全 文 ：园 艺 学 报 ， （ ）： – 2014 41 12 2373 2382 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2014–08–05；修回日期：2014–10–17
基金项目：国家科技支撑计划项目（2012BAD21B04）；山东省农业良种工程重大课题（鲁农良字[2011]7 号）；国家植物种质资源共享
平台项目（2013-39）
叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及
AFLP遗传多样性分析
吴岐奎，邢世岩*，王 萱，孙立民
（山东农业大学林学院，山东泰安 271018）
摘 要：对叶用银杏种质资源进行黄酮和萜内酯类含量及 AFLP 遗传关系分析。结果表明，叶用银杏
种质资源在黄酮和萜内酯类含量水平和 DNA 分子水平上都存在较高的遗传多样性。68 份叶用银杏种质叶
片提取物成分中银杏苦内酯 A、B、C、J 和白果内酯 B，银杏总内酯，黄酮的平均含量分别为 0.0371%、
0.0185%、0.0280%、0.0133%、0.0243%、0.1216%、1.7103%。8 对 AFLP 引物组合共扩增出 1 408 条谱带，
其中多态带为 99.28%，Nei’s 基因多样性和 Shannon’s 指数分别为 0.1939 和 0.3142；种质间的遗传相似系
数在 0.2924 ~ 0.7413 之间，平均值为 0.4888。种质间基于黄酮和萜内酯类含量分析的聚类分析结果与基
于遗传相似系数的 UPGMA 聚类分析结果基本一致。利用黄酮和萜内酯类含量和 AFLP 分析相结合的方
法，筛选出高黄酮和萜内酯类特异种质，对叶用银杏种质资源的评价与保护有一定的积极意义。
关键词：银杏；种质资源；叶用；黄酮；萜内酯类；含量；AFLP；遗传多样性
中图分类号：S 792.95 文献标志码：A 文章编号：0513-353X（2014）12-2373-10

Genetic Diversity of Leaf-used Ginkgo biloba Germplasms Based on
Flavonoids and Ginkgolides Contents and AFLP Markers
WU Qi-kui，XING Shi-yan*，WANG Xuan，and SUN Li-min
（College of Forestry，Shandong Agricultural University，Tai’an，Shandong 271018，China）
Abstract：The genetic relationship of leaf-used Ginkgo biloba L. germplasms were evaluated by
flavonoids and ginkgolides contents and AFLP markers. The results showed that rich genetic diversity
existed in both flavonoids and ginkgolides contents and AFLP markers. The average content of leaf
extracts（Ga，Gb，Gc，Gj，Bb，Te，GF）in 68 leaf-used G. biloba L. germplasms are 0.0371%，0.0185%，
0.0280%，0.0133%，0.0243%，0.1216% and 1.7103% respectively. Among the 1 408 bands obtained from
8 selective primer pairs，99.28% of them were polymorphic. Nei’s genetic diversity was 0.1939，and
Shannon’s index was 0.3142. The molecular genetic similarity coefficients range from 0.2924 to 0.7413，
with an average of 0.4888. The results of hierarchical cluster analysis based the flavonoids and ginkgolides
contents of different populations and UPGMA exhibited a good consistency. By the hybrid method of
flavonoids and ginkgolides contents and AFLP markers analysis，screen out the distinctive G. biloba
germplasms of high-flavonoids and ginkgolides，would be valuable for germplasm management and

* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：xingsy@sdau.edu.cn）
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utilization of leaf-used G. biloba L. germplasm.
