全 文 ：过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１影响植物对病原菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ的抗性∗
王其娟１ꎬ２ꎬ 陈利钢１∗∗ꎬ 余迪求１∗∗
(１ 中国科学院西双版纳热带植物园热带森林生态学重点实验室ꎬ 昆明　 ６５０２２３ꎻ ２ 中国科学院大学ꎬ 北京　 １０００４９)
摘要: ＷＲＫＹ转录调控因子基因家族是主要存在于植物中的超级基因家族ꎬ 其在调控植物生长发育以及
响应逆境胁迫方面发挥了重要的功能ꎮ 本研究首先检测了 ＡｔＷＲＫＹ７１在不同组织器官ꎬ 发育阶段ꎬ 激素处
理和病原菌侵染条件下的表达模式ꎮ 结果显示在约 １２周大的 ＷＴ植株的不同组织器官中ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１主要
在根部表达ꎬ 同时与 １４ ｄ龄的幼苗相比ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１在 ８ ｄ龄的幼苗中有更强的表达ꎮ 在不同的处理条件
下ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１受水杨酸 (ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄꎬ ＳＡ)ꎬ 乙烯 (ｅｔｈｙｌｅｎｅꎬ ＥＴ)ꎬ 茉莉酸 (ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄꎬ ＪＡ) 以及细菌
病原菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ的诱导表达ꎮ 此外ꎬ 和野生型植株相比ꎬ 组成型表达 ＡｔＷＲＫＹ７１一方面使植株
生长发育变缓且出现锯齿状叶片ꎬ 另一方面也增强了植株对 Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ的敏感性ꎬ 并抑制了多个与水杨酸
信号转导途径相关的病程相关基因 (ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅꎬ ＰＲ) 的表达ꎮ 这些研究结果表明ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１
可能作为一个重要的调节子ꎬ 在植物的生长发育及防御反应中发挥了重要功能ꎮ
关键词: ＡｔＷＲＫＹ７１ꎻ ＷＲＫＹ转录因子ꎻ 转基因植物ꎻ 防御反应
中图分类号: Ｑ ７８６　 　 　 　 　 　 　 文献标志码: Ａ　 　 　 　 　 　 　 文章编号: ２０９５－０８４５(２０１５)０５－５７７－０９
Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１ Ａｆｆｅｃｔｓ Ｐｌａｎｔ’ｓ Ｄｅｆｅｎｓｅ
Ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ
ＷＡＮＧ Ｑｉ￣ｊｕａｎ１ꎬ２ꎬ ＣＨＥＮ Ｌｉ￣ｇａｎｇ１∗∗ꎬ ＹＵ Ｄｉ￣ｑｉｕ１∗∗
(１Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｆｏｒｅｓｔ Ｅｃｏｌｏｇｙꎬ Ｘｉｓｈｕａｎｇｂａｎｎａ Ｔｒｏｐｉｃａｌ Ｂｏｔａｎｉｃａｌ Ｇａｒｄｅｎꎬ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ
Ｋｕｎｍｉｎｇ ６５０２２３ꎬ Ｃｈｉｎａꎻ ２ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓꎬ Ｂｅｉｊｉｎｇ １０００４９ꎬ Ｃｈｉｎａ)
Ａｂｓｔｒａｃｔ: Ｔｈｅ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｓｕｐｅｒ￣ｆａｍｉｌｙ ｐｌａｙｓ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅｓ ｉｎ ｎｕｍｅｒｏｕｓ ｐｒｏｃｅｓｓｅｓꎬ ｓｕｃｈ ａｓ ｐｌａｎｔ
ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ａｎｄ ｐｌａｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ. Ｉｎ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙꎬ ｗｅ ｆｉｒｓｔ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｔｈｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｒｏｆｉｌｅｓ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｉｎ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｏｒｇａｎｓ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ ａｎｄ ｕｎｄｅｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｈｏｒｍｏｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ. Ｉｎ １２ｗ ｏｌｄ
ＷＴ ｐｌａｎｔｓꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｍａｉｎｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｒｏｏｔｓ ａｎｄ ｈａｄ ｓｔｒｏｎｇｅｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ８ ｄ ｏｌｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ ｔｈａｎ ｔｈａｔ ｏｆ １４ ｄ
ｏｌｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ. Ｕｎｄｅｒ ｖａｒｉｏｕｓ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｗａｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ＳＡꎬ ＥＴ ｏｒ ＪＡ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ
ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ. Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒｅꎬ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｗｉｌｄ ｔｙｐｅꎬ ｐｌａｎｔｓ ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｉｖｅｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＡｔＷＲＫＹ７１
ｗｅｒｅ ｓｍａｌｌｅｒ ｉｎ ｓｉｚｅ ａｎｄ ｈａｄ ｓｌｉｇｈｔｌｙ ｓｅｒｒａｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ. Ｆｕｒｔｈｅｒ ａｎａｌｙｓｉｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｉｎ￣
ｃｒｅａｓｅｄ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｔｏ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ. Ｔｈｅ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｗａｓ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｒｅｄｕｃｅｄ
ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ￣ｒｅｇｕｌａｔｅｄ ＰＲ ｇｅｎｅｓ. Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈａｔ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｉｓ ａ ｎｏｖｅｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｉｎ ｂｏｔｈ
ｐｌａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ａｌｓｏ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ.
Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ: ＡｔＷＲＫＹ７１ꎻ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒꎻ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔꎻ Ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ
　 植物在与病原微生物长期对抗过程中形成
了具有自我保护功能的天然免疫系统ꎮ 植物天然
免疫系统包含两个层面: 首先是基于细胞表面的
模式识别受体 (Ｐａｔｔｅｒｎ￣ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓꎬ ＰＲＲｓ)
植 物 分 类 与 资 源 学 报　 ２０１５ꎬ ３７ (５): ５７７~５８５
Ｐｌａｎｔ Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ ａｎｄ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 ＤＯＩ: １０.７６７７ / ｙｎｚｗｙｊ２０１５１５０２２
∗
∗∗
基金项目: 国家自然科学基金项目 (３１２００９１５) 和中国科学院西部之光、 中国科学院青年创新促进会项目
通讯作者: Ａｕｔｈｏｒ ｆｏｒ ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅꎻ Ｅ￣ｍａｉｌ: ｃｈｅｎｌｉｇａｎｇ＠ｘｔｂｇ􀆰 ａｃ􀆰 ｃｎꎻ ｙｄｑ＠ｘｔｂｇ􀆰 ａｃ􀆰 ｃｎ
收稿日期: ２０１５－０２－０３ꎬ ２０１５－０３－２７接受发表
作者简介: 王其娟 (１９８８－) 女ꎬ 硕士研究生ꎬ 主要从事植物分子生物学研究ꎮ
