置
员 澡后袁 于 源 益 冰 箱 中 放 置 圆 澡遥 然 后 室 温袁
源 园园园 则窑皂蚤灶 原员条件下离心 员园 皂蚤灶袁收集抗血清渊栽蚤葬灶
藻贼 葬造援袁 圆园园圆曰 吕建敏等袁圆园园源冤遥 二抗为辣根过氧化
物酶偶联的羊抗兔 陨早郧鄄匀砸孕制剂渊购于博士德生物
工程有限公司冤遥 对照组不加一抗袁直接在对照组
血清中加二抗孵育遥
员郾 圆郾 猿摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质的间接免疫组织细
胞化学定位 摇 员 冤 将当年生枝条末端小枝袁切成
园郾 缘 耀 员 糟皂的小块遥 标本用 云粤粤 渊缘园豫乙醇冤溶液
室温固定 圆源 澡或含 远豫戊二醛的 园郾 员 皂燥造窑蕴 原员磷酸
盐缓冲液渊责匀 苑郾 圆冤 源 益下固定 圆源 澡袁乙醇 辕正丁醇
系列脱水袁石蜡包埋袁切片厚度 圆园 滋皂遥 圆冤 脱蜡前袁
将切片在室温中放置 远园 皂蚤灶或 远园 益恒温箱中烘烤
圆园 皂蚤灶遥 用二甲苯脱蜡 猿园 皂蚤灶袁各梯度酒精渊员园园豫 袁
怨缘豫 袁愿缘豫 袁苑园豫 袁缘园豫 袁猿园豫 袁园冤依次脱蜡脱水 缘 皂蚤灶
左右遥 猿冤 将切片放入 猿豫 匀圆韵圆 中 员园 皂蚤灶袁蒸馏水
冲洗 猿 次渊每次 圆 皂蚤灶冤袁转移至 园郾 园员 皂燥造窑蕴 原员柠檬酸
盐缓冲液渊责匀 远郾 园袁员 园园园 皂蕴冤中 员园 耀 员缘 皂蚤灶渊缓冲
液温度保持在 怨圆 耀 怨愿 益之间冤袁之后冷却 员园 耀 圆园
皂蚤灶至室温袁将切片用蒸馏水冲洗 圆 次袁再用 栽月杂
渊责匀苑郾 缘冤溶液冲洗 猿 次渊每次缘 皂蚤灶冤遥 源冤 将切片放
入 栽月杂渊含 园郾 员 皂燥造窑蕴 原员 晕匀源悦造冤溶液中 员 澡袁用 栽月杂渊含 园郾 圆豫栽憎藻藻灶圆园冤溶液冲洗 猿 次渊每次缘 皂蚤灶冤袁再用
栽月杂渊含员园 皂皂燥造窑蕴 原员甘氨酸冤溶液浸洗 猿 次渊每次
缘 皂蚤灶冤袁 之 后 浸 入 栽月杂 渊含 缘豫 脱 脂 奶 粉 和
员园 皂皂燥造窑蕴 原员甘氨酸冤溶液中袁室温 员 澡袁转移至以
栽月杂渊含 园郾 园圆豫 栽憎藻藻灶圆园尧缘豫脱脂奶粉和 员园 皂皂燥造窑
蕴 原员甘氨酸冤稀释的一抗中渊员 颐 员园园冤袁室温孵育 员 澡
渊或 源 益孵育过夜冤袁用 栽月杂渊含 园郾 园圆豫 栽憎藻藻灶圆园尧缘豫
脱脂奶粉和员园 皂皂燥造窑蕴 原员甘氨酸冤溶液浸洗 猿 次渊每
次 缘 皂蚤灶冤袁与以 栽月杂渊含 园郾 园圆豫 栽憎藻藻灶圆园尧缘豫脱脂奶
粉和员园 皂皂燥造窑蕴 原员甘氨酸冤稀释的辣根过氧化物酶
偶联的羊抗兔二抗室温作用 员 澡袁用 栽月杂栽 清洗 圆 次
渊每次 缘 皂蚤灶冤袁用 栽月杂 清洗 圆 次渊每次 缘 皂蚤灶冤袁最后
加 阅粤月鄄匀圆韵圆 显色液显色 猿 耀 缘 皂蚤灶袁蒸馏水冲洗袁过
夜晾干袁白胶封片袁用于观察遥 阴性对照以免疫前新
西兰白兔血清取代一抗袁其余步骤与试验组相同遥
圆摇 结果与分析
圆郾 员摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质抗原的制备
采用制备型 杂阅杂鄄孕粤郧耘 制备抗原袁蛋白质上样
量很关键遥 上样过少袁制备的抗原量少袁浓度小袁达
不到注射抗原量的要求曰 上样量过多袁银杏 猿圆 和
猿远 噪怎蛋白质谱带之间有重叠部分渊图 员 原 员冤袁不利
于针对性地切取目标谱带袁这样制备得到的抗原纯
度不够遥 只有确定适宜的上样量袁经 杂阅杂鄄孕粤郧耘 才
能得到浓度大又易区分的蛋白质抗原遥 研究结果表