Key words：Ginkgo biloba；germplasm；leaf-used；flavonoids；ginkgolides；content；AFLP；
genetic diversity

银杏（Ginkgo biloba L.）是银杏科单属种植物，是第四纪冰川之后唯一保存下来的孑遗植物。
银杏果、叶、材等用途广泛，具有较高的经济效益、生态效益和社会效益（邢世岩，2013）。自 1965
年德国的 Schwabe 首次将银杏叶提取物（Ginkgo biloba extract，EGb）引入医学实践后，叶用银杏
的栽培、生理活性物质的提取和加工等一系列的研究逐步开展，目前法国、德国、新西兰、美国等
对叶用银杏药物成分的研究处于领先水平（Dipak et al.，2014）。叶用银杏以叶大、高产、优质为主
要选种目标，优先选择叶内有效成分含量高的种质。中国是银杏资源的起源、进化及分布中心，拥
有大量的银杏资源，积极开展叶用银杏种质资源研究具有重要意义（邢世岩，1997）。
近年银杏成为药用研究开发的热点植物之一，其生理活性物质的含量水平是评价银杏药物制剂
最常用的指标（Del Tredici，1991）。目前从银杏叶片中分离出来的成分较为复杂，主要有黄酮类、
萜内酯类、聚戊烯醇等化合物，此外还有酚类、生物碱、有机酸、碳水化合物和矿质元素等药用成
分（史清文 等，1995）。有关银杏叶提取物的研究大多集中在其主要成分的生理生化水平（陈佳 等，
2010；Chen et al.，2012）及药用效果（Sandra et al.，2010；Zhou et al.，2011）方面。黄酮类和萜
内酯类化合物（银杏苦内酯 A、银杏苦内酯 B、银杏苦内酯 C、银杏苦内酯 J、白果内酯 B）是其中
最主要的两大类生理活性物质，具有改善血液循环抑制血栓形成、拮抗支气管收缩、改善脑细胞代
谢水平及清除自由基等多种作用（Wang et al.，2006a；Giedre et al.，2010）。
分子标记技术在银杏种质遗传多样性（Tsumura & Ohaba，1997；王利 等，2009；Singh et al.，
2010）、遗传图谱的构建（刘叔倩 等，2001）、银杏雌雄性别鉴定（Liao et al.，2009）、银杏遗传变
异和特异种质分析（Fan et al.，2004；Shen et al.，2005）等方面有较多的研究报道。AFLP 标记是
目前较为常用的分子标记方法，综合了 RFLP 和 RAPD 技术的优点，已用于观赏银杏（Wang et al.，
2006b）、雄株银杏（郭彦彦，2006）、雌株银杏（王利 等，2008）等研究，但针对于叶用银杏种质
资源遗传多样性和特异种质分析的研究报道较少。
本研究中采用银杏叶黄酮和萜内酯类含量分析与 AFLP 遗传多样性分析相结合的方法，筛选出
黄酮和萜内酯类含量较高、遗传特异性较强的叶用银杏种质，为叶用银杏种质资源的开发、利用及
特异种质的鉴定、保护提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 试验材料
68 份叶用银杏种质资源材料（表 1）来自山东农业大学银杏种质资源苗圃。于 2013 年 4 月，
每份材料采集幼嫩叶片 3 ~ 4 片，硅胶干燥保存备用，用于 DNA 的提取。于 2013 年 8 月，每份材
料采集成熟叶片 10 片，用于叶片黄酮和萜内酯类含量测定。
1.2 叶片黄酮和萜内酯类含量测定
银杏叶片提取物中的主要测定成分包括：银杏苦内酯 A（Ga）、银杏苦内酯 B（Gb）、银杏苦内
酯 C（Gc）、银杏苦内酯 J（Gj）、白果内酯 B（Bb）、银杏萜内酯（Te）和黄酮（GF）。
黄酮含量采用 Rutin 分光光度法（邢世岩 等，1998）测定。按 GF（%，干样）= Rutin（g · L-1）/
样品质量（g）× 稀释倍数 × 10-3 × 100 计算。
12 期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及 AFLP 遗传多样性分析 2375
萜内酯类含量采用 HPLC 国际标准（van Beek et al.，1990）测定。色谱条件：仪器岛津（Shimadzu）
LC-10AD HPLC，视差折光检测器（RP-HPLC RI），色谱柱 C18（Shimadzu），柱箱 CTO-10A，柱温
36 ℃，流动相为甲醇（CH3OH）︰水（H2O）= 1︰3，流速 0.8 ~ 1.0 mL · min-1。银杏叶萜内酯类组
分含量及总量按下式计算：银杏萜内酯（%）= A 酯/A 标 × 100/R × 1.045/M。其中，R 为内酯的响应
