全 文 ：园 艺 学 报 2011，38（10）：1893–1900 http: // www. ahs. ac. cn
Acta Horticulturae Sinica E-mail: yuanyixuebao@126.com
收稿日期：2011–05–03；修回日期：2011–09–22
基金项目：国家自然科学基金项目（30771756）；农业部西北园艺种质资源与遗传改良重点开放实验室项目
* 通信作者 Author for correspondence（E-mail：dqr0723@163.com）
柿果实内切–1,4–β–葡聚糖酶基因克隆与定
量表达分析
宋康华，饶景萍*，常晓晓，祝庆刚
（西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 712100）
摘 要：以成熟期‘富平尖柿’（Diospyros kaki L.‘Fuping Jianshi’）为材料，采用 RT-PCR 和 RACE
相结合的方法，克隆柿果实中内切–1,4–β–葡聚糖酶基因（EG）cDNA，并在此基础上采用实时荧光
PCR 定量技术检测采后常温下柿果及 GA3、ABA 和 1-MCP 处理柿果软化过程中该 EG 基因转录水平的表
达特点。试验结果：获得了一个内切–1,4–β–葡聚糖酶基因 cDNA，命名为 DKEG1（GenBank accession
number：HQ222561），长 2 011 bp，编码 545 个氨基酸，末端含有 CBD 区域。实时荧光 PCR 定量技术检
测发现常温下对照组柿果采后 3 d 时出现 DKEG1 基因表达高峰，下降后又逐渐上升，并在 12 d 时出现第
2 个高峰；赤霉素明显抑制了柿果实在整个后熟过程中 DKEG1 基因的表达，尽管在 6 d 时也有升高，但
与对照相比全程表达量均极低；ABA 处理大大提高了 DKEG1 基因的表达量，没有出现采后 3 d 的表达高
峰，但在 6 ~ 18 d 期间其表达量均高于对照的最高峰值，其表达高峰出现采后 9 d；1-MCP 处理的柿果表
达高峰比对照推迟 9 d，且前期表达量显著降低，但后期又上升。据此推断柿果实 DKEG1 的表达受乙烯
生成和乙烯信号转导的调控，进而参与果实的后熟软化过程。
关键词：柿；果实；软化；EG 基因；实时荧光定量 PCR
中图分类号：S 665.2 文献标识码：A 文章编号：0513-353X（2011）10-1893-08

Studies on Cloning and Real-time Expression of Endo-1,4-β-glucanase Gene
in Persimmon Fruit
SONG Kang-hua，RAO Jing-ping*，CHANG Xiao-xiao，and ZHU Qing-gang
（College of Horticulture，Northwest A & F University，Yangling，Shaanxi 712100，China）
Abstract：A full length of endo-1,4-β-glucanase gene was isolated from mature persimmon
（Diospyros kaki L.‘Fuping Jianshi’）fruit by RT-PCR and RACE（rapid amplification of cDNA ends）
method，and its mRNA expression level of different treatments（GA3，ABA，1-MCP at room temperature）
on persimmon fruits were further investigated by the Real-time fluorescence qPCR. The results showed
that the obtained EG gene，named DKEG1（GenBank accession number：HQ222561），was 2 011 bp in
length，and encoded 545 amino acid，with CBD residue in the deduced EG protein. Real-time fluorescence
qPCR（RT-qPCR）showed that the expression of DKEG1 in control fruits increased to maximum at 3 d after
harvest，then decreased rapidly and rised to a second expression peak at 12 d after harvest；While in GA3

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treatment，it was suppressed obviously through the whole ripening and softening progress. Though its
expression level increased at 6 d after harvest，generally it’s still lower than that of control. The DKEG1
was abundantly expressed in ABA treatment from 6 to 18 days after harvest with an expression peak at 9 d
after harvest，but it didn’t show an expression peak at 3 d after harvest as the control. The expression peak
of DKEG1 in 1-MCP treatment was delayed 9 days than the control，and its expression were significantly
inhibited at earlier stage but increased at later stage. Therefore，the expression of DKEG1 in persimmon
fruits is concluded to be regulated by ethylene and the ethylene signal transduction，and then participates in
the ripening and softening progress.
Key words：persimmon；fruit；softening；endo-1,4-β-glucanase gene；real-time quantitative PCR

柿（Diospyros kaki L.）原产中国，果实营养丰富，风味独特，具有很高的食用价值和医疗保健
价值（龙兴桂，2000），采后极易软化，给贮藏运销带来很大困难。随着对柿各种生理生化过程分子
基础研究的深入，利用基因工程来调控其生长发育和代谢过程，从根本上改良柿采后贮藏性能是目
前研究的热点。
细胞壁代谢在果实的生长发育和成熟衰老过程中发挥着重要作用（Brummell，2006）。研究认
为，不是由单一的酶类或基因启动了果实的后熟软化，而是由许多潜在的相关基因及其对应的细胞
壁修饰酶，如多聚半乳糖醛酸酶（PG）、果胶甲酯酶（PME）、β–半乳糖苷酶（β–Gal）、内切–
1,4–β–葡聚糖酶（EG）、木葡聚糖内糖基转移酶（XET）、扩张蛋白（Expansin）、阿拉伯糖苷酶（Afase）
等一起参与完成，而且此类基因大都属于多基因家族，表现重叠效应或者过剩表达（Alan & John，
2008）。目前本课题组已经在‘富平尖柿’的成熟期、转色期、膨大期克隆到 8 个扩张蛋白基因（童
斌 等，2005；常晓晓 等，2010），此外从成熟期柿果中又成功克隆到 3 个 PG 基因（刘乐 等，2009a），
并认为 PG 基因表达受乙烯的调控（姜妮娜 等，2010），其他细胞壁降解酶也正在研究中，旨在建
立柿果实后熟软化过程中较完善的细胞壁降解模型，进而从根本上改良柿采后贮藏性能。内切–
1,4–β–葡聚糖酶（EG）作为纤维素酶的一种，在果实后熟软化中也起着重要的作用。它主要是通
过水解纤维素和半纤维素分子中的 1,4–β–葡聚糖酶主链，改变细胞壁的多孔性和黏性，促使细胞
壁修饰酶更加容易接近其作用的底物，从而更快地引起果实的软化（欧阳杰 等，2007）。EG 酶的
研究尚未见在柿中报道。
作者以中国涩柿优良品种‘富平尖柿’为材料，进行 EG 基因的克隆，利用果实软化抑制剂 GA3、
1-MCP 和衰老促进剂 ABA 处理果实的成熟衰老各阶段，进行 EG 基因的实时荧光定量分析，旨在
探讨 EG 基因在转录水平对柿果实成熟软化的调控作用。
1 材料与方法
1.1 试验材料
供试柿品种为富平尖柿（Diospyros kaki L.‘Fuping Jianshi’），于 2010 年 10 月 5 日采于陕西省
富平县城南果园。采收成熟度一致，大小均匀，无病虫害的柿果，当天运回实验室，一部分去皮切
成 1 cm 见方的小块以液氮速冻存于超低温冰箱以提取 RNA 供基因克隆及实时荧光定量使用，另一
部分于 10 月 6 日设 3 种处理，每处理 3 次重复，每重复 60 个果实。
（1）用 60 mg · L-1 赤霉素 GA3（Sigma，G7645）浸果处理 2 min 后取出晾干；用蒸馏水浸果相
同时间为对照；（2）含 1-MCP（ethylBlocR，美国罗门哈斯上海公司提供）500 nL · L-1 的容器中处
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理 24 h 后通风；对照果密闭于不含 1-MCP 的容器中处理相同时间后通风。（3）用 50 mg · L-1 ABA
（A1049，Sigma）浸果处理 2 min 后晾干；用蒸馏水浸果相同时间为对照。
处理后将果实取出，放于室温下，10 月 7 日第一次取样，以后每 3 d 取一次样，用 GY-1 型硬
度计测定其硬度，随机挑选 6 个果子，单果测定 3 次，当硬度下降至 ≤ 2 kg · m-2 停止取样，去皮
后切 1 cm 见方的小块置于液氮中速冻，存于超低温冰箱备用。
1.2 EG 基因的克隆
1.2.1 总 RNA提取和 cDNA第一链反转录
采用改良热硼法（Wan & Wilkins，1994）提取样品 RNA，并用用 Olig（dT）18 作引物进行 RT-PCR
反转录。
1.2.2 引物设计与合成
根据 GenBank 报道的 EG 氨基酸保守序列设计简并引物，上游为 TAY（CT）TAY（CT）GAY
（CT）GCN（ATCG）GGN（ATCG）GAY（CT）；下游为 N（ATCG）CCN（ATCG）AR（AG）D
（ATG）ATR（AG）TAR（AG）TCN（ATCG）ACY（CT）TG。委托上海生工生物工程技术服务
有限公司合成。
1.2.3 cDNA全长克隆
以第 1 链 cDNA 为模板，与 EG 基因简并引物进行 PCR 扩增。PCR 反应条件为：95 ℃ 3 min；
95 ℃ 1 min；47 ℃ 1.5 min；72 ℃ 1.5 min，共 35 个循环，最后 72 ℃延伸 6.5 min。
PCR反应产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测后回收，与pMD-18T载体连接，转化大肠杆菌DH5α感
受态细胞，测序，得到一个目的片段。再根据得到的序列设计3′端特异引物（CGGGGGACAA
TGTGAAGTT）进行RACE（Rapid Amplification of cDNA Ends）扩增，所用试剂为3′-Full RACE Core
SetVer1210（TaKaRa，日本），方法参照说明书。
1.3 序列分析
利用 DNAMAN 分析工具对 EG 编码的部分蛋白进行氨基酸基本性质分析，序列比对，并结合
MEGA4.0 构建进化树。
1.4 实时荧光定量分析
对各个处理进行果肉 RNA 的提取以及 cDNA 第一链反转录（参照 TaKaRa 反转录试剂盒）。仪
器为 iCycler iQ5实时定量PCR 仪器（Bio-Rad，美国）。反应体系为 20.0 μL，含有 10.0 μL SYBR Premix
Ex TaqTMⅡ（TaKaRa），1.0 μL cDNA，8.2 μL ddH2O，上下游引物各 0.8 μL（引物浓度 10 μmol · L-1）。
运行程序为：95 ℃预变性 3 min，95 ℃变性 20 s，58 ℃退火 20 s，72 ℃延伸 20 s，40 次循环。
每个样品 3 次重复。
以柿 Actin 基因（登录号为 AB219402）作为内参，引物为：5′-TGCTCTTCCAGCCATCACTCA
TT-3′；5′-ATTTCCTTGCTCATCCGGTCAG-3′，EG 基因的上游引物为：GCGTCCTTCCTCCTCACT，
下游引物为：CATATCCCACCATGTAACTTGTA。采用 Livak 和 Schmittgen（2001）的 2–△△CT公式
计算基因相对表达量，其中△△CT =（CT，Target–CT，Actin）Time x–（CT，Target–CT，Actin）
Time 0。CT，Target 和 CT，Actin 分别是目标基因和内参基因的 CT 值；Time x 和 Time 0 分别指留
样不同时间点。以采收后未进行任何处理的样本为参照，将其值转换成 1，将其他时间点样品与之
比较，即获得相对表达值（姜妮娜 等，2010）。
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2 结果与分析
2.1 柿果实 EG 基因的克隆和序列分析
通过设计简并引物进行 PCR 扩增，从富平尖柿果肉得到一个约 900 bp 的中间片段。将 PCR 产
物克隆到 pMD18-T 载体上，测序，在 GenBank 上进行 blast 分析，发现该序列编码的氨基酸序列与
其他植物上 EG 蛋白有较高的同源性，证明该序列是 EG 基因的一部分。在此基础上进行 3′RACE
扩增后，获得一条长 2 011bp 的片段，命名为 DKEG1，GenBank 登录号为 HQ222561，其编码区编
码 545 个氨基酸，推导的该蛋白的氨基末端比其他完整 EG 蛋白略短，但与其他植物上克隆的 EG
蛋白的相应结构域有很高的同源性，均包含有 EG 蛋白特有的 4 个半胱氨酸（Cys）残基和两个糖基
水解酶启动位点，分别为 SYMVGYGSNYVHHR 和 FADQRDNYEQTEPATYNNA，属于糖基水解酶
第 9 家族，且末端含有纤维素结合区域（CBD），命名为 DKEG1，其推导的氨基酸 GenBank 登录号
为 ADP55074.1。


图 1 柿果实 EG 推导的氨基酸序列与其他物种 EG 基因氨基酸同源性比较
黑色部分表示完全相同，灰色部分表示部分相同。CAI68019、ACT54546、ADP55074 和 CAB43938 分别为桃、龙眼、柿和草莓的氨基酸序
列 GenBank 登录号。框内序列为 EG 基因家族保守结构域 CBM_2。
Fig. 1 Amino acid homology of persimmon EG gene compared with other species
Shadow means conserved regions. CAI68019，ACT54546，ADP55074，CAB43938 are amino acid sequences accession No. in GenBank of Prunus
persica，Dimocarpus longan，Diospyros kaki，Fragaria × ananassa. CBM_2 conserved domain in frame.
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2.2 不同物种间 EG 蛋白的同源性分析
利用 MEGA4.0 软件构件了包括柿果 EG 基因在内的 16 个 EG 的系统进化树（图 2），由图 2 中
可见，EG 分为两大类，跨模型 EG 蛋白和分泌性 EG 蛋白，玉米（NP001147537）和番茄（AAC49704）
属于前一类，而柿果 EG 则属于后一类，且含有 CBD 纤维素结合区域，与桃、龙眼和草莓等同源性
较高，分别达到 80%、81%和 79%。

图 2 由柿果实 EG 推导的氨基酸序列与其他物种氨基酸同源性比较
Fig. 2 Phylogenetic analysis of amino acid sequences of EG gene from persimmon and other plants in GenBank database

2.3 柿果实 EG 基因在常温对照处理及 GA3、ABA 和 1-MCP 处理不同阶段的表达
图 3 显示，各处理柿果实贮藏期间硬度均呈下降趋势。ABA 处理和对照硬度下降幅度和速率均
较大，至 21 d 硬度下降为刚采收时的 9.6%和 17.9%，常温贮藏 12 d 时两处理之间差异不显著，之
后 ABA 处理果实硬度更迅速下降，GA3 和 1-MCP 处理果实硬度下降速度较对照明显缓慢，贮藏 6 d
两处理与对照差异均达到显著水平（P < 0.05），21 d 时硬度仅为刚采收时的 28.3%和 33.3%，1-MCP
处理柿果 24 d 时降至最低值。
由图 4 可见，对照果实在采收后 3 d 时出现 DKEG1 基因表达高峰，降低后逐渐上升，在 12 d
时又出现一个较低的高峰；GA3 处理柿果实在后熟的整个过程中明显抑制了 EG 基因的表达，尽管
在采后 6 d 时也有升高，但与对照相比，全程的表达量均极低，在采收后各个时间点的差异均达到
极显著水平。
ABA 处理显著提高了柿果实 DKEG1 基因表达量，虽然没有出现采收 3 d 时的表达高峰，但在
6 ~ 18 d 期间其表达量均高于对照的最高峰时，其表达高峰出现在采后 9 d（图 5）。
1-MCP 处理的柿果 EG 基因在前 15 d 表达量明显低于对照，在此后则高于对照，其表达高峰较
对照推迟 9 d，且其高峰时的表达量略低于对照高峰表达量（图 6）。


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图 3 GA3、ABA、1-MCP 处理柿果实硬度变化
Fig. 3 The firmness of persimmon fruit treated by GA3，
ABA and 1-MCP
图 4 赤霉素 GA3 处理下柿果实 DKEG1 表达水平
Fig. 4 Expression level of DKEG1 in fruits of
persimmon treated with GA3
图 5 脱落酸 ABA 处理下柿果实 DKEG1 表达水平
Fig. 5 Expression level of DKEG1 in fruits of persimmon
treated with ABA
图 6 1-MCP 处理下柿果实 DKEG1 表达水平
Fig. 6 Expression level of DKEG1 in fruits of persimmon
treated with 1-MCP

3 讨论
内切–1,4–β–葡聚糖酶（EG）是一类由多基因家族编码的细胞壁代谢酶之一（Trainotti et al.，
1998），EG 基因与植物生长发育的各个阶段如细胞的伸长生长，果实成熟，器官脱落等有密切的关
系，且大多数情况下受激素变化调节，在不同的组织器官中也有特异的表达（Ilan et al.，2002）。从
成熟期柿果果肉中分离得到 DKEG1 基因，经氨基酸序列比对发现其含有纤维素结合区域（Cellulose
Binding Domain，CBD），推测属于分泌性蛋白（吴富旺 等，2009），通过信号肽和跨膜结构预测分
析发现，DKEG1 含有信号肽，不含有跨膜区域。蛋白质序列分析表明，与柿果肉 DKEG1 同源性近
的序列大都与果实的成熟软化有关。以上均暗示 DKEG1 在柿果的后熟软化过程中起着某种重要的
作用。
内切–1,4–β–葡聚糖酶（EGases）可以催化水解具有 1,4–β–葡聚糖主链的多聚糖，如纤维
素和木葡聚糖分子，从而参与对细胞壁的修饰（Wong et al.，1977；欧阳杰 等，2007）。植物细胞
中存在一个 EGase 蛋白家族，且多为分泌蛋白。目前为止，EG 基因在植物组织中的天然底物仍不
清楚（欧阳杰 等，2007），在番茄，草莓等作物中各种转基因技术的应用表明 EG 基因的 mRNA 被
抑制并不能延缓果实衰老和软化。不同植物果实中 EG 基因表达的调节机制也各有不同。番茄中
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LeCel1、LeCel2 和 LeCel5 的表达受乙烯调控（Kalaitzis et al.，1999）；而草莓果实中 FaCel1 的表
达则受内源生长素类物质的调控（Harpster et al.，1998），纤维素酶在柿果实后熟软化中的影响及作
用被认为低于果胶酶，但纤维素的降解也是伴随柿果实后熟变软，硬度下降的主要特征。柿果实是
一种较特殊的呼吸跃变型果实，其幼果采后会产生大量的乙烯，幼果离体后由于呼吸作用会产生水
分胁迫，胁迫信号会诱导萼片中 DK-NCED1 基因的表达，并诱导产生 ABA，随即诱导乙烯的生成，
乙烯作为次级信号激活乙烯的自我催化，产生大量乙烯，促使果实后熟（冷平 等，2009b）。本试验
中，对照柿果 DKEG1 基因表达趋势与 ABA 及乙烯产生趋势相一致，说明 EG 基因的表达极有可能
受乙烯的调节。赤霉素可以显著抑制 ACC 合酶和降低 EFE 的活性，进而延缓内源乙烯产生，应用
GA3 处理的柿果肉中 EG 基因 mRNA 的积累在每个时间点均显著受到抑制，表明 EG 基因的表达与
内源乙烯关系密切。研究认为，1-MCP 可以抑制柿果实中 ACS 和 ACO 基因的表达（刘乐 等，2009），
及下调绿熟期番茄中 ACC 合成/氧化酶，乙烯受体和响应因子基因的表达（Krishnaraj & Gopinadhan，
2011），且内源乙烯浓度（IEC）可以调节跃变型果实对 1-MCP 的敏感性，在呼吸跃变之前 1-MCP
可以没有竞争地，不可逆地不完全结合乙烯受体蛋白，阻断乙烯信号传导过程，但随着内源乙烯的
不断生成，乙烯受体蛋白逐渐消耗，果实对 1-MCP 敏感度降低（Zhang et al.，2011）。而 1-MCP 处
理前期 DKEG1 基因的表达显著受到抑制，后期又上升也与该 EG 基因受内源乙烯的调控的结论相
一致。ABA 处理大大提高了 DKEG1 基因的表达量并使得表达高峰提前了 3 d，也都充分说明了柿
果肉中 EG 基因的表达受乙烯的生成和乙烯信号转导两方面的影响，并参与了柿果实的后熟软化，
但具体的调控模式仍不清楚。其中，ABA 处理果实在第 3 天没有出现 EG 的一个表达高峰，原因可
能是 ABA 处理当天即诱导了乙烯产生，比对照提前达到表达高峰，故第 2 天所取样品没有检测到
EG 的表达高峰。此外，在成熟初期柿果实的正常软化过程中，在采后第 12 和 16 天分别出现了果
胶酶和 DKPG1 基因的表达高峰，促进了原果胶的降解和水溶性果胶的增加（姜妮娜 等，2010），
但两者进度并不一致，可能 β-Gal 也参与了果胶的降解，甚至在在柿果果胶降解中也起着更为重要
的作用（罗自生，2005），DKEG1 和 CDK-EXP3 在 12 d 时均有表达高峰出现（另文发表），编码能
使植物细胞壁松驰和加速缓解细胞壁张力的细胞壁蛋白质。同时，DKEG1 在第 3 天大量表达，与纤
维素酶可能在柿果实的前期软化中起重要作用的猜测相一致。目前，大多数细胞壁降解酶作为乙烯
的响应因子，相互协作共同参与果实的后熟软化过程，进一步的研究正在进行中。

References
Alan B Bennett，John M Labavitch. 2008. Ethylene and ripening-regulated expression and function of fruit cell wall modifying proteins. Plant
Science，175：130–136.
Brummell D A. 2006. Cell wall disassembly in ripening fruit. Functional Plant Biology，33 (2)：103–119.
Chang Xiao-xiao，Rao Jing-ping，Liu Le. 2010. Cloning and prokaryotic expression of expansin cDNA in persimmon fruits. Acta Horticulturae
Sinica，37 (7)：1139–1146. (in Chinese)
常晓晓，饶景萍，刘 乐. 2010. 柿果实扩张蛋白基因 cDNA 克隆及原核表达. 园艺学报，37 (7)：1139–1146.
Harpster M H，Brummell DＡ，Dunsmuir P. 1998. Expression analysis of a ripening-specific，auxin-repressed endo-1,4-beta-glucanase gene in
strawberry. Plant Physiology，118 (4)：1307–1316.
Ilan Levy，Ziv Shani，Oded Shoseyov. 2002. Modification of polysaccharides and plant cell wall by endo-1,4-bglucanase and cellulose-binding
domains. Biomolecular Engineering，19：17–30.
Jiang Ni-na，Rao Jing-ping，Fu Run-shan，Suo Jiang-tao. 2010. Effects of propylene and 1-methylcyclopropene on PG activities and expression of
DkPG1 gene during persimmon softening process. Acta Horticulturae Sinica，37 (9)：1507–1512. (in Chinese)
姜妮娜，饶景萍，付润山，索江涛. 2010. 柿果实采后软化中 PG 酶活性及其基因 DkPG1 的表达. 园艺学报，37 (9)：1507–1512.
Kalaitzis P，Hong S，Solomos L，Mark L，Tucker. 1999. Molecular characterization of a tomato endo-β-1,4-glucanase gene expressed in mature
1900 园 艺 学 报 38 卷
pistils，abscission zones and fruit. Plant and Cell Physiology，40 (8)：905–908.
Krishnaraj Tiwaria，Gopinadhan Paliyath. 2011. Microarray analysis of ripening-regulated gene expression and its modulation by 1-MCP and hexanal.
Plant Physiology and Biochemistry，49：329–340.
Leng Ping，Zhang Guang-lian，Li Xiang-xin，Wang Liang-he，Zheng Zhong-ming. 2009. Cloning of ABA biosynthesis key enzymes NCED from fruit
calyx of persimmon and regulation of ABA on ethylene from detached young persimmon fruits. Science in China，50 (14)：2082–2088. (in
Chinese)
冷 平，张光连，李祥欣，王良合，郑仲明. 2009. 柿果萼 ABA 生物合成关键酶 NCED 的克隆及 ABA 对柿离体幼果乙烯的调节. 科学
通报，50 (14)：2082–2088.
Liu Le，Rao Jing-ping，Chang Xiao-xiao. 2009a. Cloning and sequencing full-length cDNA encoding PG gene from Persimmon. Acta Bot Boreal -Occident
Sin，29 (4)：656–661. (in Chinese)
刘 乐，饶景萍，常晓晓. 2009a. 柿果实多聚半乳糖醛酸酶基因克隆与序列分析. 西北植物学报，29 (4)：656–661.
Liu Le，Rao Jing-ping，Chang Xiao-xiao，Yi Shun-chao. 2009b. Effects of propylene and 1-methylcyclopropene on expressions of ACC synthase and
ACC oxidase genes in persimmon fruits. Scientia Agricultura Sinica，42 (6)：2092–2097. (in Chinese)
刘 乐，饶景萍，常晓晓，弋顺超. 2009b. 丙烯和 1-MCP 处理对采后柿果实 ACS 和 ACO 基因表达的影响. 中国农业科学，42 (6)：
2092–2097.
Long Xing-gui. 2000. Cultivation of modern fruit tree（Deciduous fruit tree）. Beijing：China Forestry Publishing House：709–711. (in Chinese)
龙兴桂. 2000. 现代果树栽培（落叶果树卷）. 北京：中国林业出版社：709–711.
Luo Zi-sheng. 2005. Effect of GA3 on ripening and cell wall component metabolism of persimmon fruit. Journal of Zhejiang University：Agric &
Life Sci，32 (4)：415–419. (in Chinese)
罗自生. 2005. GA3 对柿果实成熟软化及细胞壁组分代谢的影响. 浙江大学学报：农业与科学版，32 (4)：415–419.
Ouyang Jie，Jiang Jian-xiong，Zhang Tian-zhen，Guo Wang-zhen，Yi Zi-li. 2007. The function of endo-1,4-β-glucanase on plant cell growth and
development. Acta Botanica Boreali-Occidentalia Sinica，27 (4)：844–851. ( in Chinese)
欧阳杰，蒋建雄，张天真，郭旺珍，易自力. 2007. 内切–1,4–β–葡聚糖酶在植物细胞生长发育中的作用. 西北植物学报，27 (4)：844–
851.
Tong Bin，Rao Jing-ping，Ren Xiao-lin，Li Jia-rui. 2005. Cloning and sequencing of expansin cDNA in the fruits of Chinese persimmon. Acta Bot
Boreal-Occident Sin，25 (11)：2168–2171. (in Chinese)
童 斌，饶景萍，任小林，李嘉瑞. 2005. 中国柿果实扩展蛋白基因的 cDNA 克隆与序列分析. 西北植物学报，25 (11)：2168–2171.
Trainotti L，Ferrarese L，Casadoro G. 1998. Characterization of cCel3，a member of the pepper endo-β-1,4-glucanasemultigene family. Hereditas，
128 (2)：121–126.
Wan C Y，Wilkins T A. 1994. A modified hot borate method significantly enhances the yield of high qualitity RNA from cotton（Cossypium hirsutum
L.）. Analytical Biochemistry，(223)：7–12.
Wong Y，Fincher G B，Maclachlan G A. 1977. Cellulases can enhance beta-glucan synthesis. Science，195 (4279)：679–681.
Wu Fu-wang，Kuang Jian-fei，Lu wang-jin，Liu Hong-jian，Chen Jian-ye. 2009. Cloning and expression analysis of EG genes in litchi fruit.
Horticulturae Sinica，36 (12)：1733–1740. (in Chinese)
吴富旺，邝健飞，陆旺金，刘洪见，陈建业. 2009. 荔枝果实内切–1,4–β–葡聚糖酶基因（EG）的克隆和表达分析. 园艺学报，36
(12)：1733–1740.
Zhang Zhen-ke，Huber Donald J，Rao Jing-ping. 2011. Ripening delay of mid-climacteric avocado fruit in response to elevated doses of 1-methy-
lcyclopropene and hypoxia-mediated reduction in internal ethylene concentration. Postharvest Biology and Technology，60：83–91.