全 文 ：© 1994-2010 China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http://www.cnki.net
园 　艺 　学 　报 　2010, 37 (1) : 9 - 16
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2009 - 09 - 07; 修回日期 : 2009 - 11 - 11
基金项目 : 中国农业科学院科研基金项目 (农科院 [ 2006 ] 31号 )3 通讯作者 Author for correspondence ( E2mail: yfdong@1631com)
苹果茎痘病毒 RT2PCR检测及分子变异分析
李丽丽 1 , 董雅凤 23 , 张尊平 2 , 张志宏 1 , 范旭东 2 , 裴光前 2
(1 沈阳农业大学园艺学院 , 沈阳 110161; 2 中国农业科学院果树研究所 , 辽宁兴城 125100)
摘 　要 : 利用 RT2PCR技术对采自 6个苹果品种和 7个梨品种的 33个样本中的苹果茎痘病毒 (A pple
stem pitting virus, ASPV) 进行了检测 , ASPV感染率为 63% ( 19 /33)。对 6个 ASPV中国分离物外壳蛋白
(Coat p rotein, CP) 基因进行了扩增、克隆和测序 , 测序结果显示 CP基因全长为 1 191 nt, 编码 397个氨基
酸。中国分离物与 GenBank中其他分离物核苷酸序列同源性为 7012% ～9117%。系统进化分析显示不同
ASPV分离物分为 3个大的类群 , 呈现一定的寄主相关性 , 并未呈现明显的地理相关性。第一和第三大类
群的寄主皆为苹果 , 第二大类群包含 6个梨分离物和 2个苹果分离物。不同 ASPV分离物的抗原指数差异
较大 , 推断可能由于序列变异引起抗原表位变异 , 从而引起血清型差异。
关键词 : 苹果 ; 梨 ; 苹果茎痘病毒 ; RT2PCR检测 ; 序列分析
中图分类号 : S 661; S 718185　　文献标识码 : A　　文章编号 : 05132353X (2010) 0120009208
RT2PCR D etection and M olecular Var iab ility of A pple stem pitting virus
L IL i2li1 , DONG Ya2feng23 , ZHANG Zun2p ing2 , ZHANG Zhi2hong1 , FAN Xu2dong2 , and PE I Guang2qian2
(1 College of Horticu lture, Shenyang A gricu ltura l U niversity, Shenyang 110161, Ch ina; 2 R esearch Institu te of Pom ology, Chinese
A cadem y of A gricu ltura l Sciences, X ingcheng, L iaon ing 125100, China )
Abstract: Thirty2three samp les including 6 app le and 7 pear cultivars were detected for A pple stem
pitting virus (ASPV) by RT2PCR, the infected rate was up to 63% (19 /33). The ASPV coat p rotein (CP)
gene of 6 Chinese isolates were amp lified by RT2PCR, cloned and sequenced. Sequence analysis showed that
the full2length CP gene comp rised 1 191 nt and encoded 397 am ino acid. Identities of nucleotide between
Chinese isolates and other isolates were 7012% - 9117%. Phylogenetic analysis showed that all isolates of
ASPV fell into three group s, and the group swere slightly related to host, but it was not related to geographical
origin of isolates. In group 1 and 3, the host of all isolates were app les. Six isolates came from pears and two
isolates came from app les lay in group 2. The diversity of antigenic index was comp licated for different ASPV
isolates, and we p resumed that the diversity of antigenic index was due to variation of sequences, so serology
differentiations were likely to be gradually developed.
