全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 7期 2016年 4月 ·1132·
地黄生品与炮制品中 8个糖类成分及不同炮制时间点其量变化分析
张文婷 1，岳 超 1，黄琴伟 1，袁 堃 1，严爱娟 1，石上梅 2*
1. 浙江省食品药品检验研究院，浙江 杭州 310052
2. 国家药典委员会，北京 100061
摘 要：目的 采用 HPLC 法分析地黄生品及炮制品中 8 种糖类成分，探索炮制时间对地黄中糖类成分的影响。方法 采
用 Prevail Carbohydrate ES色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），体积流量 0.8 mL/min，蒸发光散射检测器检测，流动相为乙
腈-水，梯度洗脱。结果 果糖、葡萄糖、蔗糖、密二糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖、毛蕊花糖分离良好。在相应质量浓
度范围内 8种化合物的线性关系良好，r在 0.998 4～0.999 7；平均加样回收率为 97.5%～103.2%。不同炮制时间点定量分析
结果显示地黄中糖类成分蔗糖、棉子糖、水苏糖和毛蕊花糖在炮制过程中呈下降趋势，而果糖、葡萄糖、密二糖和甘露三糖
明显上升。结论 地黄生品与炮制品中糖类比例明显不同，不同炮制时间地黄中糖类成分有不同的变化趋势。
关键词：生地黄；熟地黄；炮制；糖类成分；果糖；葡萄糖；蔗糖；密二糖；棉子糖；甘露三糖；水苏糖；毛蕊花糖
中图分类号：R283.1 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2016)07 - 1132 - 05
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2016.07.012
Contents of eight saccharides in unprocessed and processed Rehmannia glutinosa
and content changes at different processing time points
ZHANG Wen-ting1, YUE Chao1, HUANG Qin-wei1, YUAN Kun1, YAN Ai-juan1, SHI Shang-mei2
1. Zhejiang Institute for Food and Drug Control, Hangzhou 310052, China
2. Chinese Pharmacopeia Commission, Beijing 100061, China
Abstract: Objective To analyze the contents of eight saccharides in unprocessed and processed Rehmannia glutinosa by HPLC and
to investigate the impacts of processing time on saccharides in R. glutinosa. Methods HPLC conditions were as follows: Prevail
Carbohydrate ES column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm), flow rate of 0.8 mL/min, ELSD detector, acetonitrile as mobile A and water as
mobile B for gradient elution. Results Fructose, glucose, surcrose, melibiose, raffinose, manninotriose, stachyose, and verbascose
were separated with good linear relationships within their corresponding concentration ranges, the r values were within 0.998 4—
0.999 7; the average recovery was 97.5%—103.2%. The content analysis at different processing time points showed that surcrose,
raffinose, stachyose, and verbascose exhibited decreasing trend during processing, while fructose, glucose, melibiose, and
manninotriose exhibited significantly increasing trend. Conclusion The proportions of saccharides in unprocessed and processed R.
glutinosa are significantly different, and the results of this study could provide the data support for revealing the processing mechanism
of R. glutinosa.
Key words: unprocessed Rehmannia glutinosa; processed Rehmannia glutinosa; processing; saccharides; fructose; glucose; surcrose;
melibiose; raffinose; manninotriose; stachyose; verbascose

地黄为玄参科地黄属植物地黄 Rehmannia
glutinosa Libosch. 的新鲜或干燥块根，为最常用和
用量最大的中药材之一。《中国药典》2015 年版收
录的炮制方法有蒸法或酒炖法[1]，地黄加工炮制后
药性和功效发生改变，生地黄大寒而凉血，蒸制熟
地黄性寒而补肾，酒炖熟地黄性微温而补血[2]，临
床依据不同药效而应用于不同病症。地黄主要含有
糖类、环烯醚萜类、氨基酸类等成分，其中糖类成
分的生物学活性受到了广大学者的关注，现代研究
表明地黄低聚糖类具有提高机体免疫力、促进血细
胞增殖、抗氧化、降血糖、抗老年痴呆等作用[3-10]。
目前文献报道地黄生品与炮制品主要关注梓醇、环

收稿日期：2015-11-03
作者简介：张文婷，主任中药师，研究方向为中药质量评价与新药研究。Tel: (0571)87180337 E-mail: leozhwt@163.com
*通信作者 石上梅，主任药师，主要从事中药标准的研究与建立。E-mail: ssm@chp.org.cn

