全 文 ：园 　艺 　学 　报 　2001 , 28 (4) : 359～360
Acta Horticulturae Sinica
收稿日期 : 2001 - 03 - 15 ; 修回日期 : 2001 - 06 - 18
分蘖洋葱茎尖愈伤组织诱导及植株再生
陈 　典1 　徐启江2
(1 东北农业大学园艺系 , 哈尔滨 150030 ;　2 黑龙江农垦师范专科学校生物系 , 阿城 150301)
摘 　要 : 阿城紫皮分蘖洋葱鳞茎茎尖愈伤组织诱导培养基以 MS + 2 ,42D 2. 0 mg·L - 1 + KT
0. 5 mg·L - 1最佳 , 出愈率为 100 % ; 分化培养基以 MS + NAA 0. 1 mg·L - 1 + BA 0. 4 mg·L - 1最佳 ,
分化率为 88. 3 % , 平均成苗数为 10. 2 ; 生根壮苗最佳培养基为 1/ 2 MS + PP3330. 1 mg·L - 1 +
NAA 0. 01 mg·L - 1 + IBA 1. 5 mg·L - 1 , 生根率 100 % , 移栽成活率达 100 %。
关键词 : 洋葱 ; 愈伤组织 ; 再生植株 ; 移栽
中图分类号 : S 633. 2 　　文献标识码 : A 　　文章编号 : 05132353X (2001) 0420359202
1 　目的、材料与方法
分蘖洋葱 ( Allium cepa L. var. multiplcans Bailey syn. var. Agrogatum Don) 由于生产
上长期采用鳞茎繁殖 , 致使病毒积累、产量及品质下降。作者以‘阿城紫皮’分蘖洋葱茎
尖为试材 , 进行组培研究 , 为脱毒苗大量繁殖奠定基础。
剥除鳞茎外皮 , 洗净后切除顶部 2/ 3 , 于 70 ℃温箱中热处理 10 min , 用 10 %次氯酸钠
溶液浸泡 10 min , 无菌水冲洗 3～4 次 , 无菌滤纸吸干水分 , 在无菌条件下剥离 0. 2～
0. 5 mm茎尖 , 接种到脱分化培养基 , 35 d 时统计出愈率。选择生长较好、质地疏松的愈
伤组织切成 5 mm 的方块接入分化培养基 , 40 d 时统计分化率和平均成苗数。将 3. 5～
5 cm 高的分化苗分离 , 移入生根培养基 , 20 d 时统计生根率。选择健壮的试管苗进行驯
化移栽 , 15 d 时统计成活率 ; 40 d 后将成活苗移入冷床 , 扣网棚防蚜。均以 MS 为基本培
养基 , 添加不同的植物激素 , 蔗糖 3 % , 琼脂 0. 8 % , 调 pH 值至 5. 7～5. 8。脱分化培养
基 : (1) MS , (2) MS + 2 ,42D 2. 0 mg·L - 1 + KT 0. 5 mg·L - 1 , (3) MS + 2 ,42D 2. 0 mg·L - 1
+ KT 1. 0 mg·L - 1 , (4) MS + 2 ,42D 2. 0 mg·L - 1 + BA 0. 5 mg·L - 1 , (5) MS + 2 ,42D 2. 0 mg·
L - 1 + BA 1. 0 mg·L - 1 ; 分化培养基 : MS + NAA + BA , NAA、BA 浓度分别为 0. 1、0. 5、
1. 0 mg·L - 1和 0. 1、0. 4、1. 0 mg·L - 1 , 共 9 个处理 ; 生根培养基 : (1) MS + NAA 0. 01 mg
·L - 1 + IBA 1. 5 mg·L - 1 , (2) 1/ 2 MS + NAA 0. 01 mg·L - 1 + IBA 1. 5 mg·L - 1 , (3) 1/ 2 MS +
PP3330. 1 mg·L - 1 + NAA 0. 01 mg·L - 1 + IBA 1. 5 mg·L - 1。培养温度 (22 ±1) ℃, 光照强度
2 000 lx , 光照时间 13 h·d - 1。移栽前进行低温炼苗 5～7 d , 然后移植到营养钵中 , 在自
然光照 (昼 22～24 ℃, 夜 11～14 ℃, RH 90 %以上) 温室内驯化 , 4 月 5 日前后栽植于冷
床。生育过程中检查有无褪绿条斑、花叶、皱缩拧曲等病毒病症状 , 同时电镜检测有无病
毒粒体。
2 　结果与分析
2. 1 　愈伤组织的诱导 　生长素和细胞分裂素能启动细胞分裂 , 导致愈伤组织发生〔1〕。本
试验表明 , 2 ,42D 与 KT或 BA 组合均能诱导分蘖洋葱茎尖产生愈伤组织 , 但 KT的效果优
于 BA ; 并且 KT以低浓度为优 , BA 以高浓度为优 ; 当 KT、BA 浓度均为 0. 5、1. 0 mg·L - 1
时 , 添加 KT培养基的出愈率分别比添加 BA 培养基的高 57. 3 %、20. 2 % ; KT 浓度为
0. 5 mg·L - 1的出愈率比浓度为 1. 0 mg·L - 1的高 30 % ; BA 浓度为 1. 0 mg·L - 1的出愈率比浓
度为 0. 5 mg·L - 1的高 26. 1 %。2 ,42D 2. 0 mg·L - 1 + KT 0. 5 mg·L - 1是诱导愈伤组织的最佳
激素组合 , 35 d 出愈率达 100 % , 形成的愈伤组织呈白色或淡黄、浅绿色 , 质地疏松 , 生
长量最大 (见插页 1 图版 , A) 。
2. 2 　愈伤组织的分化 　在一定生长素浓度范围内 , 随着 BA 浓度的增大 , 愈伤组织的分
化率也随之增大 , 如 NAA 为 0. 1 mg·L - 1时 , BA 0. 4 比 0. 1 mg·L - 1的分化率高 46. 6 % ;
NAA 为 0. 5 mg·L - 1时 , BA 0. 4 比 0. 1 mg·L - 1的分化率高 20. 9 %。但 BA 浓度增大到一定
