全 文 ：植物科学学报 ２０１５ꎬ ３３(６): ８６１~８６６
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
ＤＯＩ:１０ １１９１３ / ＰＳＪ ２０９５￣０８３７ ２０１５ ６０８６１
高效液相色谱法同时测定荷叶中 ６种黄酮类成分
梁佳文ꎬ 刘艾洁ꎬ 马冰馨ꎬ 王有为∗
(武汉大学药学院中药与天然药物研究所ꎬ 武汉 ４３００７１)
摘 要: 为了探索同时测定荷叶茶及饮片中 ６种黄酮类成分(芦丁、 金丝桃苷、 紫云英苷、 槲皮素、 山奈素和异
鼠李素)含量的方法ꎬ 本研究以 ８种不同的荷叶样本为材料ꎬ 采用高效液相色谱分析法对 ６种黄酮类成分进行了
同时测定ꎮ 样品经过前处理ꎬ 以 ０ ５％甲酸￣水(Ａ)和 ０ １％甲酸￣乙腈(Ｂ)作为流动相进行梯度洗脱ꎬ 流速为
１ ｍＬ / ｍｉｎꎬ 柱温为 ２５℃ꎬ 进样量为 ２０ μＬꎬ 经 Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ￣Ｃ１８(２) (１５０ ｍｍ × ４ ６ ｍｍꎬ ５ μｍ)色谱柱分离ꎬ 于
３６０ ｎｍ 波长处检测ꎬ 结果显示ꎬ 芦丁、 金丝桃苷、 紫云英苷、 槲皮素、 山奈酚、 异鼠李素 ６ 种黄酮类成分分别
在 １ ６ ~ １６０、 １ ８ ~ １８０、 ２ １６ ~ ２１６、 １ ４ ~ １４０、 ２ １２ ~ ２１２、 １ ６ ~ １６０ μｇ / ｍＬ浓度范围内有良好的线性
关系(Ｒ ２ > ０ ９９９２)ꎬ 其检测稳定性、 重复性、 日内精密度、 日间精密度以及加样回收率的 ＲＳＤ均小于 ２％ꎮ 进
一步用该方法对不同来源的 ８个荷叶样本进行检测ꎬ 结果显示荷叶样本中 ６ 种黄酮类成分含量以槲皮素最高ꎬ
并且以样本 Ｇ荷叶茶(购自 Ｇ公司ꎬ 批号为 １３０８０２)的槲皮素含量最高ꎮ 本研究建立的同时测定 ６ 种荷叶黄酮
类成分含量的方法快速、 准确ꎬ 可为荷叶有效成分的检测和质量控制提供技术支撑ꎮ
关键词: 高效液相色谱ꎻ 同时测定ꎻ 荷叶ꎻ 黄酮
中图分类号: Ｑ９４６ ８ 文献标识码: Ａ 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１５)０６￣０８６１￣０６
收稿日期: ２０１５￣０６￣０４ꎬ 退修日期: ２０１５￣０８￣１９ꎮ
基金项目: 国家“十二五”科技支撑计划项目(２０１２ＢＡＩ２９Ｂ０３)ꎻ 湖北省自然科学基金重点项目(２０１０ＣＢＢ０２３０１)ꎮ
作者简介: 梁佳文(１９８８－)ꎬ 女ꎬ 硕士研究生ꎬ 从事中药质量标准研究(Ｅ￣ｍａｉｌ: １２７２３６２８８＠ｑｑ ｃｏｍ)ꎮ
∗通讯作者(Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｗｙｗ＠ｗｈｕ ｅｄｕ ｃｎ)ꎮ
Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｓｉｘ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ ｉｎ
Ｌｏｔｕｓ Ｌｅａｖｅｓ ｂｙ Ｈｉｇｈ Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ Ｌｉｑｕｉｄ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ
ＬＩＡＮＧ Ｊｉａ￣Ｗｅｎꎬ ＬＩＵ Ａｉ￣Ｊｉｅꎬ ＭＡ Ｂｉｎｇ￣Ｘｉｎꎬ ＷＡＮＧ Ｙｏｕ￣Ｗｅｉ∗
( Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＴＣＭ ＆ Ｎａｔｕｒａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓꎬ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｗｕｈａｎ ４３００７１ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏ ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｌｙ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ( ｒｕｔｉｎꎬ ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅꎬ
ａｓｔｒａｇａｌｉｎꎬ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎꎬ ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ ａｎｄ ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ) ｉｎ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｒｅｌａｔｅｄ ｔｅａ ｐｒｏｄｕｃｔｓꎬ
ｅｉｇｈｔ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｆ ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｍｐａｎｉｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ＨＰＬＣ. Ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒｅｄ
ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｐａｒａｔｅｄ ｂｙ Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ￣Ｃ１８(２) (１５０ ｍｍ × ４６ ｍｍꎬ ５ μｍ) ａｔ ２５℃ ｗｉｔｈ ａ
ｓｔｅｐ ｌｉｎｅａｒ ｇｒａｄｉｅｎｔ ｕｓｉｎｇ ０ ５％ ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ￣ｗａｔｅｒ (Ａ) ａｎｄ ０ １％ ｆｏｒｍｉｃ ａｃｉｄ￣ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ (Ｂ)
ａｔ ａ ｆｌｏｗ ｒａｔｅ ｏｆ １ ０ ｍＬ / ｍｉｎ. Ｔｈｅ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ ｗａｓ ３６０ ｎｍ. Ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅｓ ｏｆ ｒｕｔｉｎꎬ ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅꎬ ａｓｔｒａｇａｌｉｎꎬ ｑｕｅｒｃｅｔｉｎꎬ ｋａｅｍｐｆｅｒｉｄｅ ａｎｄ
ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ ｗｅｒｅ １ ６ －１６０ꎬ １ ８ －１８０ꎬ ２１６ －２１６ꎬ １ ４ －１４０ꎬ ２ １２ －２１２ ａｎｄ １ ６ －１６０ μｇ /
ｍＬꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. Ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｓｅ ｒａｎｇｅｓꎬ ｔｈｅ ｌｉｎｅａｒｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｗｅｒｅ ｗｅｌｌ￣ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ
(Ｒ ２ > ０ ９９９２) ｉｎ ａ ｃｅｒｔａｉｎ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｒａｎｇｅ. Ｔｈｅ ＲＳＤ ｖａｌｕｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔａｂｉｌｉｔｙꎬ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙꎬ
ｉｎｔｒａ￣ｄａｙ ａｎｄ ｉｎｔｅｒ￣ｄａｙ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｓ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅｓ ｗｅｒｅ ａｌｌ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ２％. Ｅｉｇｈｔ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｆ
ｓａｍｐｌｅｓ ｆｒｏｍ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｃｏｍｐａｎｉｅｓ ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ａｂｏｖｅ ｍｅｔｈｏｄ. Ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ
ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ｗａｓ ｔｈｅ ｈｉｇｈｅｓｔ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓꎬ ａｎｄ ｗａｓ ｈｉｇｈｅｓｔ ｉｎ Ｂａｔｃｈ Ｎｏ. １３０８０２
ｆｒｏｍ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｇ. Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｕｓｅｄ ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ａｃｃｕｒａｔｅｌｙ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓｉｘ
ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ ａｎｄ ｔｅａ ｐｒｏｄｕｃｔｓꎬ ａｎｄ ｐｒｏｖｉｄｅｄ ａｎ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｗａｙ ｉｎ ｗｈｉｃｈ ｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ａｎｄ ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｆ ｐｒｏｄｕｃｔｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ＨＰＬＣꎻ Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎꎻ Ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅꎻ Ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
荷叶为莲科植物莲(Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ Ｇａｅｒｔｎ)
的干燥叶ꎬ 夏、 秋季采收ꎬ 晒至七、 八成干时ꎬ 除
去叶柄ꎬ 折成半圆形或折扇形ꎬ 干燥即得ꎮ 荷叶具
有清热解暑、 升发清阳、 凉血止血的功效ꎬ 常用于
暑热烦渴、 暑湿泄泻、 脾虚泄泻、 血热吐衄和便血
崩漏ꎮ 荷叶炭能收涩化瘀止血ꎬ 多用于出血症及产
后血晕[１]ꎮ «本草纲目»、 «随息居饮食谱»、 «中
国药茶配方大全»等古今典籍认为ꎬ 荷叶具有清心
火、 平肝火、 泻脾火、 降肺火ꎬ 以及清热养神、 降
压利尿、 敛液止汗、 止血固精等作用ꎮ
据报道ꎬ 荷叶具有抗氧化[２]、 减轻高血脂
症[３]、 抑菌[４]等作用ꎮ 近年来已研发出许多以荷
叶为原料的饮品ꎬ 如: 荷叶普洱熟茶、 晒青荷叶与
晒青干姜混合的泡腾饮品ꎬ 以及鲜竹荷叶茶、 荷叶
金花菌茶、 荷叶苦瓜茶、 荷叶固体饮料[５－９]等ꎮ
荷叶的化学成分比较复杂ꎬ 除了生物碱成分之
外ꎬ 还具有丰富的黄酮类化合物ꎮ 近年来有关荷叶
生物碱的研究多集中在对化合物的测定和分析方