因子（RGa = 1.12，RGb =1.16，RGc =1.26，RGj =1.21，RBb = 1.11）；M 为叶片样品质量（mg）；A 酯为
萜内酯类组分的峰面积，A 标为内标峰面积。
根据银杏叶各萜内酯含量计算内酯总量，银杏叶内酯总量（Te，%）= Ga（%）+ Gb（%）+ Gc
（%）+ Gj（%）+ Bb（%）= ΣGi（%）+ Bb（%）。

表 1 叶用银杏种质来源、代号及性别
Table 1 Plant geographical origin，coed and sexuality of leaf-used G. biloba germplasm
来源
Origin
代号
Accession
性别
Sexuality
来源
Origin
代号
Accession
性别
Sexuality
安徽宁国 Ningguo，Anhui Y1 雌 Female 山东泰安 Tai’an，Shandong Y35 雌 Female
Y2 雄 Male Y36 雌 Female
Y3 雌 Female Y37 雌 Female
福建芦山 Lushan，Fujian Y4 雄 Male Y38 雌 Female
福建尤溪 Youxi，Fujian Y5 雌 Female Y39 雌 Female
广西桂林 Guilin，Guangxi Y6 雄 Male Y40 雌 Female
贵州印江 Yinjiang，Guizhou Y7 雄 Male 山东郯城 Tancheng，Shandong Y41 雄 Male
Y8 雌 Female Y42 雄 Male
Y9 雌 Female Y43 雄 Male
湖北安陆 Anlu，Hubei Y10 雄 Male Y44 雄 Male
湖南东安 Dong’an，Hunan Y11 雄 Male Y45 雄 Male
Y12 雌 Female Y46 雄 Male
江苏泰兴 Taixing，Jiangsu Y13 雌 Female Y47 雌 Female
江西信丰 Xinfeng，Jiangxi Y14 雌 Female Y48 雌 Female
山东海阳 Haiyang，Shandong Y15 雄 Male Y49 雌 Female
Y16 雌 Female Y50 雌 Female
Y17 雌 Female 山东枣庄 Zaozhuang，Shandong Y51 雌 Female
Y18 雌 Female 陕西延安 Yanan，Shaanxi Y52 雌 Female
山东济宁 Jining，Shandong Y19 雌 Female 陕西杨陵 Yangling，Shaanxi Y53 雌 Female
山东蒙阴 Mengyin，Shandong Y20 雄 Male 陕西长安 Chang’an，Shaanxi Y54 雄 Male
Y21 雌 Female 陕西周至 Zhouzhi，Shaanxi Y55 雄 Male
山东青岛 Qingdao，Shandong Y22 雌 Female 四川万源 Wanyuan，Sichuan Y56 雌 Female
山东日照 Rizhao，Shandong Y23 雄 Male Y57 雌 Female
Y24 雄 Male 云南腾冲 Tengchong，Yunnan Y58 雄 Male
Y25 雌 Female Y59 雌 Female
Y26 雌 Female Y60 雌 Female
山东荣城 Rongcheng，Shandong Y27 雄 Male 浙江富阳 Fuyang，Zhejiang Y61 雌 Female
Y28 雌 Female 浙江丽水 Lishui，Zheijiang Y62 雄 Male
Y29 雌 Female Y63 雄 Male
山东泰安 Tai’an，Shandong Y30 雄 Male 浙江诸暨 Zhuji，Zhejiang Y64 雌 Female
Y31 雄 Male Y65 雌 Female
Y32 雄 Male Y66 雌 Female
Y33 雄 Male Y67 雌 Female
Y34 雌 Female Y68 雌 Female
1.3 AFLP分析
用改良 CTAB 法（Doyle & Doule，1987）提取叶用银杏种质基因组总 DNA，在 CTAB 提取缓
冲液中加入 β–巯基乙醇和 PVP 以除去酚和多糖物质，用紫外分光光度计测定提取的总 DNA。AFLP
分析参照 Vos 等（1995）的方法修改后进行，用 PstⅠ+ MseⅠ内切酶组合对基因组 DNA 进行限制
性酶切，并筛选出 8 对多态性高且稳定的引物组合进行扩增分析，扩增产物采用 ABI 3730XL 自动
测序仪进行荧光检测，检测结果用 GeneScan3.1 软件进行分析，并将结果转化为 0/1 数据矩阵用于
统计分析。

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表 2 用于 AFLP 分析的接头与引物
Table 2 Adaptors and primers used for AFLP analysis
引物 Primer 序列 Sequence
接头引物 Adaptor PstⅠ 5′-CTC GTA GAC TGC GTA CAT GCA-3′；3′-CA TCT GAC GCA-5′
MseⅠ 5′- GA CGA TGA GTC CTG A G -3′；3′-TA CTC AGG ACT CAT-5′
预扩引物 Primer for the
pre-PCR amplification
P0 5′-GAC TGC GTA CAT GCA G-3′
M0 5′-GAT GAG TCC TGA GTA AC-3′
选择性扩增引物
Primer for AFLP amplification
P1 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GAA-3′
P2 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GAC-3′
P3 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GAG-3′
P4 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GAT-3′
P5 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GTA-3′
P6 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GTC-3′
P7 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GTG-3′
P8 5′-GAC TGC GTA CAT GCA GTT-3′
M1 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACA A-3′
M2 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACA C-3′
M3 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACA G-3′
M4 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACA T-3′
M5 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACT A-3′
M6 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACT C-3′
M7 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACT G-3′
M8 5′-GAT GAG TCC TGA GTA ACT T-3′
1.4 数据统计与分析
利用 Excel 2007 对叶片黄酮和萜内酯类含量进行整理分析及相关计算，并采用 SAS9.0 软件对
叶用银杏种质资源进行系统聚类分析。利用 Excel 2007 对 AFLP 扩增结果 0/1 数据矩阵进行分析，
依据每对引物扩增出来的总条带及多态性条带数，计算多态带百分率。利用 POPGENE version 1.31
软件计算遗传多样性指标：等位基因数（Na）、有效等位基因数（Ne）、Nei’s 基因多样性（H）、Shannon’s
信息指数（I）。采用 NTSYSpc version2.10e 软件计算各种质间的遗传相似性矩阵，并进行 UPGMA
聚类分析以了解叶用银杏种质资源间的遗传关系。
2 结果与分析
2.1 黄酮和萜内酯类含量分析
根据色谱图计算 68 份叶用银杏的黄酮和萜内酯类含量，图 1 为 Y52 种质的色谱图。统计分析
68 份叶用银杏种质资源叶片银杏的黄酮和萜内酯类含量，记录其最大值和最小值，并计算各种成分
的平均含量（表 3），68 份叶用银杏种质中 Ga 平均含量为 0.0371%，其中 Y16 含量最多（0.1348%）；
Gb 平均含量为 0.0185%，其中 Y64 含量最多（0.0472%）；Gc 平均含量为 0.0280%，其中 Y16 含量
最多（0.0690%）；Gj 平均含量为 0.0133%，其中 Y64 含量最多（0.0372%）；Bb 平均含量为 0.0243%，