值时 , 愈伤组织的分化率则减少 , 如 NAA 为 0. 1 mg·L - 1时 , BA 1. 0 比 0. 4 mg·L - 1的分化
率低 51. 3 % ; NAA 为 0. 5 mg·L - 1时 , BA 1. 0 比 0. 4 mg·L - 1的分化率低 19. 1 %。在细胞分
裂素浓度较低时 , 随着 NAA 浓度的增大分化率也随之增大 , 但差异不明显 , 如 BA 为
0. 1 mg·L - 1时 , NAA 为 0. 1、0. 5、1. 0 mg·L - 1的分化率分别为 41. 7 %、49. 1 %、53. 3 % ;
但当 BA 浓度较高时 , 要获得最高的分化率则要求较低的 NAA 浓度 , 如 BA 为 0. 4 mg·L - 1
时 , 达到 88. 3 %分化率时的 NAA 浓度为 0. 1 mg·L - 1。所以较高浓度的 BA 和低浓度的
NAA 有利于愈伤组织的分化。
40 d时 MS + NAA 0. 1 mg·L - 1 + BA 0. 4 mg·L - 1 培养基愈伤组织分化率最高 , 达
88. 3 % , 并且每块愈伤组织上形成的芽最多 , 可达 14 个芽 , 平均成苗数高达 10. 2 , 其繁
殖系数是生产上鳞茎繁殖的 12 倍。
2.3 　生根和壮苗 　切取健壮芽转入到生根培养基 20 d 后的结果表明 , 1/ 2 MS + PP333
0. 1 mg·L - 1 + NAA 0. 01 mg·L - 1 + IBA 1. 5 mg·L - 1培养基为最佳 , 能诱导根系早生快发 ,
根粗而多 (见插页 1 图版 , D) , 叶色浓绿 , 植株整齐 , 地上与地下部能协调生长。
2. 4 　炼苗与移栽 　3 月上旬将根系发达、生长健壮的试管苗移出培养室 , 打开封口膜 ,
于 18 ℃室温下炼苗 5～7 d。然后洗净根系附着的琼脂 , 移植到营养钵中。基质为 1/ 3 草炭
土、1/ 3 大田土、1/ 3 厩肥并添加少量过筛炉灰渣。浇足水后置于温室中管理 , 其成活率
为 100 % (见插页 1 图版 , E) ; 4 月 5 日前后移栽到冷床中 , 植株能适应外界环境条件 ,
生长势强 (见插页 1 图版 , F) 。经观察无病毒病症状 , 经电镜检测脱毒率达 100 %。
参考文献 :
1 　中国科学院上海植物生理研究所. 植物组织和细胞培养. 上海 : 上海科学技术出版社 , 1978. 177～178
Callus Induction and Plantlets Regeneration of Tillered2onion from the Shoot2tip
Chen Dian1 and Xu Qijiang2
(1 Department of Horticulture , Northeast Agriculture University , Harbin 150030 ;　2 Department of Biology , Heilongjiang
Nongken Teachers College , Acheng 150301)
Abstract : This paper reports the studies on in vitro culture of shoot2tip of tillered2onion , including callus induction
and differentiation , plantlet root development and transplantation. Results showed : (1) MS basal medium supplemen2
ted with 2 ,42D 2. 0 mg·L - 1 and KT 0. 5 mg·L - 1 was advantageous to callus induction. The frequency of callus induc2
tion was 100 %. (2) The combination of NAA 0. 1 mg·L - 1 and BA 0. 4 mg·L - 1 was the best for callus differentiation
with the ratio of 88. 3 %. Most of callus was aggrandized again and induced green bud spots then formed multiplying
clumpy buds , the mean number of plantlets per callus was 10. 2 . (3) 100 % of the regenerated plantlets treated with
NAA 0. 01 mg·L - 1 and IBA 1. 5 mg·L - 1 and PP333 0. 1 mg·L - 1 could develop their roots , grew robustly and robust
green leaves , after the regenerated plantlets were transplanted to soil. The survival ratio of transplanting reached 100 %.
Key words : Tillered2onion ; Shoot2tip ; Callus ; Plant regeneration ; Transplant
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