面[１０]ꎮ 对荷叶中黄酮类成分含量及测定的研究主
要集中在总黄酮含量上ꎬ 而对荷叶中主要黄酮类成
分含量同时测定的研究较少ꎬ 其原因主要是荷叶中
黄酮类化合物不稳定(植物中的黄酮类化合物一般
以苷类状态存在ꎬ 而非以苷元形式存在)ꎬ 而有些
苷元类化合物ꎬ 如槲皮素及其衍生物在荷叶总黄酮
中的含量相对较高[１１]ꎮ 值得注意的是ꎬ 在一定的
条件下黄酮苷和苷元会发生相互转换ꎬ 最典型的就
是异槲皮苷酸水解后会产生槲皮素[１２]ꎮ
很多药材(如淫羊藿[１３] )及水果(如脐橙[１４] )
中都含有黄酮类成分ꎬ 通过测定各黄酮类成分含量
可以较好地分析与评价这些原料和产品的质量ꎮ 目
前采用高效液相色谱法(ＨＰＬＣ)来测定荷叶饮片中
黄酮类成分含量的方法很多ꎬ 如测定荷叶饮片中金
丝桃苷[１５ꎬ１６]、 异槲皮苷[１６ꎬ１７]某一成分含量的方
法ꎻ 同时测定荷叶饮片中槲皮素￣３￣Ｏ￣桑布双糖苷、
金丝桃苷、 异槲皮苷和槲皮素含量的方法[１８]等ꎮ
本研究采用反相高效液相色谱法同时测定荷叶饮片
中芦丁、 金丝桃苷、 紫云英苷、 槲皮素、 山奈酚和
异鼠李素 ６种黄酮类成分的含量ꎬ 以期探索出一种
基于多种荷叶黄酮类成分含量测定来更全面地分析
与评价荷叶质量的新方法ꎮ
１ 材料与方法
１ １ 材料、 仪器及试剂
材料: 供试的不同荷叶样本(荷叶茶 /茶叶饮
片 /荷叶药材)分别购自不同的公司ꎮ 将它们编号为:
Ａ荷叶饮片(购自 Ａ公司ꎬ 生产日期为 ２０１４－ ０４)ꎻ
Ｂ荷叶茶(购自Ｂ公司ꎬ 批号为 ２０１３０８０６)ꎻ Ｃ荷叶
茶(购自Ｃ公司ꎬ 生产日期为 ２０１３－１０－０１)ꎻ Ｄ荷
叶茶(购自 Ｄ 公司ꎬ 生产日期为 ２０１３ － ０８ － ２６)ꎻ
Ｅ 荷叶茶(购自 Ｅ 公司ꎬ 批号为 ２０１３０７０１)ꎻ Ｆ 荷
叶茶(购自 Ｆ 公司ꎬ 生产日期为 ２０１４ － ０２ － １２)ꎻ
Ｇ荷叶茶(购自 Ｇ公司ꎬ 批号为 １３０８０２)ꎻ Ｈ荷叶
对照药材(购自中国食品药品检定研究院ꎬ 批号为
１２１３２２－ ２００９０３)ꎮ
仪器: 高效液相色谱仪(ＨＰＬＣꎬ Ｓｈｉｍａｄｚｕ ＬＣ￣
２０ＡＴ)ꎻ 紫外检测器ꎻ Ｃ１８色谱柱(Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ￣Ｃ１８
(２)ꎻ １５０ ｍｍ × ４ ６ ｍｍꎬ ５ μｍ)ꎻ ＳＥ４０２Ｆ电子天
平(奥豪斯仪器有限公司)ꎻ ＲＥ￣５２ＡＡ 型旋转蒸发
仪(郑州长城科工贸有限公司)ꎻ 超纯水器(北京普
析通用仪器有限责任公司)ꎻ 高速万能粉粹机(天
津市泰斯特仪器有限公司)ꎮ
对照品: 芦丁(批号 １０００８０￣２０１４０８ꎬ 纯度为
９０ ２％)、 金丝桃苷 (批号 １１１５２１￣２０１２０５ꎬ 纯度
为 ９３ ３％)、 紫云英苷(批号 １１５２１￣２０１２０５ꎬ 纯度
为 ９８％)、 槲皮素(批号 １０００８１￣２０１４０８ꎬ 纯度为
９９ １％)、 山奈素 (批号 １１０８６１￣２０１３１０ꎬ 纯度为
９３ ２％)、 异鼠李素 (批号 １１０８６０￣２０１１０９ꎬ 纯度
为 ９９％)均购自中国食品药品检定研究院ꎮ
试剂: 乙腈、 甲醇(色谱纯)均购自美国 Ｆｉｓｈｅｒ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司ꎻ 甲酸(８８％)购自国药集团化学试
剂有限公司ꎻ 实验用水用超纯水器制备ꎮ
１ ２ 供试品溶液制备
供试品的制备参考 Ｃｈｅｎ 等[１９ꎬ２０] 和 Ｙａｎｇ
等[２１]的方法并加以改进ꎮ 取上述供试荷叶样本ꎬ
粉碎、 过 ６０目筛ꎬ 精密称取 １０ ｇ荷叶样本粉末加
入 ３０倍量(ｇ / ｖ)的 ７０％甲醇水(甲醇 ∶ 水 ＝ ７０ ∶
２６８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷
３０ꎬ Ｖ / Ｖ )混匀后ꎬ 超声提取 ３０ ｍｉｎꎬ 取上清液ꎬ
连续提取 ３ 次ꎮ 合并滤液ꎬ １５０００ × ｇ、 ４℃离心
１５ ｍｉｎꎬ 取上清液过 ０ ２２ μｍ 微孔滤膜ꎬ 将滤液
旋干ꎬ 再用 ４ ｍＬ 的 ２ ５ ｍｏｌ / Ｌ 盐酸甲醇水(盐酸
甲醇 ∶ 水 ＝ ５０ ∶ ５０ꎬ Ｖ / Ｖ )溶液溶解ꎬ ９０℃酸水
解 ４ ｈꎬ 定容至 １０ ｍＬꎬ 过 ０ ２２ μｍ 微孔滤膜ꎬ 即
得供试品溶液ꎬ 于 ４℃保存、 备用ꎮ
１ ３ 对照品溶液制备
精密称取 ６ 种黄酮类化合物对照品: 芦丁
４ ０ ｍｇ、 金丝桃苷 ４ ５ ｍｇ、 紫云英苷 ５ ４ ｍｇ、
槲皮素 ３ ５ ｍｇ、 山奈素 ５ ３ ｍｇ、 异鼠李素
４ ０ ｍｇꎬ 用甲醇超声溶解定容到 ２５ ｍＬ 容量瓶
中ꎬ 充分混匀ꎬ 即得对照品混合储备液(１)ꎬ 精密
吸取上述对照品混和溶液 ０ １、 ０ ５、 １、 ２、 ４、 ６、
８ ｍＬ分别至 １０ ｍＬ容量瓶中ꎬ 加甲醇至刻度ꎬ 摇
匀ꎬ 即得对照品混合溶液(２) ~ (８)ꎮ
１ ４ 测试方法
１ ４ １ 色谱条件
岛津 ＨＰＬＣ 液相色谱仪ꎬ 紫外检测器ꎬ 检测
波长为 ３６０ ｎｍꎻ 色谱柱为 Ａｇｉｌｅｎｔ ＴＣ￣Ｃ１８ (２)
(１５０ ｍｍ × ４６ ｍｍꎬ ５ μｍ)ꎻ 流动相 Ａ: ０ ５ ％甲
酸￣水ꎬ 流动相 Ｂ: ０ １ ％甲酸￣乙腈[１９－２２]ꎻ 梯度洗
脱程序为: ０ ~ ８ ｍｉｎꎬ ２０％ ~ ４０％ Ｂꎻ ８ ~
１３ ｍｉｎꎬ ４０ ％ Ｂꎻ １３ ~ １５ ｍｉｎꎬ ４０％ ~ ２８ ％ Ｂꎻ
１５ ~ １８ ｍｉｎꎬ ２８％ Ｂꎻ 柱温为 ２５℃ꎻ 进样体积
２０ μＬꎮ
１ ４ ２ 标准曲线的建立
分别精密吸取 １ ３小节制备的 ７个不同浓度的
对照品混合溶液 ２０ μＬꎬ 按 １ ４ １ 小节中的色谱条
件测定ꎬ 每个质量浓度平行进样 ３ 次ꎬ 峰面积
(Ｙ )取其平均值ꎮ 以对照品浓度(Ｘ )为横坐标ꎬ
峰面积(Ｙ )为纵坐标ꎬ 绘制标准曲线ꎮ
１ ４ ３ 方法学考察
精密度考察 取同一对照品混合溶液ꎬ 按
１ ４ １小节中的色谱条件连续进样 ６ 次ꎬ 分别记录
６种黄酮成分的峰面积ꎬ 并计算相对标准偏差
(ＲＳＤ)ꎮ 精密吸取同一对照品混合溶液ꎬ 每天进
样 １次ꎬ 连续 ３ ｄꎬ 分别记录 ６种黄酮成分的峰面
积并计算 ＲＳＤꎬ 用以考察仪器的精密度ꎮ
稳定性考察 取同一对照品混合溶液ꎬ 分别在
０、 ２、 ４、 ８、 １２、 １６、 ２４、 ３６ ｈ 进样ꎬ 记录 ６ 种
黄酮成分的峰面积并计算 ＲＳＤꎮ
重复性考察 取同一批荷叶样本ꎬ 按照 １ ２小
节的方法平行制备 ６ 份供试品溶液ꎬ 按 １ ４ １ 小
节中的色谱条件测定ꎬ 分别记录峰面积并计算
ＲＳＤꎮ
加样回收率考察 采用对照品进行加样回收率
测定ꎬ 即向已知被测成分含量的供试品中精密加入
一定量的对照品ꎮ 具体方法是取 １ ２小节制备的同
一批供试品溶液ꎬ 精密加入等体积 ３ 个不同浓度
(高 １２０％、 中 １００％、 低 ８０％)的对照品溶液ꎬ 混
合均匀后按 １ ４ １小节中的色谱条件进行测定ꎬ 计
算加样回收率及 ＲＳＤꎮ
１ ４ ４ 不同荷叶样本中 ６ 种黄酮类化合物含量
测定
分别称取不同荷叶样本粉末及荷叶对照药材粉
末各 ０ ５ ｇꎬ 按 １ ２ 小节的方法制备供试品溶液ꎬ
再按 １ ４ １小节中的色谱条件检测ꎬ 连续进样 ３次
并记录各个峰的峰面积ꎬ 根据标准曲线计算不同荷
叶样本中 ６种黄酮类成分的含量ꎮ
２ 结果
２ １ ６种黄酮化合物共检测图谱
取用荷叶对照药材制备的供试品溶液以及
１ ３小节制备的对照品溶液ꎬ 分别按照 １ ４ １ 小节
中的色谱条件进样并采集图谱(图 １)ꎮ
450
400
250
300
250
200
150
100
50
0
-50
0.0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5
1
2
3 4
5
6
a
b
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& Time min( )
１. 芦丁ꎻ ２. 金丝桃苷ꎻ ３. 紫云英苷ꎻ ４. 槲皮素ꎻ ５. 山奈素ꎻ
６. 异鼠李素ꎮ
１. Ｒｕｔｉｎꎻ ２. Ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅꎻ ３. Ａｓｔｒａｇａｌｉｎꎻ ４. Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎꎻ ５.
