全 文 ：园艺学报，2015，42 (8)：1583–1590.
Acta Horticulturae Sinica
doi：10.16420/j.issn.0513-353x.2015-0218；http：//www. ahs. ac. cn 1583
收稿日期：2015–04–21；修回日期：2015–06–04
基金项目：国家‘十二五’科技支撑计划项目（2011BAD35B07，2012BAD02B04，2014BAD01B08）；国家自然科学基金项目（31401872）；
中国农业科学院科技创新工程项目（CAAS-ASTIP-IVFCAAS）；农业部园艺作物生物学与种质创制重点实验室项目
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：xuzhaosheng@caas.cn）
菠菜性别基因 X/Y 连锁标记的筛选及应用
刘丹丹，钱 伟，张合龙，范桂彦，徐兆生*
（中国农业科学院蔬菜花卉研究所，中蔬种业科技（北京）有限公司，北京 100081）
摘 要：以菠菜杂交一代品种‘冬绿 1 号’中的雌株与雄株杂交构建的 F2分离群体为试验材料，采
用 SRAP-BSA 法筛选与性别基因 X/Y 连锁的分子标记。从 256 对 SRAP 引物组合中筛选到了 3 个与性别
基因 X/Y 紧密连锁 SRAP 标记：SRAP4.3、SRAP5.7 和 SRAP9.5。将 SRAP5.7 和 SRAP9.5 分别转化为 SCAR
标记（S5.7、S9.5），将 SRAP4.3 转化为 dCAPs 标记（D4.3）。SCAR 标记 S5.7、S9.5 与 Y 基因共分离，
dCAPs 标记 D4.3 与 X/Y 基因紧密连锁，遗传距离为 0.3 cM。利用 S5.7、S9.5 和 D4.3 在其它 7 个菠菜群
体中进行雌雄性别鉴定，分子标记鉴定结果与表型鉴定结果一致，因此 S5.7、S9.5 和 D4.3 可以用于分子
标记辅助选择育种。
关键词：菠菜；性别；SRAP；BSA 法；SCAR；dCAPs；分子标记辅助选择育种
中图分类号：S 636.1 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2015）08-1583-08

Development and Application of Molecular Markers Linked with Sex Gene
X/Y in Spinach
LIU Dan-dan，QIAN Wei，ZHANG He-long，FAN Gui-yan，and XU Zhao-sheng*
（Institute of Vegetables and Flowers，Chinese Academy of Agricultural Sciences，Beijing Zhongshu Horticultural Crop
Seed Research and Development Center，Beijing 100081，China）
Abstract：The F2 segregation population constructed by hybridization among female and male
individuals of‘Winter Green 1’was our experimental material. We obtained the molecular markers linked
with the sex gene X/Y using SRAP-BSA technique. Three SRAP markers（SRAP4.3，SRAP5.7，SRAP9.5）
closely linked with the sex gene X/Y were gained from 256 SRAP primer combinations. SRAP5.7 and
SRAP9.5 were successfully converted into SCAR markers（S5.7，S9.5）. SRAP4.3 was smoothly
transformed into dCAPs marker（D4.3）. S5.7 and S9.5 marker were co-segregated with Y gene. D4.3
marker was closely linked to X/Y gene，and the genetic distance is 0.3 cM. The sex in other 7 spinach
populations was identified by the marker S5.7，S9.5 and D4.3. The results of molecular identification were
consistent with the phenotype，so these three molecular markers could be used for marker-assisted
selection breeding（MAS）.
Key words：spinach；sex；SRAP；BSA；SCAR；dCAPs；MAS



