全 文 ：植物科学学报　 ２０１５ꎬ ３３(４): ５３６~５４４
Ｐｌａｎｔ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｊｏｕｒｎａｌ
　 　 ＤＯＩ:１０􀆰 １１９１３ / ＰＳＪ􀆰 ２０９５－０８３７􀆰 ２０１５􀆰 ４０５３６
桐花树叶醇提取物乙酸乙酯部位对大鼠
皮肤抗氧化与抗衰老能力的影响
黄晓冬ꎬ 蔡建秀ꎬ 戴聪杰ꎬ 张阿婷ꎬ 董文云
(泉州师范学院近海资源生物技术福建省高校重点实验室ꎬ 福建泉州 ３６２０００)
摘　 要: 萃取法获得桐花树叶 ７５％乙醇提取物的石油醚、 二氯甲烷、 乙酸乙酯、 正丁醇和水部位(醇沉)ꎬ 从中
筛选出多酚与总黄酮含量均较高、 ＤＰＰＨ 自由基清除能力较强的乙酸乙酯部位作为辅料试配成膏状体ꎬ 并通过
对 ＳＤ大鼠背部皮肤进行连续外涂实验ꎬ 测定其皮肤组织匀浆的总超氧化物歧化酶(Ｔ￣ＳＯＤ)活性、 羟基自由基
清除能力、 丙二醛(ＭＤＡ)含量、 羟脯氨酸(ＨＹＰ)和胶原蛋白含量ꎮ 结果表明: ２􀆰０％桐花树叶乙酸乙酯部位膏状
体处理组的皮肤组织 Ｔ￣ＳＯＤ活性、 羟基自由基清除能力、 ＨＹＰ和胶原蛋白含量均极显著高于ꎬ 但 ＭＤＡ 含量极
显著低于阴性对照组(仅含化妆品基质的膏状体)、 阳性对照组(２􀆰０％熊果苷膏状体)与 １􀆰０％、 ０􀆰５％乙酸乙酯部
位膏状体处理组(Ｐ < ０􀆰０１)ꎮ 说明桐花树叶乙酸乙酯部位是一种潜在的抗氧化或抗衰老化妆品辅料ꎬ ２􀆰０％乙酸
乙酯部位含量是试配该化妆品的有效添加剂量ꎮ 增强 Ｔ￣ＳＯＤ 活性、 提高自由基清除能力、 降低 ＭＤＡ 含量、 促
进胶原蛋白合成可能是桐花树叶乙酸乙酯部位预防或延缓皮肤衰老的作用机制ꎮ
关键词: 桐花树叶ꎻ 乙酸乙酯部位ꎻ 膏状体ꎻ 抗氧化ꎻ 抗衰老
中图分类号: Ｑ９４６􀆰８ꎻ Ｒ２８５　 　 　 　 　 文献标识码: Ａ　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５￣０８３７(２０１５)０４￣０５３６￣０９
　 　 　 收稿日期: ２０１４￣１１￣０２ꎬ 退修日期: ２０１４￣１２￣０８ꎮ
　 基金项目: 福建省自然科学基金海洋经济发展专项重点项目(２０１４Ｎ００１７)ꎻ 福建省教育厅科技项目(ＪＡ１２２７８)ꎻ 泉州市第二批科技
项目(２０１３Ｚ１２６)ꎻ 国家级大学生创新创业训练计划项目(１０３９９)ꎮ
　 作者简介: 黄晓冬(１９７３－)ꎬ 男ꎬ 副教授ꎬ 研究方向为天然产物化学与资源植物学(Ｅ￣ｍａｉｌ: ｈｘｄ６０２＠１６３􀆰 ｃｏｍ)ꎮ
Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｈｅ Ｅｔｈｙｌ Ａｃｅｔａｔｅ Ｆｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ｅｔｈａｎｏｌ Ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ
Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ Ｌｅａｖｅｓ ｏｎ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ
Ａｎｔｉ￣ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ Ａｂｉｌｉｔｙ ｉｎ Ｒａｔ Ｓｋｉｎ
ＨＵＡＮＧ Ｘｉａｏ￣Ｄｏｎｇꎬ ＣＡＩ Ｊｉａｎ￣Ｘｉｕꎬ ＤＡＩ Ｃｏｎｇ￣Ｊｉｅꎬ ＺＨＡＮＧ Ａ￣Ｔｉｎｇꎬ ＤＯＮＧ Ｗｅｎ￣Ｙｕｎ
( Ｉｎｓｈｏｒｅ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｆｕｊｉａｎ Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｅｄｕｃａｔｉｏｎꎬ
Ｑｕａｎｚｈｏｕ Ｎｏｒｍａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬ Ｑｕａｎｚｈｏｕꎬ Ｆｕｊｉａｎ ３６２０００ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｃｒｅａｍ ｕｓｉｎｇ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ (Ｌｉｎｎ.) Ｂｌａｎｃｏ ｌｅａｆ ｅｘｔｒａｃｔ ａｓ ｔｈｅ
ａｃｔｉｖｅ ａｄｄｉｔｉｖｅ ａｎｄ ｅｖａｌｕａｔｅ ｉｔｓ ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ ａｎｔｉ￣ａｇｉｎｇ ａｃｔｉｏｎ ｉｎ ｓｋｉｎꎬ ｆｉｖｅ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ
ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒꎬ ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅꎬ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅꎬ ｎ￣ｂｕｔａｎｏｌ ａｎｄ ｗａｔｅｒ (ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ
ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ) ｗｅｒｅ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ７５％ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ａ􀆰 ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｌｅａｖｅｓ. Ａｍｏｎｇ
ｔｈｅｍꎬ ｔｈｅ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ａｎｄ ｓｔｒｏｎｇ
ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ｓｃｒｅｅｎｅｄ ａｓ ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｔｏ ｐｒｅｐａｒｅ ｔｈｅ ｃｒｅａｍ. Ａｆｔｅｒ ｃｏｎｔｉｎｕｏｕｓ
ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｃｒｅａｍ ｔｏ ｔｈｅ ｄｏｒｓａｌ ｓｋｉｎ ｏｆ ＳＤ ｒａｔｓꎬ ｓｋｉｎ ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ｔｏ
ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｏｔａｌ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ (Ｔ￣ＳＯＤ) ａｃｔｉｖｉｔｙꎬ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙꎬ
ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ (ＭＤＡ) ｃｏｎｔｅｎｔꎬ ａｎｄ ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ (ＨＹＰ) ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ. Ｒｅｓｕｌｔｓ
ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ Ｔ￣ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙꎬ ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＨＹＰ ａｎｄ
ｃｏｌｌａｇｅｎ ｉｎ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｆｒｏｍ ＳＤ ｒａｔｓ ｔｒｅａｔｅｄ ｂｙ ｃｒｅａｍ ｗｉｔｈ ２􀆰０％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙꎬ ｂｕｔ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ＭＤＡ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｔｈｅ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｏｒ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ｔｈｅ １􀆰０％ ａｎｄ ０􀆰５％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ
ｆｒａｃｔｉｏｎ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ (Ｐ < ０􀆰０１) . Ｔｈｉｓ ｓｕｇｇｅｓｔｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ａ.
ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｌｅａｖｅｓ ｗａｓ ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ ａｎｄ ａｎｔｉ￣ａｇｉｎｇ ｃｏｓｍｅｔｉｃ ａｄｄｉｔｉｖｅ ｗｉｔｈ ａｎ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ ｏｆ ２％ꎬ ａｎｄ ｉｔｓ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｐｒｅｖｅｎｔｉｎｇ ｏｒ ｐｏｓｔｐｏｎｉｎｇ ｓｋｉｎ ａｇｉｎｇ ｍｉｇｈｔ ｂｅ
ｔｈｒｏｕｇｈ ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ Ｔ￣ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙꎬ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔꎬ ａｎｄ
ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｌｅａｖｅｓꎻ Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎꎻ Ｃｒｅａｍꎻ Ａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎꎻ
Ａｎｔｉ￣ａｇｉｎｇ
　 　 安全、 健康、 有效是当前绿色消费潮流的主
张ꎬ 并已深刻影响到食品添加剂、 药品、 精细化工
等领域产品开发的理念与行动ꎮ 在极力解除或降低
化学制品副作用的产品开发中ꎬ 具有副作用小、 安
全性高、 多种活性功效等特点的植物活性成分深受
绿色产品研发的重视与消费者的青睐ꎬ 如化妆品中
植物添加成分越来越多ꎮ 在我国开发植物化妆品特
别是中草药化妆品具有独特的优势ꎬ 一方面有传统
中医学理论结合现代医学及美容概念作为理论基
础ꎬ 另一方面有丰富的天然植物包括中草药提供物
质基础ꎮ 有研究发现ꎬ 银杏提取物、 竹叶提取物、
甘草黄酮、 大豆异黄酮等许多植物提取物具有美白
功效[１]ꎬ 竹叶黄酮可作为抗衰老因子[２]应用于抗
衰老化妆品ꎮ
红树林是一种分布于热带、 亚热带海边滩涂的
植物类群ꎬ 由于生长环境特殊ꎬ 红树林植物中富含
结构新颖、 具有多种生物活性与药用价值的化合
物[３]ꎮ 其中ꎬ 生于海边潮水涨落泥滩上的桐花树
[Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ (Ｌｉｎｎ.) Ｂｌａｎｃｏ]系紫金
牛科桐花树属植物ꎬ 是红树林的广布种之一[４]ꎮ
民间用药记载桐花树茎皮和叶熬汁有治疗哮喘、 抗
糖尿病、 抗关节炎与抗风湿病等药效[５]ꎻ 化学成
分研究显示其茎皮、 根皮等部位具有生物碱类、 苷
类、 甾体、 黄酮类、 皂苷与单宁等活性物质[３ꎬ４ꎬ６]ꎬ
并以醌类和三萜类为主要特征性代谢产物[７]ꎮ 李
元跃和林鹏通过解剖显微观察发现ꎬ 桐花树叶片含
有较丰富的多酚类物质(单宁) [８]ꎻ 我们采用“超声
波辅助提取－金属盐沉淀－乙酸乙酯萃取”获得桐花
树多酚提取物ꎬ 并通过福林酚法测定其多酚含量约
为(５２１􀆰８ ± １７􀆰２)ｍｇ / ｇ(以等量没食子酸计)ꎬ 该
多酚提取物表现出较强的抗氧化活性、 酪氨酸酶抑
制活性与抗菌活性[９ꎬ１０]ꎮ 本研究拟以泉州湾河口湿
地的桐花树叶为材料制备 ７５％乙醇浸膏及其各萃
取部位ꎬ 进而筛选出具有较高多酚含量与自由基清
除活性的萃取部位ꎬ 并以其作为功能性辅料与化妆
品基质混配成膏状体ꎬ 通过 ＳＤ 大鼠皮肤外涂试验
及皮肤组织匀浆进行总超氧化物歧化酶(Ｔ￣ＳＯＤ)
活性、 丙二醛(ＭＤＡ)及羟脯氨酸(ＨＹＰ)含量等生
理生化指标的测定ꎬ 以期探讨开发桐花树叶提取物
作为潜在的抗氧化或抗衰老化妆品功能性辅料的可
行性ꎮ
１　 材料和方法
１􀆰 １　 桐花树叶萃取部位制备
桐花树叶片于 ２０１３ 年 ８ 月采自福建泉州湾洛
阳江河口红树林ꎮ 将采集的桐花树叶片洗净、 阴
干ꎬ 碾粹后用 ７５％乙醇浸泡 ３次ꎬ 每次 ７ ｄꎬ 浸泡
液依次用 ３层纱布过滤、 滤纸抽滤ꎻ 滤液旋转蒸发
至无醇味ꎬ 加水混悬后依次用石油醚、 二氯甲烷、
乙酸乙酯、 正丁醇充分萃取ꎬ 减压浓缩 (５０℃ꎬ
－０􀆰 ０９ ＭＰａ) 各萃取液得到石油醚部位、 二氯甲烷
部位、 乙酸乙酯部位、 正丁醇部位以及萃取后剩余
的水层ꎻ 用无水乙醇将水层调制成乙醇终体积分数
为 ７５％ꎬ 摇匀后静置于 ４℃冰箱中 ２４ ｈꎬ 并取下层
沉淀物作为水部位ꎮ 各萃取部位用 ＤＭＳＯ(二甲基
亚矾)配制成一定浓度的测试样液ꎮ
１􀆰 ２　 多酚含量测定
多酚含量测定采用福林酚法[１１ꎬ１２]ꎮ 准确移取
１０ μＬ样液ꎬ 加入 １１５ μＬ 去离子水和 ５０ μＬ １０ 倍
稀释的 Ｆｏｌｉｎ￣Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ试剂ꎬ 漩涡混匀ꎻ １ ｍｉｎ 后
加入 ５０ μＬ ２０％ Ｎａ２ＣＯ３溶液ꎬ 充分混合后置于暗
光下(３７℃)６０ ｍｉｎꎻ 然后在 Ａｓｙｓ ＵＶＭ３４０连续波
长酶标仪(英国 Ｂｉｏｃｈｒｏｍ)上 ７５０ ｎｍ 波长处测定
吸光度ꎮ 以没食子酸对照品(贵州迪大生物有限公
７３５　 第 ４期　 　 　 　 　 　 黄晓冬等: 桐花树叶醇提取物乙酸乙酯部位对大鼠皮肤抗氧化与抗衰老能力的影响
司ꎬ 纯度≥９８％ꎬ 批号 １４９￣９１￣７)作标准曲线(ｙ ＝
０􀆰１４１８ｘ ＋ ０􀆰００２７ꎬ 线性范围为 ０ ~ ４􀆰０ μｇꎬ Ｒ ２ ＝
０􀆰９９９０)ꎬ 且１􀆰０ ｇ萃取部位所含的多酚含量以没食子
酸当量计(ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｓꎬ ｍｇ/ ｇ)ꎮ
１􀆰 ３　 总黄酮含量测定