Key words: app le; pear; A pple stem pitting virus; RT2PCR detection; sequence analysis
苹果茎痘病毒 (A pple stem pitting virus, ASPV) 是一种严重危害果树生产的潜隐性病毒 , 主要侵
染苹果和梨 , 世界分布广泛 ; 其常与苹果褪绿叶斑病毒 (A pple ch lorotic leaf spot virus, ACLSV )、苹果
茎沟病毒 (A pple stem groove virus, ASGV) 等混合侵染 , 使苹果和梨产量降低 , 品质变劣 (Jelkmann,
1994)。ASPV能引起梨石痘病 ( Pear stony p it)、梨脉黄病 ( Pear vein yellow) 等多种病症 , 在一些敏
感的砧木和栽培品种上症状较明显 , 主要表现为叶片反卷、木质部茎痘斑、果实凹陷、叶偏上性生长
等 (邓晓云和王国平 , 2002)。ASPV主要通过嫁接传播 , 目前被确定为凹陷病毒属 ( Foveavirus) 的
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代表种 (Martelli & Jelkmann, 1998)。
ASPV为单链正义 RNA病毒 , 目前已有 3个分离物的基因组被测序 , 分别为德国分离物 PA66、
日本分离物 IF38及中国分离物 PR1 (Jelkmann, 1994; Yoshikawa et al. , 2001) ; 德国分离物 PA66基
因全长约 9 306 nt, 包含 5个 ORFs, 分别编码 247、25、13、17和 44 kD蛋白 , 3′末端为非编码区
(Untranslated region, UTR) 及 Poly (A) 尾 (Jelkmann, 1994)。目前国内外已有较多不同地理起源的
ASPV分离物的报道 , 并有较多分离物已获得了部分基因组序列信息 , 现有的序列信息表明 ASPV不
同分离物变异复杂 (Jelkmann, 1994; 赵英和牛建新 , 2008) , 但进行系统分子变异研究的报道较少。
由于基因组序列变异 , 一些检测 ASPV的 PCR引物仅对部分分离物有效。
在分子水平上明确病毒变异特点并建立有效检测技术对控制病毒危害具有重要意义。本研究利用
RT2PCR技术对生产中苹果、梨植株中的 ASPV进行检测 ; 并通过筛选引物 , 对 ASPV不同分离物外
壳蛋白 (Coat p rotein, CP) 基因进行克隆、测序 , 与国外分离物进行比较分析 , 以期明确该病毒分子
变异特点 , 探索其变异与寄主来源和地域起源的相关性。
1　材料与方法
111　植物材料
苹果 (M alus pum ila M ill. ) 栽培品种澳洲青苹 ( Granny Sm ith)、寒富 (Hanfu)、望山红 (W ang2
shanhong)、南方脆 (Nanfangcui)、清明 (Q ingm ing) 试管苗取自国家落叶果树脱毒中心 (兴城 ) ; 梨
( Pyras spp. ) 栽培品种圆黄 (Wonwhang)、西子绿 (Xizi Green)、玛瑙 (Manao)、P4 ( Pyrus spp. )、
黄冠 (Huangguan)、中矮一号 ( Zhongai 1)、库尔勒香梨 ( Korla Pear) 休眠枝条于 2008年秋季采自
国家梨种质资源圃 (兴城 )。阴性对照、阳性对照分别为 ASPV指示植物光辉 (R65276 Radiant) 苹果
和受 ASPV侵染的王实 (W angshi) 苹果。ASPV分离物 W S、38、242、1615、2221、2312分别分离
自栽培品种望山红 (W angshanhong) 和国家苹果种质资源圃 (兴城 ) 采集的大比耐 (Dabinett)、矮
黄 (A ihuang)、蜜津 (M ijin)、七户一号 (Q ihuyihao)、梅浓 (Meinong)。
112　分子生物学试剂
M 2MLV购自 Promega公司 , dNTPs、DH5α感受态细胞购自北京天根生化科技有限公司。限制性
内切酶、连接酶、Taq酶购自大连宝生物工程有限公司。
113　引物
ASPV检测引物序列为 ASPV1A: 5′2CTCTTGAACCAGCTGATGGC23′, ASPV1B: 5′2ATAGCCGC2
CCCGGTTTAGGTT23′(Jelkmann, 1994)。根据 GenBank中 ASPV 基因组全序列 (登录号 : D21828)
设计扩增 CP基因全序列引物 , 引物序列为 : 5′2GAGCTCATAGGTGCGTTCAATCAT23′(上游引物 ) ,
5′2CTCGAGTCACTTCCTGATGGATAAA23′(下游引物 )。引物由大连宝生物工程有限公司合成。
114　总 RNA提取
取苹果、梨的叶片或休眠枝条韧皮部约 0110 g, 利用改进二氧化硅吸附法提取总 RNA (Rott &
Jelkmann, 2001) , 最后溶于 80μL DEPC水中。
115　RT2PCR
反转录体系为 2510μL, 含总 RNA 510μL、随机 9引物 (Nonadeoxyribonucleotide m ixture) (100
μg·μL - 1 ) 110μL及 DEPC水 910μL; 离心混匀后 95 ℃温浴 5 m in, 冰浴 2 m in后加入 5 ×M 2MLV
Buffer 510μL、dNTPs (10 mmol·L - 1 ) 1125μL、M 2MLV 100 U 及 DEPC水 3125μL。反应条件为
37 ℃ 10 m in, 42 ℃ 50 m in, 70 ℃ 5 m in。
PCR反应体系为 25μL, 含 10 ×PCR Buffer 215μL、dNTPs (10 mmol·L - 1 ) 015μL、引物 (10