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Development and application of molecular markers linked with sex gene X/Y in spinach .
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菠菜一般是雌雄异株作物，少量植株表现为雌雄同株。研究者普遍认为菠菜的雌雄性型遗传主
要受性染色体上的一对 X 和 Y 基因的控制，基因型为 XX 的植株表现为雌株，基因型为 XY 的植株
表现为雄株，菠菜植株群体中雌雄株比例约为 1︰1（Rosa，1925；Bemis & Wilson，1953；Janick &
Stevenson，1955；Janick & Iizuka，1961）。
菠菜在苗期难以区分雌雄株，只有生长至抽薹开花期时，才能从性型表型上有效区分，严重影
响了育种效率。Akamatsu 等（1998）开发出与菠菜 X/Y 基因连锁的分子标记 T11A、V20A，可用于
鉴别菠菜雌、雄植株；Khattak 等（2006）认为菠菜性型受 X/Y 位点控制，用 AFLP 和 SSR 技术构
建菠菜的 7 个遗传连锁图，总长 580 cM，X/Y 位点被定位在连锁群 3 较小的遗传区域内，与 SSR 标
记 SO4 相距 1.9 cM；Onodera 等（2011）和 Yamamoto 等（2013）利用 BSA 法筛选到 10 个 AFLP
标记与菠菜 X/Y 位点紧密连锁，4 个标记与 Y 位点共分离；验证已发表的与 Y 位点连锁的 SCAR 标
记 T11A、V20A，其均与 Y 位点连锁；杨金华（2009）通过 ISSR 分析，筛选到一个与雌性相关的
标记，全长 1 176 bp，并将其转化为重复性和特异性更好的 SCAR 标记。本研究中通过对以上已发
表的连锁标记在菠菜性别分离群体中进行验证，仅 T11A 可以很好地区分雌雄株，其余的标记在本
试验材料中均不能使用。为筛选更多与菠菜性别基因 X/Y 连锁的分子标记，对菠菜性别更加准确鉴
定，本研究中通过 SRAP-BSA 法（刘艳 等，2009）筛选与菠菜性别基因 X/Y 连锁的分子标记，进
而转化为更有效的 SCAR 或 dCAPs 标记，用于标记选择辅助育种，同时为性别基因 X/Y 的定位克隆
奠定基础。
1 材料与方法
1.1 材料
2013 年 7 月至 2015 年 2 月将材料种植于中国农业科学院蔬菜花卉研究所温室大棚。由菠菜
（Spinacia oleracea L.）杂交一代品种‘冬绿 1 号’中的雌株 × 雄株构建 F2 分离群体，用于性别基
因分子标记筛选；由菠菜杂交一代品种‘菠菲特’雌株 × 雄株构建的 F2 群体中的雌株 × 雄株构建
F3 群体，选取其中的 4 个 F3 群体（分别编号为 48、50、52 和 53）用于分子标记性别鉴定；由菠菜
杂交一代品种‘黑强’雌株 × 雄株构建的 F2 群体中的雌株 × 雄株构建 F3 群体，选取其中的 3 个
F3 群体（分别编号为 54、58 和 59）用于分子标记性别鉴定。
群体长至抽薹开花期开始进行性状调查，前后总共调查 3 次，最终确定菠菜性别。每个单株选
取 4 ~ 6 片叶，用于 DNA 提取。
试验所用试剂 Taq 酶购自北京康为世纪生物科技有限公司；HiFi 酶、pEASY-T1 载体购自北京
全式金生物技术有限公司；AluⅠ内切酶购自上海吉泰生物科技有限公司；其他药剂均为国产分析
纯。
1.2 DNA 的提取
采用 CTAB 法（丛娟 等，2007）提取菠菜基因组 DNA，并用 NanoDrop ND-1000 分光光度计
（Thermo Fisher Scientific，USA）以及 1.0%琼脂糖凝胶电泳对提取的 DNA 浓度和纯度进行检测。
2014 年 3 月分别取‘冬绿 1 号’F2 群体中 10 个雌株、10 个雄株的 DNA 构建用于分离群体分组分
析（Bulk Segregating Analysis，BSA）的雌、雄基因池。
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1.3 SRAP 引物筛选
SRAP 引物参考任映雪（2012）的报道（表 1），共合成 SRAP 正向引物 16 条，反向引物 16 条。
引物由上海捷瑞生物工程有限公司合成。