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 7期 2016年 4月 ·1133·
烯醚萜类、水苏糖等成分的差异[11-12]，但同时测定
地黄中 8种糖类成分的分析方法尚未见报道。为了
进一步探讨地黄炮制前后成分的变化规律，阐明炮
制作用机制，本实验采用 HPLC-ELSD 法研究地黄
生品与炮制品中 8种糖类成分的变化情况，观察其
动态变化过程，为揭示地黄炮制机制提供数据支持。
1 仪器与材料
Agilent 1200 高效液相色谱仪，美国安捷伦公
司，Chemstation色谱工作站；AG285电子天平，瑞
士Mettler Toledo公司；2000ES蒸发光散射检测器，
Alltech 公司；KQ-300VDB 型双频数控超声波清洗
仪，昆山市超声仪器有限公司；MilliQ-Advantuge
A10，Millipore公司。
乙腈，Merck 公司，色谱纯；甲醇，杭州化学
试剂有限公司，分析纯；纯水，Milli-Q 自制。D-
无水葡萄糖（供定量测定用，质量分数 99.5%，批
号 110833-201205）、蔗糖（供定量测定用，批号
111507-20001）、果糖（供定量测定用，质量分数
99.4%，批号 100231-121305），均购自中国食品药
品检定研究院；密二糖（质量分数 99%，批号
C1301015）、棉子糖（质量分数99%，批号E1222007）、
水苏糖（质量分数 98%，批号 G1316008），均购自
Aladdin Industrial 公司；甘露三糖（质量分数＞
99%），由中国食品发酵工业研究所赠送；毛蕊花糖
（质量分数＞95%，批号 120801），购于 Megazyme
公司。
地黄、熟地黄样品分别由嘉兴东方国药有限公
司（批号：地黄 130605、130610，熟地黄 S130605、
S130610）、宁波市中药饮片有限公司（批号：地黄
1305322、130606，熟地黄 S1305322、S130606）、
浙江中医药大学中药饮片厂（批号：地黄 3年存，
熟地黄 3年存）、杭州桐君堂医药药材有限公司中药
饮片厂（批号：地黄 20130530、20130604，熟地黄
S20130530、S20130604）提供（同一厂家相应批次
的熟地黄由对应批次的生地黄炮制得到），经浙江省
食品药品检验研究院郭增喜主任中药师鉴定均为玄
参科地黄属植物地黄 Rehmannia glutinosa Libosch.
的干燥块根。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 Prevail Carbohydrate ES柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-水，梯度洗脱：0～
20 min，72%～60%乙腈；20～30 min，60%～55%
乙腈；体积流量 0.8 mL/min；蒸发光散射检测器检
测。典型图谱见图 1。





1-果糖 2-葡萄糖 3-蔗糖 4-密二糖 5-棉子糖 6-甘露三糖
7-水苏糖 8-毛蕊花糖
1-fructose 2-glucose 3-surcrose 4-melibiose 5-raffinose
6-manninotriose 7-stachyose 8-verbascose

图 1 对照品 (A)、地黄 (B) 和熟地黄 (C) 的 HPLC图
Fig. 1 HPLC of reference substances (A), unprocessed R.
glutinosa (B), and processed R. glutinosa (C)

2.2 对照品溶液的制备
取对照品适量，精密称定，加 25%甲醇分别制
成含果糖 362.7 μg/mL、葡萄糖 180.7 μg/mL、蔗糖
160.8 μg/mL、密二糖 133.4 μg/mL、棉子糖 168.0
μg/mL、甘露三糖 752.5 μg/mL、水苏糖 687.0 μg/mL、
毛蕊花糖 72.8 μg/mL的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
选取杭州桐君堂提供的地黄（批号 20130530）
平均分成 10份，置蒸锅内，分别蒸制 0、3、6、9、
12、15、18、21、24、27 h，取出，低温干燥，得
到不同炮制时间点的熟地黄样品。
取不同批次地黄的生品和炮制品适量，剪碎，
精密称定，精密加入等量硅藻土，研匀，取粉末约
2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入 25%甲醇溶
液 25 mL，精密称定质量，超声处理 1 h，放冷，加
25%甲醇补足减失的质量，摇匀，高速离心 10 min
后用 0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
1
2
3
4
5
6
7
A
1
2
3
4
5
6
7
7 1
2 3
4 5
6
0 10 20 30
t/min
B
C
8
8
8

