全 文 ：第 ww卷 第 ts期
u s s {年 ts 月
林 业 科 学
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雷公藤体细胞胚发生及其植株再生 3
李 琰t ou 崔宏安u 冯俊涛t 丁虹茹u 易晓华t 张 兴t
kt1 西北农林科技大学无公害农药研究服务中心 陕西省生物农药工程技术研究中心 杨凌 ztutss ~
u1西北农林科技大学生命科学学院 杨凌 ztutssl
关键词 } 雷公藤 ~愈伤组织 ~体细胞胚发生 ~植株再生
中图分类号 }≥zuu1vn z ~ ±|wv1t 文献标识码 }„ 文章编号 }tsst p zw{{kuss{lts p stw{ p sx
收稿日期 }ussz p tt p uv ∀
基金项目 }国家/十五0攻关项目kussu…„xty„swl ∀
3 张兴为通讯作者 ∀
Σοµατιχ Ε µ βρψογενεσισ ανδ Πλαντλετ Ρεγενερατιον οφ Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι
¬≠¤±tou ≤∏¬‹²±ªπ¤±u ƒ ±¨ª∏±·¤²t ⁄¬±ª ‹²±ªµ∏u ≠¬÷¬¤²«∏¤t «¤±ª ÷¬±ªt
kt1 Τεχηνολογψ ανδ Ενγινεερινγ Χεντεροφ Βιοπεστιχιδε οφ Σηαανξι Προϖινχε
Ρεσεαρχη ανδ ∆εϖελοπµεντ Χεντεροφ Βιορατιουαλ Πεστιχιδε oΝορτηωεστ Α&Φ Υνιϖερσιτψ Ψανγλινγ ztutss ~
u1 Χολλεγε οφ Λιφε Σχιενχε oΝορτηωεστ Α&Φ Υνιϖερσιτψ Ψανγλινγ ztutssl
Αβστραχτ } ׫¨ ¦¤¯ ∏¯¶²© Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι º¤¶∏¶¨§·²¶·∏§¼·«¨ ©¨©¨¦·²©¥¤¶¬¦°¨ §¬¤o§¬©©¨µ¨±·³¯¤±·ªµ²º·«µ¨ª∏¯¤·²µ¶¤±§
§¬©©¨µ¨±·¦²±¦¨±·µ¤·¬²±¶²©ªµ²º·«µ¨ª∏¯¤·²µ¶²± µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ²© Τq ωιλφορδιι q„±§·«¨ ³µ²¦¨¶¶²©·«¨ ¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶º¤¶
²¥¶¨µ√¨ §q׫¨ µ¨¶∏¯·¶¶«²º¨ §·«¤·‘„„ º¤¶ °²µ¨ ©¨©¨¦·¬√¨ ¤∏¬¬± ·«¤± u ow2⁄ ¬± ¬±§∏¦¬±ª·«¨ ³¯¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²± ²© Τq
ωιλφορδιι q≤¼·²®¬±¬±¶¦²∏¯§³µ²°²·¨·«¨ ¦¤¯ ∏¯¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±o©²µº«¬¦«y2…„ º¤¶°²µ¨ ©¨©¨¦·¬√¨ ·«¤± Ž× q׫¨ ¦²°¥¬±¤·¬²± ²©
‘„„ ¤±§y2…„ ±¨¦²∏µ¤ª¨§°²µ¨ µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±·«¤± ¤¨¦«²©·«¨ ° ∏¶¨§¤¯²±¨ q „°²±ª·«¨ y °¨ §¬¤¶∏³³¯¬¨§o≥ ¤±§…x ¥µ²∏ª«·
