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Analysis of Fruit Flavor Components in Wild Pentaploid Strawberry Native to China

自然五倍体野生草莓果实风味物质分析


Components related to aroma, sugar, acid were assayed in mature fruits of two wild pentaploid strawberry accessions native to China, Hei 1 and Hei 6, by HS-SPME, GC–MS and HPLC. The results showed that the accessions contained 92 aromatic components divided into 11 categories, which included 22 components(5 categories)with relative contents higher than 1%. The predominant aromatic components were acetic acid ethyl ester, butanoic acid ethyl ester, butanoic acid 3-methyl ethyl ester, hexanoic acid ethyl ester, myrtenyl acetate,2-pentanone, 2-undecanone, ethanol,2-heptanol, 1-hexanol, (E)-2-hexen-1-ol, hexanal,(E)-2-hexenal, 2,5-dimethyl-4-methoxy-3(2H)-furanone. Butanoic acid 3-methyl ethyl ester was the unique component in the two wild pentaploid accessions in comparison with Hei 10 (Fragaria orientalis,4x) and Ji 12 (F. mandschurica,2x), and 2, 5-dimethyl-4-methoxy-3(2H)-furanone, 2-pentanone, 2-heptanol, 1-hexanol, and (E)-2-hexen-1-ol were more abundant in the pentaploids. Fructose was the major sugar, followed by glucose, while the least was sucrose. Remarkable difference in sorbitol content was observed between the two accessions. Malic acid predominated in the two wild pentaploid accessions, more than 86% of the total acids.


全 文 :园 艺 学 报 , ( ): – 2010 37 4 613 618
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期:2009–09–28;修回日期:2010–03–16
自然五倍体野生草莓果实风味物质分析
赵密珍*,生静雅,袁 骥,王壮伟,钱亚明,吴伟民,王 静
(江苏省农业科学院园艺研究所,南京 210014)
摘 要:以中国自然五倍体野生草莓黑 1 与黑 6 的成熟果实为试材,采用顶空固相微萃取(HS-SPME)、
气相色谱—质谱(GC–MS)及高效液相色谱(HPLC)技术,分析果实香气、糖、酸成分。结果表明,
自然五倍体野生草莓含 11 类 92 种挥发性成分,相对含量大于 1%的成分有 5 类共 22 种,其中乙酸乙酯、
丁酸乙酯、3–甲基丁酸乙酯、己酸乙酯、乙酸桃金娘烯醇酯、2–戊酮、甲基壬基甲酮、乙醇、2–庚醇、
1–己醇、(E)–2–己烯–1–醇、己醛、(E)–2–己烯醛、4–甲氧基–2 ,5–二甲基–3(2H)–呋喃
酮是主要的香气物质,与东方草莓黑 10(4x)、东北草莓吉 12(2x)相比,3–甲基丁酸乙酯为自然五倍
体试材所特有,而 4–甲氧基–2 ,5–二甲基–3(2H)–呋喃酮、2–戊酮、2–庚醇、1–己醇、(E)–
2–己烯–1–醇的相对含量较高;自然五倍体野生草莓的主要糖成分为果糖,其次为葡萄糖,蔗糖最少,
山梨醇在两份野生资源中差异较大;苹果酸为自然五倍体野生草莓的主要酸成分,其含量占总酸含量的
86%以上。
关键词:草莓;自然五倍体;香气;糖;酸
中图分类号:S 668.4 文献标识码:A 文章编号:0513-353X(2010)04-0613-06