Ｋａｅｍｐｆｅｒｉｄｅꎻ ６. Ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ.
图 １ ６种黄酮化合物混合对照品(ａ)与荷叶
对照药材供试品(ｂ)的 ＨＰＬＣ￣ＵＶ图谱
Ｆｉｇ １ ＨＰＬＣ￣ＵＶ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍｓ ｏｆ ｔｈｅ ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｍｉｘｔｕｒｅ (ａ) ａｎｄ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｆ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ
ｍｅｄｉｃｉｎａｌ ｍａｔｅｒｉａｌ (ｂ)
３６８ 第 ６期 梁佳文等: 高效液相色谱法同时测定荷叶中 ６种黄酮类成分
２ ２ 标准曲线
以对照品的质量浓度(Ｘ)为横坐标ꎬ 峰面积
(Ｙ )为纵坐标ꎬ 绘制标准曲线ꎮ 结果显示在一定
的浓度范围内ꎬ 芦丁、 金丝桃苷、 紫云英苷、 槲皮
素、 山奈酚、 异鼠李素的质量浓度与峰面积之间线
性关系良好(表 １)ꎮ
２ ３ 方法学考察
２ ３ １ 精密度、 重复性、 稳定性和加样回收率
考察
日间精密度、 日内精密度、 重复性、 稳定性、
加样回收率的 ＲＳＤ 均在 ２％以内ꎬ 表明仪器的精
密度、 方法的重复性以及对照品溶液在 ３６ ｈ 内的
稳定性都很好ꎬ 结果见表 ２ꎮ
２ ４ 不同荷叶样品中 ６种黄酮类成分含量测定
在本实验条件下ꎬ 测得不同荷叶样品中 ６种黄
酮类成分含量为: 芦丁 ０ ００２４ ~０ ３０８ ｍｇ / ｇ、 金
丝桃苷 ０００４８ ~００４５６ ｍｇ / ｇ、 紫云英苷 ００２０３ ~
００８９１ ｍｇ / ｇ、 山奈素 ０１００９ ~ ０１８８７ ｍｇ / ｇ、 槲
皮素 ０９９５７ ~ ２３３９８ ｍｇ / ｇ、 异鼠李素 ０００８８ ~
００２４２ ｍｇ / ｇꎮ 其中ꎬ 槲皮素的含量最高ꎬ 异鼠李
素的含量相对较低ꎻ 样品 Ｄ 荷叶茶(购自 Ｄ 公司ꎬ
生产日期为 ２０１３ －０８ －２６)和样品Ｇ荷叶茶(购自
Ｇ公司ꎬ 批号为 １３０８０２)中的异鼠李素含量未出
现在线性范围内(图 ２)ꎮ
３ 讨论
由于黄酮类化合物存在桂皮酰基及苯甲基组成
的共轭体系ꎬ 其在甲醇溶液里有两个主要吸收带ꎬ
荷叶黄酮类化合物在 ３６０ ｎｍ 和 ２５４ ｎｍ 左右均有
吸收峰ꎮ 而萜类等其它化合物在 ２５４ ｎｍ 左右也有
吸收峰ꎬ 容易造成干扰ꎬ 因此本实验选择 ３６０ ｎｍ
作为检测波长ꎮ
黄酮类化合物作为植物中极为广泛的一类物
质ꎬ 具有较强的生理活性[２３ꎬ２４]ꎬ 具有抑菌、 抗炎
及保护心血管等作用ꎮ 莲作为中国传统栽培植物ꎬ
人工种植历史悠久ꎬ 栽培品种繁多ꎬ 据王其超等[２５]
表 １ ６种荷叶黄酮类化合物的定量参数
Ｔａｂｌｅ １ Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ
化合物
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ
回归方程
Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ ｅｑｕａｔｉｏｎ
线性范围
Ｌｉｎｅａｒ ｒａｎｇｅ
(μｇ / ｍＬ)
判定系数(Ｒ ２)
Ｃｏｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｏｆ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
芦丁 Ｒｕｔｉｎ Ｙ ＝ ４０１９５Ｘ ＋ ３５４３０ １.６ ~ １６０ ０.９９９４
金丝桃苷 Ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ Ｙ ＝ ４４０３１Ｘ ＋ ２５８１１ １.８ ~ １８０ ０.９９９３
紫云英苷 Ａｓｔｒａｇａｌｉｎ Ｙ ＝ ３８３６０Ｘ ＋ ４０３４５ ２.１６ ~ ２１６ ０.９９９７
槲皮素 Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ Ｙ ＝ ７２２３２Ｘ － ４７２３６ １.４ ~ １４０ ０.９９９４
山奈素 Ｋａｅｍｐｆｅｒｉｄｅ Ｙ ＝ ５９９０８Ｘ － ５３１４８ ２.１２ ~ ２１２ ０.９９９４