其中 Y52 含量最多（0.0582%）；Te 平均含量为 0.1216%，其中 Y64 含量最多（0.2813%）；GF 平均
含量为 1.7103%，其中 Y64 含量最多（2.4779%）。雌雄银杏之间的黄酮和萜内酯类含量虽有所不同，
但其含量差别不大，差异并不显著。
图 1 Y52 种质的黄酮和萜内酯类（A）和标准 EGb（B）的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatogram of flavonoids and ginkgolides（A）and EGb（B）in the Y52 germplasm
12 期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及 AFLP 遗传多样性分析 2377
表 3 叶用银杏 68 份种质资源的黄酮和萜内酯类含量
Table 3 The analysis of flavonoids and ginkgolides contents for 68 leaf-used G. biloba germplasms %
代号
Code
黄酮和萜内酯类
Flavonoids and ginkgolides
最大值
Maximum
最小值
Minimum
平均值
Average
雌株平均值
Average of female
雄株平均值
Average of male
Ga 银杏苦内酯 A Ginkgolide A 0.1348（Y16） 0.0083（Y3） 0.0371 ± 0.0233 0.0389 ± 0.0280 0.0343 ± 0.0127
Gb 银杏苦内酯 B Ginkgolide B 0.0472（Y64） 0.0060（Y3） 0.0185 ± 0.0088 0.0181 ± 0.0093 0.0190 ± 0.0080
Gc 银杏苦内酯 C Ginkgolide C 0.0690（Y16） 0.0119（Y3） 0.0280 ± 0.0118 0.0284 ± 0.0116 0.0276 ± 0.0123
Gj 银杏苦内酯 J Ginkgolide J 0.0372（Y64） 0.0028（Y46） 0.0133 ± 0.0078 0.0135 ± 0.0078 0.0131 ± 0.0078
Bb 白果内酯 B Bilobalide B 0.0582（Y52） 0.0057（Y54） 0.0243 ± 0.0121 0.0248 ± 0.0126 0.0236 ± 0.0114
Te 银杏萜内酯 Ginkgolides 0.2813（Y64） 0.0028（Y6） 0.1216 ± 0.0502 0.1247 ± 0.0569 0.1166 ± 0.0373
GF 黄酮 Flavonoids 2.4779（Y64） 1.2697（Y4） 1.7103 ± 0.2513 1.7195 ± 0.2467 1.6954 ± 0.2629
注：括号内为材料代号。Note：Plant coed is in bracket.

根据叶片黄酮和萜内酯类含量对 68 份种质资源进行系统聚类分析（图 2），在欧式距离为 0.9




























图 2 叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量系统聚类图
Fig. 2 Dendrogram of leaf-used of G. biloba L. germplasms based on flavonoids and ginkgolides contents

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处，将其划分为 6 大类。第Ⅰ类包含 48 份种质，第Ⅱ类包含 12 份种质，第Ⅲ类包含两份种质，第
Ⅳ类包含 3 份种质，第Ⅴ类包含 2 份种质，第Ⅵ类包含 1 份种质。
2.2 遗传多样性分析
从 64 对引物中筛选出 8 对多态性高且表现稳定的引物组合对 68 份叶用银杏种质材料进行扩增
（部分结果见图 3），，每对引物的鉴别效率为 100%。8 对引物组合共扩增出 1 408 条谱带，扩增片
段大小范围在 70 ~ 500 bp 之间，其中多态性条带为 1 398 条，平均每对引物组合扩增多态性条带 174
条，每对引物组合多态性条带百分率（PPB）为 99.28%。8 对引物组合共产生 181 条特异性条带（包
括 3 条缺失带），不同引物组合产生的特异性条带数量有所不同，P-GAC/M-CTC 产生的特异性条带
最多，为 30 条，包括两条特异性条带，P-GAG/M-CTG 产生的特异性条带最少（11 条）。不同种质
产生的特异性条带也有所不同，其中 Y64 产生的特异性条带最多（11 条），Y33、Y44、Y46 未产生
特异性条带。
图 3 引物组合 P-GAC/M-CTG 对 68 份叶用银杏种质资源的 AFLP 扩增图谱
Fig. 3 AFLP patterns of 68 leaf-used G. biloba L. germplasms by P-GAC/M-CTG

运用 POPGENE version 1.31 软件对各位点观测的 Na、Ne、H、I 进行统计分析，68 份叶用银杏
种质观测等位基因数（Na）平均值为 1.9928，有效等位基因数（Ne）平均值为 1.1608，Nei’s 基因多
样性（H）平均值为 0.1939，Shannon’s 信息指数（I）平均值为 0.3142（表 4）。由此可见 8 对引物
组合在所分析的 68 份叶用银杏种质材料中多态性好，表明其遗传多样性处于一个较高的水平。
表 4 基于不同引物组合的叶用银杏种质遗传多样性水平
Table 4 Genetic diversity level of leaf-used G. biloba L. germplasm based on different primer combination
引物组合
Primer
多态性条带
Polymorphic
bands
多态带比例/%
Parentage of
polymorphic band
Na Ne H I
P-GAA/M-CAG 160 98.77 1.9877 ± 0.1108 1.3243 ± 0.3598 0.1954 ± 0.1852 0.3088 ± 0.2498
P-GAA/M-CTG 183 98.92 1.9892 ± 0.1037 1.2912 ± 0.3099 0.1873 ± 0.1626 0.3062 ± 0.2195
P-GAC/M-CAC 180 100.00 2.0000 ± 0.0000 1.2775 ± 0.3080 0.1791 ± 0.1614 0.2844 ± 0.2189
P-GAC/M-CTA 172 98.85 1.9885 ± 0.1069 1.3122 ± 0.3458 0.1923 ± 0.1759 0.3095 ± 0.2341
P-GAC/M-CTC 165 99.40 1.9940 ± 0.0776 1.3135 ± 0.3284 0.1967 ± 0.1714 0.6158 ± 0.2321
P-GAC/M-CTG 188 100.00 2.0000 ± 0.0000 1.3166 ± 0.2908 0.2071 ± 0.1542 0.3372 ± 0.2067
P-GAG/M-CTG 171 99.42 1.9942 ± 0.0762 1.2903 ± 0.2650 0.1962 ± 0.1431 0.3251 ± 0.1940
P-GAT/M-CAG 179 98.90 1.9890 ± 0.1048 1.3105 ± 0.3061 0.1971 ± 0.1687 0.3168 ± 0.2300
平均 Mean 174 99.28 1.9928 ± 0.0725 1.1608 ± 0.3155 0.1939 ± 0.1653 0.3142 ± 0.2231
12 期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及 AFLP 遗传多样性分析 2379
2.3 遗传关系分析
不同种质间的遗传相似系数在 0.2924 ~ 0.7413 之间，平均 0.4888，表明各叶用银杏种质间遗传
变异大，遗传关系复杂。其中 Y19 与 Y37 之间的遗传相似系数最大（0.7413），说明二者的亲缘关
系最近，遗传差异性最小；Y55 和 Y63 之间的遗传相似系数最小（0.2924），说明二者的亲缘关系最
远，遗传差异性最大。Y39 与其他叶用银杏种质间的平均相似系数最大（0.5450）；Y36 与其他叶用
银杏种质间的平均相似系数最小（0.4133），说明 Y36 与其他叶用银杏资源相似性低，亲缘关系较远。
基于 AFLP 遗传相似系数对 68 份叶用银杏种质资源进行 UPGMA 聚类分析（图 4），在相似系
数 0.50 处可将其划分为 4 大类：A 大类包含 24 份种质，B 大类包含 25 份种质，C 大类包含 8 份种
质，D 大类包含 11 份种质。地理距离较近的种质并没有聚在一起，这说明种质的聚类与地理距离并
没有明确的关系。
图 4 叶用银杏种质资源基于 AFLP 的 UPGMA 聚类图
Fig. 4 UPGMA dendrogram of leaf-used of G. biloba L. germplasm based on AFLP markers