对病原物相关分子模式 (Ｐａｔｈｏｇｅｎ￣ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｍｏ￣
ｌｅｃｕｌａｒ ｐａｔｔｅｒｎｓꎬ ＰＡＭＰｓ) 的识别ꎬ 从而使植物对
许多病原微生物中普遍存在的 ＰＡＭＰｓ 作出识别
及应答ꎬ 触发 ＰＴＩ (ＰＡＭＰ￣ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ) (Ｊｏ￣
ｎｅｓ和 Ｄａｎｇｌꎬ ２００６)ꎮ 当病原微生物成功避开植
物 ＰＴＩꎬ 试图直接向寄主体内分泌效应蛋白达到
侵染目的时ꎬ 植物又通过抗病基因 (Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ
ｇｅｎｅꎬ Ｒ ｇｅｎｅ) 编码的蛋白产物来直接或间接识
别不同来源的病原物效应子ꎬ 引发 ＥＴＩ (Ｅｆｆｅｃｔｏｒ￣
ｔｒｉｇｇｅｒｅｄ ｉｍｍｕｎｉｔｙ) ( Ｊｏｎｅｓ 和 Ｄａｎｇｌꎬ ２００６)ꎮ 发
生 ＥＴＩ时ꎬ 通常会在侵染部位产生过敏性细胞死
亡反应 (Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｒｅｓｐｏｎｓｅꎬ ＨＲ)ꎬ
从而阻止病原微生物的进一步侵染ꎮ 之后ꎬ 在自
然选择的作用下ꎬ 病原微生物可能通过不同进化
策略来避开 ＥＴＩꎬ 这时植物又共进化出新的 Ｒ蛋
白来再次触发 ＥＴＩ ꎮ 从长期的角度看ꎬ 植物与病
原微生物之间的相互作用呈现 Ｚ 字形的 “拉锯
战” 局面 (Ｊｏｎｅｓ和 Ｄａｎｇｌꎬ ２００６)ꎮ ＰＴＩ 和 ＥＴＩ 所
涉及的分子机制各不相同ꎬ 但又相互联系ꎬ 充分
体现了植物与病原微生物互作的复杂性ꎮ
植物的自我防御系统在分子水平上受到转录
调控因子的调节ꎮ ＷＲＫＹ 转录因子家族是主要
存在于植物中的一类超级基因家族ꎬ 其在植物应
对生物胁迫的过程中发挥了重要的作用ꎮ ＷＲＫＹ
转录因子在拟南芥中有 ７４ 个成员 ( Ｅｕｌｇｅｍ 和
Ｓｏｍｓｓｉｃｈꎬ ２００７)ꎬ 在其Ｎ端含有高度保守的 ＷＲＫＹ￣
ＧＱＫ氨基酸序列和锌指结构 (Ｅｕｌｇｅｍ 等ꎬ ２０００)ꎮ
ＷＲＫＹ蛋白通过结合靶基因启动子区域的 Ｗ 盒
(Ｔ / ＣＴＧＡＣＣ / Ｔ) 来调控相关基因的表达ꎬ 以此
来发挥其分子生物学的功能 (Ｍａｌｅｃｋ 等ꎬ ２０００ꎻ
Ｄｏｎｇ等ꎬ ２００３)ꎮ
目前ꎬ 大量研究表明 ＷＲＫＹ 转录因子在调
节植物防御反应相关基因的表达过程中发挥了重
要作用 (Ｅｕｌｇｅｍ和 Ｓｏｍｓｓｉｃｈꎬ ２００７)ꎮ 首先ꎬ ＷＲＫＹ
转录因子的很多成员受病原菌侵染诱导表达
(Ｒｕｓｈｔｏｎ 等ꎬ １９９６ꎻ Ｅｕｌｇｅｍ 等ꎬ １９９９ꎻ Ｃｈｅｎ 和
Ｃｈｅｎꎬ ２０００ꎻ Ｄｅｌｌａｇｉ 等ꎬ ２０００ꎻ Ｈａｒａ 等ꎬ ２０００ꎻ
Ｄｏｎｇ等ꎬ ２００３ꎻ Ｋａｌｄｅ等ꎬ ２００３ꎻ Ｅｃｋｅｙ等ꎬ ２００４ꎻ
Ｋｉｍ和 Ｚｈａｎｇꎬ ２００４ꎻ Ｔｕｒｃｋ等ꎬ ２００４)ꎮ 此外ꎬ 在
植物受到病原菌侵染后ꎬ 一些和防御反应相关的
基因 (如 ＰＲ 基因和 ＮＰＲ１) 的表达受到 ＷＲＫＹ
转录因子的调控 (Ｒｕｓｈｔｏｎ等ꎬ １９９６ꎻ Ｗｉｌｌｍｏｔｔ等ꎬ
１９９８ꎻ Ｙａｎｇ等ꎬ １９９９ꎻ Ｙｕ等ꎬ ２００１ꎻ Ｔｕｒｃｋ等ꎬ ２００４ꎻ
Ｙａｍａｍｏｔｏ 等ꎬ ２００４ꎻ Ｒｏｃｈｅｒ 等ꎬ ２００５ꎻ Ｃｈｅｎ 等ꎬ
２０１３)ꎮ 这些研究结果暗示 ＷＲＫＹ转录调控因子
广泛参与植物对病原菌侵染的响应过程ꎮ
最近ꎬ 越来越多的研究表明 ＷＲＫＹ 蛋白在
植物的基础抗性方面发挥了重要的调节作用ꎮ 如
ＡｔＷＲＫＹ３３的突变体增强了植物对 Ｂｏｔｒｙｔｉｓ Ｃｉｎｅｒｅａ
和 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓｓｉｃｉｃｏｌａ 的敏感性 ( Ｚｈｅｎｇ 等ꎬ
２００６)ꎮ 功能上冗余的 ＡｔＷＲＫＹ１８ꎬ ＡｔＷＲＫＹ４０ 和
ＡｔＷＲＫＹ６０在植物防御 Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ 和 Ｅｒｙｓｉｐｈｅ ｃｉ￣
ｃｈｏｒａｃｅａｒｕｍ的过程中发挥了负调控的功能 (Ｘｕ
等ꎬ ２００６ꎻ Ｓｈｅｎ 等ꎬ ２００７)ꎮ 此外ꎬ 还有研究报
道证实 ＡｔＷＲＫＹ８ꎬ ＡｔＷＲＫＹ４８ꎬ ＡｔＷＲＫＹ３８ 和 Ａｔ￣
ＷＲＫＹ６２在植物响应病原菌 Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ 的侵染过
程中发挥了负反馈调节的作用 (Ｋｉｍ 等ꎬ ２００８ꎻ
Ｘｉｎｇ等ꎬ ２００８ꎻ Ｃｈｅｎ 等ꎬ ２０１０)ꎮ 因而ꎬ 我们推
测 ＷＲＫＹ转录因子作为重要的调节子ꎬ 在植物
响应病原菌侵染的防御反应信号转导途径和转录
调控网络中发挥了重要的调控功能ꎮ
在前期的研究中我们对 Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ ｐｖ ｔｏｍａｔｏ
ｓｔｒａｉｎ ＤＣ３０００ (ＰｓｔＤＣ３０００) 侵染 ２天的野生型拟
南芥植株进行了表达谱分析ꎬ 发现 ＡｔＷＲＫＹ７１ 受
其强烈诱导表达ꎮ 因此ꎬ 在本研究中我们利用过
表达 ＡｔＷＲＫＹ７１ 转基因植株ꎬ 探讨了 ＡｔＷＲＫＹ７１
在响应 ＰｓｔＤＣ３０００侵染过程中的调控功能ꎮ
１　 材料和方法
１􀆰 １　 材料
[ ３２Ｐ]￣ｄＡＴＰ (>３ ０００ Ｃｉ / ｍｍｏｌ) 从北京福瑞生物技术
公司购得ꎻ 其他的化学试剂分别从上海生工生物技术公
司ꎬ Ｓｉｇｍａꎬ ＴａＫａＲａ生物技术公司 (大连) 购买ꎮ 选用
拟南芥生态型 Ｃｏｌｕｍｂｉａ￣０ (Ｃｏｌ) 为实验材料ꎮ 种子表面
消毒后均匀散布在 １ / ２ＭＳ培养基上 (含 ０􀆰 ９％ ａｇａｒ)ꎬ ４ ℃
春化 ３ ｄꎬ 转移到 ２２ ℃培养箱培养 ７ ｄ后移栽到土中ꎮ 培
养条件为温度 ２２ ℃左右ꎬ 相对湿度 ５０％ꎬ 光照周期 １０ ｈ
白 / １４ ｈ昼 (光照时间 ８ ∶ ３０－１８ ∶ ３０)ꎮ
１􀆰 ２　 激素处理
ＳＡ溶解在水中配制成 １００ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１浓度的母液ꎬ 用
ＫＯＨ调至 ｐＨ６􀆰 ５ꎬ 将 ＳＡ母液稀释为 ２ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１的浓度
用来喷施植株ꎮ 用 ５０％的乙醇先溶解茉莉酸甲酯 (Ｍｅ￣
ＪＡ) 配制成 １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１的母液ꎬ 将母液稀释为 １００ μｍｏｌ
􀅰Ｌ－１的浓度来喷施植物ꎮ 氨基环丙烷羧酸 (Ａｍｉｎｏｃｙｃｌｏ￣
ｐｒｏｐａｎｅ￣１￣ｃａｒｂｏｘｙｌｉｃ ａｃｉｄꎬ ＡＣＣ) (乙烯的前体) 溶解在水
８７５　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
溶液中ꎬ 用 ２ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１的 ＡＣＣ喷施植株ꎮ 处理所用的植
株均为 ４周大的幼苗ꎮ
１􀆰 ３　 ＲＴ￣ＰＣＲ
用 Ｔｒｉｚｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ (Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＵＳＡ) 法提取拟南芥野
生型和转基因拟南芥的 ＲＮＡꎬ 并经 ＤＮａｓｅＩ (Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ)
消化处理后进行 ＲＴ￣ＰＣＲ实验ꎮ 用 Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ( Ｉｎｖｉｔｒｏ￣
ｇｅｎꎬ ＵＳＡ) 反转录试剂盒进行实验ꎬ 反转录总体积为 ２０
μＬꎬ 包含 ２ μｇ的总 ＲＮＡꎮ 然后取 １ μＬ 用作 ＰＣＲ 模板ꎻ
ＡＣＴＩＮ２作为内参基因ꎻ ＰＣＲ 循环数基于预实验ꎬ 选择
适宜的次数ꎻ 每组 ＲＴ￣ＰＣＲ 重复 ３ 次以上ꎻ ＰＣＲ 选用
Ｔａｇ ＤＮＡ聚合酶 (ＴａＫａＲａ￣Ｂｉｏ)ꎮ 用于 ＲＴ￣ＰＣＲ 的引物分
别为: ＡｔＷＲＫＹ７１: ５′－ＡＣＡＴＣＴＡＣＴＡＧＴＣＣＡＣＣＧＴＧＧＴＧ－
３′和 ５′ － ＧＡＴＡＣＧＡＴＣＴＡＴＡＧＴＡＣＧＴＡＣＡＴＡＣＣＣＣＴＣ － ３′ꎻ
ＡＣＴＩＮ２: ５′ － ＴＧＴＧＣＣＡＡＴＣＴＡＣＧＡＧＧＧＴＴＴ － ３′ 和 ５′ －
ＴＴＴＣＣＣＧＣＴＣＴＧＣＴＧＴＴＧＴ－３′ꎮ
１􀆰 ４　 ｑＲＴ￣ＰＣＲ
用 ＰｓｔＤＣ３０００ (ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ０００ １) 处理 ＷＴ和 ３５Ｓ ∶ Ａｔ￣
ＷＲＫＹ７１ꎬ 收集ＷＴ 和 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１ 经侵染 ０ ｄꎬ １ ｄ
和 ２ ｄ的叶片ꎬ 用 Ｔｒｉｚｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ ( Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＵＳＡ) 法提
取总 ＲＮＡꎬ 并进行 ＤＮａｓｅⅠ消化ꎬ 用来进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ分
析ꎮ 用 Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ( Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＵＳＡ) 反转录试剂盒进
行实验ꎬ 反转录总体积为 ２０ μＬꎬ 包含 ２ μｇ 的总 ＲＮＡꎬ
然后取 １ μＬ用来进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ实验ꎻ ＡＣＴＩＮ２ 作为内参
基因ꎮ 定量 ＰＣＲ 的反应体系 ( ２０ μＬ): １０ μＬ ＳＹＢＲ
Ｇｒｅｅｎ Ｉ反应混合物ꎬ 蒸馏水 ８ μＬꎬ 每条引物各 ０􀆰 ５ μＬ
和 １ μＬ ｃＤＮＡꎮ 退火温度为 ５０ ℃ꎬ 在 Ｒｏｃｈｅ ＬｉｇｈｔＣｙｃｌｅｒ
４８０ ｒｅａｌ￣ｔｉｍｅ ＰＣＲ 仪上进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ 实验ꎮ 整个 ｑＲＴ￣
ＰＣＲ实验用不同的 ＲＮＡ 样品重复 ３ 次ꎮ 用于 ｑＲＴ￣ＰＣＲ
的引物分别为: ＡＣＴＩＮ２: ５′－ＴＧＴＧＣＣＡＡＴＣＴＡＣＧＡＧＧＧ￣
ＴＴＴ－ ３′和 ５′ － ＴＴＴＣＣＣＧＣＴＣＴＧＣＴＧＴＴＧＴ － ３′ꎻ ＰＲ１: ５′ －
ＧＣＡＧＣＣＴＡＴＧＣＴＣＧＧＡＧＣＴＡＣ－３′和 ５′－ＴＣＣＡＴＴＧＣＡＣＧＴ￣
ＧＴＴＣＧＣＡＧＣ－３′ꎬ ＰＲ２: ５′－ＣＧＣＣＣＡＧＴＣＣＡＣＴＧＴＴＧＡＴＡ－
