全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（增刊）：2500 http: // www. ahs. ac. cn
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收稿日期：2011–08–01
基金项目：国家自然科学基金项目（30800738）；中国博士后科学基金项目（20090451251，201003602）；作物遗传改良国家重点实验
室开发课题（ZK201003）；江苏省植物功能基因组学重点实验室开放课题（K09002）
* E-mail：xyxu@yzu.edu.cn；Tel：13616294168
多胺及其抑制剂对椪柑原生质体再生的影响
徐小勇 1,2,*，谢该生 2，何 丽 1，刘继红 2
（1扬州大学园艺与植物保护学院，江苏扬州 225009；2华中农业大学园艺林学学院，武汉 430070）
原生质体再生成植株是一个复杂的发育过程，包括细胞壁再生、细胞伸长和分裂，最终通过器
官发生途径或胚状体发生途径形成完整植株。值得注意的是，从酶解到细胞壁形成过程中，细胞内
会积累不同程度的活性氧（AOS），从而产生氧化胁迫，影响原生质体再生。多胺作为抗氧化剂，能
清除细胞中的活性氧，提高抗氧化酶活性，促进细胞生长发育。本研究中以来源于同一柑橘品种的
愈伤组织原生质体（培养能再生）和叶肉原生质体（培养不能分裂、再生）为材料，比较它们在培
养过程中多胺含量等变化；此外在愈伤组织原生质体培养中采用多胺合成酶抑制剂处理，叶肉原生
质体在培养中添加外源多胺处理，研究 AOS含量、抗氧化酶活性、抗氧化物质含量等方面变化，旨
在阐明柑橘原生质体再生与多胺及其抑制剂的关系，同时采用相应措施促进叶肉原生质体分裂再生。
试验材料为椪柑（Citrus reticulata）愈伤组织和椪柑种子。纯化后的原生质体悬浮于MA液体培
养液（MT + 0.15 mol · L-1蔗糖 + 0.45 mol · L-1甘露醇 + 40 g · L-1腺嘌呤）中，最终浓度调至 2 ×
106 · mL-1，28 ℃下暗培养。细胞壁再生采用荧光染料 Calcofluor White M2R染色进行观察。采用 5%
高氯酸提取多胺，采用高效液相色谱法测定其含量。分别添加 D-Arg（10 mmol · L-1）和腐胺（10
mmol · L-1）处理愈伤组织原生质体和叶肉原生质体；对于培养的原生质体，每隔 2 d取样，采用试
剂盒检测过氧化氢（H2O2）含量、抗氧化酶（SOD、CAT以及 POD）活力、抗氧化物质（还原型抗
坏血酸、还原型谷胱甘肽）含量，直至第 8天。
结果与分析：（1）对于分离的椪柑愈伤组织原生质体，在培养基中添加外源多胺与多胺抑制剂
进行培养，荧光增白剂染色观察表明，外源多胺处理促使原生质体细胞壁形成启动提前，而多胺抑
制剂处理则相对延后。（2）刚分离的原生质体中腐胺、精胺含量显著低于愈伤组织，亚精胺含量则
升高。愈伤组织原生质体在培养过程中，腐胺含量逐渐增加，6 d 时达到最高；亚精胺含量则是先
下降，6 d 时再升高；精胺含量变化趋势与腐胺相似。该结果表明在可再生的原生质体的培养过程
中，为了应对氧化胁迫，细胞内抗逆有关基因得以表达，并激活多胺合成途径，从而诱导多胺在细
胞体内合成。（3）腐胺与 D-Arg 处理结果表明，多胺抑制剂处理延长了 H2O2在原生质体中积累，
同时引起抗氧化酶活性下降，最终导致原生质体活力和植板率下降。外源多胺处理在培养前期降低
了 H2O2在原生质体内的积累，并且提高抗氧化酶活性和抗氧化物质的含量，但培养后期 H2O2水平
仍处于高位，最终原生质体全部破裂死亡。因此，如何降低活性氧水平是下一步研究的重点。

关键词：椪柑；原生质体；活性氧；抗氧化酶；抗氧化物质；多胺
中图分类号：S 666.1 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）S-2500-01