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2.4 线性关系考察
精密吸取上述混合对照品溶液 0.5～30 μL，分
别注入液相色谱仪，测定峰面积，以进样量的对数
为横坐标（X），峰面积积分值的对数为纵坐标（Y），
以最小二乘法进行线性回归，得回归方程、相关系
数（r）及线性范围分别为果糖 Y＝1.723 X＋3.594，
r＝0.999 1，0.181～2.902 μg；葡萄糖 Y＝1.532 X＋
3.510，r＝0.998 6，90.4～3 614.0 ng；蔗糖 Y＝1.422
X＋3.694，r＝0.999 2，80.4～3 216.0 ng；蜜二糖
Y＝1.379 X＋3.286，r＝0.998 9，0.114～2.858 μg；
棉子糖 Y＝1.486 X＋3.511，r＝0.999 3，0.162～3.240
μg；甘露三糖 Y＝1.450 X＋2.938，r＝0.999 7，
0.343～10.278 μg；水苏糖 Y＝1.449 X＋3.470，r＝
0.999 6，0.137～6.183 μg；毛蕊花糖 Y＝1.386 X＋
3.592，r＝0.998 4，69.6～1 392.0 ng；结果显示，
果糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖、
水苏糖和毛蕊花糖分别在相应进样范围内呈良好的
线性关系。
2.5 精密度试验
分别精密吸取混合对照品溶液 10 μL，重复进
样 6 次，以峰面积值为指标计算 RSD（n＝6），考
察方法精密度，结果果糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、
棉子糖、甘露三糖、水苏糖和毛蕊花糖的 RSD分别
为 1.5%、4.3%、2.7%、3.7%、1.8%、0.9%、0.8%
和 3.8%，表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
精密称取熟地黄（批号 S130605）粉末 6 份，
按照“2.3”项方法制备供试品溶液，测定峰面积并
分别计算各成分的量。结果果糖平均质量分数为
45.83 mg/g，RSD为 1.4%；葡萄糖平均质量分数为
24.43 mg/g，RSD 为 1.9%；蔗糖平均质量分数为
17.24 mg/g，RSD为 3.5%；蜜二糖平均质量分数为
13.63 mg/g，RSD为 2.7%；棉子糖平均质量分数为
16.32 mg/g，RSD为 1.8%；甘露三糖平均质量分数
为 78.53 mg/g，RSD为 1.4%；水苏糖平均质量分数
为 81.01 mg/g，RSD为 0.8%；毛蕊花糖平均质量分
数为 5.29 mg/g，RSD为 4.3%。
2.7 稳定性试验
取重复性试验第 1份供试品溶液，分别间隔 0、
3、6、9、11、13 h进样分析，以峰面积为指标计算
RSD，考察供试品溶液稳定性，结果供试品溶液果
糖、葡萄糖、蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖、
水苏糖和毛蕊花糖峰面积的 RSD 分别为 1.5%、
3.0%、2.1%、4.2%、3.5%、2.2%、1.6%、4.3%，
表明对照品溶液和供试品溶液在 13 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
采用加样回收率测定法评价该方法的准确度。
精密量取已测定的熟地黄（批号 S130605）粉末 6
份，分别精密加入各对照品溶液适量，按照供试品
制备方法制备供试品溶液，测定峰面积，计算平均
回收率和 RSD。结果果糖平均回收率为 103.2%，
RSD 为 1.4%；葡萄糖平均回收率为 98.8%，RSD
为 1.3%；蔗糖平均回收率 99.1%，RSD 为 3.7%；
密二糖平均回收率 102.1%，RSD为 2.0%；棉子糖
平均回收率 98.5%，RSD为 2.2%；甘露三糖平均回
收率为 99.0%，RSD为 2.7%；水苏糖平均回收率为
97.5%，RSD 为 1.6%；毛蕊花糖平均回收率为
101.3%，RSD为 2.0%。
2.9 样品测定
取生地黄样品和炮制后的熟地黄样品，按“2.3”
项方法制备供试品溶液，分别测定果糖、葡萄糖、
蔗糖、蜜二糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖和毛蕊
花糖的量，结果见表 1。
将不同炮制时间点的熟地黄样品，分别按照
“2.3”项方法制备供试品溶液，进样测定，记录峰
面积，并计算各成分质量分数，测定结果见表 2。
表 2测定结果显示，与炮制前比较，熟地黄中
果糖、葡萄糖、蜜二糖和甘露三糖明显升高，而蔗
糖、棉子糖、水苏糖和毛蕊花糖明显下降（P＜0.01，
8个成分炮制前后比较均具显著性差异），这可能与
炮制受热过程蔗糖分解为果糖和葡萄糖、棉子糖分
解成为蜜二糖和果糖、水苏糖分解为甘露三糖或蜜
二糖相关。从测定结果看出，生地黄中以蔗糖、棉
子糖、水苏糖和毛蕊花糖为主成分，而熟地黄中以
果糖、葡萄糖、密二糖、甘露三糖为主成分。
不同炮制时间点的熟地黄各指标成分定量测定
结果发现，果糖、葡萄糖、蜜二糖和甘露三糖在炮
制过程中呈现上升趋势，9 h内上升较为明显，之后
变化较为缓和。水苏糖、蔗糖、棉子糖和毛蕊花糖
4种成分总体呈现下降趋势。
3 讨论
本实验还对地黄经液相分离所得各色谱峰用对
照品对照和 LC-MS 手段验证，证明了对照品成分
与地黄中各成分的一致性。
本实验对回流提取和超声提取进行了比较，结
果显示回流提取方法部分指标成分低于超声提取方