３′和 ５′－ＧＧＴＣＴＣＣＧＡＣＡＣＣＡＣＧＡＴＴＴ－ ３′ꎬ ＰＲ５: ５′－ＴＧ￣
ＣＡＡＧＡＧＴＧＣＣＴＧＴＧＡＧＡＧ － ３′和 ５′ － ＴＣＣＧＧＴＡＣＡＡＧＴ￣
ＧＡＡＧＧＴＧＣ－３′ꎮ
１􀆰 ５　 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ
ＲＮＡ提取采用 Ｔｒｉｚｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ ( Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎꎬ ＵＳＡ) 法ꎮ
使用 １􀆰 ５％甲醛￣ＭＯＰＳ 琼脂糖凝胶分离大约 ２０ μｇ 的
ＲＮＡ后ꎬ 转移到尼龙膜上ꎮ 杂交温度为 ６８ ℃ꎻ 杂交液
选用 ＰｅｒｆｅｃｔＨｙｂ Ｐｌｕｓ Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ Ｂｕｆｆｅｒ ( Ｓｉｇｍａ)ꎮ 探针
通过 ｋｌｅｎｏｗ ｆｒａｇｍｅｎｔ ( Ｔａｋａｒａ) 进行３２ Ｐ￣ｄＡＴＰ 标记ꎮ 洗
膜: ２ × ＳＳＣ 和 ０􀆰 ５％ ＳＤＳ １ 次ꎬ 每次 １０ ｍｉｎꎻ ０􀆰 ５ × ＳＳＣ
和 ０􀆰 １％ ＳＤＳ ２次ꎬ 每次 ２０ ｍｉｎꎻ ０􀆰 １ × ＳＳＣ和 ０􀆰 １％ ＳＤＳ
１次ꎬ 每次 ２０ ｍｉｎꎬ 最后压片放射自显影ꎮ
１􀆰 ６　 ＡｔＷＲＫＹ７１过表达植株构建
通过 ＰＣＲ 扩增出 ＡｔＷＲＫＹ７１ 基因组 ＤＮＡ 序列ꎬ 在
３５Ｓ强启动子下将其克隆到 ｐＯＣＡ３０ 载体上 ( Ｃｈｅｎ 和
Ｃｈｅｎꎬ ２００２)ꎬ 从而得到 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１过表达转基因植
株ꎮ 农杆菌转化按照 Ｃｌｏｕｇｈ 和 Ｂｅｎｔ (１９９８) 的花序浸染
法操作ꎮ 收到的转基因拟南芥种子用含 ５０ μｇ􀅰ｍＬ－１ ｋａ￣
ｎａｍｙｃｉｎ的 １ / ２ ＭＳ板进行筛选ꎬ 筛选到的种子进行 ８ ｄ
的萌发实验后被移植到土中生长ꎮ 提取 ４ 周大的 ＷＴ 和
转基因拟南芥植株的总 ＲＮＡ 进行 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ 实验ꎬ
筛选到组成型表达 ＡｔＷＲＫＹ７１的 ６个株系ꎮ 根据 Ｔ１代在
卡那霉素筛选板上出现的筛选比例 (３ ∶１) 确定 Ｌ３和 Ｌ５
这两株系为单拷贝插入的转基因株系ꎬ 并作为后续实验
的材料ꎮ
１􀆰 ７　 ＰｓｔＤＣ３０００处理
挑单菌落到 ５０ ｍＬ ｋｉｎｇ’ｓ培养液 (已加抗生素)ꎬ ２８ ℃
摇床过夜ꎮ 离心ꎬ 收集细菌ꎬ 然后用 １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２
稀释至 ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ５ꎬ 再用 １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ
－１ ＭｇＣｌ２稀释 ５０００倍
(ＯＤ６００ ＝ ０. ０００１)ꎮ 选取有 ６ ~ ８ 片叶的植株ꎬ 手指贴近
叶面ꎬ 用注射器从叶背面打入叶内ꎮ 收集叶片加 １ ｍＬ １０
ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２研磨ꎬ 取叶片提取物涂在含 ｒｉｆａｍｐｉｃｉｎ
(１００ μｇ􀅰ｍＬ－１) 和 ｋａｎａｍｙｃｉｎ (２５ μｇ􀅰ｍＬ－１) 的 Ｋｉｎｇ’ｓ Ｂ
板上ꎬ ２５ ℃避光培养 ２ ｄ后统计菌落数目ꎮ
２　 结果与分析
２􀆰 １　 ＡｔＷＲＫＹ７１的蛋白结构
ＡｔＷＲＫＹ７１ (ＡＴ１ｇ２９８６０) 的蛋白由 ２８３ 个氨
基酸组成ꎬ 其分子量为 ３１ ９５５􀆰 ２ Ｄａꎬ 等电点为
７􀆰 ４９５ ３ꎮ 序列分析表明ꎬ ＷＲＫＹ７１ 蛋白含有一
个高度保守的 ＤＮＡ结合域 (ＷＲＫＹ ｄｏｍａｉｎ)ꎬ 因
此被认为是 ｇｒｏｕｐ ＩＩ ＷＲＫＹ蛋白中的一员 (图 １)
(Ｅｕｌｇｅｍ等ꎬ ２０００)ꎮ
２􀆰 ２　 ＡｔＷＲＫＹ７１的表达谱分析
为了了解 ＡｔＷＲＫＹ７１的生物学功能ꎬ 我们首
先分析了 ＡｔＷＲＫＹ７１在不同组织器官及发育阶段
的表达谱ꎮ ＲＴ￣ＰＣＲ的结果表明ꎬ 在约 １２周大的
ＷＴ植株的不同组织器官中ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１在根中的
表达量最高ꎮ 同时ꎬ 在 ８ ｄ 龄幼苗中 ＡｔＷＲＫＹ７１
的表达量要高于 １４ ｄ龄的幼苗 (图 ２: Ａ)ꎮ 为了
证实 ＡｔＷＲＫＹ７１在植物基础抗性方面的功能ꎬ 我
们探究了其在不同处理条件下的表达谱ꎮ 如图
２Ｂ所示ꎬ 与对照相比ꎬ 在注射 ＰｓｔＤＣ３０００ 侵染
植株 １ ｄꎬ ２ ｄ 和 ３ ｄ 后ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１ 受到强烈的
诱导表达ꎮ 除此之外ꎬ 我们还分析了水杨酸 (Ｓａ￣
ｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄꎬ ＳＡ)ꎬ 乙烯 (ｅｔｈｙｌｅｎｅꎬ ＥＴ) 和茉莉酸
( ｊａｓｍｏｎｉｃ ａｃｉｄꎬ ＪＡ) 处理下ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１ 的表达
９７５５期　 　 　 　 　 　 　 王其娟等: 过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１影响植物对病原菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ的抗性　 　 　 　 　 　 　 　
水平ꎮ 从图 ２Ｃ中我们可以看出ꎬ 在这三种激素
处理后ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１ 的表达都受到诱导ꎮ 以上结
果表明ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１可能在植物的基础抗性方面
发挥重要的功能ꎮ
为了进一步证实 ＡｔＷＲＫＹ７１的表达是否受 ＳＡꎬ
ＥＴ和 (或) ＪＡ等信号转导途径或生物合成途径
的影响ꎬ 我们检测了 ＡｔＷＲＫＹ７１ 在以上途径下不
同突变体中的表达水平ꎮ 和 ＷＴ 相比ꎬ 在 ＳＡ 信
号转导和生物合成突变体 ｎｐｒ１￣３ 和 ｓｉｄ２ 中ꎬ Ａｔ￣
ＷＲＫＹ７１的表达受到轻微的抑制 (图 ３) ( Ｃａｏ
等ꎬ １９９７ꎻ Ｗｉｌｄｅｒｍｕｔｈ 等ꎬ ２００１)ꎮ 在 ＥＴ 不敏感
突变体 ｅｉｎ２￣１ (Ｘｉｅ 等ꎬ １９９８) 中ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１ 的
转录水平要高于其在ＷＴ 中的水平 (图 ３)ꎮ 在 ＪＡ
不敏感突变体 ｃｏｉ１￣１ (Ａｌｏｎｓｏ 等ꎬ １９９９) 中ꎬ Ａｔ￣
ＷＲＫＹ７１的表达受到显著的诱导 (图 ３)ꎮ 这些结
果表明ꎬ 在 ＰｓｔＤＣ３０００ 侵染时 ＡｔＷＲＫＹ７１ 的表达
受到 ＳＡ信号途径的正调节ꎬ 而受到 ＥＴ和 ＪＡ信
号途径的负调节ꎮ
图 １　 ＡｔＷＲＫＹ７１的氨基酸序列分析
横线标示的为保守的 ＷＲＫＹＧＱＫ结构域和 Ｃ２Ｈ２锌指结构
Ｆｉｇ􀆰 １　 Ａｍｉｎｏ ａｃｉｄ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１
Ｔｈｅ ｈｉｇｈｌｙ ｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ＷＲＫＹＧＱＫ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｄｕｅｓ ｆｏｒｍｉｎｇ ｔｈｅ Ｃ２Ｈ２ ｚｉｎｃ ｆｉｎｇｅｒｓ ａｒｅ ｕｎｄｅｒｌｉｎｅｄ
图 ２　 ＡｔＷＲＫＹ７１的表达谱分析
Ａ. ＡｔＷＲＫＹ７１在不同的组织器官及发育阶段的表达谱分析ꎮ 收集约 １２周大的 ＷＴ植株的根、 莲座叶、 茎生叶、 茎、 花、 角果及 ８ ｄ
和 １４ ｄ龄的幼苗并提取总 ＲＮＡꎬ 以 ＡＣＴＩＮ２作为内参基因ꎬ 实验重复 ３次ꎮ ＲＴ￣ＰＣＲ 的结果表明 ＡｔＷＲＫＹ７１ 在根中表达最强ꎻ Ｂ. 病
原菌处理后 ＡｔＷＲＫＹ７１的表达谱分析ꎬ 将 １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２ 或 ＰｓｔＤＣ３０００ (ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ０００１ ｉｎ １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２) 注射到 ５周大的
ＷＴ幼苗中ꎬ 然后收集叶片ꎬ 提取 ＲＮＡꎬ 并进行 ＲＴ￣ＰＣＲ分析ꎻ Ｃ. 激素处理后 ＡｔＷＲＫＹ７１的表达谱分析ꎬ 分别用 ＳＡ (１ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１)ꎬ
ＡＣＣ (０􀆰 １ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１) 和 ＭｅＪＡ (０􀆰 １ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１) 处理 ４周大的 ＷＴ幼苗ꎬ 然后收集叶片ꎬ 提取 ＲＮＡꎬ 并进行 ＲＴ￣ＰＣＲ分析
Ｆｉｇ􀆰 ２　 Ｔｉｓｓｕｅ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｄ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｇｅｎｅ
Ａ. ＡｔＷＲＫＹ７１ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｖａｒｉｏｕｓ ｐｌａｎｔ ｏｒｇａｎｓ ａｎｄ ａｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌ ｓｔａｇｅｓ. ＲＴ￣ＰＣＲ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ｗｉｔｈ ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ
ｒｏｏｔｓꎬ ｒｏｓｅｔｔｅ ｌｅａｖｅｓꎬ ｃａｕｌｉｎｅ ｌｅａｖｅｓꎬ ｓｔｅｍꎬ ｆｌｏｗｅｒｓꎬ ｓｉｌｉｑｕｅｓ ｏｆ ａｂｏｕｔ １２ｗ ｏｌｄ ＷＴ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ ８ ｄ ｏｒ １４ ｄ ｏｌｄ ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ. Ｔｈｅ Ａｃｔｉｎ２ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ
ａｓ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ ｆｏｒ ａｎ ｅｑｕａｌ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ｃＤＮＡ. Ｔｈｅ ｄａｔａ ｐｒｅｓｅｎｔｅｄ ａｒｅ ｔｈｅ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｒｅｓｕｌｔ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ｔｈｒｅｅ ｒｅｐｌｉｃａｔｅｓꎻ Ｂ. Ｔｉｍｅ
ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１ ａｆｔｅｒ ｍｏｃｋ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ. Ｆｉｖｅ￣ｗｅｅｋ￣ｏｌｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｐｌａｎｔｓ (Ｃｏｌ￣０) ｗｅｒｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ １０ ｍｍｏｌ
􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２ ｏｒ ＰｓｔＤＣ３０００ (ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ０００１ ｉｎ１０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２). Ｔｈｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｉｍｅｓ ａｆｔｅｒ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ
ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ. ＲＴ￣ＰＣＲ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｓ ｉｎ Ａꎻ Ｃ. Ｔｉｍｅ ｃｏｕｒｓｅ ｏｆ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１ ａｆｔｅｒ ｃｈｅｍｉｃａｌ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ. Ｆｏｕｒ￣ｗｅｅｋ￣ｏｌｄ ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ
(Ｃｏｌ￣０) ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｔｒｅａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＳＡ (１ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１)ꎬ ＡＣＣ (０􀆰 １ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１)ꎬ ｏｒ ＭｅＪＡ (０􀆰 １ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１) . Ｌｅａｆ ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎꎬ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ
ＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｓ ｉｎ Ａ
０８５　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
图 ３　 ＡｔＷＲＫＹ７１在 ｓｉｄ２ꎬ ｎｐｒ１ꎬ ｅｉｎ２和 ｃｏｉ１突变体中的表达分析
将 ＰｓｔＤＣ３０００ (ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ０００１ ｉｎ １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２) 注射到 ５周大的 ＷＴꎬ ｓｉｄ２ꎬ ｎｐｒ１ꎬ ｅｉｎ２及 ｃｏｉ１
突变体中ꎬ 然后收集叶片ꎬ 提取 ＲＮＡꎬ 并进行 ＲＴ￣ＰＣＲ分析
Ｆｉｇ􀆰 ３　 Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｉｎ ｄｅｆｅｎｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｍｕｔａｎｔｓ ｉｎｆｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰｓｔＤＣ３０００
Ｆｉｖｅ￣ｗｅｅｋ￣ｏｌｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｗｉｌｄｔｙｐｅ (Ｃｏｌ￣０)ꎬ ｓｉｄ２ꎬ ｎｐｒ１ꎬ ｅｉｎ２ ａｎｄ ｃｏｉ１ ｍｕｔａｎｔ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰｓｔＤＣ３０００
(ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ０００１ ｉｎ １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２) . Ｔｈｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｗｅｒｅ ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ ａｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｉｍｅｓ ａｆｔｅｒ
ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｆｏｒ ＲＮＡ ｉｓｏｌａｔｉｏｎ. ＲＴ￣ＰＣＲ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｓ ｉｎ Ｆｉｇ􀆰 ２Ａ
２􀆰 ３　 ＡｔＷＲＫＹ７１过表达转基因拟南芥植株的构建
为了进一步探究 ＡｔＷＲＫＹ７１ 的分子生物学功
能ꎬ 我们构建了 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１过表达载体ꎬ 并
通过花絮浸泡法获得了转基因拟南芥植株ꎮ 根据
Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ的结果我们筛选到几株组成型表
达 ＡｔＷＲＫＹ７１的转基因拟南芥植株 (图 ４: Ａ)ꎮ
与 ＷＴ相比ꎬ 这些转基因植株生长稍微变缓且叶
片出现锯齿状 (图 ４: Ｂ)ꎮ 这些转基因拟南芥植
株的表型与之前报道的且受病原菌诱导表达的
ＡｔＷＲＫＹ８ꎬ ＡｔＷＲＫＹ１８ 和 ＡｔＷＲＫＹ４８ 的转基因植
株的表型类似 (Ｃｈｅｎ和 Ｃｈｅｎꎬ ２００２ꎻ Ｘｉｎｇ等ꎬ ２００８ꎻ
Ｃｈｅｎ等ꎬ ２０１０)ꎮ 由于 Ｌ３和 Ｌ５ 这两个转基因株
系中只含有一个 Ｔ￣ＤＮＡ插入位点ꎬ 因此我们选择
了这两个株系进行接下来的研究工作 (图 ４: Ａꎬ
Ｌｉｎｅ３和 Ｌｉｎｅ５)ꎮ
２􀆰 ４　 过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１降低了植株对 ＰｓｔＤＣ３０００
的耐受性
为了检测 ＡｔＷＲＫＹ７１在抗病方面的功能ꎬ 我
们比较分析了ＷＴ和 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１过表达植株
在 ＰｓｔＤＣ３０００侵染后的生长状况ꎮ 实验选取 ５ 周
大的幼苗ꎬ 用注射器将 ＰｓｔＤＣ３０００ 从叶背面打
入ꎮ 从图 ５Ａ中我们可以看出ꎬ 与 ＷＴ 相比ꎬ Ａｔ￣
ＷＲＫＹ７１过表达植株中 ＰｓｔＤＣ３０００ 的生长量增加
了 ７到 １１倍ꎮ 表型方面ꎬ 用 ＰｓｔＤＣ３０００ 侵染 Ａｔ￣
ＷＲＫＹ７１过表达植株后ꎬ 转基因拟南芥植株表现
出更为严重的感病表型ꎬ 如叶片更黄且萎蔫等
(图 ５: Ｂ)ꎮ 以上研究表明ꎬ 过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１降
低了植株对 ＰｓｔＤＣ３０００的耐受性ꎮ
２􀆰 ５　 ＡｔＷＲＫＹ７１抑制 ＰＲ基因的表达
ＳＡ调节的抗病信号转导途径在抵御 Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎ￣
ｇａｅ的侵染方面发挥了重要的功能ꎬ 而此机制与
多个病程相关基因 (ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅꎬ ＰＲ)
的表达有关ꎬ 如 ＰＲ１ (Ａｔ２ｇ１４６１０)ꎬ ＰＲ２ (Ａｔ３ｇ５７２６０)
和 ＰＲ５ (Ａｔ１ｇ７５０４０) (Ｌｉ等ꎬ ２００４)ꎮ 此外ꎬ 先前
的研究还表明 ＰＲ１可作为系统获得性抗病机制
图 ４　 ＡｔＷＲＫＹ７１高表达转基因植株的构建及表型分析
Ａ. ＡｔＷＲＫＹ７１在 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１植株中的表达ꎮ 提取 ４周大的
ＷＴ和转基因拟南芥植株总 ＲＮＡ进行 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔｔｉｎｇ实验ꎻ
Ｂ. ３０ ｄ龄的 ＷＴꎬ ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１ ∶ Ｌ３及 ３５Ｓ ∶
ＡｔＷＲＫＹ７１ ∶ Ｌ５幼苗的表型分析
Ｆｉｇ􀆰 ４　 Ｏｖｅｒ￣ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｌｉｎｅｓ ｆｏｒ ＡｔＷＲＫＹ７１
Ａ. ＡｔＷＲＫＹ７１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｉｎ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ. Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ ４￣ｗｅｅｋ￣ｏｌｄ ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ (Ｃｏｌ￣０) ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ ａｎｄ
ｐｒｏｂｅｄ ｗｉｔｈ ａ ＡｔＷＲＫＹ７１￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｐｒｏｂｅ. Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｌｉｎｅｓ
３ ａｎｄ ５ ｃｏｎｔａｉｎｅｄ ａ ｓｉｎｇｌｅ Ｔ￣ＤＮＡ ｉｎｓｅｒｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｇｅｎｏｍｅ ａｎｄ ｅｘｈｉｂｉ￣
ｔｅｄ ｓｔａｂｌｅ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ. Ｔｈｅ Ｆ３ ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ ｐｒｏｇｅｎｙ ｐｌａｎｔｓ
ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｔｈｅ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｓｔｕｄｙꎻ Ｂ. Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ ｏｆ ｒｅｐｒｅ￣
ｓｅｎｔａｔｉｖｅ ３０￣ｄ￣ｏｌｄ ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ ( Ｃｏｌ￣０) ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔ ｌｉｎｅｓ ３
(Ｌ３) ａｎｄ ５ (Ｌ５) ｏｖｅｒ￣ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ＡｔＷＲＫＹ７１
１８５５期　 　 　 　 　 　 　 王其娟等: 过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１影响植物对病原菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ的抗性　 　 　 　 　 　 　 　
(Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ａｃｑｕｉｒｅｄ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅꎬ ＳＡＲ) 一个可靠的
ｍａｒｋｅｒ基因ꎮ 因此ꎬ 我们比较分析了这些 ＰＲ 基
因在 ＰｓｔＤＣ３０００侵染 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１转基因植株
和 ＷＴ后的表达差异ꎮ 和抗病表型一致ꎬ 与 ＷＴ
图 ５　 高表达 ＡｔＷＲＫＹ７１影响植株对 ＰｓｔＤＣ３０００的响应
Ａ. 细菌生长统计分析ꎮ 用悬浮于 １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２ ＯＤ６００ ＝
０􀆰 ０００１的 ＰｓｔＤＣ３０００注射 ＷＴ和高表达植株ꎬ 三天后收集样品
来确定细菌的生长ꎮ 每个株系取 ６~ ８株ꎻ Ｂ. 发病症状分析ꎮ 用
ＰｓｔＤＣ３０００接种ＷＴꎬ ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１∶ Ｌ３及 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１∶ Ｌ５叶
片ꎬ 三天后拍照
Ｆｉｇ􀆰 ５　 Ａｌｔｅｒｅｄ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１
ｐｌａｎｔｓ ｔｏ ＰｓｔＤＣ３０００
Ａ. Ａｌｔｅｒｅｄ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｇｒｏｗｔｈ. Ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ ( Ｃｏｌ￣０) ａｎｄ ｏｖｅｒ￣ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｗｅｒｅ ｉｎｆｉｌｔｒａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｏｆ ＰｓｔＤＣ３０００
(ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ０００１ ｉｎ １０ ｍｍｏｌ􀅰Ｌ－１ ＭｇＣｌ２) . Ｓａｍｐｌｅｓ ｗｅｒｅ ｔａｋｅｎ ａｔ ０
ａｎｄ ３ ｄｐｉ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｇｒｏｗｔｈ ｏｆ ｔｈｅ ｂａｃｔｅｒｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎ. Ｔｈｅ ｍｅａｎｓ
ａｎｄ ｓｔａｎｄａｒｄ ｅｒｒｏｒｓ ｗｅｒｅ ｃａｌｃｕｌａｔｅｄ ｆｒｏｍ ６ － ８ ｐｌａｎｔｓ ｆｏｒ ｅａｃｈ ｔｒｅａｔ￣
ｍｅｎｔ. Ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ Ｄｕｎｃａｎ’ｓ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｒａｎｇｅ ｔｅｓｔ (Ｐ＝ ０􀆰 ０５)ꎬ ｍｅａｎｓ
ｏｆ ｃｏｌｏｎｙ￣ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔｓ ( ｃｆｕ) ｄｏ ｎｏｔ ｄｉｆｆｅｒ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ａｔ ｔｈｅ ｓａｍｅ
ｄｐｉ ｉｆ ｔｈｅｙ ａｒｅ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｓａｍｅ ｌｅｔｔｅｒ. Ｔｈｉｓ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ｗａｓ ｒｅ￣
ｐｅａｔｅｄ ｔｈｒｅｅ ｔｉｍｅｓꎬ ｗｉｔｈ ｓｉｍｉｌａｒ ｒｅｓｕｌｔｓꎻ Ｂ. Ａｌｔｅｒｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｙｍｐｔｏｍ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ. Ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ (Ｃｏｌ￣０) ａｎｄ ｏｖｅｒ￣ｅｘ￣
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｐｌａｎｔｓ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｓ ｉｎ (Ａ). Ｐｉｃｔｕｒｅｓ ｏｆ ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ ｉｎ￣
ｏｃｕｌａｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｔａｋｅｎ ａｔ ３ ｄｐｉ
相比ꎬ ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１ 转基因植株中 ＰＲ１ꎬ ＰＲ２
和 ＰＲ５的转录水平显著降低 (图 ６)ꎮ 这些研究结
果进一步证实了 ＡｔＷＲＫＹ７１ 在植物抵抗 ＰｓｔＤＣ３０００
侵染过程中发挥了负调控的功能ꎮ
图 ６　 ＰＲ基因的表达分析
收集 ＷＴ和 ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１经 ＰｓｔＤＣ３０００ (ＯＤ６００ ＝０􀆰 ０００１) 侵染
０天ꎬ １天和 ２天的叶片ꎬ 提取 ＲＮＡꎬ 并进行 ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析
Ｆｉｇ􀆰 ６　 Ｐａｔｈｏｇｅｎ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
Ｗｉｌｄ￣ｔｙｐｅ (Ｃｏｌ￣０) ａｎｄ ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ３５Ｓ ∶ ＡｔＷＲＫＹ７１ ｐｌａｎｔｓ ｗｅｒｅ ｉｎｏｃｕ￣
ｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ＰｓｔＤＣ３０００ ( ＯＤ６００ ＝ ０􀆰 ０００１) . Ｔｏｔａｌ ＲＮＡ ｗａｓ ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｆｒｏｍ ｉｎｏｃｕｌａｔｅｄ ｌｅａｖｅｓ ｔｈａｔ ｗｅｒｅ ｈａｒｖｅｓｔｅｄ ａｔ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｉｍｅｓ ａｆｔｅｒ ｉｎ￣
ｏｃｕｌａｔｉｏｎ. Ｔｈｅｎ ｑＲＴ￣ＰＣＲ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｐｅｒｆｏｒｍｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ＡＣＴＩＮ２
ｇｅｎｅ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａｎ ｉｎｔｅｒｎａｌ ｃｏｎｔｒｏｌ
２８５　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
３　 讨论
在自然环境中ꎬ 植物的生长发育往往受到各
种逆境胁迫的影响ꎬ 为了在逆境中求得生存ꎬ 植
物往往通过调节自身来适应ꎬ 并在长期的适应过
程中ꎬ 形成了一套以多防线来抵抗环境变化的独
特防御机制ꎬ 包括形态ꎬ 生理或者分子水平上的
改变或调节 (Ｂｏｈｎｅｒｔ等ꎬ １９９５)ꎮ 其中ꎬ 在分子水
平上主要表现为相关基因的转录激活或抑制ꎬ 而
这个过程需要转录调控因子的参与ꎮ ＷＲＫＹ 转
录因子家族是主要存在于植物中的一类超级基
因家族ꎬ 在植物的生长发育 (Ｊｏｈｎｓｏｎ 等ꎬ ２００２ꎻ
Ｌａｇａｃｅ和 Ｍａｔｔｏｎꎬ ２００４ꎻ Ｘｕ 等ꎬ ２００４ꎻ Ｚｈａｎｇ 等ꎬ
２００４ꎻ Ｚｏｕ 等ꎬ ２００４ꎻ Ｘｉｅ 等ꎬ ２００５) 以及应对生
物胁迫方面 (Ｅｕｌｇｅｍ 等ꎬ ２０００ꎻ Ｅｕｌｇｅｍ 和 Ｓｏｍｓ￣
ｓｉｃｈꎬ ２００７) 发挥了重要的作用ꎮ 如 ＡｔＷＲＫＹ７０介
导了茉莉酸及水杨酸信号的选择与平衡ꎬ 表现为
激活水杨酸相关反应基因的表达ꎬ 而抑制茉莉酸
相关响应基因的表达ꎮ ＡｔＷＲＫＹ７０ 的高表达植株
中茉莉酸响应基因 ＰＤＦ１􀆰 ２ 的表达受到抑制ꎬ 结
果表现为植物对 Ｂｏｔｒｙｔｉｓ ｃｉｎｅｒｅａ 和 Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ ｂｒａｓ￣
ｓｉｃｉｃｏｌａ等病原菌的抗性降低 (Ｌｉ 等ꎬ ２００４)ꎮ Ａｔ￣
ＷＲＫＹ３和 ＡｔＷＲＫＹ４ 在植物应对 Ｂ􀆰 ｃｉｎｅｒｅａ 的调控
过程中发挥了正调的作用ꎬ 而 ＡｔＷＲＫＹ４在植物响
应 ＰｓｔＤＣ３０００侵染的过程中发挥了负调的功能
(Ｌａｉ 等ꎬ ２００８)ꎮ ＡｔＷＲＫＹ８ 则通过介导脱落酸
(ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄꎬ ＡＢＡ) 和乙烯 (ＥＴ) 信号参与了
十字花科感染烟草花叶病毒 (ＴＭＶ￣ｃｇ) 的防御反
应 (Ｃｈｅｎ等ꎬ ２０１３)ꎮ ＷＲＫＹ 转录因子家族成员
除了参与调控真菌、 细菌、 病毒等生物胁迫反应
外ꎬ 还参与调控了其他生物胁迫过程ꎮ 研究表明
ＡｔＷＲＫＹ２３在线虫叮咬的早期诱导表达ꎬ 而其高
抑制植株中线虫叮咬程度变弱 (Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ 等ꎬ
２００８)ꎮ 在本研究中ꎬ 我们检测了 ＡｔＷＲＫＹ７１的基
础表达以及不同处理条件下的诱导表达情况ꎮ 结
果显示ꎬ ＡｔＷＲＫＹ７１ 在根中的表达最为强烈ꎻ Ａｔ￣
ＷＲＫＹ７１受 ＳＡꎬ ＥＴ和 ＪＡ等植物激素的诱导表达ꎻ
同时 ＡｔＷＲＫＹ７１ 也受 ＰｓｔＤＣ３０００ 侵染强烈诱导表
达 (图 ２)ꎮ 这些研究结果意味着 ＡｔＷＲＫＹ７１ 可能
在植物的基础抗病方面发挥着重要的调控功能ꎮ
目前大量的研究表明ꎬ 植物在受到病原菌的
侵害时会激活各种与抗病相关的信号转导途径ꎮ
其中ꎬ ＳＡ抗病信号转导途径主要参与了对活体
营养型病原菌的抵抗以及 ＳＡＲ ( Ｓｙｓｔｅｍｉｃ Ａｃ￣
ｑｕｉｒｅｄ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ) 的建立ꎮ Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ 在侵染植
物的初始阶段是活体营养型ꎬ 但在侵染的后阶段
就变成了死体营养型ꎬ 因此它是一种半活体营养
型的病原菌ꎮ 已有研究证实 ＳＡ 信号途径在限制
Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ的生长方面发挥了重要的作用ꎬ 例如
在与 ＳＡ生物合成或信号转导途径相关的突变体
中 (ｅｄｓ１ꎬ ｐａｄ４ꎬ ｅｄｓ５ꎬ ｓｉｄ２ꎬ ｎｐｒ１) Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ 的
生长量增加 ( Ｇｌａｚｅｂｒｏｏｋ 等ꎬ １９９６ꎻ Ｒｏｇｅｒｓ 和
Ａｕｓｕｂｅｌꎬ １９９７ꎻ Ａａｒｔｓ 等ꎬ １９９８ꎻ Ｚｈｏｕ 等ꎬ １９９８ꎻ
Ｎａｗｒａｔｈ和 Ｍｅｔｒａｕｘꎬ １９９９)ꎬ 而组成型表达 ＳＡ的
突变体ꎬ 如 ａｃｄ６ ( ａｃｃｅｌｅｒａｔｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ６) 和
ａｇｄ２ ( ａｂｅｒｒａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ ｄｅａｔｈ ２) ( Ｒａｔｅ 等ꎬ
１９９９ꎻ Ｒａｔｅ 和 Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇꎬ ２００１)ꎬ 则增强了对
Ｐ􀆰 ｓｙｒｉｎｇａｅ的耐受性ꎮ 我们的研究证实过表达 Ａｔ￣
ＷＲＫＹ７１增强了植株对 ＰｓｔＤＣ３０００ 的敏感性ꎬ 表
现在细菌数量的增加以及植株感病症状的增强
(图 ５: Ａꎬ Ｂ)ꎮ 与 ＡｔＷＲＫＹ８ꎬ ＡｔＷＲＫＹ１８ 和 Ａｔ￣
ＷＲＫＹ４８等过表达植株表型类似 (Ｃｈｅｎ 和 Ｃｈｅｎꎬ
２００２ꎻ Ｘｉｎｇ等ꎬ ２００８)ꎬ 过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１也使植
株生长发育变缓且出现锯齿状叶片 (图 ４: Ｂ)ꎮ
但不同于 ＡｔＷＲＫＹ１８ 的过表达植株ꎬ ＡｔＷＲＫＹ８ꎬ
ＡｔＷＲＫＹ４８和 ＡｔＷＲＫＹ７１ 的过表达株系表现出对
ＰｓｔＤＣ３０００的不耐受性ꎮ 同时ꎬ 我们还发现 ３ 个
和 ＳＡ抗病信号转导途径相关的 ＰＲ 基因 (ＰＲ１ꎬ
ＰＲ２ꎬ ＰＲ５)ꎬ 在 ＡｔＷＲＫＹ７１过表达植株中的转录
水平也比 ＷＴ 中要低 (图 ６)ꎮ 因此ꎬ 我们的研
究结果证实 ＡｔＷＲＫＹ７１ 在 ＳＡ 调节的抗病信号转
导途径中发挥了负调控的功能ꎮ
为了进一步研究 ＡｔＷＲＫＹ７１的功能ꎬ我们也尝
试构建了 ＡｔＷＲＫＹ７１￣ＲＮＡｉ 转基因植株ꎬ 但通过比
较研究发现其在抗病方面与 ＷＴ 相比没有什么区
别 (ｄａｔａ ｎｏｔ ｓｈｏｗｎ)ꎬ 这可能是因为 ＡｔＷＲＫＹ７１在
ＡｔＷＲＫＹ７１￣ＲＮＡｉ转基因植株中的表达没有被完全
抑制ꎬ 也可能是由于 ＷＲＫＹ 基因家族成员之间存
在功能冗余ꎮ 因此ꎬ 未来如有可能获得 ＡｔＷＲＫＹ７１
完全缺失的突变体ꎬ 仍有必要进一步检测其在基
础抗病性方面的功能ꎮ 同时也可以进一步深入研
究 ＡｔＷＲＫＹ７１ 在植物基础抗病性方面的分子机
制ꎬ 如寻找 ＡｔＷＲＫＹ７１ 的下游直接调控靶基因
及其相互作用蛋白等ꎬ 相信这些工作有助于详细
解析 ＡｔＷＲＫＹ７１ 在植物基础抗病性方面的功能ꎮ
３８５５期　 　 　 　 　 　 　 王其娟等: 过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１影响植物对病原菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ的抗性　 　 　 　 　 　 　 　
总之ꎬ 我们的研究证实了 ＡｔＷＲＫＹ７１ 参与了植物
的抗病反应ꎬ 进一步完善了 ＷＲＫＹ基因家族在调
控植物基础抗病性方面的功能ꎮ
〔参　 考　 文　 献〕
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ｇｅｎｅ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] . Ｐｒｏｃｅｅｄ￣
ｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＵＳＡꎬ ９５: １０３０６—１０３１１
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ｐｒｏｔｅｉｎ ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎｋｙｒｉｎ ｒｅｐｅａｔｓ [Ｊ] . Ｃｅｌｌꎬ ８８: ５７—６３
Ｃｈｅｎ ＣＨꎬ Ｃｈｅｎ ＺＸꎬ ２０００. Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｗｏ
ｐａｔｈｏｇｅｎ￣ ａｎｄ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ｇｅｎｅｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ＷＲＫＹ
ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ ｔｏｂａｃｃｏ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏ￣
ｇｙꎬ ４２: ３８７—３９６
Ｃｈｅｎ ＣＨꎬ Ｃｈｅｎ ＺＸꎬ ２００２. Ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｄ
ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｂｙ ＡｔＷＲＫＹ１８ꎬ ａ ｐａｔｈｏｇｅｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｒａ￣
ｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ [ Ｊ ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ １２９:
７０６—７１６
Ｃｈｅｎ ＬＧꎬ Ｚｈａｎｇ ＬＰꎬ Ｌｉ ＤＢ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０１３. ＷＲＫＹ８ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ＴＭＶ￣ｃｇ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｂｙ ｍｅｄｉａｔｉｎｇ ｂｏｔｈ ａｂ￣
ｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ ｅｔｈｙｌｅｎｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] . Ｐｒｏｃｅｅｄ￣
ｉｎｇｓ ｏｆ ｔｈｅ Ｎａｔｉｏｎａｌ Ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ ＵＳＡꎬ １１０: Ｅ１９６３—
Ｅ１９７１
Ｃｈｅｎ ＬＧꎬ Ｚｈａｎｇ ＬＰꎬ Ｙｕ ＤＱꎬ ２０１０. Ｗｏｕｎｄｉｎｇ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ＷＲＫＹ８ ｉｓ
ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｂａｓａｌ ｄｅｆｅｎｓｅ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣
Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ ２３: ５５８—５６５
Ｃｌｏｕｇｈ ＳＪꎬ Ｂｅｎｔ ＡＦꎬ １９９８. Ｆｌｏｒａｌ ｄｉｐ: ａ ｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ
Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉａｎａ
[Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ １６: ７３５—７４３
Ｄｅｌｌａｇｉ Ａꎬ Ｈｅｉｌｂｒｏｎｎ Ｊꎬ Ａｖｒｏｖａ ＡＯ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０００. Ａ ｐｏｔａｔｏ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏ￣
ｄｉｎｇ ａ ＷＲＫＹ￣ｌｉｋｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｉｎ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ
ｗｉｔｈ Ｅｒｗｉｎｉａ ｃａｒｏｔｏｖｏｒａ ｓｕｂｓｐ ａｔｒｏｓｅｐｔｉｃａ ａｎｄ Ｐｈｙｔｏｐｈｔｈｏｒａ ｉｎｆｅｓ￣
ｔａｎｓ ａｎｄ ｉｓ ｃｏｒｅｇｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｃｌａｓｓ Ｉ ｅｎｄｏｃｈｉｔｉｎａｓｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ [Ｊ] .