异鼠李素 Ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ Ｙ ＝ ７０１６５Ｘ ＋ ５３６０２ １.６ ~ １６０ ０.９９９２
表 ２ 日间精密度、 日内精密度、 重复性、 稳定性和加样回收率
Ｔａｂｌｅ ２ Ｉｎｔｅｒ￣ｄａｙ ａｎｄ ｉｎｔｒａ￣ｄａｙ ｐｒｅｃｉｓｉｏｎｓꎬ ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙꎬ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅｓ
化合物
Ｃｏｍｐｏｕｎｄ
日间精密度
Ｉｎｔｅｒ￣ｄａｙ
ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ
(ｎ ＝ ３)
ＲＳＤ (％)
日内精密度
Ｉｎｔｒａ￣ｄａｙ
ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ
(ｎ ＝ ６)
ＲＳＤ (％)
重复性
Ｒｅｐｅａｔａｂｉｌｉｔｙ
(ｎ ＝ ６)
ＲＳＤ (％)
稳定性
Ｓｔａｂｉｌｉｔｙ
(ｎ ＝ ６)
ＲＳＤ (％)
加样回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｒａｔｅ (ｎ ＝ ３)
平均回收率
Ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅ (％)
相对标准偏差
ＲＳＤ (％)
芦丁 Ｒｕｔｉｎ １.２０ ０.４９ １.２８ １.１２ ９８.３９ １.２４
金丝桃苷 Ｈｙｐｅｒｏｓｉｄｅ １.４６ ０.３４ １.１８ １.０５ １０１.９９ １.５２
紫云英苷 Ａｓｔｒａｇａｌｉｎ １.５０ ０.４４ １.１０ ０.８０ １００.８６ １.１３
槲皮素 Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ ０.８２ ０.２９ １.７９ ０.４４ ９９.０４ ０.８９
山奈素 Ｋａｅｍｐｆｅｒｉｄｅ ０.５４ ０.２４ ０.９３ ０.７５ ９８.０３ ０.２７
异鼠李素 Ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ ０.９６ ０.３９ １.００ ０.３０ １０１.１１ ０.１５
４６８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷
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图 ２ 不同荷叶样本中 ６种黄酮类化合物的含量(ｎ ＝ ３ꎬ ｍｇ / ｇ)
Ｆｉｇ ２ Ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓｉｘ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｓａｍｐｌｅｓ ｏｆ ｌｏｔｕｓ ｌｅａｖｅｓ
统计ꎬ ２００４ 年已有莲品种 ６００ 多个ꎮ 由于产地、
品种不同以及提取方法的差异ꎬ 导致荷叶中黄酮含
量各有不同ꎬ 高丽等[２６]的实验结果表明荷叶中的
槲皮素含量相对较低ꎻ 而 Ｃｈｅｎ 等[１１]的研究结果
表明荷叶中槲皮素含量相对较高ꎬ 山奈素、 异鼠李
素含量相对较低ꎻ 李慧芬等[１８]采用 ＨＰＬＣ 方法同
时测定了 ５个不同产地荷叶饮片中 ４种黄酮类化合
物的含量ꎬ 其中江西、 湖南、 山东产的饮片中金丝
桃苷的含量比河南和湖北产的相对较高ꎬ 而前 ３个
产地饮片的槲皮素含量却相对较低ꎮ 本实验选择了
不同公司生产的 ７个荷叶样本进行了检测ꎬ 结果表
明 ７个荷叶样本中黄酮类化学成分的种类具有一定
的相似性ꎬ 检测的 ６种黄酮类化合物在荷叶对照药
材和 ７个荷叶样本中均有检出ꎬ 其中以槲皮素含量
最高ꎬ 其次是山奈素ꎮ ８个样本中(Ａ ~ Ｈ)ꎬ 除了
样本 Ｇ荷叶茶(购自 Ｇ 公司ꎬ 批号为 １３０８０２)中
槲皮素含量比对照药材含量高外ꎬ 其余几种荷叶样
本中的槲皮素含量均比其含量低ꎮ 本实验测得的槲
皮素含量均比李慧芬等[１８]和高丽等[２６]测得的槲皮
素含量高ꎬ 这与黄酮类物质在植物中主要以苷类状
态存在形式有关ꎬ 且测试样本经过酸解后ꎬ 有些苷
类可能被酸解成苷元 (如异槲皮苷酸解后形成槲皮
素)ꎮ 当然ꎬ 酸解的时间、 温度以及酸解液的浓
度[１２]也可能会影响苷转变成苷元的效率ꎮ 不同测
试样本之间相同黄酮化合物含量的差异可能与其产
地、 品种以及加工方式有关[１５ꎬ２７]ꎮ
本实验建立的采用反相高效液相色谱技术同时
测定荷叶中 ６ 种黄酮类成分含量的方法ꎬ 能够快
速、 准确地检测荷叶中 ６种黄酮类成分含量ꎬ 可为
荷叶及其制品的质量控制提供技术支撑ꎮ
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ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ
ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ) ｕｓｉｎｇ ｈｉｇｈ
ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ
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ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ / ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ
ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｏｒ ｔａｎｄｅｍ ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｍａｓｓ
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Ｘｕ ＹＪꎬ Ｌｉ ＣＨꎬ Ｚｈａｎｇ ＪＪꎬ Ｚｈａｎｇ Ｊ. Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ
ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ ａｎｄ ｆｌａｖｏｎｏｌｓ ｉｎ ｐｅｔａｌｓ ｏｆ
ｌｏｔｕｓ ( Ｎｅｌｕｍｂｏ ) ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｂｙ ｈｉｇｈ￣ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ
ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ￣ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃ￣
ｔｉｏｎ / ｅｌｅｃｔｒｏｓｐｒａｙ ｉｏｎｉｚａｔｉｏｎ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ
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Ｙａｎｇ ＰＦ. Ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ ｑｕａｌｉｔａｔｉｖｅ ａｎｄ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ
ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ ｏｆ ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓꎬ ｆｌａｖｏｎｅｓ ａｎｄ ｆｌａｖｏ￣
ｎｏｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｔａｌｓ ｏｆ １０８ ｌｏｔｕｓ (Ｎｅｌｕｍｂｏ ｎｕｃｉｆｅｒａ)
ｃｕｌｔｉｖａｒｓ[Ｊ] . Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍꎬ ２０１３ꎬ １３９(１－４): ３０７－
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ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
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(责任编辑: 张 平)
６６８ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