明院 银杏营养贮藏蛋白质的上样量为员 远园园 滋蕴 时袁
经考马斯亮蓝 砸鄄圆缘园 染色后袁银杏 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白
质谱带清晰渊图 员 原 圆冤袁经 运悦造 染色后袁在黑色背景
和透射的日光灯上能明显观察到清晰的 圆 条谱带袁
便于切取目的胶条遥
圆郾 圆摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质抗原和抗体专一性
怨远
林 业 科 学 源苑 卷摇
检测
图 员摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质上样量
云蚤早援 员摇 杂葬皂责造蚤灶早 增燥造怎皂藻 燥枣 猿圆 葬灶凿 猿远 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶
郧援 遭蚤造燥遭葬 遭赠 责则藻责葬则葬贼蚤增藻 藻造藻糟贼则燥责澡燥则藻泽蚤泽
员郾 上样量为 圆 园园园 滋蕴 杂葬皂责造蚤灶早 增燥造怎皂藻 燥枣 圆 园园园 滋蕴曰
圆郾 上样量为 员 远园园 滋蕴 杂葬皂责造蚤灶早 增燥造怎皂藻 燥枣 员 远园园 滋蕴援
提取银杏树皮可溶性蛋白袁进行 杂阅杂鄄孕粤郧耘袁转
至 孕灾阅云膜上袁分别用这 圆 种蛋白质的抗血清进行
宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 分析遥 结果表明院 经免疫前新西兰白
兔血清进行宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼分析袁未发现免疫相关谱带
渊对照组冤渊图 圆 原 员冤遥 猿远 噪怎 蛋白质多克隆抗体与
猿远 噪怎蛋白质发生强免疫反应袁与 猿圆 噪怎 蛋白质发生
微弱免疫反应袁免疫相关的蛋白质谱带有 圆 条袁
猿远 噪怎蛋白质谱带清晰袁染色深渊图 圆 原 圆冤袁而 猿圆 噪怎
蛋白质谱带颜色很浅袁说明 猿远 噪怎 蛋白质抗血清专
一性强袁适合进行细胞定位研究遥
猿圆 噪怎 蛋白质多克隆抗体与 猿圆 噪怎蛋白质发生免
疫反应 袁免疫相关的蛋白质谱带有 圆条袁猿圆 噪怎蛋白质
谱带染色深袁而 猿远 噪怎蛋白质谱带颜色较浅渊图 圆 原猿冤袁
猿圆 噪怎蛋白质抗血清专一性好袁猿圆和 猿远 噪怎蛋白质具有
一定的免疫相关性袁适合进行细胞定位研究遥
图 圆摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼图谱
云蚤早援 圆摇 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 燥枣 猿圆 葬灶凿 猿远 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 蚤灶 郧援 遭蚤造燥遭葬
员郾 用免疫前新西兰白兔血清进行 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 燥枣 灶藻憎 在藻葬造葬灶凿 憎澡蚤贼藻 则葬遭遭蚤贼 泽藻则怎皂 遭藻枣燥则藻 蚤皂皂怎灶蚤扎葬贼蚤燥灶曰
圆 原 远郾 用 猿远 噪怎蛋白质的抗血清进行 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 宰藻泽贼藻则 遭造燥贼 燥枣 猿远 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 葬灶贼蚤泽藻则怎皂曰