中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 47卷 第 7期 2016年 4月 ·1135·
表 1 生地黄和熟地黄样品测定结果 (n = 2)
Table 1 Determination of samples of unprocessed and processed R. glutinosa (n = 2)
企业 批号 规格
质量分数/(mg·g−1)
果糖 葡萄糖 蔗糖 密二糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖 毛蕊花糖
嘉兴东方国药有
限公司
130605 生地 34.92 27.14 59.30 17.42 61.38 63.74 283.63 17.92
S130605 熟地 88.56 49.60 32.99 26.66 31.39 147.17 153.31 10.79
130610 生地 37.70 31.34 61.24 18.12 62.72 63.40 275.13 17.00
S130610 熟地 82.17 44.63 29.33 23.61 27.75 143.09 154.09 10.18
宁波市中药饮片
有限公司
1305322 生地 24.57 27.45 98.24 13.26 75.27 38.45 286.26 18.62
S130532 熟地 130.41 76.10 12.26 37.03 9.92 207.01 31.34 —
130606 生地 25.26 28.57 67.75 13.73 98.86 55.31 369.42 18.86
S130606 熟地 133.92 85.71 13.71 38.32 14.65 105.86 27.38 —
杭州桐君堂医药
药材有限公司
中药饮片厂
20130530 生地 13.99 21.27 73.73 10.76 109.90 24.07 314.50 16.11
S20130530 熟地 105.97 59.56 11.62 40.08 17.62 113.56 61.31 —
20130604 生地 28.63 25.79 41.36 21.59 75.39 47.46 266.90 15.81
S20130604 熟地 96.61 54.25 10.38 35.15 13.85 107.44 35.51 —
浙江中医药大学
中药饮片厂
3年存 生地 15.97 21.93 65.36 12.96 111.00 27.14 324.63 18.21
3年存 熟地 69.61 44.72 45.36 23.24 71.24 283.32 208.45 13.75

表 2 不同炮制时间点的熟地黄各成分定量测定结果 (n = 2)
Table 2 Determination each constituent in processed R. glutinosa at different processing time points (n = 2)
炮制时间/h
质量分数/(mg·g−1)
果糖 葡萄糖 蔗糖 蜜二糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖 毛蕊花糖
0 29.09 37.52 48.80 19.45 57.82 52.85 291.26 20.35
3 49.13 38.42 33.33 21.64 44.94 85.87 225.13 14.89
6 88.24 49.75 29.52 28.09 33.39 151.07 181.52 12.83
9 107.04 59.67 19.33 33.86 21.17 199.87 126.72 10.99
12 105.63 51.70 9.85 34.21 11.62 209.43 53.14 8.54
15 101.89 59.48 9.39 36.76 8.06 214.15 34.41 7.58
18 118.74 80.59 10.50 43.98 7.74 231.91 26.18 6.01
21 102.59 61.12 7.86 35.79 — 223.74 12.69 5.30
24 112.18 69.57 8.61 40.44 — 236.53 6.35 3.53
27 113.24 73.39 8.91 42.42 — 230.95 5.07 3.74

法，与文献报道[13-15]这些糖类热不稳定性相吻合，
故本实验选用超声提取方法。超声时间比较结果显
示，超声 40 min与超声 60 min结果基本一致，为
保证提取完全，实验选用超声 60 min。本实验还对
提取溶剂体积进行了比较，结果显示所设计的溶剂
体积满足提取要求。本方法所得生地黄和熟地黄图
谱特征性明显，可方便地区分两者，方法简便，结
果准确，可为评价生地黄和熟地黄质量提供依据。
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