表 1 SRAP 标记引物序列
Table 1 The sequence of the SRAP primers
正向引物
Forward
引物序列
Sequence（5′→3′）
反向引物
Reverse
引物序列
Sequence（5′→3′）
me1 TGAGTCCAAACCGGATA em1 GACTGCGTACGAATTAAT
me2 TGAGTCCAAACCGGAGC em2 GACTGCGTACGAATTTGC
me3 TGAGTCCAAACCGGAAT em3 GACTGCGTACGAATTGAC
me4 TGAGTCCAAACCGGACC em4 GACTGCGTACGAATTTGA
me5 TGAGTCCAAACCGGAAG em5 GACTGCGTACGAATTAAC
me6 TGAGTCCAAACCGGTAA em6 GACTGCGTACGAATTGCA
me7 TGAGTCCAAACCGGTCC em7 GACTGCGTACGAATTCAA
me8 TGAGTCCAAACCGGTGC em8 GACTGCGTACGAATTCTG
me9 TGAGTCCAAACCGGATG em9 GACTGCGTACGAATTCGA
me10 TGAGTCCAAACCGGGAT em10 GACTGCGTACGAATTCAG
me11 TGAGTCCAAACCGGGCT em11 GACTGCGTACGAATTCCA
me12 TTCAGGGTGGCCGGATG em12 GACTGCGTACGAATTATG
me13 TGGGGACAACCCGGCTT em13 GACTGCGTACGAATTATT
me14 TGAGTCCAAACCGGATC em14 GACTGCGTACGAATTACG
me15 TGAGTCCAAACCGGTCA em15 GACTGCGTACGAATTGAT
me16 TGAGTCCAAACCGGACA em16 GACTGCGTACGAATTAGC

SRAP 标记反应体系是根据 SRAP 反应原理（史倩倩 等，2011），利用 SRAP 正反向引物任意
组合，通过 SRAP 反应体系对基因组 DNA 进行扩增，产生多态性条带。PCR 扩增体系：50 ng DNA，
10× PCR 缓冲液（含 Mg2+）1 µL ，2.5 mmol · L-1 的 dNTPs 0.8 µL ，Primer F 和 Primer R 各 0.2 µL，
0.5 U Taq DNA 聚合酶，ddH2O 补足 10 µL。扩增程序为：94 ℃预变性 3 min；94 ℃ 1 min，35 ℃
1 min，72 ℃ 1 min，5 个循环；94 ℃ 1 min，50 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35 个循环；72 ℃终延
伸 10 min。利用 8%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 PCR 产物，电泳恒压 160 V，0.5× TBE 为缓冲
液。利用快速银染法（Sanguinetti et al.，1994）对凝胶进行染色，照相保存。统计多态性条带，并
利用筛选到的多态性标记在 F2 群体中进行验证，进一步筛选与性别基因连锁的分子标记。
1.4 SCAR 以及 dCAPs 标记转化
从聚丙烯酰胺凝胶上回收扩增的 SRAP 特异条带。以回收到的 DNA 为模板，用 SRAP4.3、
SRAP5.7、SRAP9.5 重新进行 PCR 扩增，扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后回收，克隆于 pEASY-T1 载
体。转化大肠杆菌（E. coli）后送金唯智生物科技有限公司进行测序。特异片段的序列与目前已公
布的菠菜参考基因组序列（http：//bvseq. molgen. mpg. de/index. shtml）进行比对。根据比对的结果
以及序列信息，利用 Primer Premier 5.0 和 dCAPs Finder 2.0（http：//helix. wustl. edu/dcaps/dcaps. html）
进一步设计 SCAR 和 dCAPs 引物。用这些引物对雌雄基因池以及 F2 单株进行 PCR 扩增。
扩增体系包括 50 ng DNA，10× PCR 缓冲液（含 Mg2+）1 µL ，2.5 mmol · L-1 的 dNTPs 0.8 µL，
Primer F 和 Primer R 各 0.2 µL，0.5 U Taq DNA 聚合酶，ddH2O 补足 10 µL。SCAR 标记反应程序：
94 ℃预变性 5 min；94 ℃ 30 s，58 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 个循环；72 ℃终延伸 7 min。

