全 文 ：园 艺 学 报 2003，30(6)：737～738
Ac／a Homculturae&reca
与辣椒抗蚜性基 因连锁 的 RAPD标记
陈 青 张银东2
( 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 ，儋州 571737； 中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验
室 ，海El 571101)
摘 要 ：运用 RAPD技术 ，在 F2代群体中采用混合分组分析法 (bulked segregant analysis，BSA)进行分
子标记研究 ，找到一个与辣椒抗蚜性基因连锁 的 RAPD标记 oPal8~o，并在杂种后代 F2群体和供试抗 、感
品种中得到了验证。
关键词 ：辣椒；抗虫性 ；蚜虫；RAPD
中图分类号：S 641 文献标识码-A 文章编号 ：0513—353X (2003)06-0737—02
1 目的、材料与方法
本试验就与辣椒抗蚜性基因连锁的 RAPD标记进行了研究 ，以期为辣椒抗蚜育种材料的鉴定与筛
选及定位 、克隆该基因奠定基础。供试辣椒品种选用对桃蚜 [Myzus persicae (Sulzer)]表现高抗的凉
椒一号、猪大肠、都椒一号和新丰五号 ，表现抗性的苗丰三号和中椒六号 ，表现高感的大羊角椒、砀
椒一号、湘研 9402和渝椒五号，表现感性的保椒二号和泰国正椒三号u J。FI代群体由猪大肠 (竿)
与大羊角椒 (舍)单株杂交结实获得。F2代群体由 F 代杂种单株 自交结实获得。随机引物为 Op~ro．
公司产品，dNTPs和 TaqDNA聚合酶购 自上海生工生物工程公司，其它试剂为国产分析纯试剂和 Sigma
公司产品。抗蚜性鉴定采用温室苗期人工接蚜鉴定方法与分级标准u J。依据平均每株蚜量分级 ：0级
为 0～1．0头 ，为高抗 ；1级 1．1～5．0头，为抗 ；2级 5．1～10．0头，为中抗 ；3级 10．1～15．0头 ，为
感 ；4级 >15．0头 ，为高感。PCR仪为 PE480型。总 DNA提取参照周群初等 ]方法。辣椒抗蚜性基
因的 RAPD标记筛选与验证采用 Michelm0re ]的 BSA方法，根据 F2代表现型分为抗与感两类，从两类
中各选取 10个症状明显的单株的 DNA等量混合 ，构成一对抗蚜和感蚜基因池。以这两池 DNA、两亲
本 、F 代以及 F2代抗 、感各一个单株 DNA为模板 ，应用同一随机引物同时进行 PCR扩增初步筛选引
物 ，扩增产生多态性的 RAPD引物经 2～3次重复后，．再对用以构建抗 、感 DNA混合池的 20个 F2代
单株和其它供试抗 、感品种进行 PCR扩增 ，以进一步确证。
2 结果与分析
2．1 杂种后代 F1、F2的抗蚜性鉴定结果
以猪大肠 (旱)与大羊角椒 (舍)进行杂交，
杂交后代 F 对桃蚜的反应表现为高抗 ，表明辣椒
抗蚜性属显性遗传。在 F2代植株 中，398株对桃
蚜的反应表现为抗 ，135株表现为感 ，经适合性
检验，X。 =0．016<瑶 1=3．84，抗与感植株分
离符合 3：1(表 1)。
表 1 辣椒抗蚜性的苗期鉴定结果
Table 1 Results ofidmtifmtien of~,zustm~ae (SlBIg~r)
re 嘶 in c,~s／cu= oaltivar 伐mng
品种
Cultlvars
调查株数抗性株 感性株 挚感比
No·plants Resistance Susceptibility o(R：s)
DeCl踟
猪大肠 Zhudachang 100 100
大羊角椒 Dayangiaoj iao 100
Ft 100 100
Fz 533 398
2．2 与辣椒抗蚜性基因连锁的 RAPD标记筛选与验证
以 F2代抗感两混合 DNA池为模板 ，从 Opero．公司的 A、D、E、F、G、O共 7组 140个随机引物
中筛选出有多态性差异的引物 7个。对这 7个引物进一步筛选 ，最终筛选出一个重复性好 、扩增条带
收稿 日期 ：2003一O1—20；修回日期：2O03—05—20
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清晰可辨、片段大小约为 600 bp的一条差异带 ，
在抗蚜 DNA池中存在而在感蚜 DNA池中不存在 ，
将其命名为 OPA186oo(图 1)。再用引物 OPAl8对
用以构建抗感 DNA混合池的 20个 F2代单株和包
括杂交亲本在 内的供试抗 、感 品种进行 PCR扩
增 ，结果表明，l0个 F抗蚜单株和 6个抗蚜品种
DNA池均能扩增出而 l0个 F2感蚜单株和 6个感
蚜品种 DNA池均未能扩增出 OPA186o差异带 (图
2、3)，重复 3次结果一致 ，由此可确定 0PAl86o0
是与辣椒抗蚜性基因连锁的 RAPD标记。
0PAl8—
