全 文 ：园 艺 学 报 , 一
生
】
一 甲基环丙烯处理对苹果贮藏中可溶性蛋 白的影
响
朱玉涵 ’ , 胡 芳’‘ , 马书尚‘ , 郭 燕‘ , 赵 刚’
’西北农林科技大学生命科学学院 , 陕西杨凌 杭州市夏衍中学 , 杭州
摘 要 采用 一 技术 , 以 个苹果品种为试材 , 探究 一 甲基环丙烯 一 处理对采后果
实中可溶性蛋白的影响 。 结果表明 , 对照果实在后熟衰老阶段出现了 个特异蛋白条带 , 分子量分别为
、 、 、 、 、
和 。 特异蛋白的变化存在品种间差异 , 蛋白仅在
‘ 嘎拉 ’ 和 ‘ 秦冠 ’ 苹果中表达 蛋白含量在 ‘ 嘎拉 ’ 和 ‘ 秦冠 ’ 苹果中减少 , 但在其他品种中
保持稳定 蛋白在 ‘ 嘎拉 ’ 苹果中没有表达 蛋白仅在 ‘ 新红星 ’
、 ‘ 秦冠 ’ 和 ‘ 富士 ’
苹果中表达 。 经
· 一 ’ 一 处理的果实中 、
、 、 、 、 蛋白的积累被
推迟或减少 , 而 ‘ 嘎拉 ’ 和 ‘ 秦冠 ’ 苹果中 蛋白的降解被延缓 。
关键词 苹果 一 甲基环丙烯 成熟 贮藏 衰老 蛋白质
中图分类号 文献标识码 文章编号 一 刁 一
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一
一 甲基环丙烯 一 叩 , 一 作为新型 乙烯受体抑制剂 , 能有效抑制乙烯的作
用 , 延缓苹果的后熟衰老 韩冬芳 等
, 孙希生 等 , 。 王瑞庆等 报道 一 抑
制 ‘ 嘎拉 ’ 苹果贮藏期间某些蛋白质的表达 , 但 一 的抑制作用是否存在品种间差异尚不清楚 。
本试验通过对不同品种苹果采后可溶性蛋白的电泳分析 , 寻找与苹果后熟衰老相关的蛋白质 , 研
究 一 处理对这些蛋白质的影响 。
收稿 日期 一 一 修回 日期 一 一
基金项目 国家 ‘ 十五 ’ 科技攻关项 目 美国罗 门哈斯 中国公司 资助项 目
通讯作者 。
‘ 一 、
,日 艺 学 报 卷
材料与方法
材料及其处理
试验用果采自陕西省扶风县南阳镇一管理 良好的果园 。 ‘ 嘎拉 ’
、 ‘ 新红星 ’
、 ‘ 秦冠 ’
、 ‘ 富士 ’
和 ‘ 粉红女士 ’ 苹果均在当地商业采收期采收 , 采收日期分别为 年 月 日
、 月 日
、
月
日和 月 日 , 当日运 回西北农林科技大学采后实验室 。
选择成熟度一致 , 大小均匀 , 无病虫害的果实进行试验 。 一 处理 将果实放入 个塑
料果箱 , 堆放在容积为 耐 的双层塑料帐内 , 称取
一
粉末 。 有效成分
, 美国 置于 、 烧杯中 , 将烧杯放人塑料帐内 , 加人 蒸馏
水 , 立即将塑料帐扎紧 , 在 ℃下密封 , 帐内
一 浓度约为
· 一 ’。 对照 将果
实放人不含 一 的塑料帐中 , 在 ℃下密封 。 对照和处理均设 个重复 。 打开塑料帐 , 将果
实转人带有塑料薄膜内衬的果箱内 , 在 土 ℃下贮藏 。 中晚熟品种 ‘ 嘎拉 ’ 和 ‘ 新红星 ’ 苹果
每重复 个果实 , 贮藏 周 晚熟品种 ‘ 秦冠 ’
、 ‘ 富士 ’ 和 ‘ 粉红女士 ’ 苹果每重复 个果实 ,
贮藏 周 。
可溶性蛋白的 一 聚丙烯酞胺凝胶电泳
‘ 嘎拉 ’ 和
‘
新红星 ’ 苹果贮藏
、 、 、
和 , ‘ 秦冠 ’
、 ‘
富士 ’ 和 ‘ 粉红女士 ’ 苹果
贮藏
、 、 、 、 、 和 时 , 分别从对照和处理的 个重复果箱内各取 个果实 , 将果皮
下果肉组织切成厚约 的薄片 , 冷冻干燥 , 一 ℃ ,
, 冰浴下研磨成粉 , 在 一 ℃下保存待用
蛋白质提取 称取 于燥样品放人 离心管中 , 加人 样品提取缓冲液 仁
,
· 一 ’ 一 , 一 琉基乙醇 〕, 待样品溶解后在 ℃下提取 , 沸
水浴 , 冷却后在
· 。 一 ’下离心 , 取上清液置于干净离心管 , 加嗅酚蓝 林 ,
混匀后上样 。
一 参照陈毓荃 的方法 。 分离胶浓度 , 长度 浓缩胶浓度 , 长