苑 原 员员郾 用 猿圆 噪怎蛋白质的抗血清进行 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 宰藻泽贼藻则灶 遭造燥贼 燥枣 猿圆 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 葬灶贼蚤泽藻则怎皂援
圆郾 猿摇 银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质的间接免疫组织细胞
化学定位
采用间接免疫组织细胞化学定位技术对 猿圆 和
猿远 噪怎蛋白质在银杏当年生枝条细胞中的位置进行
研究遥 结果表明院 银杏当年生枝条加入 猿远 噪怎 蛋白
质抗血清后袁在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮
薄壁细胞中有被染成褐色的内含物渊图 猿 原 圆冤袁它们
存在于这些细胞的小液泡里渊图 猿 原 猿袁源冤遥 而不加
猿远 噪怎蛋白质抗血清袁加入免疫前新西兰白兔血清袁
再加辣根过氧化物酶偶联的羊抗兔二抗制剂的枝条
细胞渊对照组冤袁相应亚细胞部位未见被染成褐色的
内含物渊图 猿 原 员冤遥 由此可见院 银杏 猿远 噪怎蛋白质定
位于银杏枝条皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细
胞中袁存在于这些细胞的小液泡里遥
银杏当年生枝条加入 猿圆 噪怎 蛋白质抗血清后袁
在一些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中有
被染成褐色的内含物渊图 猿 原 缘冤袁它们存在于这些细
胞的小液泡里渊图 猿 原 远冤遥 而不加 猿圆 噪怎 蛋白质抗
体袁加入免疫前新西兰白兔血清袁再加辣根过氧化物
酶偶联的羊抗兔二抗制剂的枝条细胞渊对照组冤袁在
皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中均未发现
被染成褐色的内含物渊图 猿 原 员冤遥 由此可见院 银杏
猿圆 噪怎蛋白质定位于银杏枝条皮层薄壁细胞和韧皮
部的韧皮薄壁细胞中袁存在于这些细胞的小液泡里遥
枝条皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中
被染成褐色的内含物就是贮藏蛋白质细胞的液泡内
含物遥 猿远 噪怎 蛋白质抗血清处理的光镜切片袁液泡
内含物聚集在一起袁被均一染色袁枝条中 猿远 噪怎 蛋白
质含量丰富渊图 猿 原 圆袁猿袁源冤曰 而猿圆 噪怎蛋白质抗血清
处理的光镜切片袁褐色物质没有猿远 噪怎蛋白质分布致
密袁染色程度浅于 猿远 噪怎 蛋白质渊图 猿 原 缘袁远冤袁结果
表明院猿远 噪怎蛋白质比 猿圆 噪怎蛋白质在枝条中含量丰
富遥 这一结果与 杂阅杂鄄孕粤郧耘图谱和细胞学观察结论
一致渊郭红彦等袁圆园园怨冤遥
园苑
摇 第 员 期 郭红彦等院 银杏枝条营养贮藏蛋白质的免疫细胞化学鉴定
图 猿摇 银杏枝条 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质的 阅粤月 原免疫光镜定位
云蚤早援 猿摇 蕴燥糟葬造蚤扎葬贼蚤燥灶 燥枣 猿圆 葬灶凿 猿远 噪怎 灾杂孕泽 蚤灶 遭则葬灶糟澡藻泽 燥枣 郧援 遭蚤造燥遭葬 遭赠 蚤皂皂怎灶燥鄄阅粤月 遭赠 皂蚤糟则燥泽糟燥责藻