500bp
M l 2 3 4 5 6 7
图 1 引物 OPAl8筛选 时的扩增结果
1．F：抗蚜混合 DNA池；2．抗蚜亲本锗大肠；3．F1；4．F2抗
蚜单株；5．F2感蚜混合 DNA池；6．感蚜亲本大羊角椒 ；
7 感蚜单株；M．分子量标准 (100 bp DNA ladder)。
rig． 1 PCR analysis ofOPAl8 during primer selection
1． F2 resistant DNA pool；2．Resistant parent Zhudachang；
3 Fl； 4．F2 resistantindividual； 5．F2 susceptible DNA
pool；6．Susceptible parent Dayangji舯jiao；7．
Susceptible individual； M， 100 bp DNA ladder．
0PAl8
500bp
图2 引物 OPAl8在 F2代抗、感单株中的扩增结果
1～10为抗蚜单株 ；11～20为感蚜单株。
Fig．2 PCR analysis ofFzindividuals
amplifiedwitll primerOPAl8
1—10：F2 resistant individual； 11—20：F2 susceptible individual
M l 2 3 4 5 6 7 8 9 l0 l1 l2
0 二
图3 引物 OPAl8在 12个供试抗、感品种中的扩增结果
1 6分别为抗蚜品种凉椒一号、猪大肠 、都椒一号 、
新丰五号、苗丰三号、中椒六号：7 12分别为感蚜品
种大羊角椒 、砀椒一号、湘研 9402、渝椒五号 、保椒
二号 、泰国正椒三号。
Fig．3 PCR analysis of12 re~ lant and susceptible
amplifiedwi111 primerOPAl8
1—6：Resistant cultivars：Liangjiao 1，Zhudachang，Doujiao 1
Xinfeng 5，Miaofeng 3。Zho,gjiao 1；7—12：Susceptibleculti—
vats；Dayangjiaojiao。Dangjiao 1，Xiangyan 94O2。Yujiao 5，
B舯jiao 2。Taiguozhengiao 3．
参考文献：
1 陈 青．几种生化物质与辣椒抗蚜性的相关性 ．园艺学报，2002，29(6)：533—536
2 周群初。马艳青 。张竹青 ，等 ．利用 RAPD技术进行辣椒杂种纯度鉴定的研究 ．湖南农业大学学报 ，1999，25(2)：95—98
3 Michelmore R W ．Identification of marker linked to disease resistance gene by bulked segregant analysis： A rapid method detect markers in specific
genomic regions by using segregating population．Proe．Nata1．Acod．Sci．USA．，1991，88：9828～9832
A RAPD M arker Linked to Aphid Resistant Gene in Capsicum annuum
Chen Qing and Zhang Yindong2
(。Plant Pro~ n Research Institate，CATAS，Dtmzhou 571737，Ch／na； National Key Biotechnology Laboratoryfor Tropical Crops
CATAS，Haikou 571101，Ch／na)
Al~stret：Random Amplified Polymorphic DNA (RAPD)was employed to detect a molecular marker linked to
aphid resistant gene in Capsicum cultivars． A RAPD marker 0PAl860o was proved to be link ed aphid resistan t gene
by bulked segregant analysis(BSA)with F2 population．OPA186oo Was also tested with F2 population，resistant
and susceptible Capsicum cultivars．
Key words：Capsicum arl~UlJ3Tt L．；Pest resistance；Myzus persicae(Sulzer)；RAPD
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