取 ３００ μＬ 测试样液ꎬ 加入 １􀆰２ ｍＬ 双蒸水、
７５ μＬ ５％ ＮａＮＯ２充分混合ꎻ ６ ｍｉｎ 后加入 １５０ μＬ
１０％ ＡｌＣｌ３水溶液ꎬ ５ ｍｉｎ后再加入 ０􀆰５ ｍＬ １ ｍｏｌ / Ｌ
ＮａＯＨꎬ 双蒸水补足至总反应体积 ２􀆰５ ｍＬꎬ 混匀
后在 Ｖ￣１１００可见光分光光度计(上海美谱达仪器
有限公司)上 ５１０ ｎｍ波长处测定吸光度[１３]ꎮ 以芦
丁对照品 (中国药品生物制品检定所ꎬ 纯度
９２􀆰５％ꎬ 批号 １０００８０￣２００７０７)作标准曲线 ( ｙ ＝
０􀆰００５１ｘ － ０􀆰００４ꎬ 线性范围 ０ ~ １５０ μｇꎬ Ｒ ２ ＝
０􀆰 ９９９０)ꎬ 且总黄酮含量以芦丁当量计 ( ｒｕｔｉｎ
ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔｓꎬ ｍｇ / ｇ)ꎮ
１􀆰 ４　 ＤＰＰＨ自由基清除能力测定
参照 Ｆｕｋｕｍｏｔｏ 等[１４]的方法并略加调整ꎮ 在
９６孔酶标板各孔中分别加入 ２０ μＬ 供试样液和
１８０ μＬ １５０ μｍｏｌ / Ｌ ＤＰＰＨ (１ꎬ１￣二苯基苦基苯肼)
溶液(用体积分数 ８０％乙醇配制)ꎬ 空白对照加入
１８０ μＬ ＤＰＰＨ溶液和 ２０ μＬ ＤＭＳＯꎬ 样液本底值的
测定则加入 １８０ μＬ 乙醇(体积分数 ８０％)和 ２０ μＬ
供试样液ꎻ 然后将酶标板置于酶标仪中振动 ３０ ｓꎬ
室温避光静置一定时间后在 ５２２ ｎｍ 波长下读取吸
光度ꎮ 每个样品设 ３次重复ꎬ ＤＰＰＨ清除率的计算
公式为: Ｓ ＝ (１－ (Ａｓ－ Ａｂ) / Ａｃ) × １００％ꎬ 式中
Ａｓ为样液实验组的吸光度ꎻ Ａｃ为空白对照的吸光
度ꎻ Ａｂ为样液本底值的吸光度ꎮ
１􀆰 ５　 桐花树叶萃取部位膏状体的配制与理化性质
检测
１􀆰 ５􀆰 １　 配制方法
油相: 硬脂酸 ４􀆰５％ꎬ 十六醇 ２􀆰５％ꎬ 十八醇
２􀆰５１％ꎬ 吐温￣６０ ０􀆰５％ꎬ 羊毛脂 １􀆰２％ꎬ 橄榄油
０􀆰 ５％ꎬ 白油 ３􀆰１％ꎻ
水相: 质量体积浓度分别为 ２􀆰０％、 １􀆰０％、
０􀆰５％的桐花树叶萃取部位ꎬ 甘油 ６􀆰５％ꎬ 三乙醇胺
０􀆰３１％ꎬ 其余部分蒸馏水补足ꎻ
其它辅料: 茉莉香精适量ꎬ 布罗波尔 ０􀆰０５％ꎬ
尼泊金乙酯 ０􀆰１％ꎬ 尼泊金丙酯 ０􀆰１％ꎮ
油相和水相分别置于 ９０℃恒温水浴中完全融
化均匀ꎬ 然后将水相 ９０℃左右保温 ２０ ｍｉｎ并边搅
拌边倒入油相中ꎬ 待其温度降至 ４５℃时加入茉莉
香精和防腐剂尼泊金乙酯、 尼泊金丙酯与布罗波
尔ꎻ 继续搅拌ꎬ 待温度降至 ３５℃时停止搅拌ꎬ 静
置冷却即得乳化膏霜状产品ꎬ 取样保存、 待检ꎮ 按
照上述方法步骤ꎬ 分别制作熊果苷膏状体 (用
２􀆰０％熊果苷代替桐花树叶萃取部位配制)与仅含化
妆品基质的膏状体(用蒸馏水代替桐花树叶萃取部
位配制)ꎮ
１􀆰 ５􀆰 ２　 膏状体理化性质测定
按润肤膏霜国家轻工业行业标准 ＱＢ / Ｔ１８５７￣
２００４[１５]对膏体外观、 香气、 ｐＨ 值、 耐寒实验
(－５℃ ~ －１０℃ꎬ ２４ ｈ)、 耐热实验(４０℃ꎬ ２４ ｈ)
等理化性质进行测定ꎻ 按王富花等[１６]的方法进行
离心试验(４０００ ｒ / ｍｉｎꎬ ３０ ｍｉｎ)、 皮肤刺激试验
等ꎬ 并分析膏体的稳定性与安全性ꎮ
１􀆰 ５􀆰 ３　 ＳＤ大鼠皮肤膏状体外涂处理
ＳＰＦ( Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｆｒｅｅ)级 ＳＤ ( Ｓｐｒａ￣
ｇｕｅ￣Ｄａｗｌｅｙ)大鼠ꎬ 雌性ꎬ １００ ± ２５ ｇꎬ ３５ 日龄ꎬ
由福建医科大学实验动物中心提供ꎬ 实验动物使用
许可证号 ＳＣＸＫ (闽): ２０１２￣０００１ꎬ 合格证号:
００００６６６ꎮ 动物饲养于鼠笼中ꎬ 每笼 １０ 只ꎬ 每周
更换 ２ ~ ３次垫料ꎬ 自由摄食和饮水ꎬ 保持室内温
度 １８℃ ~ ２２℃ꎮ
将 ＳＤ大鼠随机分为 ５组ꎬ 包括 ３个浓度处理
组(０􀆰５％、 １􀆰０％、 ２􀆰０％桐花树叶萃取部位膏状
体)、 阳性对照组(２􀆰０％熊果苷膏状体)和阴性对
照组(仅含化妆品基质的膏状体)ꎬ 每组 １０ 只ꎮ 轻
轻用刮毛器剃除每只大鼠背部被毛至皮肤裸露面积
约为 ６ ｃｍ × ６ ｃｍꎬ 并于每天早上按时在其背部脱
毛区裸露皮肤上用消毒棉棒定量(０􀆰４５ ｇ)、 均匀
涂抹 １次ꎬ 连续涂抹 ３０ ｄꎮ
１􀆰 ５􀆰 ４　 ＳＤ大鼠皮肤组织匀浆的制备
各组大鼠均于 ３０ ｄ 后麻醉处死ꎬ 剪取背部脱
毛涂抹区皮肤组织块约 ０􀆰５ ｇꎬ 经预冷的 ０􀆰９％
ＮａＣｌ溶液漂洗后除去皮下脂肪和其他结缔组织ꎬ
滤纸拭干[１７]ꎻ 然后将组织块剪碎后倒入冰水浴中
的玻璃匀浆管中ꎬ 并加入该组织块质量 ９倍体积的
预冷 ０􀆰９％ ＮａＣｌ 溶液ꎬ 用内切式组织匀浆机制成
８３５ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
１０％皮肤组织匀浆ꎬ 反复冻融 ３ 次ꎬ 使其完全破
碎且细胞内容物完全游离在液相中ꎬ －２０℃保存备
用ꎮ
１􀆰 ５􀆰 ５ 　 Ｔ￣ＳＯＤ 活性、 羟基自由基清除能力与
ＭＤＡ含量测定
皮肤组织匀浆经低温(０℃) ３０００ ｒ / ｍｉｎ 离心
１０ ~ １５ ｍｉｎ后ꎬ 取上清液ꎬ 采用南京建成生物工
程研究所生产(批号: ２０１３１０１６)的 Ｔ￣ＳＯＤ测试试
剂盒—羟胺法、 羟基自由基测试试剂盒、 ＭＤＡ 测
试试剂盒(ＴＢＡ 法)、 总蛋白(ＴＰ)测定试剂盒—考
马斯亮蓝法分别测定 ＳＤ 大鼠皮肤组织的 Ｔ￣ＳＯＤ
活性、 羟基自由基清除能力、 ＭＤＡ 含量、 总蛋白
含量(以牛血清白蛋白(ＢＳＡ)为标准品)ꎮ
１􀆰 ５􀆰 ６　 羟脯氨酸含量测定
羟脯氨酸含量参考陈勤[１８]的方法进行测定ꎮ
以 Ｌ￣羟脯氨酸标准品(成都瑞芬思生物有限公司ꎬ
ＨＰＬＣ≥９８％ꎬ 批号 Ｑ￣０４０￣１３０４２２))作标准曲线
(ｙ ＝ ０􀆰０６７８ｘ － ０􀆰０００５ꎬ 线性范围 ０ ~ １０ μｇꎬ
Ｒ ２ ＝ ０􀆰９９７８)ꎻ 样品羟脯氨酸含量 ( μｇ / ｍｇ)以