箭头示被染色成褐色的蛋白质 粤则则藻憎泽 蚤灶凿蚤糟葬贼藻 凿赠藻凿 遭则燥憎灶 责则燥贼藻蚤灶泽曰 员郾 对照袁 伊 源园园 悦运袁 伊 源园园曰 圆郾 猿远 噪怎蛋白质抗血清处理袁 伊 源园
栽则藻葬贼 憎蚤贼澡 猿远 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 葬灶贼蚤泽藻贼怎皂袁 伊 源园曰 猿袁源郾 猿远 噪怎营养贮藏蛋白质抗血清处理袁 伊 员 园园园 栽则藻葬贼 憎蚤贼澡 猿远 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 葬灶贼蚤泽藻则怎皂袁 伊 员 园园园噪曰
缘郾 猿圆 噪怎蛋白质抗血清处理袁 伊 源园 栽则藻葬贼 憎蚤贼澡 猿圆 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 葬灶贼蚤泽藻则皂袁 伊 源园曰 远郾 猿圆 噪怎蛋白质抗血清处理袁 伊 员 园园园噪
栽则藻葬贼 憎蚤贼澡 猿圆 噪怎 责则燥贼藻蚤灶 葬灶贼蚤泽藻则怎皂袁 伊 员 园园园噪曰 孕澡院韧皮薄壁细胞 孕澡造燥藻皂 责葬则藻灶糟澡赠皂葬 糟藻造造曰 灾院 液泡 灾葬糟怎燥造藻援
猿摇 结论与讨论
猿郾 员摇 银杏枝条 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质的免疫细胞化学
鉴定
一般认为树木营养贮藏蛋白质具有以下 猿 个特
点院 员冤 积累在液泡中曰 圆冤 在贮藏组织的可溶性蛋
白质中相对含量高曰 猿冤 有明显的季节变化袁在休眠
季节大量积累袁在树木重新生长后消失 渊 悦造葬怎泽藻灶
藻贼 葬造援袁 员怨怨员冤遥 落叶期银杏枝条树皮和木质部中存
在相对含量高的 猿圆 和猿远 噪怎蛋白质袁春季随着芽的
萌发袁积累在枝条中的这 圆 种蛋白质明显消失渊郭
红彦等袁圆园园怨冤曰 本文采用间接免疫组织细胞化学定
位技术袁对这 圆 种蛋白质进行细胞化学定位袁猿圆 和
猿远 噪怎蛋白质具有一定的免疫相关性袁它们分布在一
些皮层薄壁细胞和韧皮部的韧皮薄壁细胞中袁存在
于这些细胞的小液泡里遥 研究结果揭示这 圆 种蛋白
质的组织分布式样袁并为这 圆 种蛋白质是银杏的营
养贮藏蛋白质提供有力证据遥 因此袁这 圆 种蛋白质
应当是银杏的营养贮藏蛋白质遥 有研究者认为院源园
和 源缘 噪怎 蛋白质是银杏的营养贮藏蛋白质组分
渊杂澡蚤皂 藻贼 葬造援袁员怨愿缘冤袁但未经过免疫定位进行印证袁这
可能是与不同时期银杏不同的生长环境有关袁因此
源园 和 源缘 噪怎蛋白质是否是银杏的营养贮藏蛋白质组
分有待于进一步研究遥
不少学者已对部分木本植物中发现的营养贮藏
蛋白质进行免疫细胞化学定位 渊 匀藻则皂葬灶 藻贼 葬造援袁
员怨愿愿曰 郧则藻藻灶憎燥燥凿 藻贼 葬造援袁 员怨愿远曰 宰藻贼扎藻造 藻贼 葬造援袁员怨怨员曰
悦造葬怎泽藻灶 藻贼 葬造援袁员怨怨员曰 杂贼藻责蚤藻灶 藻贼 葬造援袁员怨怨圆冤遥 但对银杏
营养贮藏蛋白质进行免疫细胞化学定位尚属首
例袁这为其功能和生化性质的研究提供重要的
依据遥
猿郾 圆摇 银杏枝条 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质的合成部位
有研究发现院 银杏营养贮藏蛋白质在细胞质内
合成袁由内质网膨大的槽库尧质膜内折或高尔基体小
员苑
林 业 科 学 源苑 卷摇
泡发育形成贮藏蛋白质的液泡袁线粒体和高尔基体
参与营养贮藏蛋白质的运输渊孕藻灶早 藻贼 葬造援袁 圆园园源冤袁本
研究发现银杏 猿圆 和 猿远 噪怎 蛋白质定位于皮层薄壁
细胞和韧皮部的薄壁细胞袁存在于这些细胞的液泡