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dCAPs 标记反应程序：94 ℃预变性 5 min；94 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，35 个循环；
72 ℃终延伸 7 min。dCAPs 标记酶切体系：PCR 产物 2 µL，内切酶 0.2 µL（10 000 U · mL-1），缓冲
液 0.9 µL，ddH2O 补足 10 µL，37 ℃过夜酶切。
1.5 遗传距离分析
利用 SCAR 或 dCAPs 标记，对 F2 分离群体里 343 个单株的性别表型和分子标记的结果进行分
析，统计数据利用 Joinmap4.0 计算遗传连锁距离。
1.6 分子标记辅助选择育种
利用已转化成功的 SCAR 标记及 dCAPs 标记，在菠菜其它 7 个群体中进行雌雄性别分子鉴定，
与田间鉴定结果进行比较。
2 结果与分析
2.1 菠菜性别的遗传学分析
利用菠菜杂交一代品种‘冬绿 1 号’中的雌、雄株杂交构建 F2 群体，待抽薹开花期开始进行性
状调查，总共 343 个单株，其中 154 个雄株，189 个雌株。经卡方检验符合 1︰1 分离比（χ2 = 3.571 <
χ20.05 = 3.841），菠菜性别受性别基因 X/Y 控制。
2.2 SRAP 引物筛选
选取‘冬绿 1 号’F2 分离群体中 10 个雌株、10 个雄株，提取 DNA，用 ddH2O 把 DNA 分别稀
释到相同的浓度 200 ng · µL-1，各取 100 µL，分别混合构成雌、雄基因池（F 池、M 池）。利用雌、
雄基因池共对 256 对 SRAP 引物组合进行筛选，筛选到有特异条带的引物组合 99 对（图 1）。












图 1 构池筛选到有多态性的引物组合
绿色代表特异条带明显的引物组合；橙色代表特异条带不明显的引物组合。
Fig. 1 The primer combinations with polymorphism by screening among the female and male gene pools
Green represents the primer combinations of clear specific band；Orange represents the primer
combinations of indisitinct specific bands.

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进一步利用本群体中的 32 个单株对筛选出来的标记进行验证，其中有 3 对引物组合（me4em3、
me5em7、me9em5）与性别连锁，其均在雄株中扩增出特异条带，在雌株中没有扩增条带，分别命
名为 SRAP4.3、SRAP5.7（图 2）和 SRAP9.5；其他引物组合在雌雄单株中扩增的条带一致，比如
引物组合 me8em3（命名为 SRAP8.3，图 2）。















图 2 具有多态性的 SRAP 引物在 32 个 F2 单株中验证
Fig. 2 The validation of SRAP primers with polymorphism in 32 F2 plants

2.3 SCAR 及 dCAPs 标记的转化
对于 SRAP4.3、SRAP5.7 和 SRAP9.5 的雄株特异条带进行切胶回收，回收产物与 pEASY-T1 载
体连接，转化大肠杆菌。挑取单菌落进行 PCR 验证，对含有目标片段的单克隆进行测序。结果表明，
在雄株里 SRAP4.3 扩出 1 条 322 bp 的特异条带；SRAP5.7 扩出 1 条 126 bp 的特异条带；SRAP9.5
扩出 1 条 119 bp 的特异条带。
将 SRAP4.3、SRAP5.7 和 SRAP9.5 扩增特异条带序列分别与已公布的菠菜参考基因组序列
（http：//bvseq. molgen. mpg. de/index. shtml）进行比对。其中 SRAP5.7 和 SRAP9.5 特异序列不能比
对到菠菜参考基因组上，SRAP4.3 可以比对到菠菜参考基因组 scaffold46066 上。
根据 SRAP5.7 和 SRAP9.5 的特异序列，利用 Primer Premier5.0 设计 SCAR 标记，分别命名为
S5.7（F：5′-TGAGTCCAAACCGGAAGTCGTATC-3′，R：5′-TGACTGCGTACGAATTCAAGATAAA
T-3′）、S9.5（F：5′-TGAGTCCAAACCGGATGTCGCCTG-3′，R：5′-TGACTGCGTACGAATTAACT
GTGG-3′）。S5.7 分子标记在菠菜雄株里可以扩出 126 bp 的特异条带，在雌株里没有条带。S9.5 分
子标记在菠菜雄株里可以扩出 119 bp 的特异条带，在雌株里没有条带。
根据 SRAP4.3 的特异序列，利用 Primer Premier5.0 设计 SCAR 标记，在雌、雄单株里进行 PCR
扩增，发现都扩增出了特异条带，SCAR 标记转化不成功。由于 SRAP4.3 的特异序列可以比对到菠
菜参考基因组 scaffold46066 上，所以根据 SRAP 4.3 的特异序列在菠菜参考基因组 scaffold 上的目标
位置左右延伸至总长 1 614 bp 的长片段，设计 SCAR 标记，对菠菜雌、雄基因池进行 PCR 扩增，都
扩增出了 1 614 bp 的长片段，切胶回收。挑 5 个克隆测序，其中 2 个来自雌性基因池，3 个来自雄
性基因池。利用 Mega 软件对测序结果进行比对，分析发现二者存在 3 个 SNP，分别位于第 1 057
位的 T/C、1 094 位的 C/T 和第 1 112 位的 T/G。

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进一步根据第 1 个 SNP 设计 dCAPS 标记 D4.3（F：5′-ACCGGAATAACGAACAGGACCGAAC
AGAGC-3′，R：5′-GGTTAATCTTACACATGGGGTCAAGTGCGG-3′），在雌、雄株中都可以扩出 179
bp 的条带，用 AluⅠ内切酶酶切，雌株（XX）只有 1 条带，而雄株（XY）有两条带。
2.4 S5.7、S9.5 和 D4.3 标记的群体验证
应用 S5.7、S9.5 标记对‘冬绿 1 号’F2 代 343 个单株 DNA 进行 PCR 扩增，在雄株里都扩出了
1 条 126 bp、119 bp 的片段，在雌株都没有扩出来条带；图 3 为其中部分单株的结果。说明 S5.7 和
S9.5 转化成功，而且与 Y 染色体共分离。

图 3 S5.7（上）和 S9.5（下）标记在 F2 群体单株中的多态性分布
Fig. 3 Polymorphic pattern of S5.7（up）and S9.5（down）among individuals in F2

D4.3 标记在‘冬绿 1 号’F2 群体 343 单株里验证，在菠菜雌株和雄株中均可扩增出 179 bp 的
条带，雌株（XX）扩增条带经限制性内切酶 AluⅠ酶切后，只有 1 条带，而雄株（XY）扩增条带经
限制性内切酶 AluⅠ酶切后，有两条带（图 4）。用 Joinmap4.0 软件计算，D4.3 与性别基因的遗传遗
传距离约为 0.3 cM。



图 4 D4.3 标记在菠菜 F2 群体单株中的多态性分布
Fig. 4 Polymorphic pattern of D4.3 among individuals in F2

2.5 S5.7、S9.5 和 D4.3 标记的分子标记辅助选择应用
利用已转化成功的 SCAR 标记（S5.7 和 S5.9）和 dCAPs 标记（D4.3），在菠菜其它 7 个群体中
进行雌雄性别鉴定，分子标记鉴定结果与表型鉴定结果一致（表 2），吻合率 100%，因此可以用于
分子标记辅助选择育种。
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表 2 F3 群体分子鉴定结果与田间鉴定结果
Table 2 The result of molecular identification and field identification in the F3 population
分子鉴定结果 Molecular identification 田间鉴定结果 Field identification 群体编号
Population
株数
Number 雌株 Female 雄株 Male 雌株 Female 雄株 Male
48 18 10 8 10 8
50 13 5 8 5 8
52 10 5 5 5 5
53 20 9 11 9 11
54 17 7 10 7 10
58 13 10 3 10 3
59 21 9 12 9 12

3 讨论
菠菜在苗期难以区分雌雄株，只有生长至抽薹开花期时，性型表型才能有效区分，这严重影响
了育种效率。由于雌雄异株植物个体的主要性状差异表现在性别上，而这种差异的本质在于遗传物
质的组成上，因此，采用分子标记的方法可以快速、方便地获得鉴定雌雄性别的标记。
目前国内外已发表的连锁标记有 4 个，第 1、2 个是 T11A、V20A，与菠菜性别基因 Y 共分离，
但是在大群体验证时 V20A 扩增效果不够稳定，T11A 与 Y 共分离；第 3 个是 SO4，其与菠菜性别
基因 Y 相距 4.3 cM，在群体中验证时不连锁；第 4 个为杨金华（2009）通过 ISSR 分析筛选到一个
与雌性相关的标记，全长 1 176 bp，并将其转化为 SCAR 标记，该标记在群体中验证时与性别不连
锁。此外，Khattak 等（2006）、Onodera 等（2011）和 Yamamoto 等（2013）开发了与性别基因连锁
的 AFLP 分子标记。由于可以利用的分子标记很少，本研究中通过 SRAP-BSA 法，筛选 SRAP 引物
256 对，具有特异条带的引物组合 99 对，在单株中验证获得了 3 对与性别连锁的基因，并成功转化
成了 2 个 SCAR 标记（S5.7、S9.5）和 1 个 dCAPs 标记（D4.3）。SCAR 标记是一种显性标记，一般
表现为扩增片段的有无（熊芳 等，2012）。dCAPs 是一种共显性标记，通过在引物中引入错配，来
检测 SNP 的一种分子标记（赵红敬 等，2011）。相对于 AFLP 分子标记，这两种标记操作起来简单
方便，可以快速地鉴定性别，加快育种进程。另外，S5.7 和 S9.5 与性别基因 Y 共分离，很有可能就
是 Y 染色体上的特异片段，这也为性别基因 Y 的克隆奠定基础。
S5.7、S9.5 在雄株里都可以扩增出特异条带，在雌株没有扩增出特异条带，可以很好地区分雌、
雄株，但是却不能区分两性株。Onodera 等（2011）发现 1 个可能为单独的、不完全显性的雌雄同
株基因 Xm，分子标记 SO4 距离 Xm基因 4.3 cM，距离 X/Y 位点 1.6 cM。Yamamoto 等（2013）通过
分子标记等手段，进一步证明菠菜雌雄同株受 Xm 控制，Xm 不与 X/Y 位点等位，而是与 X/Y 位点紧
密相连。因此，对于区分两性株的分子标记还有待进一步开发与研究。