μmol·L - 1 ) 015μL、0175 U Taq酶、反转录产物 215μL, 最后加水补至 25μL。检测 ASPV反应程
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　1期 李丽丽等 : 苹果茎痘病毒 RT2PCR检测及分子变异分析 　
序为 : 95 ℃ 2 m in; 94 ℃ 30 s, 56 ℃ 1 m in, 72 ℃ 1 m in, 35个循环 ; 最后 72 ℃延伸 7 m in。扩增外
壳蛋白反应程序为 : 95 ℃ 2 m in; 94 ℃ 30 s, 54 ℃ 1 m in, 72 ℃ 1 m in, 35个循环 ; 最后 72 ℃延伸 7
m in。
116　克隆、测序和序列分析
PCR产物经切胶回收、纯化后与载体连接 , 转化大肠杆菌 DH5α, 通过抗性筛选和 PCR鉴定阳
性克隆 (D ieffenbach & Dveksler, 1998 )。测序由北京诺赛基因组研究中心完成 , 分别利用软件
CLUSTAL X (1183)、DNA star进行多序列比对 (Multip le sequence alignment)、分析不同分离物间序列
同源性、外壳蛋白二级结构及抗原指数变异特点。分别利用软件 MEGA 311中的最小进化法 (M ini2
mum evolution, ME)、软件 PHYL IP 3168中的邻近聚类 (Neighbor2joining, NJ) 算法基于 ASPV不同分
离物 CP基因核苷酸序列构建系统进化树 , 邻近聚类算法中重复次数为 100次 , 利用 Bootstrap法对进
化树进行检验 , 其他参数为默认 ; 桃褪绿斑驳病毒 ( Peach ch lorotic m ottle virus, PCMV ) ( GenBank登
录号 : NC_009892) 作为外群。序列分析中所应用的 ASPV分离物的寄主来源、地理起源情况见表 1。
表 1　不同 ASPV分离物的寄主及地理起源
Table 1　The d ifferen t hosts and geograph ica l or ig in s of ASPV isola tes
分离物
Isolate
寄主
Host
国家
Country
GenBank登录号
GenBank accession No.
ASPV2p1 梨 Pear 中国 China EU708018
PR1 梨 Pear 中国 China EU095327
ST54 梨 Pear 波兰 Poland AF345892
GNKIII/45 梨 Pear 波兰 Poland AF491929
br1 梨 Pear 巴西 B razil AY572458
PSA2H 梨 Pear 德国 Germany D21828
IF38 苹果 App le 日本 Japan AB045371
MT24 苹果 App le 波兰 Poland AF438522
J335 苹果 App le 波兰 Poland AF491930
N1 苹果 App le 波兰 Poland AF491931
ST181 苹果 App le 波兰 Poland AF495382
PA66 苹果 App le 德国 Germany D21829
MHczAp 苹果 App le 捷克 Czech Republic DQ003336
CzAp36 苹果 App le 捷克 Czech Republic AJ968944
W S 苹果 App le 中国 China EU314950
38 苹果 App le 中国 China FJ619187
24 苹果 App le 中国 China FJ619188
1615 苹果 App le 中国 China FJ619184
2221 苹果 App le 中国 China FJ619185
2312 苹果 App le 中国 China FJ619186
2　结果与分析
211　ASPV的 RT2PCR检测
以苹果品种王实为试材 , 利用检测引物 ASPV1A和 ASPV1B 扩增出了预期片段 (264 bp ) , 并经
克隆、测序证明其为 ASPV的特异片段。对 33个样品 (采自 6个苹果品种和 7个梨品种 ) 进行了检
测 , 其中受 ASPV侵染样本 19个 , 带毒率为 63% (部分检测结果见图 1)。感染 ASPV的梨品种为圆
黄、西子绿、黄冠、玛瑙和库尔勒香梨 , 在 P4、中矮一号上未检测到 ASPV, 而采集的 6个苹果品种
皆检测到了 ASPV。
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图 1　利用 RT2PCR检测 ASPV
M: DL2000 marker; 1～5: 梨 ; 8～12: 苹果 ; 6、14: 王实 (阳性对照 ) ; 7、13: 光辉 (阴性对照 ) ;
1: 圆黄 ; 2: 西子绿 ; 3: 玛瑙 ; 4: 库尔勒香梨 ; 5: 黄冠 ; 8: 澳洲青苹 ;
9: 望山红 ; 10: 南方脆 ; 11: 清明 ; 12: 寒富。
F ig. 1　D etection of ASPV by RT2PCR
M: DL2000 marker; 1 - 5: Pears; 8 - 12: App les; 6, 14: W angshi (positive control) ;
7, 13: R65276 Radiant ( negative control) ; 1: Wonwhang; 2: Xizi Green; 3: Manao;
4: Korla Pear; 5: Huangguan; 8: Granny Sm ith; 9: W angshanhong;
10: Nanfangcui; 11: Q ingm ing; 12: Hanfu.