度 样品上样量 林 , 点样孔为 火 。 为 一 低分子量标准
蛋白 上海生物化学研究所 。 电泳装置为 电泳仪 , 初始电流 巧 一 , 指示剂进人分离胶后
换 , 电泳时间约 。
考马斯亮蓝 一 染色 , 参照王台 的方法染色 一 , 脱色 一 。
用 一 凝胶成像系统对凝胶扫描成像 , 并应用配套分析软件 , 以标准
蛋白分子量为对照 , 计算特异蛋白的相对分子量 。
结果与分析
‘ 嘎拉 ’ 苹果蛋白质的变化
对照果实在贮藏期间有 个蛋白条带发生变化 图 。 从条带的宽窄及清晰度可见 , 蛋
白含量逐渐增加 蛋白含量略有增加 蛋白在贮藏 时出现 , 之后含量变化不明
显 蛋白在贮藏 后含量明显减少 蛋白随贮藏期延长含量不断增加 。
在处理果实中
, 、 和 蛋白含量低于对照 , 且随贮藏期延长略有增加
蛋白在贮藏 时才出现 , 之后含量增加 蛋白含量没有明显减少 。 由此表明 一 处理
抑制 、
、
和 蛋白的积累 , 延缓 蛋白的降解 。
‘ 新红星 ’ 苹果蛋 白质的变化
在对照果实中 , 蛋白含量随贮藏期延长略有增加 图 和 蛋白在贮藏
期 朱 长涵等 一 甲基环丙烯处理对 节果贮藏中可溶性蛋自的影响
时含量分别明显增加和略有增加
, 之后无明显变化 蛋自含量不断增加 蛋白在
贮藏 时出现 , 之后缓慢增加 。 此外 , 与 ‘ 嘎拉 ’ 苹果相比
, 蛋白条带明显 , 含量没有
在处理果实中 和 蛋白含量明显低于对照 , 而
、 和 蛋白含量略低
这表明 一 处理抑制了这些蛋白的积累 但没有影响 蛋白的表达 。
少对减于
图 ‘ 嘎拉 ’ 苹果贮藏期间果肉可溶性蛋白的
标准蛋白 采收时 对照
一 处理
黑箭头指示贮藏中出现的 条特异蛋白条带
,
分子量从大到小依次为
、 、 、 ,
和
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图 ‘ 新红星 ’ 苹果贮藏期间果肉可溶性蛋 白的 一
标准蛋白 采收时 对照
一
处理
黑箭头指示贮藏中出现的 条特异蛋自条带
,
分 量从大到小依次为
、 、 、 、
和
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园 艺
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学 报 卷
‘ 秦冠 ’ 苹果蛋白质的变化
对照果实 蛋白含量稳定 图
、
和 蛋白含量不断增加 , 贮藏
时达较高水平 , 之后变化不大 蛋白在人贮前含量较高 , 贮藏 ‘ 后明显下降 , 直至条带消
失 蛋白含量不断增加 蛋白在贮藏 时出现
,
之后略有增加 。
图 ‘ 秦冠 ’ 苹果贮藏期间果肉可溶性蛋白的
一
标准蛋自 采收时 对照 卜 处理
黑箭失指小贮藏中出现的 条特异蛋日条带 分 子量从大到小依次为
、 、 、 、 、
和
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处理果实中 , 蛋白含量低于对照
、 、
和 蛋白条带在贮藏 时
尚不清楚 , 之后缓慢增加 蛋白在贮藏 时略有下降 蛋白一直未出现清晰条
带 。 由此可 见 一 处理抑制
、 、 、 、 和 蛋白的积累 , 延缓
蛋白的降解
、〕
‘ 富士 ’ 苹果蛋白质的变化
在对照果实中 , 蛋白含量随贮藏期延长略有增加 图 和 蛋白条带变
化不明显 蛋白含量不断增加 蛋白含量虽有增加 , 但含量较低 蛋白在贮
藏期间条带明显
, 含量稳定 , 这一点与 ‘ 新红星 ’ 苹果相似 。
在处理果实中 ,
、
和 蛋白含量略低于对照 和 蛋白含量 明显低
于对照 , 蛋白含量 与对照相近 由此表明
一 处理抑制
、 、 、 和
蛋白的积累 , 但未影响 蛋白表达 。
‘ 粉红女士 ’ 苹果蛋 白质的变化
在对照果实中 , 蛋白含量少且较稳定表达 图 和 蛋白在贮藏 时
增加 , 之后变化不大 蛋白含量不断增加 蛋白条带明显 , 含量没有变化 , 与 ‘ 新