内袁因此可以推断银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质是在细胞
内合成袁在液泡内积累遥
猿郾 猿摇 银杏枝条 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质的免疫相关性
不同科的硬材树种之间袁营养贮藏蛋白质缺乏
免疫相关性遥 宰藻贼扎藻造等渊员怨怨员冤使用杨树 猿圆 噪怎 蛋白
质的抗血清检测 远 科 员员 种温带硬材树种袁结果表
明院 除杨柳科渊杂葬造蚤糟葬糟藻葬藻冤树木外袁其他科树木的营
养贮藏蛋白质与该 猿圆 噪怎 蛋白质缺乏免疫相关性遥
陈月异等渊圆园园苑冤发现同属无患子科的荔枝和无患
子的营养贮藏蛋白质存在免疫相关性袁而不同科树
木的营养贮藏蛋白质之间缺乏免疫相关性遥 在楝科
渊酝藻造蚤葬糟藻葬藻冤树木中袁同一亚科树木的营养贮藏蛋白
质较不同亚科树木的营养贮藏蛋白质具有相对高的
免疫相关性渊田维敏等袁圆园园圆冤遥 同一属树木的营养
贮藏蛋白质高度同源的证据来自对杨属植物加拿大
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发现银杏 猿圆 和 猿远 噪怎蛋白质存在一定免疫相关性袁
这可能是由于同一种树种中两相邻分子质量蛋白质
具有相似化学结构所致遥 另一方面袁不同科的软材
树种间的营养贮藏蛋白质是免疫相关的 渊匀葬则皂泽
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参 考 文 献
陈月异袁 史敏晶袁 田维敏援 圆园园苑援 印度紫檀营养贮藏蛋白质的主要
特性援 林业科学袁 源猿渊怨冤院 苑员苑 原 苑圆缘援
郭红彦袁 郭彦青袁 彭方仁援 圆园园远援 木本植物营养贮藏蛋白质代谢机
理的研究进展援 南京林业大学学报袁 猿园渊源冤院 员圆员 原 员圆愿援
郭红彦袁 谭鹏鹏袁 吴青霞袁 等援 圆园园苑援 银杏营养贮藏蛋白质的 杂阅杂鄄聚
丙烯酰胺凝胶电泳研究援 山西农业大学学报袁 圆苑渊员冤院 员远 原圆园援
郭红彦袁 吴青霞袁 彭方仁援 圆园园怨援 银杏枝条营养贮藏蛋白质的组分
及动态变化援 林业科学袁 源缘渊猿冤院 圆源 原 圆愿援
郭红彦援 圆园园苑援 银杏营养贮藏蛋白质的分离鉴定及特性研究援 员园员 原员园圆援
吕建敏袁王德军袁徐剑钦袁等援 圆园园源援 实验用兔的取血方法援 中国养兔袁
渊远冤院猿园袁圆圆援
彭方仁袁 王改萍袁 郭摇 娟援 圆园园远援 银杏营养贮藏蛋白质的细胞学及生
物化学分析援 南京林业大学学报院 自然科学版袁 猿园 渊源冤院 员园怨
原员员猿援
彭方仁袁郭 娟袁 徐柏森援 圆园园员援 木本植物营养贮藏蛋白质研究进展援
植物学通报袁 员愿渊源冤院 源源缘 原 源缘园援
田维敏袁 吴继林袁 郝秉中援 员怨怨怨援 大叶桃花心木营养贮藏蛋白质的
细胞学研究援 热带作物学报袁 圆园渊源冤院 圆缘 原 猿远援
田维敏袁 闫兴富袁 胡正海援 圆园园猿援 杨树新梢积累营养贮藏蛋白质的
细胞学研究援 西北植物学报袁 圆猿渊苑冤院 员员源猿 原 员员源苑援
田维敏袁吴继林援 圆园园圆援 楝科树木营养贮藏蛋白质的研究援 植物学
报袁源源渊圆冤院 圆源圆 原 圆源缘援
吴青霞袁 樊莉丽袁 彭方仁援 圆园园远援 银杏营养贮藏蛋白质的细胞学研
究援 林业科技开发袁 圆园渊远冤院 员怨 原 圆圆援
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渊责任编辑摇 王艳娜冤
圆苑