１ ｍｇ 干皮肤含羟脯氨酸的量(μｇ)来表示ꎬ 胶原蛋
白含量按羟脯氨酸是胶原蛋白含量的 １３％计算ꎮ
１􀆰 ６　 数据处理与分析
采用 Ｍｉｃｒｏｓｏｆｔ Ｅｘｃｅｌ ２００３ 与 ＳＰＳＳ Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ
Ｖ１７􀆰０等软件进行数据统计、 处理与分析ꎻ 实验数
据以平均值 ±标准差(Ｘ± ＳＤ)表示ꎻ 采用 ＡＮＯＶＡ
单因素方差分析的 ＬＳＤ 多重比较分析组间差异ꎬ
并选用 Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数分析其相关性ꎮ
２　 结果与分析
２􀆰 １　 桐花树叶不同溶剂萃取部位的得率、 多酚与
总黄酮含量
由表 １可知ꎬ 桐花树叶不同溶剂萃取部位的得
率以正丁醇部位和水部位较大ꎬ 分别为 ２０􀆰３１％与
２０􀆰６９％ꎻ 多酚与总黄酮含量以乙酸乙酯部位含量
最高ꎬ 分别为 ２６􀆰６８％与 １７􀆰５８％ꎮ ＬＳＤ 多重比较
显示ꎬ 乙酸乙酯部位与桐花树叶其他萃取部位的多
酚、 总黄酮含量差异均达极显著水平(Ｐ < ０􀆰０１)ꎮ
２􀆰 ２　 桐花树叶不同溶剂萃取部位的 ＤＰＰＨ 自由基
清除能力
ＤＰＰＨ自由基反应体系具有易控制、 简便、 快
速、 重复性好等特点而被广泛应用于自由基清除活
性成分的筛选与评价[１９]ꎮ 由质量体积浓度均为
１􀆰０ ｍｇ / ｍＬ桐花树叶各萃取部位的 ＤＰＰＨ 自由基
清除能力可见(表 ２)ꎬ 不同反应时间作用下ꎬ 乙酸
乙酯部位的 ＤＰＰＨ 清除率均高于其他萃取部位ꎬ
当体系反应 ４５ ｍｉｎ 时其 ＤＰＰＨ 清除率可达
７３􀆰３１％ꎬ 极显著高于其他萃取部位(Ｐ < ０􀆰０１)ꎬ
表明桐花树叶乙酸乙酯部位比其他萃取部位具有更
强的自由基清除能力ꎮ 相关性分析发现ꎬ ＤＰＰＨ清
除率与多酚含量之间具有极显著正相关关系
(Ｐ < ０􀆰 ０１)ꎬ 而与总黄酮含量之间的相关性不显
著(Ｐ > ０􀆰０５)ꎮ
２􀆰 ３　 桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体的理化性质
本研究选用多酚含量、 总黄酮含量均较高以及
ＤＰＰＨ自由基清除率较大的桐花树叶乙酸乙酯部位
作为辅料ꎬ 并按照 １􀆰 ５􀆰 １ 描述的方法分别配制
２􀆰０％、 １􀆰０％、 ０􀆰５％桐花树叶乙酸乙酯部位膏状
体ꎮ 由表 ３可知ꎬ 所配制膏状体的理化性质均与膏
霜类型化妆品的质量标准指标[１５]以及离心稳定性、
安全性等检验要求[１６]较为符合ꎻ 但由于乙酸乙酯
部位本身色泽较深的影响ꎬ 膏体色泽表现为绿色至
深绿色ꎮ
２􀆰 ４　 外涂桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体对 ＳＤ 大
鼠皮肤组织抗氧化能力和 ＭＤＡ含量的影响
　 　 皮肤外涂实验结果显示(表 ４)ꎬ ＳＤ 大鼠皮肤
组织 Ｔ￣ＳＯＤ活性、 羟基自由基清除能力随膏状体
中桐花树叶乙酸乙酯部位添加量的增加而增强ꎬ
ＭＤＡ含量则随膏状体中乙酸乙酯部位添加量的增
加而减少ꎮ ２􀆰０％乙酸乙酯部位膏状体处理组的 ＳＤ
大鼠皮肤组织 Ｔ￣ＳＯＤ 活性、 羟基自由基清除能力
分别为 ２１􀆰２０ ± ０􀆰５７ Ｕ / ｍｇＰｒ、 １４􀆰１９ ± １􀆰０１ Ｕ / ｍｇ
Ｐｒꎬ 均极显著高于阴性对照组、 阳性对照组以及
１􀆰０％、 ０􀆰５％乙酸乙酯部位膏状体处理组 ( Ｐ <
０􀆰０１)ꎻ 而其 ＭＤＡ 含量为 ３􀆰３５ ± ０􀆰２４ ｎｍｏｌ / ｍｇ
Ｐｒꎬ 极显著低于各对照组及 １􀆰０％、 ０􀆰５％乙酸乙酯
部位膏状体处理组(Ｐ < ０􀆰０１)ꎮ
２􀆰 ５　 外涂桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体对 ＳＤ 大
鼠皮肤组织 ＨＹＰ、 胶原蛋白含量的影响
　 　 ＳＤ 大鼠皮肤外涂膏状体 ３０ ｄ 后ꎬ 其皮肤组
织的 ＨＹＰ、 胶原蛋白含量(表 ５)均随膏状体中桐花
９３５　 第 ４期　 　 　 　 　 　 黄晓冬等: 桐花树叶醇提取物乙酸乙酯部位对大鼠皮肤抗氧化与抗衰老能力的影响
表 １　 桐花树叶 ７５％乙醇提取物各萃取部位的得率、 多酚与总黄酮含量(ｎ ＝ ３)
Ｔａｂｌｅ １　 Ｙｉｅｌｄ ａｎｄ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ７５％ ｅｔｈａｎｏｌ
ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｌｅａｖｅｓ
萃取物
Ｅｘｔｒａｃｔａｎｔ
得率(％)
Ｙｉｅｌｄ
多酚含量(％)
Ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ
总黄酮含量(％)
Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄ ｃｏｎｔｅｎｔ
石油醚部位 Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ ２.０８ ４.１３ ± ０.４９∗∗ １０.７６ ± ０.４６∗∗
二氯甲烷部位 Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ １.８５ ７.２８ ± ０.９２∗∗ １２.４６ ± ０.４４∗∗
乙酸乙酯部位 Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ４.４６ ２６.６８ ± ２.１９ １７.５８ ± ０.６８
正丁醇部位 ｎ￣ｂｕｔａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ ２０.３１ １６.５２ ± ２.６２∗∗ ８.３４ ± ０.７２∗∗