212　外壳蛋白基因的扩增、克隆及测序
根据 GenBank中 ASPV基因组全序列 (登录号 : D21828) 设计扩增 CP基因全序列的 PCR引物 ,
以本实验室保存的 ASPV分离物 W S、38、242、1615、2221、2312试管苗及枝条为试材 , 利用 RT2
PCR技术对 ASPV的 CP基因进行扩增 , 得到了约为 1 200 bp的目的片段 (图 2)。经克隆、测序 , 证
明其为 ASPV外壳蛋白基因特异片段 , 大小为 1 191 bp, 编码 397个氨基酸 , 与国外分离物核苷酸序
列同源性为 7419% ～9111% , 序列提交至 GenBank, 登录号分别为 EU314950、FJ619187、FJ619188、
FJ619184、FJ619185和 FJ619186。
图 2　ASPV外壳蛋白基因的扩增
M: DL2000 marker; 1～6: ASPV分离物 W S、38、242、1615、2221、2312。
F ig. 2　The result of PCR2am plif ied the coa t prote in gene of ASPV
M: DL2000 marker; 1 - 6: The isolates of ASPV W S,
38, 242, 1615, 2221 and 2312.
213　序列分析
21311　同源性分析 　
对 20个 ASPV分离物的 CP基因序列 ( 14个为 GenBank中早期公布的分离物序列 ) ( 1 191～1
240 nt) 进行多序列比对 , 较多分离物比对后存在空位 , 其中波兰分离物 CzAp36、巴西分离物 BR1
分别较其他分离物缺失了 90、60个核苷酸 , 而中国分离物 PR1较其他分离物多了 12个核苷酸 ; 通过
手工比对来对空位区域进行调整 , 比对结果输入 DNAStar软件 , 计算不同分离物的序列同源性。
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ASPV不同分离物 CP基因核苷酸序列同源性为 6817% ～9917% , 中国分离物与 GenBank中其他分离
物的核苷酸序列同源性为 7012% ～9117%。
对 ASPV的 CP基因氨基酸序列进行了多序列比对 , 结果显示前 140个氨基酸残基变异较大 , 从
第 141到 309氨基酸残基变异较小 , 而从第 310到 397氨基酸残基高度保守。高度变异区 (前 140个
氨基酸残基 ) 有氨基酸缺失 , 其中波兰分离物 CzAp36、巴西分离物 BR1分别较其他分离物缺失了
30、20个氨基酸。在保守区内 , 有 80个氨基酸序列完全一致 , 且与其他病毒属病毒的氨基酸序列的
相似性也较高。以分离物 W S的此部分序列与马铃薯 X病毒 ( Pota to virus X , PVX) ( GenBank登录
号 : NC_011620) (马铃薯 X病毒属 )、马铃薯 M 病毒 ( Pota to virus M , PVM ) ( GenBank登录号 :
NC_001361) (麝香石竹潜隐病毒属 ) 的 CP基因氨基酸序列进行多序列比对 , 显示该区域氨基酸序列
有较高的相似性 (图 3)。
图 3　PVM、PVX与 ASPV部分外壳蛋白基因氨基酸序列比较3 : 相同序列 , ·: 相似性高的氨基酸残基。
F ig. 3　The com par ison of the ASPV coa t prote in am ino ac id sequences w ith those of PVM and PVX
Identical residues are indicated by asterisks and those
with sim ilar p roperties by dots.
21312　系统进化分析　
利用软件 PHYL IP 3168中的邻近聚类算法 (Neighbor2joining, NJ ) , 基于ASPV不同分离物 CP基
因核苷酸序列构建了系统进化树 , 利用最小进化法获得的进化树与此相近 , 仅个别分离物 (如分离
物 1615) 所处的进化枝略有差异。利用邻近聚类算法 , 基于 ASPV不同分离物 CP基因核苷酸序列构
建的化树显示不同 ASPV分离物分为 3个大的类群 (图 4) , 第一类群包含分离物有 38、2221、N1、
MHczAp、J335、1615、 IF38、2312和 242, 第二大类群包含的分离物有 ST54、 br1、CzAp36、 PR1、
PSA2H、PA66、GNKIII/45和 ASPV2p1, 第三大类群包含的分离物有 W S、ST181和 MT24。不同分离
物间呈现一定的寄主相关性 , 第一和第三大类群的寄主皆为苹果 , 第二大类群寄主即有梨又有苹果 ,
包含 6个梨分离物和 2个苹果分离物。所有的 20个分离物中 , 较多 (10个 ) 来源于地理区域相互临
近的波兰、德国和捷克 , 但并未呈现明显的地理相关性 ; 中国分离物、波兰分离物数量较多 , 也并未
呈现各自聚集成簇的趋势 ; 中国分离物、波兰分离物倾向于在进化树中不同位置聚集成多个小的进化
枝 (图 4)。
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图 4　基于 ASPV CP基因核苷酸序列的系统进化树
利用邻近聚类法构建的进化树。PCMV: 桃褪绿斑驳病毒 ( Peach chlorotic m ottle virus)
( GenBank登录号 : NC_009892) , 外群。
F ig. 4　Phylogenetic tree ba sed on the nucleotide sequences of coa t prote in gene of ASPV isola tes
Phylogenetic tree was constructed by neighbor - joining method.
PCMV ( GenBank accession number: NC_009892) was used as the outgroup.
21313　抗原指数差异分析 　
利用 DNA star软件中的 Protean程序 , 对 ASPV外壳蛋白不同区域的抗原指数、蛋白二级结构中α
螺旋、β片层结构、β转角结构、无规则卷曲、疏水性和表面可及性 ( Surface p robability) 进行了分
析 , 根据抗原指数特点 , 同时结合外壳蛋白二级结构特点 , 根据抗原表位主要分布在β转角结构和
无规则卷曲区域、亲水性和表面可及性参数较高的特点 , 推断 ASPV的抗原表位可能分布在 N端第
80～90个氨基酸残基附近 ( GYEEGSRPNQRVLP) 或 C端末尾区域 ( GGKIGPKPVLSIRK)。不同 AS2
PV分离物的抗原指数存在较大差异 , 特别是系统进化分析中位于不同类群的分离物间差异较明显。
图 5显示了系统进化分析中分别位于不同的类群的 3个分离物 ( PSA2H、ST181和 N1) 的抗原指数差
图 5　系统进化分析中分别位于 3个类群的分离物的抗原指数差异
A: 分离物 PSA2H; B: 分离物 ST181; C: 分离物 N1; e: 预测的抗原表位区。
F ig. 5　The var ia tion of an tigen ic index for 3 isola tes a s the represen ta tive for 3 groups of phylogenetic ana lysis
A: Isolates PSA2H; B: Isolates ST181; C: Isolates N1; e: Presumed ep itope.
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　1期 李丽丽等 : 苹果茎痘病毒 RT2PCR检测及分子变异分析 　
异。与 CP基因氨基酸序列差异相似 , ASPV不同分离物 N端 140个氨基酸残基区域的抗原指数差异
最大。
3　讨论
外壳蛋白在保护病毒核酸的同时 , 在病毒侵染过程中还起着识别寄主的作用 , 而蛋白质功能位点
往往是由较短的序列片段组成 , 此区域序列一般具有较强的保守性 (Meng et al. , 1998; Hull, 2007)。
在 ASPV外壳蛋白氨基酸序列分析中 , 所有分离物的后 87个氨基酸序列同源性极高 , 且有 80个氨基
酸序列完全相同 , 因而推测 CP中该区域可能执行着极为重要的生理功能 , 其生物学意义仍需进一步
探索。此外 , 由于 ASPV不同分离物在 CP基因中后部区域的高度一致性 , 因而建议在此区域设计
PCR检测引物 , 可增强引物的通用性 , 将株系分化的影响降至最低。
通过对 ASPV不同分离物间的核苷酸序列同源性分析发现 , ASPV不同分离物变异较复杂 , 多数
分离物间核苷酸序列同源性较低 (多数低于 80% ) , 同时又与其地理起源不相关 , 这种病毒的变异与
地理起源不相关特性在柑橘速衰病毒 (C itrus tristeza virus, CTV ) 等病毒的研究中也有报道 (张建坤
等 , 2006) , 其原因可能在于病毒在传播之前已经发生复杂的分化了 , 也可能在于此类病毒的变异受
地理因子及其相关生态条件影响较小 , 而主要受寄主等其他因子的影响 ; 此外 , 也可能与研究中采用
的系统发育学算法、数据输入质量等相关。由于序列变异 , 获得可有效扩增 ASPV不同分离物 CP基
因的 PCR引物较困难 , 本研究中应用的引物是筛选了 10多对引物后才筛选到。在系统进化分析中 ,
第二类群的寄主多为梨 , 而寄主为苹果的分离物 CzAp36和 PA66也位于其中。分离物 CzAp36是所有
分离物中最短的 , 有多处核苷酸缺失 , 较其他分离物缺失了近 90个核苷酸 , 其高度缺失特点可能对
其系统发育结果有较大影响 ; Jelkmann (1994) 早期测定了分离物 PA66和 PSA2H的 CP基因序列 ,
并以此证明了梨脉黄病毒 ( Pear vein yellow virus) 和 ASPV为同种病毒 , 分离物 PA66和 PSA2H核苷
酸序列同源性极高 , 为 9917% , 而其他分离物间同源性皆较低 (6817% ～9319% , 多数低于 80% ) ,
分离物 PA66和 PSA2H间这种高同源性的原因尚难以解释。
在侵染苹果和梨的主要病毒中 , ACLSV 和 ASGV 的株系分化研究皆较多 (邓晓云和王国平 ,
2002) , 而 ASPV的相关研究较少。国内研究人员应用指示植物法已证实 ASPV在我国已普遍发生
(王国平和洪霓 , 1997) , 且已获得了 ASPV分离物的部分或完整基因组序列 , 但系统研究 ASPV分子
变异的研究较少。本研究中显示 ASPV不同分离物间序列变异较复杂 , 氨基酸变异较大 , 推断由于氨
基酸序列变异可能引起抗原表位的变异 , 从而分成不同的血清型 , 其有待于进一步通过指示植物症状
及血清学试验证实。由于 ASPV的血清学研究基础较薄弱 , 当前缺乏效果较好的商业化抗血清 , 其阻
碍了 ASPV的株系分化研究。本实验室也正在研究制备 ASPV的抗血清 , 由于 ASPV CP基因偏大
(1 191～1 240 nt) 且变异复杂 , 克隆表达载体后极容易造成移码突变或异常终止 , 进展较缓慢。基
于 ASPV抗原表位特点 , 同时借鉴动物病毒的抗血清制备方法 , 本实验室正在探索通过分析 ASPV抗
原表位、人工合成多肽、与载体蛋白交联后免疫动物策略制备 ASPV的抗血清 , 其可能为 ASPV的抗
血清制备探索出一种新的方式。
早期研究结果显示我国北方梨产区主栽品种上 ASPV的平均带毒率为 6118% (王国平和洪霓 ,
1997)。近年来不同研究人员多利用分子生物学技术来检测 ASPV (张开春 等 , 2001; 牛建新 等 ,
2004; 侯雨萱 等 , 2005) , 不同研究中带毒率差异较大 ( 2613% ～8615% ) , 但多数带毒率较高。本
研究利用 RT2PCR技术对苹果和梨上的 ASPV侵染状况进行了调查 , 结果表明带毒率较高 , 且涉及的
品种多是主栽品种。综合分析来看 , 尽管我国自 20世纪 90年代初即开始脱毒研究 , 但当前 ASPV感
染率未见明显降低 , 说明控制该病毒的传播和扩散仍较重要 , 有必要进一步加强病毒检测研究 , 严格
管理无病毒苗木繁育。
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