全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月

• 123 •

HPLC-MS 法同时测定酸枣仁中 9 种成分
张巧月，杨浩天，史 贺，张智勇，张兰桐*
河北医科大学药学院 药物分析教研室，河北 石家庄 050017
摘 要：目的 建立 HPLC-MS/MS 法同时测定酸枣仁中酸枣仁皂苷 A、酸枣仁皂苷 B、斯皮诺素、白桦脂酸、白桦脂醇、
芦丁、芹菜素、橙皮苷、柚皮苷的量。方法 采用 Sapphire C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm），以水（1 mmol/L 乙酸铵-0.1%
的甲酸）-乙腈溶液为流动相进行梯度洗脱，体积流量 1 mL/min，进样量 10 μL，柱温 30 ℃；采用电喷雾离子源进行负离子
模式监测，多反应监测模式（MRM）用于定量分析，源喷射电压为−4 500 V，离子源温度为 650 ℃。结果 9 种成分的峰
面积和质量浓度在测定质量浓度范围内均具有良好的线性关系，加样回收率为 98.04%～101.5%，精密度 RSD 值为 0.03%～
0.74%。结论 本法简便、快速、灵敏度高、专属性好，可用于酸枣仁中 9 种化学成分的测定。
关键词：酸枣仁；HPLC-MS；酸枣仁皂苷 A；酸枣仁皂苷 B；斯皮诺素；白桦脂酸；白桦脂醇；芦丁；芹菜素；橙皮苷；柚皮苷
中图分类号：R286.6 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2015)01 - 0123 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2015.01.024
Simultaneous quantification of nine constituents in Ziziphi Spinosae Semen
by HPLC-MS
ZHANG Qiao-yue, YANG Hao-tian, SHI He, ZHANG Zhi-yong, ZHANG Lan-tong
Department of Pharmaceutical Analysis, School of Pharmacy, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China
Abstract: Objective To develop an HPLC-MS/MS method for the determination of jujuboside A, jujuboside B, spinosin, betulinic acid,
betulin, rutin, apigenin, hesperidin, and naringin in Ziziphi Spinosae Semen. Methods Analysis was performed on a Sapphire C18 column
(150 mm × 4.6 mm, 5 μm) eluted with acetonitrile and 0.1% methanoic acid solution containing 1 mmol/L ammonium acetate in a gradient
program. The flow rate was 1 mL/min, the injection volume was 10 μL, and the column temperature was 30 . The multiple℃ -reaction
monitoring scanning (MRM) was employed for the quantification with switching electrospray ion source polarity in negative mode. The ion
spray voltage was set at −4 500 V and the turbo spray temperature was maintained at 650 . ℃ Results The regression equations showing
linear relationships between peak areas and contents of each compound were obtained. The average recoveries of the compounds ranged from
98.04% to 101.5% and the precision in terms of RSD was in the range of 0.03%—0.74%. Conclusion The method is simple, rapid, and
sensitive. It could be used as a quantitative determination method for the nine components in Ziziphi Spinosae Semen.
Key words: Ziziphi Spinosae Semen; HPLC-MS; jujuboside A; jujuboside B; spinosin; betulinic acid; betulin; rutin; apigenin;
hesperidin; naringin

酸枣仁 Ziziphi Spinosae Semen 是《中国药典》
2010 年版收载的养心安神药[1]，属于卫生部颁布的
第一批药食同源两用品，其药用历史悠久，《神农本
草经》列为上品，《本草纲目》列为本部类[2]。酸枣
仁味酸、性平，具有补肝宁心、镇静安神、敛汗、
生津等功效，主要用于治疗虚烦不眠、惊悸多梦、
体虚多汗、津伤口渴等症，是河北省道地药材[3]。
酸枣仁的主要化学成分有皂苷类、黄酮类、生
物碱类等。现代药理研究表明酸枣仁中皂苷类和黄
酮类化合物是其镇静催眠的主要有效成分[4]。其中
酸枣仁皂苷 A 和斯皮诺素是《中国药典》2010 年版
所规定的酸枣仁的活性成分，白桦脂酸也以其抗肿
瘤活性备受关注。目前，已有文献报道了一些酸枣
仁活性成分（酸枣仁皂苷 A、酸枣仁皂苷 B、斯皮
诺素和白桦脂酸）的测定分析方法，包括高效液相
色谱（HPLC）[5-7]、超高效液相色谱（UPLC）[8]

收稿日期：2014-10-11
基金项目：河北省自然基金-石药集团医药联合研究基金（H2012206079）
作者简介：张巧月（1990—），女，硕士研究生，从事中药质量控制与药动学研究。Tel: 15233656827 E-mail: 694910334@qq.com
*通信作者 张兰桐 Tel: (0311)86266419 E-mail: zhanglantong@263.net
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月

• 124 •
和胶束毛细管电泳（MEKC）[9]等。但这些方法分
析周期长，所测成分单一，因此，为了进一步有效
控制酸枣仁的质量，提高临床用药的安全性，需要
建立一个可靠、准确的分析方法来对其多组分进行
同时测定。
本研究建立了 HPLC-ESI-MS/MS 法同时测定
酸枣仁药材中 9 种化学成分，并将其应用于不同来
源市售酸枣仁的质量分析，可为酸枣仁药材的质量
控制提供科学依据。
1 仪器与试药
1.1 试药
对照品酸枣仁皂苷 A（批号 110734-200510）、
酸枣仁皂苷 B（批号 110814-200607）、芦丁（批号
100080-200707）均购自中国食品药品检定研究院
（质量分数均大于 98%）；斯皮诺素（批号 121220）
购自成都普菲德生物技术有限公司（质量分数大于
98%）；白桦脂酸（批号 100904）、白桦脂醇（批号
zl20140326）均购自南京泽朗医药科技有限公司（质
量分数均大于 98%）；芹菜素（批号 101129）购自
上海融禾医药科技有限公司（质量分数大于 98%）；
柚皮苷（批号 FY17910711 ）、橙皮苷（批号
FY11290618）均购自南京飞宇生物技术股份有限公
司（质量分数均大于 98%）。
乙腈为色谱纯（美国 J. T. Baker 公司）；水为纯
净水（杭州娃哈哈集团有限公司）；甲酸为色谱纯（美
国 Dikma 公司）；其他试剂均为分析纯。酸枣仁
Ziziphi Spinosae Semen 取自不同产地酸枣 Ziziphus
jujuba Mill. var. spinosa (Bunge) Hu ex H. F. Chou，
由河北医科大学药学院生药学李连怀副教授鉴定。
样品具体信息见表 1。
1.2 仪器
Agilent1200 高效液相色谱仪，配有在线脱气
表 1 酸枣仁样品
Table 1 Samples of Ziziphi Spinosae Semen
编号 代码 来源地
1 承德-1 河北承德
2 承德-2 河北承德
3 赞皇-1 河北赞皇
4 赞皇-2 河北赞皇
5 赞皇-3 河北赞皇
6 山西-1 山西
7 山西-2 山西
8 云南 云南
机，四元泵，自动进样器（美国 Agilent 公司）；
3200QTRAPTM三重四级杆线性离子阱质谱仪，配有
ESI 离子源（美国 AB 公司）；Analyst 1.5.2 software
数据系统（美国 AB 公司）；SCQ-200 超声波清洗器
（100 W，25 kHz）（上海声谱超声波设备厂）；BP211D
型十万分之一天平（德国 Sartorius 公司）。
2 方法与结果
2.1 分析条件
2.1.1 色谱条件 色谱柱 Sapphire C18 柱（150
mm×4.6 mm，5 μm），流动相为水（A，1 mmol/L
乙酸铵-0.1%的甲酸）-乙腈（B），梯度洗脱（0～2
min，20%～95% B；2～12 min，95% B），进样前
按流动相初始条件平衡 6 min；体积流量 1 mL/min；
柱温 30 ℃；进样量 10 μL。对照品和样品的提取多
反应监测模式（MRM）色谱图见图 1。
2.1.2 质谱条件 离子源为电喷雾离子化源（ESI）；
MRM 进行定量分析；采用负离子检测模式；源喷射
电压（IS）为−4 500 V；离子源温度为 650 ℃；雾
化气（GS1，N2）压力为 413.70 kPa；辅助气（GS2，
N2）压力为 448.18 kPa；气帘气（N2）压力为 206.85
kPa。接口加热，全程通入氮气，MRM 模式定量。
监测的离子对，解簇电压（DP）和碰撞能量（CE）
见表 2。9 种被测成分的二级质谱图见图 1。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 分别称取对照品酸枣仁
皂苷 A、酸枣仁皂苷 B、斯皮诺素、白桦脂酸、白
桦脂醇、芦丁、芹菜素、橙皮苷、柚皮苷适量，精
密称定，加 75%甲醇制成对照品溶液。分别取各对
照品溶液适量，摇匀，即得酸枣仁皂苷 A、酸枣仁
皂苷 B、斯皮诺素、白桦脂酸、白桦脂醇、芦丁、
芹菜素、橙皮苷、柚皮苷的混合对照品溶液，质量
浓度分别为 12.000、25.000、5.313、175.000、327.500、
95.000、0.231、80.000、0.375 μg/mL。
2.2.2 供试品溶液的制备 将洁净酸枣仁于 40
℃条件下干燥 8 h，研磨后过 40 目筛。取酸枣仁
粉末约 5 g，置于索氏提取器中，用石油醚（60～
90 ℃）浸泡过夜（8 h），脱脂 2 次，每次 2 h，
回收石油醚。将脱脂粉末挥尽残醚至无醚味，精
密称取 1 g 酸枣仁脱脂粉，转移至 25 mL 具塞三
角瓶中，精密加入 75%甲醇 20 mL，称质量，冰
浴超声 1 h，再称质量，用 75%甲醇补足减失的质
量，取上清液，用 0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续
滤液作为供试品溶液。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月

• 125 •

图 1 对照品 (A)、酸枣仁样品 (B) 的多重反应监测色谱图和对照品二级质谱图 (C)
Fig. 1 MRM chromatograms of reference substances (A) and Semen Ziziphi Spinosae samples (B)and second mass spectrum of
reference substances (C)
表 2 酸枣仁中 9 种成分的质谱数据
Table 2 HPLC-ESI-MSn data of nine constituents from Ziziphi Spinosae Semen
成分 相对分子质量 tR /min 离子源模式 MS1(m/z) MS2 (m/z) DP/V CE/eV
酸枣仁皂苷 A 1 207.35 3.76 ESI− 1 206.2 1 206.2 −91 −27
酸枣仁皂苷 B 1 045.21 3.93 ESI− 1 043.4 1 043.4 −134 −24
斯皮诺素 608.54 3.69 ESI− 607.3 292.0 −122 −70
白桦脂酸 456.71 9.87 ESI− 455.3 455.3 −97 −20
白桦脂醇 442.72 3.69 ESI− 487.4 487.4 −58 −13
芹菜素 270.24 4.35 ESI− 260.0 116.8 −80 −51
芦丁 610.51 3.69 ESI− 609.0 300.0 −95 −49
橙皮苷 610.56 3.69 ESI− 610.2 301.3 −74 −36
柚皮苷 580.53 3.68 ESI− 579.2 150.8 −92 −56
0 3.0 6.0 9.0 0 3.0 6.0 9.0 0 200 400 600 800 1 000 1 200
t/min t/min m/z
酸枣仁皂苷 A
酸枣仁皂苷 B
斯皮诺素
白桦脂酸
白桦脂醇
芹菜素
芦丁
橙皮苷
柚皮苷
A B C
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月

• 126 •
2.3 方法学考察
2.3.1 线性关系、定量限和检测限 精密量取上述
混合对照品溶液适量，采用倍数稀释法进行稀释，
得到 6 个不同质量浓度的系列对照溶液，按照上述
色谱和质谱条件进行分析，并记录色谱峰面积。以
对照品的质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标
（Y），绘制标准曲线，并进行线性回归，得标准曲线
方程（表 3）。将混合对照品溶液逐步稀释并进行测
定，分别以信噪比为 10 和 3 时各对照品的量作为定
量限（LOQ）和检测限（LOD）。结果 9 种待测组分
的质量浓度和峰面积的相关系数（r）均大于 0.998 4，
表明该方法的线性关系良好，各组分的回归方程、
线性范围、检测限（LOQ）和定量限（LOD）见表 3。
2.3.2 精密度试验 取同一批号（赞皇-3）酸枣仁样
品，取约 1 g，精密称取 6 份，按“2.2.2”项下操作，
制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件下记录 9 种化
合物的峰面积，计算 RSD 值，考察日内精密度。取
同一批号（赞皇-3）酸枣仁样品，取约 1 g，精密称
取 6 份，按“2.2.2”项下操作，制备供试品溶液，在
上述色谱条件下记录 9 种待测成分的峰面积，连续 3
d 测定计算 RSD 值，考察日间精密度。结果显示日
内精密度及日间精密度的 RSD 值分别小于 0.38%
表 3 9 种成分的回归方程、相关系数、线性范围、定量限和检测限
Table 3 Regression equations, correlation coefficients, linear ranges, LODs, and LOQs of nine constituents
成分 标准曲线方程 r 线性范围/(μg·mL−1) LOD/(ng·mL−1) LOQ/(ng·mL−1)
酸枣仁皂苷 A Y＝476.37 X＋7.965 2 0.999 7 0.375～12.00 86.600 0 350.630 0
酸枣仁皂苷 B Y＝353.86 X－81.920 0.999 6 0.781～25.00 104.690 0 318.800 0
斯皮诺素 Y＝74 838 X＋66 546 0.998 4 0.166～5.313 0.734 4 2.447 9
白桦脂酸 Y＝245 066 X＋5 000 000 0.998 7 5.469～175.0 5.469 0 10.940 0
白桦脂醇 Y＝248.21 X＋24 711 0.998 4 20.47～655.0 843.750 0 2 109.4
芹菜素 Y＝253 404 X－623.01 0.999 0 0.007～0.231 0.104 6 1.156 3
芦丁 Y＝6 779.3 X＋359.2 0.999 7 0.578～18.50 0.115 6 0.385 4
橙皮苷 Y＝8 012.3 X－1 207.4 0.999 6 0.156～10.00 12.500 0 31.250 0
柚皮苷 Y＝14 562 X＋65.046 0.998 7 0.012～0.375 0.031 3 0.093 8

和 0.47%，表明该方法精密度良好。
2.3.3 加样回收率试验 精密称取已测定的酸枣仁
样品 0.5 g，分别精密加入高、中、低 3 个水平的对
照品溶液，每个水平 3 份，共 9 份，按“2.2.2”项
下方法操作，制备供试品溶液。按上述的色谱条件
测定 9 个化合物的峰面积，计算回收率及 RSD 值。
结果 9 种被测成分的平均回收率为 98.04%～
101.5%，RSD 值为 0.03%～0.74%。
2.3.4 稳定性试验 取同一供试品溶液（赞皇-3），
分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样分析测定，记
录峰面积，考察供试品溶液的稳定性。结果表明
所有被测物峰面积的 RSD＜0.42%，说明样品稳
定性良好。
2.3.5 重复性试验 取同一批号（赞皇-3）酸枣仁样
品，取约 1 g，精密称取 6 份，按“2.2.2”项下操作，
制备供试品溶液，在“2.1”色谱条件下记录 9 种化
合物的峰面积，计算 RSD 值，考察重复性。9 种化
合物的 RSD 值均小于 0.38%，符合规定，表明本方
法重复性良好。
2.4 样品测定
取不同批次的酸枣仁样品，按“2.2.2”项下的
方法制备供试品溶液，按照“2.1”项下的条件进行
测定，记录色谱峰面积，将 9 个待测成分的峰面积
代入相应的标准曲线方程中，并计算其质量分数。
不同批号的酸枣仁的测定结果见表 4。
8 批酸枣仁中 9 种成分的总量在 45.00～215.14
μg/g，表明这 9 种成分在不同产地不同批次的酸枣
仁中的总量有明显的不同，样品 4、5 和 3 的总量最
高，分别是 215.14、210.12、203.32 μg/g，样品 1
和 2 的总量次之，为 193.54 和 182.45 μg/g，而样品
8（伪品滇枣仁）量最低，为 45.00 μg/g。7 批正品
酸枣仁的平均量是 177.3 μg/g。平均质量分数最高
的成分是白桦脂酸 97.30 μg/g，接着是白桦脂醇
53.57 μg/g，芦丁 10.86 μg/g，酸枣仁皂苷 B 6.80
μg/g。芹菜素、橙皮苷和柚皮苷是平均量较低的成
分，而柚皮苷在伪品滇枣仁中没有检测到。从整体
来看，河北赞皇的酸枣仁有效成分量高，河北承德
次之，山西第三，伪品酸枣仁量最低。这些分析结
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 46 卷 第 1 期 2015 年 1 月

• 127 •
表 4 酸枣仁中 9 种成分的测定结果
Table 4 Determination of nine constituents in Ziziphi Spinosae Semen
质量分数/(μg·g−1) 样品
编号 酸枣仁皂苷 A 酸枣仁皂苷 B 斯皮诺素 白桦脂酸 白桦脂醇 芹菜素 芦丁 橙皮苷 柚皮苷
1 4.83 8.85 1.42 120.78 54.93 0.23 1.73 0.45 0.32
2 3.88 10.91 1.36 108.11 55.73 0.14 1.56 0.38 0.38
3 3.82 4.89 1.65 109.92 68.82 0.07 12.44 1.30 0.41
4 4.77 6.25 1.65 116.30 67.24 0.08 16.76 1.70 0.39
5 5.08 6.73 1.75 115.80 65.27 0.07 13.64 1.44 0.34
6 3.99 5.40 1.50 56.72 32.04 5.40 15.14 1.50 0.09
7 3.10 4.54 1.62 53.48 30.96 4.89 14.72 1.43 0.11
8 2.05 4.05 0.78 29.38 6.89 0.05 1.48 0.32 未检到

果表明不同产地甚至是相同产地不同批次的酸枣仁
中 9 种待测物的量存在着很大差异。
3 讨论
本实验首次建立了一种快速、准确的 HPLC-
MS/MS 分析方法，用于同时测定酸枣仁中的 9 种化
合物（酸枣仁皂苷 A、酸枣仁皂苷 B、斯皮诺素、
白桦脂酸、白桦脂醇、芦丁、芹菜素、橙皮苷、柚
皮苷）。该方法成功检测了市售常见的 8 批酸枣仁样
品，结果表明不同产地或是相同产地不同批次的酸
枣仁 9 种成分的量存在着差异。HPLC-MS/MS 方法
为酸枣仁的质量控制提供了可靠地分析手段。
实验比较了以 50%、75%、90%、100%甲醇，
75%乙醇，纯乙醇为提取媒介，提取供试品，结果
表明以 75%甲醇提取效率较高。之后比较了超声提
取及加热回流提取效果，2 种方式提取率相近，由
于超声提取相对方便快捷，因此选择超声提取法。
此外还考察了提取 30、45、60、90 min 对待测成分
的提取效果，结果表明超声提取 60 min，提取效率
较高。
流动相的选择，分别以甲醇-水、乙腈-水作为
流动相进行梯度洗脱，结果表明以乙腈-水为流动相
进行梯度洗脱时 9 种待测物均有很好的分离，所以
选择乙腈为流动相。为改善峰形，比较了乙腈-甲酸
（0.05%、0.1%、0.2%和 0.3%）为流动相时的分离
效果，结果显示乙腈-0.1%甲酸水峰形较好。为了提
高皂苷类化合物在质谱中的离子稳定性，在流动相
中加入了乙酸铵（0.5、1、2、3 mmol/L），结果显
示流动相为水（1 mmol/L 乙酸铵-0.1%的甲酸）-乙
腈时，峰形更好。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010
[2] 史琪荣, 周 耘, 周 萍, 等. 中药酸枣仁的研究概况
[J]. 天然药物化学, 2004, 22(2): 94-97.
[3] 张志斐, 袁志芳, 张兰桐, 等. 河北道地药材酸枣仁
HPLC-ELSD 指纹图谱研究 [J]. 中草药, 2006, 37(8):
1247-1250.
[4] 闫 艳, 杜晨晖, 李小菊, 等. HPLC-DAD-ELSD 法同
时测定酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷 A 和 B 的含量
[J]. 药物分析杂志, 2011, 31(1): 30-33.
[5] Zhang M C, Zhang Y Q, Xie J B. Simultaneous
determination of jujuboside A, B and betulinic acid in
Semen Ziziphi Spinosae by high performance liquid
chromatography-evaporative light scattering detection [J].
J Pharm Biomed Anal, 2008, 48(5): 1467-1470.
[6] 吴 闯, 张 健, 殷志琦. HPLC 测定酸枣仁中白桦酸
的含量 [J]. 药物生物技术, 2010, 17(3): 244-246.
[7] 张翠英, 刘 峰, 郭丽丽, 等. 酸枣仁醇提物中 4 个活
性成分的测定 [J]. 中成药, 2011, 33(12): 2119-2121.
[8] 崔思娇, 罗 洁, 张靓琦, 等. UPLC 同时测定酸枣仁
中 4 种活性成分的含量 [J]. 世界科学技术—中医药现
代化, 2013, 15(6): 1323-1327.
[9] Dong M, Chen G H, Wu X, et al. Determination of
jujuboside A and B by micellar electrokinetic capillary
chromatography [J]. Chin J Nat Med, 2010, 8(3):
208-211.