References
Akamatsu T，Suzuki T，Uchimiya H. 1998. Determination of male or female of spinach by using DNA marker. Japan：Sakata no tane KK.
Bemis W P，Wilson G B. 1953. A new hypothesis explaining the genetics of sex determination in Spinacia oleracea L. Hered，44：91–95.
Cong Juan，Li Xiao-ling，Gong Li，Li Lian-gui. 2007. Study on the method and conditions for spinach gemomic DNA extraction. Journal of
Changchun University of Techonology：Natural Science Edition，28 (4)：467–472. (in Chinese)
丛 娟，李晓玲，宫 莉，李连贵. 2007. 菠菜基因组 DNA 提取方法与条件的研究. 长春工业大学学报：自然科学版，28 (4)：467–472.
Janick J，Iizuka M. 1961. Sex determination in a spinach line containing a heteromorphic sex chromosome. Genetics，46：873–874.
Liu Dan-dan，Qian Wei，Zhang He-long，Fan Gui-yan，Xu Zhao-sheng .
Development and application of molecular markers linked with sex gene X/Y in spinach .
1590 Acta Horticulturae Sinica，2015，42 (8)：1583–1590.
Janick J，Stevenson E C. 1955. Genetics of the monoecious character in spinach. Genetics，40 (4)：429.
Khattak J Z K，Torp A M，Andersen S B. 2006. A genetic linkage map of Spinacia oleracea and localization of a sex determination locus. Euphytica，
148 (3)：311–318.
Liu Yan，Chen Quan-jia，Qu Yan-ying，Liang Ya-jun，Li Pei-yu，Zhu Biao，Lü Yu-qiang. 2009. Molecular markers of screening of the disease-
resistance gene of cotton using SRAP-BSA technique. Xinjiang Agricultural Sciences，46 (6)：1158–1163. (in Chinese)
刘 艳，陈全家，曲延英，梁亚军，李培玉，朱 彪，吕玉强. 2009. 利用 SRAP-BSA 法筛选棉花抗病基因的分子标记. 新疆农业科学，
46 (6)：1158–1163.
Onodera Y，Yonaha I，Masumo H，Tanaka A，Niikura S，Yamazaki S，Mikami T. 2011. Mapping of the genes for dioecism and monoecism in Spinacia
oleracea L.：Evidence that both genes are closely linked. Plant Cell Rep，30：965–971.
Ren Ying-xue. 2012. Cloning and identification of sex-related SRAP molecular marker in Spinacia oleracea L. and Humulus scandens L.[M. D.
Dissertation]. Xinxiang：Henan Normal University. (in Chinese)
任映雪. 2012. 菠菜及葎草性别相关 SRAP 分子标记的克隆与鉴定[硕士论文]. 新乡：河南师范大学.
Rosa J T. 1925. Sex expression in spinach. California：Univerity of California Printing Office.
Sanguinetti C J，Dias N E，Simpson A. 1994. Rapid silver staining and recovery of PCR products separated on polyacrylamide gels. Biotechniques，
17 (5)：914–921.
Shi Qian-qian，Wang Yan，Zhou Lin，Ren Lei. 2011. Application of SRAP marker in genetic breeding of ornamental plants. Biotechnology Bulletin，
(11)：74–78，87. (in Chinese)
史倩倩，王 雁，周 琳，任 磊. 2011. SRAP 分子标记在园林植物遗传育种中的应用. 生物技术通报，(11)：74–78，87.
Xiong Fang，Liu Xin-rui，Deng You-jin，Xie Bao-gui. 2012. Development of SCAR Markers based on SRAP for rapid identification of Pleurotus
cystidiosus O. K. Miller. Chinese Journal of Tropical Crops，33 (2)：321–326. (in Chinese)
熊 芳，刘新锐，邓优锦，谢宝贵. 2012. 利用 SRAP 建立快速鉴定高温平菇菌株的 SCAR 标记. 热带作物学报，33 (2)：321–326.
Yamamoto K，Oda Y，Haseda A，Fujito S，Mikami T，Onodera Y. 2013. Molecular evidence that the genes for dioecism and monoecism in Spinacia
oleracea L. are located at different loci in a chromosomal region. Heredity，doi：10.1038/hdy.2013.112.
Yang Jin-hua. 2009. A preliminary study on the molecular mechanism about gender decision of dioecious spinach[M. D. Dissertation]. Xinxiang：
Henan Normal University. (in Chinese)
杨金华. 2009. 雌雄异株植物菠菜性别决定分子机制的初步研究[硕士论文]. 新乡：河南师范大学.
Zhao Hong-jing，Xu Jin，Gao Bi-da，Xu Tao，Zhu Shui-fang. 2011. The establishment of dCAPs markers system in Oryza punctata and Oryza
officinalis on the basis of the SNP. Molecular Plant Breeding，9 (2)：169–173. (in Chinese)
赵红敬，许 瑾，高必达，徐 涛，朱水芳. 2011. 基于 SNP 位点快速鉴定药用、斑点野生稻的 dCAPS 标记体系的建立. 分子植物育
种，9 (2)：169–173.