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓꎬ １３: １０９２—１１０１
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[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ５１: ２１—３７
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ｍｅｎｔ ｏｆ ａｎ ｅａｒｌｙ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ＭＡＰ ｋｉｎａｓｅ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉ￣
ｏｌｏｇｙꎬ ５５: １—１５
Ｅｕｌｇｅｍ Ｔꎬ Ｒｕｓｈｔｏｎ ＰＪꎬ Ｒｏｂａｔｚｅｋ Ｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０００. Ｔｈｅ ＷＲＫＹ ｓｕｐｅｒ￣
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Ｅｕｌｇｅｍ Ｔꎬ Ｒｕｓｈｔｏｎ ＰＪꎬ Ｓｃｈｍｅｌｚｅｒ Ｅ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９９. Ｅａｒｌｙ ｎｕｃｌｅａｒ ｅ￣
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ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ [Ｊ] . Ｅｍｂｏ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ １８: ４６８９—４６９９
Ｅｕｌｇｅｍ Ｔꎬ Ｓｏｍｓｓｉｃｈ ＩＥꎬ ２００７. Ｎｅｔｗｏｒｋｓ ｏｆ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃ￣
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ｉｎｇ [Ｊ] . Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ １４３: ９７３—９８２
Ｇｒｕｎｅｗａｌｄ Ｗꎬ Ｋａｒｉｍｉ Ｍꎬ Ｗｉｅｃｚｏｒｅｋ Ｋ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８. Ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ Ａｔ￣
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ｔｏｄｅｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ １４８: ３５８—３６８
Ｈａｒａ Ｋꎬ Ｙａｇｉ Ｍꎬ Ｋｕｓａｎｏ Ｔ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０００. Ｒａｐｉｄ ｓｙｓｔｅｍｉｃ ａｃｃｕｍｕｌａ￣
ｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｓ ｅｎｃｏｄｉｎｇ ａ ｔｏｂａｃｃｏ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ
ｕｐｏｎ ｗｏｕｎｄｉｎｇ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｉｃｓꎬ ２６３:
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Ｊｏｈｎｓｏｎ ＣＳꎬ Ｋｏｌｅｖｓｋｉ Ｂꎬ Ｓｍｙｔｈ ＤＲꎬ ２００２. ＴＲＡＮＳＰＡＲＥＮＴ ＴＥＳＴＡ
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ｄｏｐｓｉｓꎬ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ [ Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ
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Ｊｏｎｅｓ ＪＤＧꎬ Ｄａｎｇｌ ＪＬꎬ ２００６. Ｔｈｅ ｐｌａｎｔ ｉｍｍｕｎｅ ｓｙｓｔｅｍ [Ｊ] . Ｎａｔｕｒｅꎬ
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ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙｓ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔ￣Ｍｉｃｒｏｂｅ
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Ｋｉｍ ＣＹꎬ Ｚｈａｎｇ ＳＱꎬ ２００４. Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｍｉｔｏｇｅｎ￣ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ
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ｄｅｆｅｎｓｅ ｇｅｎｅｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ [Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ３８: １４２—１５１
Ｋｉｍ ＫＣꎬ Ｌａｉ ＺＢꎬ Ｆａｎ ＢＦ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８. Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＷＲＫＹ３８ ａｎｄ
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１９ ｉｎ Ｂａｓａｌ Ｄｅｆｅｎｓｅ [Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ２０: ２３５７—２３７１
Ｌａｇａｃｅ Ｍꎬ Ｍａｔｔｏｎ ＤＰꎬ ２００４. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐ￣
ｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ ｉｎ ｌａｔｅ ｔｏｒｐｅｄｏ￣ｓｔａｇｅ ｅｍｂｒｙｏｓ ｏｆ Ｓｏｌａｎｕｍ
ｃｈａｃｏｅｎｓｅ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔａꎬ ２１９: １８５—１８９
Ｌａｉ Ｚꎬ Ｖｉｎｏｄ Ｋꎬ Ｚｈｅｎｇ Ｚ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８. Ｒｏｌｅｓ ｏｆ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＷＲＫＹ３
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[Ｊ] . ＢＭＣ Ｐｌａｎｔ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ８: ６８
Ｌｉ Ｊꎬ Ｂｒａｄｅｒ Ｇꎬ Ｐａｌｖａ ＥＴꎬ ２００４. Ｔｈｅ ＷＲＫＹ７０ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ:
Ａ ｎｏｄｅ ｏｆ ｃｏｎｖｅｒｇｅｎｃｅ ｆｏｒ ｊａｓｍｏｎａｔｅ￣ｍｅｄｉａｔｅｄ ａｎｄ ｓａｌｉｃｙｌａｔｅ￣ｍｅ￣
ｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｓ ｉｎ ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｓｅ [ Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ １６: ３１９—
３３１
Ｍａｌｅｃｋ Ｋꎬ Ｌｅｖｉｎｅ Ａꎬ Ｅｕｌｇｅｍ Ｔ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２０００. Ｔｈｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｏｍｅ ｏｆ
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Ｎａｔｕｒｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓꎬ ２６: ４０３—４１０
Ｎａｗｒａｔｈ Ｃꎬ Ｍｅｔｒａｕｘ ＪＰꎬ １９９９. Ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ￣ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕ￣
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４８５　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 植 物 分 类 与 资 源 学 报　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 　 第 ３７卷
ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｃａｍａｌｅｘｉｎ ａｆｔｅｒ ｐａｔｈｏｇｅｎ ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ [ Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ
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Ｒａｔｅ ＤＮꎬ Ｃｕｅｎｃａ ＪＶꎬ Ｂｏｗｍａｎ ＧＲ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９９. Ｔｈｅ ｇａｉｎ￣ｏｆ￣ｆｕｎｃｔｉｏｎ
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ｔｈｅ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈꎬ ｄｅ￣
ｆｅｎｓｅｓꎬ ａｎｄ ｃｅｌｌ ｇｒｏｗｔｈ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ １１: １６９５—１７０８
Ｒａｔｅ ＤＮꎬ Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇ ＪＴꎬ ２００１. Ｔｈｅ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ａｂｅｒｒａｎｔ ｇｒｏｗｔｈ ａｎｄ
ｄｅａｔｈ２ ｍｕｔａｎｔ ｓｈｏｗｓ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ ａｎｄ ｒｅ￣
ｖｅａｌｓ ａ ｒｏｌｅ ｆｏｒ ＮＰＲ１ ｉｎ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｎｇ ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ
[Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ２７: ２０３—２１１
Ｒｏｃｈｅｒ Ａꎬ Ｄｕｍａｓ Ｃꎬ Ｃｏｃｋ ＪＭＡꎬ ２００５. Ｗ￣ｂｏｘ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｆｕｌｌ ｅｘ￣
ｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＳＡ￣ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ ｇｅｎｅ ＳＦＲ２ [ Ｊ ] . Ｇｅｎｅꎬ ３４４:
１８１—１９２
Ｒｏｇｅｒｓ ＥＥꎬ Ａｕｓｕｂｅｌ ＦＭꎬ １９９７. Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｕｓ￣
ｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｍｕｔａｎｔｓ ｅｘｈｉｂｉｔ ｅｎｈａｎｃｅｄ ｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｔｏ ｓｅｖｅｒａｌ ｂａｃ￣
ｔｅｒｉａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ ａｎｄ ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ＰＲ￣１ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ [ Ｊ] .
Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ ９: ３０５—３１６
Ｒｕｓｈｔｏｎ ＰＪꎬ Ｔｏｒｒｅｓ ＪＴꎬ Ｐａｒｎｉｓｋｅ Ｍ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９６. Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｅｌｉｃｉ￣
ｔｏｒ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｅｌｉｃｉｔｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔｓ
ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒｓ ｏｆ ｐａｒｓｌｅｙ ＰＲ１ ｇｅｎｅｓ [ Ｊ] . Ｅｍｂｏ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ １５:
５６９０—５７００
Ｓｈｅｎ ＱＨꎬ Ｓａｉｊｏ Ｙꎬ Ｍａｕｃｈ Ｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００７. Ｎｕｃｌｅａｒ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ＭＬＡ
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ａｎｃｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ [Ｊ] . Ｓｃｉｅｎｃｅꎬ ３１５: １０９８—１１０３
Ｔｕｒｃｋ Ｆꎬ Ｚｈｏｕ Ａꎬ Ｓｏｍｓｓｉｃｈ ＩＥꎬ ２００４. Ｓｔｉｍｕｌｕｓ￣ｄｅｐｅｎｄｅｎｔꎬ ｐｒｏｍｏｔ￣
ｅｒ￣ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｂｉｎｄｉｎｇ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ＷＲＫＹ１ ｔｏ ｉｔｓ ｎａｔｉｖｅ
ｐｒｏｍｏｔｅｒ ａｎｄ ｔｈｅ ｄｅｆｅｎｓｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ＰｃＰＲ１￣１ ｉｎ ｐａｒｓｌｅｙ [ Ｊ] .
Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ １６: ２５７３—２５８５
Ｗｉｌｄｅｒｍｕｔｈ ＭＣꎬ Ｄｅｗｄｎｅｙ Ｊꎬ Ｗｕ Ｇ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００１. Ｉｓｏｃｈｏｒｉｓｍａｔｅ ｓｙｎ￣
ｔｈａｓｅ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｔｏ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｆｏｒ ｐｌａｎｔ ｄｅｆｅｎｃｅ
[Ｊ] . Ｎａｔｕｒｅꎬ ４１４: ５６２—５６５
Ｗｉｌｌｍｏｔｔ ＲＬꎬ Ｒｕｓｈｔｏｎ ＰＪꎬ Ｈｏｏｌｅｙ Ｒ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９８. ＤＮａｓｅ１ ｆｏｏｔｐｒｉｎｔｓ
ｓｕｇｇｅｓｔ ｔｈｅ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ ａｔ ｌｅａｓｔ ｔｈｒｅｅ ｔｙｐｅｓ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃ￣
ｔｏｒｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｐｈａ￣Ａｍｙ２ / Ａ ｂｙ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ
Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙꎬ ３８: ８１７—８２５
Ｘｉｅ ＤＸꎬ Ｆｅｙｓ ＢＦꎬ Ｊａｍｅｓ Ｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９８. ＣＯＩ１: Ａｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｇｅｎｅ
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Ｘｉｅ Ｚꎬ Ｚｈａｎｇ ＺＬꎬ Ｚｏｕ ＸＬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００５. Ａｎｎｏｔａｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ
ａｎａｌｙｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｒｉｃｅ ＷＲＫＹ ｇｅｎｅ ｓｕｐｅｒｆａｍｉｌｙ ｒｅｖｅａｌ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ
ｎｅｇａｔｉｖｅ ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ ｏｆ ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ａｌｅｕｒｏｎｅ ｃｅｌｌｓ
[Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ １３７: １７６—１８９
Ｘｉｎｇ ＤＨꎬ Ｌａｉ ＺＢꎬ Ｚｈｅｎｇ ＺＹ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００８. Ｓｔｒｅｓｓ￣ ａｎｄ ｐａｔｈｏｇｅｎ￣
ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＷＲＫＹ４８ ｉｓ ａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｔｈａｔ
ｒｅｐｒｅｓｓｅｓ ｐｌａｎｔ ｂａｓａｌ ｄｅｆｅｎｓｅ [ Ｊ] . Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｌａｎｔꎬ １: ４５９—
４７０
Ｘｕ ＸＰꎬ Ｃｈｅｎ ＣＨꎬ Ｆａｎ ＢＦ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００６. Ｐｈｙｓｉｃａｌ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｉｎ￣
ｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｐａｔｈｏｇｅｎ￣ｉｎｄｕｃｅｄ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ＷＲＫＹ１８ꎬ
ＷＲＫＹ４０ꎬ ａｎｄ ＷＲＫＹ６０ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ [ Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ
Ｃｅｌｌꎬ １８: １３１０—１３２６
Ｘｕ ＹＨꎬ Ｗａｎｇ ＪＷꎬ Ｗａｎｇ Ｓ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００４. Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ＧａＷＲＫＹ１ꎬ
ａ ｃｏｔｔｏｎ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｔｈａｔ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｓｅｓｑｕｉｔｅｒｐｅｎｅ ｓｙｎ￣
ｔｈａｓｅ ｇｅｎｅ (＋)￣ｄｅｌｔａ￣ｃａｄｉｎｅｎｅ ｓｙｎｔｈａｓｅ￣Ａ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏ￣
ｇｙꎬ １３: ５０７—５１５
Ｙａｍａｍｏｔｏ Ｓꎬ Ｎａｋａｎｏ Ｔꎬ Ｓｕｚｕｋｉ Ｋ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００４. Ｅｌｉｃｉｔｏｒ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉ￣
ｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｖｉａ Ｗ ｂｏｘ￣ｒｅｌａｔｅｄ ｃｉｓ￣ａｃｔｉｎｇ ｅｌｅｍｅｎｔｓ ｆｒｏｍ
ａ ｂａｓｉｃ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｂｙ ＷＲＫＹ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒｓ ｉｎ ｔｏｂａｃｃｏ
[Ｊ] . Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ ｅｔ Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ Ｇｅｎｅ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ Ｅｘｐｒｅｓ￣
ｓｉｏｎꎬ １６７９: ２７９—２８７
Ｙａｎｇ ＰＺꎬ Ｃｈｅｎ ＣＨꎬ Ｗａｎｇ ＺＰ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９９. Ａ ｐａｔｈｏｇｅｎ￣ ａｎｄ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ
ａｃｉｄ￣ｉｎｄｕｃｅｄ ＷＲＫＹ ＤＮＡ￣ｂｉｎｄｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｃｏｇｎｉｚｅｓ ｔｈｅ ｅｌｉｃｉ￣
ｔｏｒ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｅｌｅｍｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｔｏｂａｃｃｏ ｃｌａｓｓ Ｉ ｃｈｉｔｉｎａｓｅ ｇｅｎｅ ｐｒｏ￣
ｍｏｔｅｒ [Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ １８: １４１—１４９
Ｙｕ ＤＱꎬ Ｃｈｅｎ ＣＨꎬ Ｃｈｅｎ ＺＸꎬ ２００１. Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ａｎ ｉｍｐｏｒｔａｎｔ ｒｏｌｅ ｏｆ
ＷＲＫＹ ＤＮＡ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｉｎ ｔｈｅ ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ＮＰＲ１ ｇｅｎｅ ｅｘ￣
ｐｒｅｓｓ ｉｏｎ [Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ １３: １５２７—１５３９
Ｚｈａｎｇ ＺＬꎬ Ｘｉｅ Ｚꎬ Ｚｏｕ ＸＬ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００４. Ａ ｒｉｃｅ ＷＲＫＹ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ
ａ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎ
ａｌｅｕｒｏｎｅ ｃｅｌｌｓ [Ｊ] . Ｐｌａｎｔ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙꎬ １３４: １５００—１５１３
Ｚｈｅｎｇ ＺＹꎬ Ａｂｕ Ｑａｍａｒ Ｓꎬ Ｃｈｅｎ ＺＸ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００６. Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
ＷＲＫＹ３３ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｏ ｎｅｃｒｏ￣
ｔｒｏｐｈｉｃ ｆｕｎｇａｌ ｐａｔｈｏｇｅｎｓ [Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｊｏｕｒｎａｌꎬ ４８: ５９２—６０５
Ｚｈｏｕ Ｎꎬ Ｔｏｏｔｌｅ ＴＬꎬ Ｔｓｕｉ Ｆ ｅｔ ａｌ.ꎬ １９９８. ＰＡＤ４ ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ ｕｐｓｔｒｅａｍ
ｆｒｏｍ ｓａｌｉｃｙｌｉｃ ａｃｉｄ ｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｄｅｆｅｎｓｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ
[Ｊ] . Ｔｈｅ Ｐｌａｎｔ Ｃｅｌｌꎬ １０: １０２１—１０３０
Ｚｏｕ ＸＬꎬ Ｓｅｅｍａｎｎ ＪＲꎬ Ｎｅｕｍａｎ Ｄ ｅｔ ａｌ.ꎬ ２００４. Ａ ＷＲＫＹ ｇｅｎｅ ｆｒｏｍ
ｃｒｅｏｓｏｔｅ ｂｕｓｈ ｅｎｃｏｄｅｓ ａｎ ａｃｔｉｖａｔｏｒ ｏｆ ｔｈｅ ａｂｓｃｉｓｉｃ ａｃｉｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ
ｐａｔｈｗａｙ [Ｊ] . Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙꎬ ２７９: ５５７７０—５５７７９
５８５５期　 　 　 　 　 　 　 王其娟等: 过表达 ＡｔＷＲＫＹ７１影响植物对病原菌 Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｙｒｉｎｇａｅ的抗性