全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47 卷 第 2 期 2016 年 1 月

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一测多评法测定黄连及其炮制品中 6 种生物碱
卿大双 1, 2，罗维早 1，孙建彬 1, 3，王 欣 1, 2，阳 勇 1，王德江 2，李隆云 1，覃 瑶 1, 4*
1. 重庆市中药研究院，重庆 400065
2. 成都中医药大学，四川 成都 610072
3. 第三军医大学大坪医院野战外科研究所 药剂科，重庆 400042
4. 太极集团有限公司，重庆 401147
摘 要：目的 建立一测多评法同时测定黄连及其炮制品中 6 种生物碱的量。方法 采用高效液相色谱法，以盐酸小檗碱为内
参物，测定其与盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀的相对校正因子，利用该相对校正因
子计算其他 5 种生物碱的量，同时利用外标法测定黄连及其炮制品中 6 种生物碱的质量分数，比较 2 种测定方法的差异，验证
一测多评法的可行性和准确性。结果 在线性范围内，盐酸小檗碱与盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连
碱、盐酸巴马汀的相对校正因子分别为 1.131、0.999、1.011、1.076、1.025，在不同实验条件下相对校正因子重现性良好，6
种生物碱成分量计算值与实测值间无显著性差异。结论 一测多评法同时测定黄连及其炮制品中 6 种生物碱可行而且准确。
关键词：黄连；相对校正因子；一测多评；盐酸小檗碱；盐酸药根碱；盐酸非洲防己碱；盐酸表小檗碱；盐酸黄连碱；盐酸
巴马汀；质量控制
中图分类号：R286.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)02 - 0324 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.02.023
Determination of six alkaloids in crude and processed Coptidis Rhizoma with
quantitative analysis of multi-components by single marker
QING Da-shuang1, 2, LUO Wei-zao1, SUN Jian-bin1, 3, WANG Xin1, 2, YANG Yong1, WANG De-jiang2,
LI Long-yun1, QIN Yao1, 4
1. Chongqing Institute of Chinese Materia Medica, Chongqing 400065, China
2. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 610072, China
3. Department of Pharmacy, Daping Hospital and Research Institute of Surgery of the Third Military Medical University, Chongqing
400042, China
4. Taiji Group Co., Ltd., Chongqing 401147, China
Abstract: Objective To establish a quantitative analysis of multi-components by single marker (QAMS) for the simultaneous
determination of six alkaloids in crude and processed Coptidis Rhizoma. Methods An HPLC method was established to determine the six
alkaloids (jatrorrhizine hydrochloride, columbamine hydrochloride, epiberberine hydrochloride, coptisine hydrochloride, palmatine
hydrochloride, and berberine hydrochloride) by the external standard method (ESM). With this HPLC method, the berberine hydrochloride
was used as the internal standard (IS) to determine five relative correction factors (RCFs) of the five other alkaloids, and their contents in
all samples were calculated by their RCFs at the same time. Compared with the content results determined by the ESM and QAMS, the
feasibility and accuracy of QAMS method were verified. Results Within a certain range, the RCFs of jatrorrhizine hydrochloride,
columbamine hydrochloride, epiberberine hydrochloride, coptisine hydrochloride, and palmatine hydrochloride to berberine
hydrochloride were 1.131, 0.999, 1.011, 1.076, and 1.025, respectively, with the good repeatability in different experimental conditions.
There was no significant difference between the QAMS method and ESM method. Conclusion The QAMS method is feasible and
accurate for the simultaneous determination of the six alkaloids in crude and processed Coptidis Rhizoma.