红星 ’ 、 ‘ 富上 ’ 苹果相似 未发现明显的 蛋白条带 , 与
‘ 嘎拉 ’ 苹果相似 。
在处理果实中 ,
、
和 蛋白含量略低于对照 蛋白含量明显低于对照
蛋白含遗与对照相近 。 由此表明 一 处理抑制了
、 、
和 蛋白的积
累 , 但未影响 蛋白表达
米玉涵等 一 甲基环内烯处理对苹果贮藏中可溶性蛋自的影响
图 ‘ 富士 ’ 苹果贮藏期间果肉可溶性蛋白的
一
标准蛋白 采收时 对照 一 处理
黑箭头指示贮藏中出现的 条特异蛋白条带
,
分子量从大到小依次为
、 、 、 、
和
· ‘ ’
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图 ‘ 粉红女士 ’ 苹果贮藏期间果肉可溶性蛋白的
标准蛋白 采收时 对照 卜 处理
黑箭头指示贮藏中出现的 条特异蛋白条带
,
分 厂量从大到小依次为
、 、 、
和
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园 艺 学 报 卷
讨论
在本试验的 个苹果品种中 , 个蛋白条带在果实贮藏期间发生了变化 , 分子量分别为
、
、 、 、 、 和 在这些可能与苹果后熟衰老相关的蛋白质中 ,
、
、
蛋白在所有品种中表达
,
含量逐渐增加 , 表明这些品种在后熟衰老过程中可能伴随有
相同或相似蛋白的产生或积累 。 蛋白只出现在 ‘ 嘎拉 ’ 和 ‘ 秦冠 ’ 苹果中 , 含量逐渐增加
蛋白未在 ‘ 嘎拉 ’ 中出现 蛋白只出现在 ‘ 新红星 ’
、 ‘ 秦冠 ’ 和 ‘ 富士 ’ 中 , 含
量略有增加 可见品种之间后熟衰老相关蛋白存在差异 。 蛋白条带在 ‘ 嘎拉 ’ 和 ‘ 秦冠 ’
中随果实衰老而逐渐消失 , 在其它品种中则相对稳定 , 表明有些品种在后熟衰老过程中可能还伴随有
相关蛋白质的降解 。 在 ‘ 金帅 ’ 一 , 和 ‘ 嘎拉 ’ 王瑞庆 等 , 成熟过程中
分别发现
、 、 和 、 、 特异蛋白的积累 , 分子量与本试验中发现的
、 、
蛋白接近 , 它们可能是相同或相近的蛋白质 。 本试验中发现的其它特异蛋白条
带尚未见报道
一 通过与乙烯受体结合 , 阻碍乙烯的生理作用 , 。 在本试验中 ,
· 一 ’ 一 处理抑制
、 、 、 、 、
蛋白的积累 , 延缓 ‘ 嘎拉 ’ 和
‘ 秦冠 ’ 苹果中 蛋白的降解 , 推测这些蛋白质的积累和降解与乙烯作用有关 , 需要进一步研
究 。
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生物化学研究技术 北京
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陈毓荃 中国农业出版社 一
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韩冬芳
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马 弓尚
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武春林
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对新红星苹果乙烯代谢和贮藏品质的影响 园艺学报
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, ‘ 乔纳金 ’ 苹果采后 一 处理对常温贮藏效果的影响 园艺学报
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一 处理的反应 西北植物学报
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工 台 一种适用于双向电泳凝胶的染色方法 植物学通报 一