Analysis of Fruit Flavor Components in Wild Pentaploid Strawberry
Native to China
ZHAO Mi-zhen*,SHENG Jing-ya,YUAN Ji,WANG Zhuang-wei,QIAN Ya-ming,WU Wei-min,
and WANG Jing
(Institute of Horticulture,Jiangsu Academy of Agricultural Sciences,Nanjing 210014,China)
Abstract: Components related to aroma, sugar, acid were assayed in mature fruits of two wild
pentaploid strawberry accessions native to China, Hei 1 and Hei 6, by HS-SPME, GC–MS and HPLC.
The results showed that the accessions contained 92 aromatic components divided into 11 categories,
which included 22 components(5 categories)with relative contents higher than 1%. The predominant
aromatic components were acetic acid ethyl ester, butanoic acid ethyl ester, butanoic acid 3-methyl ethyl
ester, hexanoic acid ethyl ester, myrtenyl acetate,2-pentanone, 2-undecanone, ethanol,2-heptanol,
1-hexanol, (E)-2-hexen-1-ol, hexanal,(E)-2-hexenal, 2,5-dimethyl-4-methoxy-3(2H)-furanone. Butanoic
acid 3-methyl ethyl ester was the unique component in the two wild pentaploid accessions in comparison
with Hei 10 (Fragaria orientalis,4x) and Ji 12 (F. mandschurica,2x), and 2, 5-dimethyl-4-methoxy-3
(2H)-furanone, 2-pentanone, 2-heptanol, 1-hexanol, and (E)-2-hexen-1-ol were more abundant in the
pentaploids. Fructose was the major sugar, followed by glucose, while the least was sucrose. Remarkable

基金项目:国家自然科学项目基金项目(30671431);江苏省科技基础设施建设计划项目(BM2008008)
* 通信作者 Author for correspondence(E-mail:zhaomz@jaas.ac.cn)
614 园 艺 学 报 37 卷