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2.4 黄酮和萜内酯类含量与UPGMA聚类的比较分析
通过对 68 份叶用银杏种质资源分别进行黄酮和萜内酯类含量聚类分析及 UPGMA 聚类分析，
含量聚类结果中Ⅰ大类与 UPGMA 聚类中 A、B 大类对应，Ⅱ大类与 D 大类对应，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ
大类与 D 大类对应，结果表明两种聚类结果具有较高的一致性。
3 讨论
3.1 叶用银杏黄酮和萜内酯类含量分析
本研究中依据邢世岩等（2002）的叶子药物成分检测方法，采用高效液相色谱（HPLC），对国
际通用的欧洲 van Beek 等（1990）测定方法进行了修改。
68 份叶用银杏种质资源在叶片 6 种成分含量上都表现出差异性，通过系统聚类分析，将其划分
为 6 大类。其中有 10 份种质（Y16、Y17、Y33、Y40、Y45、Y46、Y52、Y53、Y62 和 Y64）的黄
酮和萜内酯类含量较高，达到良种选育标准（邢世岩，2013）。其中 Y64 的 GB、GJ、Te、GF 含量
最高，Y16 的 GA、GC 含量最高，Y52 的 BB 含量最高。这 10 份种质可以作为叶用银杏生产的主
要种植资源。其他类型的种质资源黄酮和萜内酯类含量普遍较低，因此在生产实践中如何通过人工
选择、杂交育种或基因工程等方式培育出高黄酮和萜内酯类的叶用银杏新品种，有待于进一步研究。
本研究中银杏黄酮和萜内酯类含量在雌雄株中并没有明显的差异表现。因此，在叶用银杏品种
选择过程中雌雄性别可不作为重点指标考虑。
3.2 叶用银杏遗传多样性和遗传关系
银杏以中国为中心，广泛种植于世界各地，不同种植区的气候变化和地区间较多的引种杂交使
银杏表现出较丰富的多样性。Singh 等（2010）采用 AFLP 技术对印度西南地区的 20 株银杏进行分
析，其多态带比例为 80.47%，聚类关系较为复杂，地理来源与遗传距离之间没有确定的关系，本研
究中 UPGMA 聚类结果与之一致，可能与银杏在不同区间内的广泛引种有关。王利等（2008）研究
了 49 个银杏雌株种质的遗传关系，其 AFLP 多态带比例为 98.44%，各品种间的相似系数为 0.39 ~
0.83，表明它们存在不同程度的遗传差异。本研究中 8 对多态性较好的 AFLP 引物组合对 68 份叶用
银杏种质资源进行扩增，条带清晰，且多态性较高（99.28%）。通过对各项遗传多样性指标（Na、
Ne、H、I）表明，叶用银杏种质具有较强的遗传多样性，这可能与银杏为雌雄异株的特性有关。
UPGMA 聚类分析结果与银杏黄酮和萜内酯类含量聚类分析结果具有较高的一致性。含量聚类
分析将 68 份种质分为 6 大类，UPGMA 聚类将 68 份种质分为 4 大类，各大类黄酮和萜内酯类含量
呈递增趋势。因此，AFLP 分子标记可以在一定程度上反映叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类的含
量情况，在叶用银杏种质资源的开发、利用的过程中，应该结合黄酮和萜内酯类含量分析和 AFLP
分析数据进行综合分析和评价。
3.3 叶用银杏特异种质的筛选
王利等（2008）研究了观赏银杏、雌株银杏的特异种质。郭彦彦（2006）研究了雄株银杏的特
异种质。本研究中通过对 68 份叶用银杏种质的黄酮和萜内酯类含量进行分析，其中 10 份种质表现
出一定的特殊性，黄酮和萜内酯类含量水平较高。10 份特异种质中来源相同的 Y16 与 Y17、Y33
与 Y40、Y45 与 Y46、Y52 与 Y53 之间的亲缘关系较近，在 UPGMA 聚类分析中较为聚集，其中
Y17、Y40、Y46、Y52 多态性较好、特异性较高。
12 期 吴岐奎等：叶用银杏种质资源黄酮和萜内酯类含量及 AFLP 遗传多样性分析 2381
本研究首次针对中国主要 68 份叶用银杏种质资源，采用植物生理学及遗传学两方面相结合的
试验方法进行研究和分析验证，在叶片黄酮和萜内酯类含量及 AFLP 分子层面上对叶用银杏种质资
源的分析得到统一。结合黄酮和萜内酯类含量、多态性、相似性、特异位点、聚类结果对所试材料
进行分析，山东海阳的 Y17（内酯 T-5 号）、山东泰安的 Y40（内酯 T-6 号）、山东郯城的 Y46（黄
酮 F-1 号）、陕西延安的 Y52、浙江丽水的 Y62、浙江诸暨的 Y64（黄酮 F-2 号）在系统聚类分析和
UPGMA 聚类分析中分别属于不同的大类，具有较强的代表性，是极其重要的特异种质，应加以保
护和利用。

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