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Κεψ ωορδσ} Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιι ~¦¤¯ ∏¯¶~¶²°¤·¬¦ °¨¥µ¼²ª¨ ±¨ ¶¬¶~³¯¤±·¯¨·µ¨ª¨ ±¨ µ¤·¬²±
雷公藤k Τριπτερψγιυµ ωιλφορδιιl系卫矛科k≤¨¯¤¶·µ¤¦¨¤¨ l雷公藤属植物 o在我国很早以前就用于医学和害虫
防治 o是生产无公害农药的宝贵资源之一k李琰等 ouss{ ~夏焱等 oussx ~陈同素 ot|vvl ∀雷公藤的活性成分
主要存在于根部k杨春欣等 ousstl o但其属多年生木质藤本 o生长较慢 o人工栽培极少 o因而人们对野生资源
大量盲目采挖 o使资源遭到严重破坏 ∀目前对雷公藤的研究主要集中在有效成分分离鉴定 !开发利用等方面
k∏± ετ αλqoussz ~≤¤±·¨µετ αλqoussy ~周琳等 oussyl o未见到关于组培快繁及体细胞胚诱导方面的报道 ∀本
文研究了基本培养基及植物生长调节剂组合等对雷公藤体细胞胚发生及其植株再生的影响及体细胞胚的发
生组织学 o以期建立一个稳定的雷公藤再生体系 o为进一步通过基因工程改良雷公藤的性状奠定基础 ∀
1 材料与方法
t1t 试验材料 愈伤组织获得 }从福建省泰宁地区采集生长良好的雷公藤单株 t年生枝条 o第 u年春季扦
插于杨凌温室苗床上 ∀新长出的幼茎高度达 x ¦°时 o嫩叶 !幼茎及根用洗洁精洗涤并用自来水反复清洗后 o
流水冲洗 u «ozs h酒精消毒 us ¶o无菌水冲洗 w次 ot ª#pt ‹ª≤¯ u 消毒 w °¬±o无菌水冲洗 w次 ∀幼茎及根切
成 s1z ¦°左右小段 o叶切成 s1x ¦° ≅ s1x ¦°方块 o接种在 ≥ n t1s °ª#pt u ow2⁄n s1x °ª#pt Ž×培养基上 o
vs §后形成愈伤组织 ∀愈伤组织在同样培养基上连续继代 x次 o形成的各种愈伤组织备用 ∀研究愈伤组织
类型对雷公藤植株再生的影响时采用根 !茎和叶 v种来源的愈伤组织 o其余试验材料均为绿色致密型愈伤组
织 ∀
t1u 试验方法 tl 不同类型愈伤组织对植株再生的影响 以 ≥为基本培养基添加 s1t °ª#pt ‘„„ n t1s
°ª#pt y2…„ o研究不同类型愈伤组织对植株再生的影响 ∀ul 植物生长调节剂浓度筛选 以 ≥为基本培养
基添加不同浓度 u ow2⁄!‘„„以及与 y2…„ !Ž×组合 o确定雷公藤愈伤组织植株再生的最佳植物生长调节剂组
合 ∀vl相同比例不同水平 y2…„ Π‘„„及活性炭对愈伤组织植株再生的影响 以 ≥为基本培养基添加相同
比例不同水平 y2…„ Π‘„„及活性炭 o确定相同比例不同水平 y2…„ Π‘„„及活性炭对雷公藤愈伤组织植株再
生的最佳组合 ∀wl 培养基筛选 选用 ≥ !…x !‹ !tΠu≥k大量元素减半l !y oz2∂ !• «¬·¨为基本培养基 o添加
s1t °ª#pt ‘„„ n t1s °ª#pt y2…„ o确定雷公藤愈伤组织植株再生的最佳培养基 ∀xl 雷公藤愈伤组织对卡
那霉素kŽ°l敏感性试验 以 ≥ n s1t °ª#pt ‘„„ n t1s °ª#pt y2…„ o添加不同浓度 Ž°确定雷公藤愈伤组
织抗 Ž°的临界浓度 ∀yl 体细胞胚发生的组织学观察 将不同分化时期的愈伤组织用 ƒ„„固定液固定 o常
规石蜡切片 o番红 p固绿染色 o显微镜观察并照相 ∀