difference in sorbitol content was observed between the two accessions. Malic acid predominated in
the two wild pentaploid accessions, more than 86% of the total acids.
Key words:strawberry;wild pentaploid;aroma;sugar;acid

我国是野生草莓资源最丰富的国家,分布有二倍体和四倍体共 11 个野生种(雷家军 等,2006)。
此外,新近发现我国分布有自然五倍体野生草莓新类型(Lei et al.,2005;邓明琴和雷家军,2005)。
野生草莓具有许多优良性状,尤其在香味、抗寒、抗病等方面更具特殊利用价值,是改良栽培草莓
的重要基因资源。我国对草莓野生资源的鉴定评价主要在植物学性状、果实经济性状等方面(雷家
军 等,1997;王壮伟 等,2008),而缺乏在果实风味物质、抗性等方面的深入评价。
作者利用顶空—固相微萃取(HS-SPME)结合气—质联用(GC–MS)及高效液相色谱等方法,
分析了自然五倍体野生草莓果实中的风味物质,以期为自然五倍体野生草莓种质资源的综合开发利
用提供科学依据。
1 材料与方法
供试材料为自然五倍体野生草莓黑龙江 1 号(简称黑 1)和黑龙江 6 号(简称黑 6),对照材料
为与自然五倍体分布一致的四倍体东方草莓黑龙江 10 号(简称黑 10)和二倍体东北草莓吉林 12 号
(简称吉 12),均来自国家南京草莓种质资源圃。
2008 年 5 月 2 日采收成熟适宜,无病虫的果实各 50 g,及时运回实验室,装入塑料袋密封好后
置于−48 ℃冰箱贮藏备用。
挥发性成分在江南大学国家重点实验室进行测定。测定仪器为美国Finnigan Trace MS气/质联用
仪,色谱柱DB-WAX,30 m × 0.25 mm × 0.25 μm。采用固相微萃取法,将果实样品在室温下解冻并
捣碎,取 6 g样品,置于 15 mL顶空瓶中,将老化后的 75 μm CAR/PDMS萃取头插入样品瓶顶空部
分,于 40 ℃吸附 40 min,吸附后的萃取头取出后插入气相色谱进样口,于 250 ℃解吸 3 min,同时
启动仪器采集数据。GC–MS分析色谱条件:进样口温度 250 ℃,柱温:起始温度 40 ℃,恒温 4 min,
以 6 ℃· min-1升至 220 ℃,恒温 10 min,载气He。质谱条件:电离方式EI,电子能量 70 eV,传输线
温度 250 ℃,离子源温度为 200 ℃。
糖酸测定在江苏省农业科学院园艺所江苏省园艺重点实验室进行,测定仪器为高效液相色谱仪
(美国Agilent 1100)。果肉可溶性糖和有机酸的提取方法按照Jia等(1999)的方法进行。糖及糖醇
的测定使用Transgenomic生产的 10 μm粒径,6 mm × 250 mm的CARBOSep CHO-620 CA柱,流动相
为双蒸水,柱温 80 ℃,示差折光检测器,进样量 15 μL。有机酸的测定使用Agilent 5 μm粒径 4.6 mm
× 250 mm的ZORBAX Eclipse XDB-C18 柱,流动相为 0.02 mol · L-1的KH2PO4(pH 2.7),流速 0.5
mL · min-1,柱温 25 ℃,紫外检测器,λ= 214 nm,进样量 5 μL。进样重复 3 次。
2 结果与分析
2.1 自然五倍体野生草莓果实香气组分及含量
自然五倍体野生草莓及两份对照材料的果实 TIC 谱图(略),经计算机谱库(NBS-WILEY)检
索及资料分析,检出的挥发性成分见表 1。