Key words: Coptidis Rhizoma; relative correction factors; quantitative analysis of multi-components by single marker; berberine hydrochloride;
jatrorrhizine hydrochloride; columbamine hydrochloride; epiberberine hydrochloride; coptisine hydrochloride; palmatine hydrochloride; quality control

收稿日期：2015-05-19
基金项目：国家科技惠民计划项目（2013GS500102）；重庆市科委项目（2015）；药典委员会项目；重庆市卫生局项目（2012-2-49）；国家中药
资源中心重庆分中心能力提升建设（cstc2014ptyjd10001）
作者简介：卿大双（1990—），女，硕士研究生，主要从事中药化学及质量标准研究。
Tel: (023)89029031 Fax: (023)89029026 E-mail: 1028290340@qq.com
*通信作者 覃 瑶，女，博士，副研究员，主要从事中药新药研究。Tel/Fax: (023)89029026 E-mail: trowa1982@126.com
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黄连为毛茛科（Ranunculaceae）黄连属 Coptis
Salisb.植物黄连 Coptis chinensis Franch.、三角叶
黄连 Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao 或云连
Coptis teeta Wall. 的加工品[1]，据文献报道，其化
学成分主要为生物碱类物质[2]。黄连的广泛利用
与其所含各种生物碱的药理作用有密切的关系，
且研究表明，黄连的药理作用并不是某单一生物
碱作用的结果，如黄连中小檗碱具有较强的抗炎
作用，但是黄连水提液的最低抑菌能力要强于小
檗碱，说明黄连中含有其他抗菌或对抗菌有协同
作用的成分[3-4]。所以，只有对其主要的多个生物
碱（如小檗碱、黄连碱、非洲防己碱、表小檗碱、
巴马汀等）的质量分数进行全面控制，才能保证
药材的质量。但对照品来源限制了多个生物碱的
含量控制。有研究者提出了一测多评的多指标质
控模式[5]，即在多指标质量控制时，利用中药有
效成分内在函数关系和比例关系，以药材中对照
品廉价易得的典型成分为内标，建立该成分与其
他成分间的相对校正因子，再通过校正因子同步
计算出其他成分的量。在方法实施时，可在只有
一个对照品的情况下，实现这些成分的同步测定，
并成功应用于薄荷，五味子，白芷、丹参、赤芍、
淫羊藿、连翘、黄芩、黄连、人参和枳实等药材
的质量控制[6-10]，以及热毒宁注射液、复方丹参、
清开灵注射液等中成药的质量控制[11-13]。其中黄
连药材的一测多评方法被《中国药典》2010 年版
采用[1]，但只对其中 4 种生物碱进行了控制。同
时测定黄连中 6 种生物碱更有利于黄连药材质量
的控制[14-15]。本研究采用一测多评的方法同时检
测黄连中 6 种生物碱的量，相较于《中国药典》
方法增加指标成分的种类，不受对照品来源的限
制，更有利于黄连及其炮制品的质量控制。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪（Waters 2695-2998，Agilent
1200S，岛津 LC-20A）；KQ5200 型超声波清洗器（昆
山市超声仪器有限公司）；CPA225D 型电子天平（十
万分之一，德国赛多利斯公司）；BS224S 型电子天
平（万分之一，德国赛多利斯公司）。
对照品盐酸巴马汀（批号 110732-200506）、盐
酸小檗碱（批号 110713-200609）由中国食品药品
检定研究院提供；对照品盐酸药根碱（质量分数
96.17%）、盐酸非洲防己碱（质量分数 96.41%）、盐
酸表小檗碱（质量分数 90.38%）、盐酸黄连碱（质
量分数 91.92%）由重庆市中药研究院药化室提供；
乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
黄连 Coptidis Rhizoma 药材（批号 2008004、
080803、080805、080804、2008005、20120905、
080810、2008008、2008007、2008006），黄连饮片
Coptidis Rhizoma decoction pieces（批号 20080501、
0808003、080802、080801、0801101、0809021、
0803180、060401、2008007、0801005、08031801、
080101），酒黄连 Coptidis Rhizoma stir-fried with
wine（批号 071224、080301、080301、071124、
080805、080301、08032101、080401、080804、
20081001），萸黄连 Coptidis Rhizoma stir-fried with
Evodiae Fructus（批号 20080301、080313、071201、
080301、080805、080301、08032101、20080401、
080804、20081001），姜黄连 Coptidis Rhizoma
Stir-fried with ginger juice（批号 080301、080313、
080804、08032101、071130、080401、080301、080803、
080805、20081001），以上药材及炮制品均由太极集
团有限公司提供；云连 Coptis teeta Wall.和三角叶
黄连 Coptis deltoidea C. Y. Cheng et Hsiao（雅连）
自采，各 3 批，以上药材均由江西中医药大学钟国
跃研究员鉴定。
2 方法与结果
2.1 一测多评方法学考察
2.1.1 对照品溶液的配制 精密称取盐酸药根碱、
盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐
酸巴马汀和盐酸小檗碱各适量，用 50%乙腈制成含
有 11.13 μg/mL 盐酸药根碱、15.2 μg/mL 非洲防己
碱、52.77 μg/mL 盐酸表小檗碱、100.93 μg/mL 盐酸
黄连碱、75.32 μg/mL 盐酸巴马汀、284.2 μg/mL 盐
酸小檗碱的混合对照品溶液。
2.1.2 供试品溶液的制备 取药材粉末约 0.2 g，精
密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%乙腈-盐酸
（100∶1）50 mL，密塞，称定质量，超声处理 30 min，
放冷，再称定质量，用 50%乙腈-盐酸（100∶1）补
足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 2 mL，
置 10 mL 量瓶中，加各溶剂至刻度，摇匀，滤过，
取续滤液即得。
2.1.3 色谱条件 色谱柱为 Gemini-NX C18（250
mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-0.25 mol/L 乙
酸铵和 8 mmol/L 十二烷基硫酸钠（SDS）水溶液（氨
水调节 pH 值为 9.3）（36∶64）；柱温 35 ℃；体积
流量 1 mL/min；检测波长 270 nm；进样量 10 μL。
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上述色谱条件下，盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、
盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小
檗碱分离良好，各组分的理论塔板数均＞7 500。色
谱图见图 1。
2.1.4 线性关系的考察 将混合对照品溶液依次稀
释 2、4、8、16、32、160 倍，精密吸取混合对照品
溶液及其稀释液各 10 μL 进样。以进样量对峰面积积
分值进行线性回归处理，得盐酸药根碱、盐酸非洲防
己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐
酸小檗碱的回归直线方程及线性范围。结果见表 1。



1-盐酸药根碱 2-盐酸非洲防己碱 3-盐酸表小檗碱 4-盐酸黄
连碱 5-盐酸巴马汀 6-盐酸小檗碱
1-jatrorrhizine hydrochloride 2-columbamine hydrochloride
3-epiberberine hydrochloride 4-coptisine hydrochloride
5-palmatine hydrochloride 6-berberine hydrochloride
图 1 混合对照品 (A) 和黄连样品 (B) 的 HPLC 图谱
Fig. 1 HPLC of reference substances (A) and Coptidis
Rhizoma sample (B)
表 1 6 种生物碱的线性关系及线性范围
Table 1 Linear relationship and range of six alkaloids
成分 回归方程 线性范围/μg R2
盐酸药根碱 Y＝1 736 070 X－873 0.006 96～0.233 0.999 9
盐酸非洲防己碱 Y＝4 568 233 X－4 886 0.004 75～0.152 1.000 0
盐酸表小檗碱 Y＝3 901 944 X－5 559 0.003 30～0.528 1.000 0
盐酸黄连碱 Y＝3 662 281 X－12 180 0.006 31～1.01 1.000 0
盐酸巴马汀 Y＝3 817 810 X－8 464 0.004 71～0.753 1.000 0
盐酸小檗碱 Y＝3 901 944 X－5 559 0.017 80～2.884 1.000 0

2.1.5 精密度试验 取盐酸药根碱、盐酸非洲防己
碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐
酸小檗碱混合对照品溶液，各重复进样 6 次，测得
盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐
酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱平均峰面积的
RSD 依次为 0.59%、0.37%、0.44%、0.20%、0.28%、
0.14%。表明有较好的精密度。
2.1.6 重复性试验 取同一批次的样品 6 份，照上
述制定的方法制备供试品溶液和进行 HPLC 测定，
测得盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、
盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱的平均质量
分数依次为 0.50%、0.45%、1.13%、2.38%、1.68%、
7.20%，RSD 依次为 1.00%、0.91%、0.76%、0.49%、
0.69%、0.36%。表明该法重复性良好。
2.1.7 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0、
2、4、8、12、24 h 测定峰面积，结果盐酸药根碱、
盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐
酸巴马汀、盐酸小檗碱的RSD依次为0.81%、0.96%、
0.57%、0.40%、0.43%、0.15%。说明供试品溶液在
24 h 内稳定。
2.1.8 加样回收率试验 精密称取适量已测定的黄
连药材粉末约 0.1 g，精密称定，共 6 份，加入混合
对照品溶液适量，按供试品制备方法制备样品进行
HPLC 测定，计算回收率。结果盐酸药根碱、盐酸
非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴
马汀和盐酸小檗碱的平均回收率依次为 99.65%、
98.59%、98.49%、98.66%、98.64%、98.63%，RSD
依次为 0.03%、0.15%、0.21%、0.12%、0.28%、0.23%。
2.2 相对校正因子的确定
2.2.1 相对校正因子计算 以盐酸小檗碱为内标
（S），分别计算盐酸小檗碱（berberine hydrochloride，
B）对盐酸药根碱（jatrorrhizine hydrochloride，J）、
盐酸非洲防己碱（columbamine hydrochloride，C1）、
盐酸表小檗碱（epiberberine hydrochloride，E）、盐
酸黄连碱（coptisine hydrochloride，C2）、盐酸巴马
汀（palmatine hydrochloride，P）的相对校正因子
（fs/k），结果见表 2。
2.2.2 相对校正因子的重现性考察 考察了3种高效
液相色谱系统：Waters 2695-2998、岛津 LC-20A 和
Agilent 1200S 型高效液相色谱仪和 3 种色谱柱：
Gemini-NX C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），XtimateTM
C18（250 mm×4.6 mm，5 μm），BETASIL C18（250
mm×4.6 mm，5 μm）并进行了不同实验室的考察，
盐酸小檗碱对盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表
小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀的 fs/k均基本一致，
RSD 小于 2%，其结果比较稳定可靠。结果见表 3。
2.2.3 待测组分色谱峰的定位 利用相对保留值
（rk/s）定性，测得盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、
盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小
檗碱的 rk/s 结果见表 4，RSD≤5%，表明利用 rk/s 进
行峰的定位可行。
rk/s=tR(k)/tR(s)
k 为待测组分，s 为对照物
0 5 10 15 20 25
t/min
1 2 3 4 5
6
1
2 3 4 5
6
A
B
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表 2 黄连生物碱 fs/k 的测定结果
Table 2 Determination of fs/k of alkaloid in Coptidis Rhizoma
进样体积/μL fB/J fB/C1 fB/E fB/C2 fB/P
1 1.109 0.998 1.001 1.062 1.022
2 1.121 0.992 1.008 1.073 1.018
4 1.135 1.009 1.009 1.073 1.029
6 1.129 0.988 1.008 1.070 1.037
8 1.135 0.992 1.009 1.070 1.032
10 1.134 0.986 1.009 1.071 1.023
20 1.134 0.990 1.009 1.070 1.016
平均值 1.128 0.994 1.008 1.070 1.025
RSD/% 0.880 0.770 0.310 0.330 0.750
表 3 相对校正因子重现性考察
Table 3 Reproducibility of relative correction factor
实验室 仪器 色谱柱 fB/J fB/C1 fB/E fB/C2 fB/P
Xtimate 1.112 0.989 1.012 1.079 1.022
Gemini 1.100 0.994 1.012 1.077 1.030
实验室 1 岛津
Thermo 1.108 0.995 1.010 1.076 1.026
Xtimate 1.128 0.994 1.008 1.070 1.025
Gemini 1.128 1.003 1.005 1.065 1.035
Waters
Thermo 1.158 1.001 1.013 1.076 1.027
Xtimate 1.138 1.001 1.021 1.081 1.018
Gemini 1.135 0.956 1.015 1.076 1.023
Agilent
Thermo 1.132 1.022 1.016 1.080 1.014
Xtimate 1.148 1.006 1.007 1.078 1.025
Gemini 1.141 1.005 1.005 1.073 1.023
实验室 2
岛津
Thermo 1.146 1.020 1.012 1.078 1.026
平均值 1.131 0.999 1.011 1.076 1.025
RSD/% 1.500 1.700 0.470 0.410 0.540

表 4 不同仪器和色谱柱测得的 rk/s
Table 4 rk/s determined by different instruments and columns