水部位(醇沉) Ｗａｔｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ (ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ) ２０.６９ ７.３６ ± １.７７∗∗ ４.９５ ± ０.７８∗∗
　 　 注: ∗∗表示乙酸乙酯部位与桐花树叶其他溶剂萃取部位的多酚含量、 总黄酮含量在 Ｐ < ０􀆰０１水平上差异极显著ꎮ
Ｎｏｔｅｓ: ∗∗ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｖｅｒｙ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｔ ｔｈｅ Ｐ < ０􀆰０１ ｌｅｖｅｌ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ
ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｏｓｅ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒａｃｔｉｏｎｓ.
表 ２　 １􀆰 ０ ｍｇ / ｍＬ桐花树叶醇提取物各萃取部位的 ＤＰＰＨ自由基清除能力及其与多酚、 总黄酮含量的相关性分析 (ｎ ＝ ３)
Ｔａｂｌｅ ２　 ＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ７５％ ｅｔｈａｎｏｌ ｅｘｔｒａｃｔ ｏｆ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ
ｌｅａｖｅｓ ａｔ １􀆰 ０ ｍｇ / ｍＬ ａｎｄ ｉｔｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗｉｔｈ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ
系列或组别
Ｓｅｒｉｅｓ ｏｒ ｇｒｏｕｐｓ
反应 ３０ ｍｉｎ时 ＤＰＰＨ
自由基清除率(％)
ＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ｒａｔｅ ａｔ ３０ ｍｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
反应 ４５ ｍｉｎ时 ＤＰＰＨ
自由基清除率(％)
ＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ｒａｔｅ ａｔ ４５ ｍｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ
石油醚部位 Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ ｅｔｈｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ １９.９６ ± １.８０∗∗ ２２.９６ ± １.５９∗∗
二氯甲烷部位 Ｄｉｃｈｌｏｒｏｍｅｔｈａｎｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ４０.６６ ± １.０８∗∗ ５０.０９ ± １.４２∗∗
乙酸乙酯部位 Ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ５８.８５ ± ３.５１ ７３.３１ ± １.３７
正丁醇部位 ｎ￣ｂｕｔａｎｏｌ ｆｒａｃｔｉｏｎ ４７.８５ ± ４.１２∗∗ ６２.０７ ± ５.７１∗∗
水部位(醇沉) Ｗａｔｅｒ ｆｒａｃｔｉｏｎ (ｂｙ ａｌｃｏｈｏｌ ｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ) ５２.２３ ± ４.５５∗ ６３.６８ ± ４.８８∗∗
相关系数 ｒ１ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ０.７０７ ０.７３２
相关系数 ｒ２ Ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ０.１３９ ０.１３３
　 　 注:∗ꎬ∗∗分别表示乙酸乙酯部位与桐花树叶其他溶剂萃取部位的 ＤＰＰＨ自由基清除率在 Ｐ < ０􀆰０５、 Ｐ < ０􀆰０１ 水平上差异显著和极显
著ꎻ ｒ１为 ＤＰＰＨ自由基清除能力与多酚含量之间的相关系数ꎻ ｒ２为 ＤＰＰＨ自由基清除能力与总黄酮含量之间的相关系数ꎮ
Ｎｏｔｅｓ: ∗ꎬ ∗∗ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ ａｔ ｔｈｅ Ｐ < ０.０５ ａｎｄ Ｐ < ０.０１ ｌｅｖｅｌｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ
ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈａｔ ｏｆ ｏｔｈｅｒ ｓｏｌｖｅｎｔ ｆｒａｃｔｉｏｎｓꎬ ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ. ｒ１ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ｂｅｔｗｅｅｎ ＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎ￣
ｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌ ｃｏｎｔｅｎｔꎬ ａｎｄ ｒ２ ｉｎｄｉｃａｔｅｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｉｎｄｅｘ ｂｅｔｗｅｅｎ ＤＰＰＨ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｆｌａ￣
ｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ.
表 ３　 桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体的理化性质
Ｔａｂｌｅ ３　 Ｐｈｙｓｉｃｏｃｈｅｍｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｃｒｅａｍ ｗｉｔｈ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ
ｆｒｏｍ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｌｅａｖｅｓ
项目
Ｉｔｅｍｓ
标准指标与检验要求
Ｓｔａｎｄａｒｄ ｉｎｄｅｘ ａｎｄ
ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎａｌ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ
检测结果
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｒｅｓｕｌｔｓ
香气 Ｆｒａｇｒａｎｃｅ 符合规定香气 符合规定香气
膏体外观 Ａｐｐｅａｒａｎｃｅ 膏体细腻ꎬ 均匀一致 细腻ꎬ 均匀一致
ｐＨ ４.０ ~ ８.５ ６.５ ~ ７.５
耐寒试验 Ｃｏｌｄ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｅｓｔ 置于
－５℃ ~ －１０℃ ２４ ｈꎬ然后恢复至室温离心后与试
验前无明显性状差异 无油水分离现象ꎬ无粗颗粒出现
耐热试验 Ｈｅａｔ￣ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｔｅｓｔ 置于 ４０℃ ２４ ｈꎬ 膏体无油水分离现象 膏体无油水分离现象
离心试验 Ｃｅｎｔｒｉｆｕｇｅ ｔｅｓｔ ４０００ ｒ / ｍｉｎ离心 ３０ ｍｉｎꎬ 无乳析现象 无乳析现象
皮肤刺激试验 Ｓｋｉｎ ｉｒｒｉｔａｎｔ ｔｅｓｔ 涂抹 ２４ ｈꎬ 皮肤无异常现象 皮肤表面无红斑、 水肿等异常现象
０４５ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
表 ４　 外涂桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体对 ＳＤ大鼠皮肤组织 Ｔ￣ＳＯＤ活性、
羟基自由基清除能力和 ＭＤＡ含量的影响 (ｎ ＝ １０)
Ｔａｂｌｅ ４　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｒｅａｍ ｗｉｔｈ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒｏｍ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｎ Ｔ￣ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙꎬ
ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ ａｎｄ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ＳＤ ｒａｔｓ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
Ｔ￣ＳＯＤ活性
Ｔ￣ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙ
(Ｕ / ｍｇ Ｐｒ)
羟基自由基清除能力
Ｈｙｄｒｏｘｙｌ ｒａｄｉｃａｌ
ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙ
(Ｕ / ｍｇ Ｐｒ)
ＭＤＡ含量
ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ
(ｎｍｏｌ / ｍｇ Ｐｒ)
阴性对照组
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ １８.１１ ± ０.４４ ３.０１ ± ０.５５ ６.６２ ± ０.５７
阳性对照组
Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ ２０.２１ ± ０.５９
∗∗ ６.８８ ± ０.６２∗∗ ４.４６ ± ０.５４∗∗
２.０％乙酸乙酯部位膏状体处理组
Ｇｒｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｒｅａｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２.０％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ２１.２０ ± ０.５７
∗∗＃＃ １４.１９ ± １.０１∗∗＃＃ ３.３５ ± ０.２４∗∗＃＃
１.０％乙酸乙酯部位膏状体处理组
Ｇｒｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｒｅａｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １.０％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ２０.３１ ± ０.４４
∗∗ １１.７７ ± ０.５７∗∗＃＃ ４.２７ ± ０.５３∗∗
０.５％乙酸乙酯部位膏状体处理组
Ｇｒｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｒｅａｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ０.５％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ １９.４６ ± １.０１
∗∗＃ ６.５３ ± ０.７９∗∗ ５.３６ ± ０.６０∗∗＃＃
　 　 Ｎｏｔｅｓ: Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ∗∗Ｐ < ０􀆰０１ꎻ Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐꎬ ＃Ｐ < ０􀆰０５ꎬ ＃＃Ｐ < ０􀆰０１. Ｓａｍｅ ｂｅｌｏｗ.