上述试验所用培养基 o加入蔗糖 vs ª#pt o用琼脂 z ª#pt固化 o³‹调至 x1{ o每个处理接种 vs瓶 o每瓶接
种 v块外植体 ∀在温度kux ? ul ε o光照 tu «#§pt o光照强度为 t sss ∗ t xss ¬¯的培养室培养 vs §后 o调查发
芽愈伤组织块数 !每块愈伤组织平均形成芽个数 o并计算分化率 ∀
2 结果与分析
u1t 愈伤组织类型对植株再生的影响 雷公藤不同外植体诱导的愈伤组织经过继代培养多次以后 o愈伤组
织类型有 v种k表 tl }一是灰白色质地疏松型k主要为根来源的愈伤组织 o图版 ´ p tl o二是乳白色致密型
k主要为茎来源的愈伤组织 o图版 ´ p ul o三是绿色致密型k主要为叶来源的愈伤组织 o图版 ´ p vl ∀在添加
了 s1t °ª#pt ‘„„ n t1s °ª#pt y2…„的 ≥培养基上 o叶来源的愈伤组织分化率最高 o接近 tss h k表 tl o且
每块愈伤组织平均形成的芽个数也比较多 o小苗生长健壮 o叶色深绿 ∀其次为茎来源的愈伤组织 o愈伤组织
增殖膨大后开始逐渐变绿 o出现芽点k图版 ´ p |l o分化率达 {u h ∀而疏松的根愈伤组织分化率较差 o愈伤
增殖膨大后 o开始褐化 o个别愈伤组织分化出芽 o小苗生长缓慢 o细弱 o黄化 o分化率仅为 vt h ∀
表 1 不同类型愈伤组织对植株再生的影响 ≠
Ταβ .1 Εφφεχτ οφ διφφερεντ χαλλυσ ον πλαντλετ ρεγενερατιον
外植体种类
×¼³¨ ²© ¬¨³¯¤±·¶
愈伤组织类型
×¼³¨ ²©¦¤¯ ∏¯¶
开始分化时间
Œ±¬·¬¤·¬²±·¬°¨²©
¦¤¯ ∏¯¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±Π
§
分化愈伤组织块数
‘∏°¥¨µ²©¦¤¯ ∏¯¶
§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±
分化率
•¤·¨ ²©
§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±Π
h
每块愈伤组织
形成芽个数
‘∏°¥¨µ²©¤√ µ¨¤ª¨
¶«²²·¶³¨µ¦¤¯ ∏¯¶
叶 ¨¤© 绿色致密型 Šµ¨ ±¨ o¦²°³¤¦· ux vs1ss ¤ tss1ss ¤ uz1vu ¤
茎 ≥«²²· 乳白色致密型 ¬¯® º«¬·¨ o¦²°³¤¦· vx uw1yz ¥ {u1uv ¥ tx1wv ¥
根 •²²· 灰白色疏松型 ’©©º«¬·¨ o¯²²¶¨ ws |1vv ¦ vt1ts ¦ v1z{ ¦
≠表中数据为 v次重复的平均值 ∀不同字母表示经 ⁄∏±¦¤±氏新复极差测验差异显著k Π s1sxl ∀下同 ∀ ⁄¤·¤¬±·«¨ ¦²¯∏°± ¤µ¨ ·«¨ °¨ ¤±¶²©
·«µ¨¨µ¨³¨·¬·¬²±¶q⁄¬©©¨µ¨±·¯ ·¨¨µ¶¬±·«¨ ¦²¯∏°±¶¶«²º ¶¬ª±¬©¬¦¤±·§¬©©¨µ¨±¦¨ ¤·Π s1sx ¥¼ ⁄∏±¦¤±π¶°∏¯·¬³¯¨·¨¶·q׫¨ ¶¤°¨¥¨ ²¯º q
表 2 不同浓度 2 ,42∆ !ΝΑΑ对愈伤组织植株再生的影响
Ταβ .2 Εφφεχτ οφ 2 ,42∆ ανδ ΝΑΑ ον χαλλυσ πλαντλετ ρεγενερατιον
植物生长调节剂浓度
°¯ ¤±·ªµ²º·«
µ¨ª∏¯¤·²µ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±Π
k°ª#ptl
u ow2⁄ ‘„„
分化愈伤组织块数