实验室 仪器 色谱柱 rB/J rB/C1 rB/E rB/C2 rB/P
Xtimate 0.368 0.478 0.585 0.681 0.871
Gemini 0.355 0.467 0.569 0.663 0.866
实验室 1 岛津
Thermo 0.359 0.477 0.593 0.693 0.871
Xtimate 0.362 0.473 0.582 0.676 0.872
Gemini 0.354 0.467 0.570 0.662 0.868
Waters
Thermo 0.358 0.476 0.592 0.694 0.869
Xtimate 0.353 0.471 0.582 0.685 0.861
Gemini 0.325 0.450 0.560 0.669 0.847
Agilent
Thermo 0.344 0.469 0.586 0.695 0.860
Xtimate 0.364 0.474 0.582 0.675 0.873
Gemini 0.351 0.464 0.567 0.658 0.868
实验室 2
岛津
Thermo 0.353 0.482 0.589 0.689 0.871
平均值 0.353 0.482 0.589 0.689 0.871
RSD/% 3.200 1.700 1.830 1.950 0.870
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2.3 一测多评法和外标法的比较
取各批次黄连及其炮制品样品粉末，按照供
试品溶液的制备方法制备样品，分别注入液相色
谱仪，测定样品中盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、
盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸
小檗碱含量；并运用小檗碱对药根碱、非洲防己
碱、表小檗碱、黄连碱、巴马汀的相对校正因子
计算药根碱、非洲防己碱、表小檗碱、黄连碱、
巴马汀的量，各批次每个样品测定 3 次，取均值，
再计算各类型黄连及其炮制品的总平均值。将一
测多评与外标法得到的量值进行比较，2 种方法
所得值的偏差都在 3%以内，由此说明一测多评
法用于黄连药材及炮制品的多成分质量评价研
究是可行的，结果见表 5。
表 5 黄连及其炮制品一测多评法与外标法测得生物碱量的比较
Table 5 Determinatin of Coptidis Rhizoma by QAMS and ESM
盐酸药根碱/% 盐酸非洲防己碱/% 盐酸表小檗碱/% 盐酸黄连碱/% 盐酸巴马汀/% 盐酸小檗碱/%药材
外标法 一测多评法 外标法 一测多评法 外标法 一测多评法 外标法 一测多评法 外标法 一测多评法 外标法
黄连原药材 0.43 0.44 0.51 0.50 0.94 0.94 2.00 2.01 1.56 1.56 6.66
黄连饮片 0.35 0.36 0.43 0.43 0.79 0.79 1.67 1.67 1.30 1.31 5.65
姜黄连 0.41 0.42 0.43 0.43 0.79 0.79 1.60 1.60 1.34 1.35 5.73
酒黄连 0.43 0.43 0.49 0.49 0.88 0.88 1.78 1.78 1.56 1.55 6.47
萸黄连 0.35 0.35 0.40 0.40 0.73 0.73 1.46 1.46 1.25 1.25 5.26
雅连 0.92 0.94 0.20 0.20 0.17 0.17 1.20 1.20 0.54 0.54 3.90
云连 0.97 0.99 0.17 0.17 0.11 0.11 1.33 1.33 0.55 0.55 6.11

3 讨论
黄连供试品制备方法中对溶媒种类进行了考
察，文献中黄连的提取溶媒多用甲醇或甲醇-盐酸，
在黄连质量标准研究中，发现 50%乙腈对生物碱的
溶解度较大，因此，对比了甲醇与 50%乙腈做溶媒
对黄连中主要生物碱质量分数的影响，结果表明
50%乙腈-盐酸（100∶1）为提取溶剂时 6 种生物碱
质量分数较高。
《中国药典》2010 年版一部对黄连制定了 4 种
生物碱的量限度，但文献已有关于黄连中 5 种或 5
种以上生物碱 HPLC 法同时测定的报道，其中包括
木兰花碱、Groenlandicine、药根碱、非洲防己碱等；
多成分测定符合中药多成分的特点，有利于中药质
量控制的整体性和客观性。因此，本课题组考察了
流动相系统，建立了分离度及对称因子都较好且稳
定的 6 种生物碱测定的 HPLC 方法；在对其检测波
长的选择上，参考文献和 PDA 检测器主要生物碱
的紫外吸收图谱，6 种生物碱在 270 nm 及 345 nm
处均有最大吸收，但考虑到木兰碱在 345 nm 下无
吸收，而在 270 nm 下，出峰数量较多且基线稳定；
因此，检测波长定为 270 nm。
为防止上述各项测定结果出现远离均数的极端
值，分别采用统计方法中的格拉布斯（Grubbs）检
验法和狄克逊（Dixon）检验法对黄连 6 种生物碱量
的最大值和最小值进行检验，舍去可疑值；并采用
各生物碱均值的 20%下限制定其质量分数限度，黄
连及其炮制品的不合格数据基本集中于同一来源的
药材，其量差异与药材的产地和炮制习惯有关。
雅连和云连中生物碱成分的量与味连相比差异
较大，其药根碱量较高，约为味连中药根碱量的 2
倍；但其非洲防己碱、表小檗碱、巴马汀量较味连
低；黄连碱量与味连一致。故在确定黄连生物碱限
度时，未将二者计算在内，单独列出，加以区分。
本研究 6 种生物碱的测定方法，与《中国药典》
2010 年版一部黄连的测定方法相比，符合中药多成
分的特点，有利于中药质量控制的整体性和客观性，
更符合中药质量控制方法的要求，对黄连及其相关
产品的质量控制具有重要意义。
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