4 期 赵密珍等:自然五倍体野生草莓果实风味物质分析 615
表 1 自然五倍体野生草莓果实芳香成分的 GC-MS 部分分析结果
Table 1 A part of GC-MS analysis results of aroma components in wild pentaploid strawberry
相对含量/% Relative content 化合物类别
Categories
化合物名称
Compounds 黑 1
Hei 1 (5x)
黑 6
Hei 6 (5x)
黑 10
Hei 10 (4x)
吉 12
Ji 12 (2x)
酯类 Esters 乙酸乙酯 Acetic acid, ethyl ester 18.16 14.06 18.09 24.54
丙酸乙酯 Propanoic acid,ethyl ester 1.00 - - -
2–甲基丁酸乙酯 Butanoic acid,2-methyl,ethyl ester - - 2.73 -
2–甲基丁酸甲酯 Butanoic acid,2-methyl,methyl ester 1.22 - 0 1.81
丁酸乙酯 Butanoic acid,ethyl ester 13.65 13.07 22.09 7.97
3–甲基丁酸乙酯 Butanoic acid,3-methyl,ethyl ester 1.02 1.08 0 0
乙酸丁酯 Acetic acid,butyl ester - 1.11 1.26 -
二环[3,3,0]辛–2–烯–4β6β碳内酯
Bicyclo[3,3,0]oct-2-ene-4β6βcarbolactone
0 0 0 1.11
己酸乙酯 Hexanoic acid,ethyl ester 1.21 2.50 2.28 -
3–甲基–2–丁烯–1–醇乙酸酯
2-Buten-1-ol,3-methyl-,acetate
- 0 1.38 -
乙酸己酯 Acetic acid,hexyl ester - - 1.60 -
(Z)–3–己烯–1–醇乙酸酯 3-Hexen-1-ol,acetate,(Z)- - - - 2.86
(E)–3–己烯–1–醇乙酸酯 3-Hexen-1-ol,acetate,(E)- 0 0 3.41 0
乙酸桃金娘烯醇酯 Myrtenyl acetate 4.64 3.98 6.23 4.29
酮类 Ketones 丙酮 Acetone 7.62 0 2.55 5.36
2–戊酮 2-Pentanone 12.97 18.71 8.12 10.32
4–甲基–2–己酮 2-Hexanone,4-methyl- 0 6.43 0 0
2–庚酮 2-Heptanone 4.91 0 4.17 -
甲基壬基甲酮 2-Undecanone 1.09 2.44 - 1.39
醇类 Alcohols 乙醇 Ethanol 1.81 2.62 1.39 3.39
1–戊醇 1-Pentanaol - - - 1.17
2–庚醇 2-Heptanol 1.67 1.56 1.15 0
1–己醇 1-Hexanol 3.11 3.06 1.20 2.12
(Z)–3–己烯–1–醇 3-Hexen-1-ol,(Z)- - 0 2.67 3.81
(E)–2–己烯–1–醇 2-Hexen -1-ol,(E)- 1.44 1.48 - -
6,6–二甲基二环[3,1,1]庚烷–2–烯–2–甲醇
Bicyclo[3,1,1]heptane-2-methanol,6,6-dimethyl-
0 0 0 1.94
6,6–二甲基二环[3,1,1]庚–2–烯–2–甲醇
Bicyclo[3,1,1]hept-2-ene-2-methanol,6,6-dimethyl-
1.21 0 0 0
醛类 Aldehydes 己醛 Hexanal 2.47 1.72 1.90 3.48
(E)–2–己烯醛 2-Hexenal,(E)- 1.18 1.04 - 2.17
呋喃 Furans 4–甲氧基–2,5–二甲基–3(2H)–呋喃酮
3(2H)–Furanone,4-methoxy-2,5-dimethyl-
3.96 4.99 - 1.08
萜烯 Terpenes 里哪醇 Linalool - 1.38 - 1.18
酸 Acids 丁酸 Butanoic acid 0 0 1.42 0
2–甲基–丁酸 Butanoic acid,2-methyl- - - 2.53 2.35
己酸 Hexanoic acid - - 1.06 -
总计 Total 84.34 81.23 87.23 82.34
注:“0”未检测到;“-”相对含量小于 1%。
Note: “0”not found; “-”Relative content below 1%.

自然五倍体黑 1 检测出 74 种化合物(占总峰面积的 99.62%),黑 6 检测出 72 种化合物(占总
峰面积的99.48%),两者检测到11类共92种化合物,具体为酯类29种(31.52%)、酮类12种(13.04%)、
醇类 22 种(23.87%)、醛类 10 种(10.87%)、呋喃类 2 种(2.17%)、烃类 3 种(3.26%)、芳香烃类
2 种(2.17%)、萜烯类 5 种(5.43%)、酸类 4 种(4.35%)、醚类 1 种(1.09%)、酚类 2 种(2.17%)。
东方草莓黑 10 检测出 12 类共 73 种化合物(占总峰面积的 100.00%),其中酯类 28 种(38.36%)、
酮类 9 种(12.33%)、醇类 14 种(19.18%)、醛类 5 种(6.85%)、呋喃类 2 种(2.74%)、萜烯 3 种

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(4.1%)、烃类 1 种(1.37%)、芳香烃类 1 种(1.37%)、酸类 6 种(8.22%)、醚类 1 种(1.37%)、
酚类 2 种(2.74%)、酸酐类 1 种(1.37%)。东北草莓吉 12 检测出 11 类共 72 种化合物(占总峰面
积的 99.61%),其中酯类 21 种(29.17%),酮类 10 种(13.89%),醇类 19 种(26.39%),醛类 8 种
(11.11%),呋喃类 3 种(4.17%),萜烯类 1 种(1.39%),烃类 2 种(2.78%)、芳香烃类 1 种(1.39%)、
酸类 4 种(5.56%)、醚类 2 种(2.78%)、酸酐类 1 种(1.39%)。由此看出,两份自然五倍体野生草
莓与黑 10、吉 12 的香气物质的种类和数量基本相似,主要由酯类、醇类、酮类、醛类、呋喃类、
萜烯类等组成。
由表 1 可以看出,黑 1 和黑 6 相对含量大于 1%的香气成分分别有 19 种和 17 种,两者共有 6
类 22 种,其中酯类 8 种、酮类 5 种、醇类 5 种、醛类 2 种、呋喃类 1 种、萜烯类 1 种;共有的成分
包括乙酸乙酯、丁酸乙酯、3–甲基丁酸乙酯、己酸乙酯、乙酸桃金娘烯醇酯、2–戊酮、甲基壬基
甲酮、乙醇、2–庚醇、1–己醇、(E)–2–己烯–1–醇、己醛、(E)–2–己烯醛、4–甲氧基–
2 ,5–二甲基–3(2H)–呋喃酮等 14 种,由此说明两份自然五倍体试材的主要香气成分基本一致。
自然五倍体材料与对照材料黑 10、吉 12 相比,3–甲基丁酸乙酯为自然五倍体试材所特有,而 4–
甲氧基–2 ,5–二甲基–3(2H)–呋喃酮、2–戊酮、2–庚醇、1–己醇、(E)–2–己烯–1–醇
的相对含量较高。
综上所述,乙酸乙酯、丁酸乙酯、3–甲基丁酸乙酯、己酸乙酯、乙酸桃金娘烯醇酯、2–戊酮、
甲基壬基甲酮、乙醇、2–庚醇、1–己醇、(E)–2–己烯–1–醇、己醛、(E)–2–己烯醛、4–
甲氧基–2 ,5–二甲基–3(2H)–呋喃酮是自然五倍体野生草莓主要的香气物质。
2.2 自然五倍体野生草莓果实糖组分及含量
由表 2 可以看出,黑 1 果实总糖含量显著高于其他所测的 3 份材料;山梨醇最多,其次为果糖、
葡萄糖,蔗糖最少;黑 6、黑 10、吉 12 各糖分的含量从高到低依次为果糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇。
本结果与姜远茂等(2004)报道的结果一致,但与葛会波和邓明琴(1993)报道的结果不太一致,
这可能与测定方法等不同有关。
表 2 自然五倍体野生草莓果实的糖和有机酸含量
Table 2 Contents of sugar and organic acid in wild pentaploid strawberry /(mg · g-1)
糖 Sugar 有机酸 Organic acid
试材
Accession
蔗糖
Sucrose
葡萄糖
Glucose
果糖
Fructose
山梨醇
Sorbitol
总量
Total
content
草酸
Oxalic
苹果酸
Malic
柠檬酸
Citric
奎尼酸
Quinic
总量
Total
content
黑 1(5x) Hei 1 1.87 b 10.61 b 12.60 c 32.77 a 57.85 a 0.09 a 4.14 a 0.19 b 0.19 a 4.61 a
黑 6(5x)Hei 6 4.16 b 13.82 ab 16.79 b 2.30 b 37.07 c 0.09 a 2.93 b 0.18 b 0.19 a 3.39 b
黑 10 (4x)Hei 10 10.26 a 13.35 b 14.71 bc 0.07 b 38.39 c 0.00 b 0.28 c 2.53 a 0.14 a 2.95 b
吉 12 (2x)Ji 12 10.95 a 17.24 a 20.46 a 0.00 b 48.65 b 0.00 b 2.43 b 0.17 b 0.15 a 2.75 b
注:表中同一列数据中的不同字母表示差异达 5%显著水平。
Note: Different letters within the same row indicate significant difference at 5% level.

2.3 自然五倍体野生草莓果实酸组分及含量
如表 2 所示,黑 1、黑 6、吉 12 以苹果酸为主,占总酸的 86.18% ~ 90.00%,其次是奎尼酸和柠
檬酸,占总酸的 4.13% ~ 5.59%;黑 10 以柠檬酸为主,占总酸含量的 87.24%,其次是苹果酸,占总
酸的 9.66%、奎尼酸占总酸的 4.83%,吉 12 及黑 10 没有检测到草酸。黑 1 总酸高于黑 6、黑 10 和
吉 12,达到显著水平。
4 期 赵密珍等:自然五倍体野生草莓果实风味物质分析 617
3 讨论
草莓果实中芳香物质组成含量是决定其风味品质的重要因素(MeFadden et a1., 1965;Latrasse,
1991)。本研究结果表明,黑 1、黑 6 自然五倍体野生草莓以及黑 10 东方草莓和吉林 12 号东北草莓
所含的香气物质达 70 余种,比张运涛等(2008)和姜远茂等(2004)报道的栽培种红颊、枥木少女、
全明星等所含的香气物质多。本研究结果显示,酯类、酮类、醇类、醛类、呋喃、萜烯类等是自然
五倍体野生草莓的主要香气物质,这进一步说明了以上物质构成了草莓的主要香气物质(Larsen &
Poll,1992;Shamaila et a1.,1992;Pérez et a1.,1997;Zabetakis & Holden,1997;Forney et a1.,
2000)。芳香物质对果实香气的贡献是依据其香气值(绝对含量/香气阈值)来划分(Larsen & Poll,
1992),草莓果实中有较高香气值的成分为其特征芳香物质。由于本试验条件的限制,仅测定香气物
质的相对含量,其中乙酸乙酯(18.16%、14.06%)、丁酸乙酯(13.65%、13.07%)、2–戊酮(12.97%、
18.71%)的相对含量特别高,一般认为其阈值也较高,因此,它们在自然五倍体草莓香味中的影响
还需要做进一步研究,而乙酸丁酯、乙酸己酯、里哪醇的相对含量(0.56% ~ 1.38%)都较高,根据
香气阈值研究结果(Larsen & Poll, 1992),乙酸丁酯(0.000001 ~ 0.00001 mg · kg-1)、乙酸己酯(0.00001
~ 0.0001 mg · kg-1)、里哪醇(0.001 ~ 0.0001 mg · kg-1)等的香气阈值很低,推测乙酸丁酯、乙酸己
酯、里哪醇可能是自然五倍体野生草莓的主要特征香气成分。
成熟草莓果实中 2,5–二甲基–4–甲氧基–3(2H)–呋喃酮(DMMF)和 2,5–二甲基–4
–羟基–3 (2H)–呋喃酮(DMHF)也是草莓特征芳香成分(Larsen & Poll,1992;Pérez et a1., 1992;
Shamaila et a1.,1992;Zabetakis & Holden,1997;Forney et a1.,2000)。Pickenhagen 等(1981)在
野生种森林草莓中检测到 DMMF 和 DMHF,而 Pyysalo 等(1979)在森林草莓中仅检测 DMMF,
并认为 DMMF 是野生草莓的主要成分。本研究没有检测到 DMHF。有文献指出 DMHF 与 DMMF
不稳定(Pérez et a1., 1992),因生长环境和品种不同会有很大的差异(Douillard & Guichard,1990)。
本研究中,自然五倍体野生草莓的 DMMF 含量比东北草莓多,而东方草莓中未能检测到。张运涛
等(2008)在对红颊等 5 个栽培品种的果实香气成分测定中,仅章姬含有 DMMF,姜远茂等(2004)
报道丰香等 4 个栽培品种的果实中均含有 DMMF,但其相对含量最高不到 0.6%,低于本研究中的
自然五倍体野生草莓。本研究中,相对含量大于 1%的成分 3–甲基丁酸乙酯仅在自然五倍体试材中
检测到,3–甲基丁酸乙酯有类似苹果、香蕉的香气,对自然五倍体的果实香味可能起到一定作用。
综上所述,自然五倍体野生草莓具有特殊的香气物质,今后在草莓香味育种中可以加以利用。
本试验中自然五倍体野生草莓的总糖含量高于葛会波和邓明琴(1993)报道的云南 1 号等野生
草莓,其中黑 1 高于栽培种草莓宝交早生,这进一步证明了自然五倍体野生草莓的可溶性糖含量极
高(邓明琴和雷家军,2005)。植松德雄(1998)报道蔗糖、果糖和葡萄糖的甜度数值分别为 1、1.3 ~ 1.7
和 0.5 ~ 0.7,山梨醇的甜度是蔗糖的 60%。结合本研究结果,说明果糖含量和山梨醇含量共同决定
五倍体草莓黑 1 的甜度,而果糖含量决定五倍体草莓黑 6 的甜度。
有机酸通常在果实生长过程中被积累,而在成熟过程中作为呼吸底物被消耗,有机酸的消长是
果实生长发育过程中的一个特点,大多数果实富含的有机酸是柠檬酸和苹果酸(陈美霞 等,2006;
赵剑波 等,2009)。本试验结果表明,苹果酸是所测的两个自然五倍体野生草莓酸的主要成分。

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