‘∏°¥¨µ²©·«¨
¦¤¯ ∏¯¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±
分化率
•¤·¨ ²©
§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±Πh
每块愈伤组织
形成芽个数
‘∏°¥¨µ²©¤√ µ¨¤ª¨
¶«²²·¶³¨µ¦¤¯ ∏¯¶
s1s s1s s1ss ª s1ss ª s1ss ª
s1s s1sx z1vu ¥¦ uw1wx ¦ u1vv ¨
s1s s1t tx1wv ¤ xt1tt ¤ y1v{ ¤
s1s s1x y1y| ¦§ uu1uu ¦ v1sz ¦§
s1s t1s w1yy §¨ tx1xy § u1y| §¨
s1sx s1s z1vt ¥¦ uw1ww ¦ w1x| ¥
s1t s1s |1yz ¥ vu1uu ¥ v1vz ¦
s1x s1s v1vv ©¨ tt1tt ¨ u1vu ¨
t1s s1s t1yz © x1xx © t1vz ©
u1u 植物生长调节剂对愈伤组织植株再生的影响 tlu ow2⁄和 ‘„„对愈伤组织植株再生的影响 不同生
长素及其浓度 o对愈伤组织植株再生的影响差异较大k表 ul ∀在不添加植物生长调节剂的培养基上 o没有芽
的分化 o愈伤组织逐渐褐化 o枯死 ∀
‘„„浓度在 s1sx ∗ t1s °ª#pt时 o愈
伤组织膨大明显 o生长后期有芽点出
现 o小苗生长较弱 o分化率随浓度增加
而降低 ~每块愈伤组织平均形成芽数
也随 ‘„„浓度的增加而下降 o其中以
‘„„ s1t °ª#pt时愈伤组织分化率最
高 o形成芽数最多 o但小苗生长较弱 o
部分逐渐枯死 ∀加入不同浓度的 u ow2
⁄后 o愈伤组织的分化率均比较低 o每
块愈伤组织分化形成的芽数也比较
少 o浓度在 s1x ∗ t1s °ª#pt时 o愈伤
膨大明显 o是刚接种的数十倍左右 o但
|wt 第 ts期 李 琰等 }雷公藤体细胞胚发生及其植株再生 z
分化的芽数较少 ∀
表 3 ΝΑΑ与 62ΒΑ !ΚΤ配合使用对愈伤组织植株再生的影响
Ταβ .3 Εφφεχτ οφιντεραχτιον οφ ΝΑΑ ανδ 62ΒΑ , ΚΤ ον χαλλυσ πλαντλετ ρεγενερατιον
植物生长调节剂浓度
°¯ ¤±·ªµ²º·«
µ¨ª∏¯¤·²µ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±Π
k°ª#ptl
‘„„ y2…„ Ž×
分化愈伤组织块数
‘∏°¥¨µ²©·«¨
¦¤¯ ∏¯¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±
分化率
•¤·¨ ²©
§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±Πh
每块愈伤组织
形成芽个数
‘∏°¥¨µ²©¤√¨ µ¤ª¨
¶«²²·¶³¨µ¦¤¯ ∏¯¶
s1t s1s s1s tx1vv § xt1tt § w1yv ¨
s1t s1x s1s vs1ss ¤ tss1ss ¤ tu1zu ¦
s1t t1s s1s vs1ss ¤ tss1ss ¤ us1xw ¤
s1t u1s s1s uw1yz ¥ {u1uu ¥ tw1sw ¦
s1t w1s s1s ut1yz ¦ zu1uu ¦ ty1w{ ¥
s1t s1s s1x tv1vv ¨ ww1ww ¨ |1yu §
s1t s1s t1s ty1ss § xv1vv § tx1y{ ¥
s1t s1s u1s ts1ss © vv1vv © ts1zs §
s1t s1s w1s x1vv ª tz1z{ ª x1zs ¨
ul ‘„„ 与 y2…„ !Ž× 配
合使用对愈伤组织植株再生
的影响 如表 v所示 o加入
y2…„后 o愈伤组织分化率可
达 tss h ∀当 y2…„ 为 t1s
°ª#pt时 o不仅每块愈伤组
织平均形成芽个数较多 o且
小苗生长健壮 ∀随着 y2…„
浓度的增加虽然分化率和芽
数变化不大 o但小苗的生长
受到了抑制 ∀当 y2…„ Π‘„„
浓度比为 ts左右时较有利
于雷公藤愈伤组织植株再
生 ∀与对照相比 o加入 Ž× o愈伤组织分化率明显降低 o平均形成芽数随浓度增加而降低 ~Ž×浓度大于 u1s °ª
#pt时 o愈伤组织分化率明显下降 ∀
u1v 同比例不同水平的 y2…„和 ‘„„水平及活性炭对愈伤组织植株再生的影响 如表 w所示 o当 y2…„ t1s
°ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt时 o愈伤组织分化出芽率最高 o达到 tss h o且分化出的小苗生长较好 ∀随着植物
生长调节剂浓度的加大分化率明显下降 o当 y2…„ ts °ª#pt n ‘„„ t1s °ª#pt时 o不仅分化率下降到了
wt h o形成芽数减少 o而且分化出来的小苗逐渐黄化枯死 ∀
活性炭加入培养基中的目的主要是利用其吸附能力 o减少一些有害物质的影响 o例如可以防止酚类物质
污染而引起的组织褐化死亡 o其对形态发生和器官形成也有良好的效应 ∀本试验中 o当同样培养基中加入
t ª#pt活性炭后 oy2…„ x1s °ª#pt n ‘„„ s1x °ª#pt时 o愈伤组织分化率及小苗生长情况才与不加活性炭
的 y2…„ t1s °ª#pt n ‘„„ s1t °ª#pt时相当 oy2…„Π‘„„浓度较低时明显抑制愈伤组织的分化 o分析其原因
可能是因为活性炭有较强的吸附能力 o吸附了培养基中的大量植物生长调节剂所致 ∀加入活性炭的培养基
小苗分化形成后 o生根较不加活性炭早 x ∗ z §o形成根的数量也明显增多 o小苗生长比较健壮 ∀
表 4 相同比例不同水平 62ΒΑΠΝΑΑ及活性炭对愈伤组织植株再生的影响
Ταβ .4 Εφφεχτ οφ διφφερεντ λεϖελσ οφ τηε σαµε προπορτιον 62ΒΑΠΝΑΑ ανδ αχτιϖε χαρβον ον χαλλυσ πλαντλετ ρεγενερατιον
植物生长调节剂浓度 °¯ ¤±·ªµ²º·«
µ¨ª∏¯¤·²µ¦²±¦¨±·µ¤·¬²±Πk°ª#ptl
‘„„ y2…„
活性炭
„¦·¬√¨¦¤µ¥²±Π
kª#ptl
分化愈伤组织块数
‘∏°¥¨µ²©·«¨ ¦¤¯ ∏¯¶
§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±
分化率
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§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±Πh
每块愈伤组织形成芽个数
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s1sx s1x s1s us1yz § y{1{| § tu1xx ¨
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s1x x1s t1s vs1ss ¤ tss1ss ¤ t{1yz ¤
t1s ts1s t1s uy1yz ¥ {{1{| ¥ tx1ws ¦
u1w 基本培养基对愈伤组织植株再生的影响 在加相同外源植物生长调节剂的条件下 o比较了 y种基本培
养基对愈伤组织分化的影响 o结果k表 xl表明 o在高盐和中等无机盐的培养基上愈伤组织的分化率均达 {s h
以上 o但分化植株的生长情况差异较大 ∀在高盐的 ≥和高硝酸盐的 …x 培养基上分化出的小苗生长较好 o
在 ≥培养基上小苗在后期还有生根现象 ~中等无机盐的 ‹ !tΠu≥上虽然分化率较高 o但小苗在后期开始
出现黄化 o长势较弱 ~y oz2∂ 培养基上不仅分化率和每块愈伤组织的成苗数下降 o而且对小苗的生长也不利 ~
低盐的 • «¬·¨培养基上愈伤组织稍有膨大后 o便逐渐枯死 o无小苗生成 ∀
sxt 林 业 科 学 ww卷
图 t Ž°浓度对雷公藤愈伤组织分化的影响
ƒ¬ªqt ׫¨ ©¨©¨¦·²©Ž° ²± ¦¤¯ ∏¯¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±
表 5 基本培养基对愈伤组织植株再生的影响
Ταβ . 5 Εφφεχτ οφ βασιχ µεδιυµ ον χαλλυσ πλαντλετ ρεγενερατιον
基本培养基
…¤¶¬¦° §¨¬∏°
分化愈伤组织块数
‘∏°¥¨µ²©·«¨
¦¤¯ ∏¯¶§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±
分化率 •¤·¨ ²©
§¬©©¨µ¨±·¬¤·¬²±Πh
每块愈伤组织
形成芽个数
‘∏°¥¨µ²©¤√¨ µ¤ª¨
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≥ vs1ss ¤ tss1ss ¤ t{1v| ¤
…x vs1ss ¤ tss1ss ¤ tw1yy §
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tΠu ≥ uw1yt ¥ {u1uu ¥ ty1yu ¦
y oz2∂ ut1yz ¦ zu1uu ¦ tt1uv ¨
• «¬·¨ s1ss § s1ss § s1ss ©
u1x 体细胞胚发生的组织学观察 根获得的
愈伤组织经过几代培养后质地疏松k图版 ´ p
tl o其细胞大多为薄壁组织 o体积大 o排列疏松 o
内部为大液泡所占据 ∀茎和叶产生的愈伤组织
经过多代培养后在其内部出现细胞较小 !排列
紧密的胚性细胞k图版 ´ p wl ∀胚性细胞细胞
质浓 !细胞核明显 o每个细胞继续横分裂形成二
细胞胚 o其中基细胞连续多次横向分裂后形成
胚柄k图版 ´ p yl ∀顶细胞经过 u次相互垂直
的纵向分裂后再进行 t次横向分裂形成八细胞
原胚k图版 ´ p xl ∀随着原胚的细胞分裂 o胚体
进行多次的各个方向分裂逐渐增大为球形原胚
k图版 ´ p yl ∀以后球形胚顶端两侧分裂生长
较快 o形成 u个突起 o即子叶原基 o经过初步分
化形成心形原胚k图版 ´ p zl ∀心形胚继续培
养后 o子叶原基进一步生长 o形成鱼雷形胚k图
版 ´ p {l o胚芽逐渐生长 o形成幼芽k图版 ´ p
|l o幼芽逐渐生长变绿k图版 ´ p tsl o基部细胞
形成胚根的一部分逐渐发育形成成熟而完整的
胚体 ∀继续培养体胚呈现明显的发育状态 o由
淡黄色逐渐转为浅绿色k图版 ´ p ttl ∀萌发的
体胚在发育培养基上继续培养 us §后 o几乎都
能萌发成完整植株k图版 ´ p tul ∀
u1y 雷公藤愈伤组织对卡那霉素kŽ°l敏感性试验 在遗传转化中 oŽ°往往作为抗性标记构建载体 o转化
成功的植株有抗 Ž°基因的表达 o能够在 Ž°较大的浓度下生长 o而未转化的植株则受到 Ž°的抑制而死亡 ∀
通过 Ž°对雷公藤愈伤组织分化的影响试验 o研究雷公藤愈伤组织抗 Ž°的临界浓度 o主要用于转基因植株
的筛选 ∀在含不同 Ž°浓度的愈伤组织再生培养基 ≥ n s1t °ª#pt ‘„„ n t1s °ª#pt y2…„上 o随着 Ž°浓
度的增加 o分化率呈急剧下降趋势k图 tl ∀当 Ž°浓度达 tus °ª#pt时 o愈伤组织的诱导率仅为 u1tx h o而且
随着 Ž°浓度的增加 o分化出的小苗黄化程度也逐渐加深 ∀当 Ž°浓度超过 {s °ª#pt时 o分化出的小苗叶为
浅黄色 o逐渐全部枯死 ∀而未加 Ž°的愈伤组织分化出来的植株小苗生长健壮 o叶色浓绿 o因此本试验的 Ž°
浓度为 {s °ª#pt o可以有效地筛选出雷公藤转基因植株 ∀
3 讨论
组织培养中 o不同植物生长发育所需要的无机离子 !有机营养物质等各不相同 o应根据培养材料和培养
目的选择一种适宜的培养基 ∀有研究表明 o培养基中较高的渗透势k张万军等 oussul !高的总氮含量和较高
比例的还原态氮k韩晓玲等 oussy ~ ²¼¨ µετ αλqot|{w ~ „°°¬µ¤·²ot|{|l对体细胞胚胎发生和发育有重要的促
进作用 ∀本试验在高渗 !高氮含量 !高比例铵态氮的 ≥以及 …x 培养基上得到了类似的结果 o但这类培养基
却不利于雷公藤愈伤组织的生长 o而在低铵态氮 !高硝态氮培养基上生长较好 ∀
植物生长调节剂是影响愈伤组织分化最重要的因素之一 ∀一般高浓度的生长素和低浓度的细胞分裂素
有利于愈伤组织的诱导和增殖 o高浓度细胞分裂素和低浓度生长素有利于愈伤组织的芽分化k姜蕾等 o
ussyl ∀本试验对雷公藤愈伤组织体细胞胚胎发生的研究表明 ou ow2⁄对雷公藤愈伤组织诱导是必需的 o但愈
伤组织形成后 o若不及时去掉 u ow2⁄o胚性愈伤组织就不能正常发生 o这与在枸杞kΛψχιυµ βαρβαρυµl体细胞胚
发生的研究中得出的结论一致k崔凯荣等 ot||{l ∀¬ª«·¥²∏µ±等kt||sl和夏时云等kussyl在红掌k Αντηυριυµ
ανδραεανυµl体细胞胚再生的研究中发现 oy2…„是影响愈伤组织芽分化最重要的植物生长调节剂 o本研究也
得出了类似的结果 o加入 y2…„后 o愈伤组织分化率达 tss h o且形成芽苗数也比较多 ∀也有人认为 oy2…„对
txt 第 ts期 李 琰等 }雷公藤体细胞胚发生及其植株再生 z
幼胚的发育起阻碍作用 o在含有 y2…„的培养基上 o难以发生体细胞胚k¤³2„¯ ¯¨ °¤±§ ετ αλqot||t ~Ž²µ±²√¤ ετ
αλqot||vl ∀本试验中加入 Ž× o愈伤组织分化率明显降低 o每块愈伤组织平均形成芽数也随浓度增加而减少 ∀
而在苜蓿k Μεδιχαγο σατιϖαl体细胞胚诱导中 o加入 u ow2⁄与 y2…„ 或 Ž× 均可诱导体细胞胚发生k王玉民等 o
ussx ~孟庆玉等 oussvl ∀可见对不同植物 o不定芽的诱导 !增殖需要不同的植物生长调节剂组合 o其机理有待
于进一步研究 ∀
参 考 文 献
陈同素 qt|vv q国产杀虫药剂雷公藤调查报告 q中华农学会报 otux }z| p {u q
崔凯荣 o任红旭 o邢更妹 o等 qt||{ q枸杞组织培养中抗氧化酶活性与体细胞胚发生相关性研究 q兰州大学学报 }自然科学版 ovwkvl }|v p || q
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k责任编辑 徐 红l
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