表 ５　 外涂桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体对 ＳＤ大鼠皮肤组织 ＨＹＰ、 胶原蛋白含量的影响 (ｎ ＝ １０)
Ｔａｂｌｅ ５　 Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｒｅａｍ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ａｄｄｉｔｉｏｎ ｏｆ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ａｅｇｉｃｅｒａｓ ｃｏｒｎｉｃｕｌａｔｕｍ
ｌｅａｖｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ ａｎｄ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ＳＤ ｒａｔｓ
组别
Ｇｒｏｕｐｓ
羟脯氨酸含量(μｇ / ｍｇ)
ＨＹＰ ｃｏｎｔｅｎｔ
胶原蛋白含量(μｇ / ｍｇ)
Ｃｏｌｌａｇｅｎ ｃｏｎｔｅｎｔ
阴性对照组
Ｎｅｇａｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ １４.２８ ± ０.５７ １０９.８３ ± ４.３８
阳性对照组
Ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ １６.３３ ± ０.６８
∗∗ １２５.６０ ± ５.２１∗∗
２.０％乙酸乙酯部位膏状体处理组
Ｇｒｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｒｅａｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ２.０％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ ２２.６４ ± ０.７８
∗∗＃＃ １７４.１５ ± ５.９８∗∗＃＃
１.０％乙酸乙酯部位膏状体处理组
Ｇｒｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｒｅａｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ １.０％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ １８.７３ ± ０.７６
∗∗＃＃ １４４.０９ ± ５.８２∗∗＃＃
０.５％乙酸乙酯部位膏状体处理组
Ｇｒｏｕｐ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｒｅａｍ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ０.５％ ｅｔｈｙｌ ａｃｅｔａｔｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ １５.７２ ± ０.４４
∗∗＃ １２０.９４ ± ３.４０∗∗＃
树叶乙酸乙酯部位添加量的增加而增大ꎮ ２􀆰０％乙
酸乙酯部位膏状体处理组的 ＳＤ 大鼠皮肤组织
ＨＹＰ、 胶原蛋白含量分别为 ２２􀆰６４ ± ０􀆰７８ μｇ / ｍｇ、
１７４􀆰１５ ± ５􀆰９８ μｇ / ｍｇꎬ 均极显著高于阴性对照
组、 阳性对照组以及 １􀆰０％、 ０􀆰５％乙酸乙酯部位膏
状体处理组(Ｐ < ０􀆰０１)ꎮ
相关性分析表明ꎬ ＳＤ大鼠皮肤组织中 ＨＹＰ含
量与其 Ｔ￣ＳＯＤ 活性(图 １: Ａ)、 羟基自由基清除
能力(图 １: Ｂ)之间存在极显著正相关关系(Ｐ <
０􀆰０１)ꎬ 而与 ＭＤＡ含量(图 １: Ｃ)存在极显著负相
关关系 (Ｐ < ０􀆰０１)ꎬ 相关系数 ｒ 分别为 ０􀆰７４８、
０􀆰９３７、 －０􀆰８５１ꎮ
３　 讨论
皮肤衰老是机体衰老的重要外在表现之一ꎬ
衰老的自由基学说认为ꎬ 自由基累积损伤是皮肤
衰老的重要原因[２０] ꎮ 若在化妆品中添加具有自由
基清除能力或者可激活皮肤组织的抗氧化体系ꎬ
则该化妆品应具有一定的抗氧化与抗衰老作用ꎮ
植物中的一些代谢成分有较强的提高机体抗自由
基损伤的能力[２１] ꎬ 其中广泛存在于植物体内的多
酚类化合物被公认为是一种很好的抗氧化剂[２２] ꎬ
是开发抗氧化、 抗衰老、 美白等功能化妆品的天
然添加成分ꎮ
１４５　 第 ４期　 　 　 　 　 　 黄晓冬等: 桐花树叶醇提取物乙酸乙酯部位对大鼠皮肤抗氧化与抗衰老能力的影响
y x= 1.865 19.491-
r P= 0.748 < 0.01
10
12
14
16
18
20
22
24
26
17 18 19 20 21 22 23
T-SOD U / mg Pr
T-SOD activity
!" ( )
y x= 2.0424 + 27.369-
r P= 0.851 < 0.01-
10
12
14
16
18
20
22
24
26
2 3 4 5 6 7 8
MDA nmol / mg Pr
MDA content
#$ ( )
C
y x= 0.6924 + 11.672
r P= 0.937 < 0.01
10
12
14
16
18
20
22
24
0 5 10 15 20
%&(&)*+, ( )U / mg Pr
Hydroxide radical scavenging ability
BA
%
-
.
/
#
$
(
)
g
/ m
g
H
YP
co
nt
en
t
μ
%
-
.
/
#
$
(
)
μg
/
m
g
H
YP
co
nt
en
t
%
-
.
/
#
$
(
)
g
/ m
g
H
YP
co
nt
en
t
μ
图 １　 ＳＤ大鼠皮肤组织中 ＨＹＰ含量与其 Ｔ￣ＳＯＤ活性、 羟基自由基清除能力和 ＭＤＡ含量之间的相关性分析
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｈｙｄｒｏｘｙｐｒｏｌｉｎｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ａｎｄ Ｔ￣ＳＯＤ ａｃｔｉｖｉｔｙꎬ ｈｙｄｒｏｘｉｄｅ ｒａｄｉｃａｌ
ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｂｉｌｉｔｙꎬ ＭＤＡ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｓｋｉｎ ｔｉｓｓｕｅ ｉｎ ＳＤ ｒａｔｓ
　 　 红树林植物桐花树为适应生境的高盐胁迫及提
高抗腐蚀性ꎬ 其器官中多酚含量较高ꎬ 这已经得到
叶片解剖学与树皮化学成分分析数据的证实[８ꎬ２３]ꎮ
但提取、 分离并应用桐花树多酚的研究尚没有引起
足够的关注ꎬ 本实验发现桐花树叶中多酚、 黄酮类
化合物主要集中在 ７５％乙醇提取物的乙酸乙酯部
位ꎬ 含量分别为 ２６􀆰６８％和 １７􀆰５８％ꎬ 并且该部位
的 ＤＰＰＨ 清除率也显著高于石油醚、 二氯甲烷、
正丁醇、 水的萃取部位ꎬ 相关性分析也发现 ＤＰＰＨ
清除率与多酚含量呈极显著正相关(Ｐ < ０􀆰０１)ꎬ 说
明多酚是乙酸乙酯部位主要的自由基清除成分之
一ꎻ 此外ꎬ 从酚类分子量与乙酸乙酯溶剂的关系来
看ꎬ 乙酸乙酯部位的多酚可能主要为中等分子量的
多酚类物质ꎬ 相比于大分子量多酚强收敛性所产生
的皮肤刺激副作用[９]ꎬ 该部位的多酚较适于用作
化妆品添加剂ꎮ 因而ꎬ 综合多酚含量与类型、 自由
基清除能力以及笔者对桐花树叶多酚提取物具有较
强的酪氨酸酶抑制活性的研究结果[９]等分析ꎬ 桐
花树叶乙酸乙酯部位较之于其他萃取部位更适宜作
为潜在的化妆品添加剂ꎮ
在添加植物提取物所制成的化妆品中ꎬ 膏霜状
化妆品是一种主要的类型ꎬ 其主要有水包油型膏霜
类(Ｏ / Ｗ型)与油包水型膏霜类(Ｗ/ Ｏ 型) [１５]ꎮ 从
配方来看ꎬ 桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体(水分大
于 ７７％)符合水包油型化妆品的特点 (水分占
７５％ ~ ９０％ꎬ 油分占 ２５％ ~ １０％) [１６]ꎬ 弱油性的
特点使其油腻感降低ꎬ 适用于任何肤质ꎻ 此外ꎬ 配
方中的白油起到润肤剂和保湿剂作用ꎬ 羊毛脂起到
软化角质皮层作用ꎬ 橄榄油使皮肤有良好的收敛和
渗透性ꎬ 甘油可使化妆品的保湿性、 营养性、 渗透
性更好[１６]等ꎬ 这些组分均使该化妆品使用时感觉
舒适、 皮肤渗透性好ꎮ 一般而言ꎬ 植物提取物在化
妆品中的用量与提取物的剂型和纯度直接相关ꎬ 通
常可按下列比例在化妆品中使用: 流浸膏 ３􀆰０％ ~
１０􀆰０％ꎬ 浸膏 ２􀆰０％ ~ ３􀆰０％ꎬ 干粉 １􀆰０％ ~ ２􀆰０％ꎬ
纯活性物 ０􀆰２５％ ~ １􀆰０％[２４]ꎮ 桐花树叶乙酸乙酯
部位为浸膏ꎬ 故本实验选用 ２􀆰０％作为添加量ꎬ 并
按药理整体实验剂量成 ２ 倍等比数列方法[２５]确定
不同添加量ꎬ 制备出 ２􀆰０％、 １􀆰０％、 ０􀆰５％桐花树
叶乙酸乙酯部位化妆品ꎬ 结果显示其理化性质均与
膏霜状化妆品的质量检测标准相符合ꎬ 且涂抹皮肤
后没有出现红斑、 水肿、 刺激等异常现象ꎬ 可以用
于动物试验ꎮ
超氧化物歧化酶(ＳＯＤ)是生物机体内唯一能
清除衰老启动因子超氧阴离子自由基(Ｏ２􀅰)的抗氧
化酶ꎬ 其活性高低与衰老有着密切的联系ꎬ 一般随
年龄增加而下降[２６]ꎮ ＭＤＡ是自由基诱发脂质过氧
化链式反应产生的代谢终产物ꎬ 也是一种极活泼的
交联剂ꎬ 能使真皮结构发生大分子交联ꎬ 使皮肤变
硬、 皱缩并生成老年斑[２７]ꎻ 自由基累积越多ꎬ
ＭＤＡ生成越多ꎬ 对机体的损伤也越大ꎮ 因此ꎬ Ｔ￣
ＳＯＤ活性与ＭＤＡ含量可反映机体自由基产生和清
除状况ꎬ 并可作为判定皮肤衰老程度的特殊而敏感
２４５ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷　
的指标[２８]ꎮ 此外ꎬ 羟基自由基(􀅰ＯＨ)是生物体内
危害最大、 活性最强的自由基ꎬ 与衰老、 辐射损伤
和细胞坏死等均密切相关[１０]ꎬ 故羟基自由基清除
能力是评定体系抗氧化能力的重要指标[２９]ꎮ 本研
究发现桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体能够较好地被
ＳＤ大鼠皮肤组织吸收ꎬ 并能极显著增强皮肤组织
的 Ｔ￣ＳＯＤ 活性、 羟基自由基清除能力与降低其
ＭＤＡ含量ꎬ 且 ２􀆰０％乙酸乙酯部位添加量提高皮肤
组织抗氧化能力的作用更为显著ꎮ
胶原蛋白是构成结缔组织胶原纤维的主要成
分ꎬ 皮肤老化的一个重要表现是皮肤中胶原蛋白含
量减少ꎮ 而胶原蛋白中的 ＨＹＰ 含量高 (约占
１２％ ~ １４％)且相对稳定ꎬ 是维持胶原蛋白纤维稳
定性的重要单元ꎬ 因此 ＨＹＰ 含量是反映胶原纤维
变化的敏感生化指标ꎬ 通过直接测定皮肤组织中
ＨＹＰ含量即可推算出胶原蛋白含量ꎬ 从而获得皮
肤老化程度的参数[３０]ꎮ 如金花葵总黄酮[３０]、 三七
总皂苷[３１]均能通过提高皮肤组织中 ＨＹＰ 含量来增
强抗衰老作用ꎻ 本实验结果也显示ꎬ ２􀆰０％桐花树
叶乙酸乙酯部位膏状体处理组的 ＳＤ 大鼠皮肤组织
ＨＹＰ、 胶原蛋白含量均极显著提高ꎮ 结合自由基代
谢指标的测定结果ꎬ 我们认为桐花树叶乙酸乙酯部
位可作为一种潜在的抗氧化或抗衰老化妆品功能性
辅料ꎬ 并且 ２􀆰０％乙酸乙酯部位添加量是制备此抗
氧化或抗衰老化妆品的有效添加剂量ꎮ
皮肤中胶原蛋白、 ＨＹＰ 含量与其自由基含量
水平、 抗氧化酶活性密切相关ꎬ 增强抗氧化酶活性
与清除自由基均可提高 ＨＹＰ 含量、 促进胶原蛋白
合成ꎬ 从而延缓皮肤的损伤、 皱化与老化[１７ꎬ３２]ꎮ
如木瓜黄酮提取液[３３]、 中药活肤油[１７]均能提高衰
老小鼠皮肤组织 ＳＯＤ活性与 ＨＹＰ含量ꎮ 本实验相
关性分析发现 ＳＤ 大鼠皮肤组织 ＨＹＰ 含量与其 Ｔ￣
ＳＯＤ活性、 羟基自由基清除能力之间呈极显著正
相关(Ｐ < ０􀆰０１)ꎬ 与其 ＭＤＡ含量呈极显著负相关
(Ｐ < ０􀆰０１)ꎬ 表明桐花树叶乙酸乙酯部位膏状体的
抗衰老作用可能是通过增强机体抗氧化酶活性、 提
高自由基清除能力、 降低 ＭＤＡ 含量并以此促进胶
原蛋白合成来起作用的ꎮ 此外ꎬ 黄酮类化合物也可
能是通过促进新胶原合成、 降低不溶性胶原含量发
挥抗衰老作用的[３４]ꎬ 桐花树叶乙酸乙酯部位较高
含量的总黄酮是否具有类似的作用有待探讨ꎻ 桐花
树叶乙酸乙酯部位是否、 或者如何通过细胞信号通
路及与衰老相关的基因表达等水平上发挥抗衰老作
用也需进一步深入研究ꎮ
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(责任编辑: 刘艳玲)
４４５ 植 物 科 学 学 报 第 ３３卷