全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 9 期 2012 年 9 月
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正交试验优化羌黄祛痹颗粒处方药材醇提工艺
徐忠坤 1, 2，郭传宝 1, 2，殷洪梅 1, 2，王钰芳 1, 2，刘洪波 1, 2，萧 伟 1, 2*
1. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222001
2. 中药制药过程新技术国家重点实验室，江苏 连云港 222001
摘 要：目的 优选羌黄祛痹颗粒处方药材乙醇提取的最佳工艺。方法 采用正交试验法，以异欧前胡素、芍药苷提取率为
指标，优选最佳醇提工艺。结果 羌黄祛痹颗粒处方药材的最佳醇提工艺为采用 5 倍量 95%乙醇提取 2 次，每次 60 min。
结论 优选的工艺稳定可行，可作为实际生产工艺。
关键词：羌黄祛痹颗粒；芍药苷；异欧前胡素；正交试验；提取工艺
中图分类号：R284.2 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)09 - 1764 - 03
Optimization of ethanol extraction technology of Qianghuang Qubi Granule
with orthogonal test
XU Zhong-kun1, 2, GUO Chuan-bao1, 2, YIN Hong-mei1, 2, WANG Yu-fang1, 2, LIU Hong-bo1, 2, XIAO Wei1, 2
1. Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co., Ltd., Lianyungang 222001, China
2. State Key Laboratory of New-tech for Chinese Medicine Pharmaceutical Process, Lianyungang 222001, China
Key words: Qianghuang Qubi Granule; peoniflorin; isoimperarorin; orthogonal test; extraction technology
羌黄祛痹颗粒源于明代·薛己《校注妇人良方》
（舒筋汤）经典古方，以中医理论为指导，应用现代
制剂技术研制而成。为治疗风寒湿痹症，肩臂疼痛
的中药六类新药。处方由片姜黄、羌活、当归、赤
芍等 7 味药组成。据文献报道[1-2]，处方中羌活的脂
溶性成分香豆素具有抗炎作用，其中异欧前胡素的
量较高；而该方中另一药材赤芍中的芍药苷同样具
有抗炎作用，并具有镇静、镇痛、解热等作用[3-4]。
为充分提取处方中各药材的有效成分，本实验以异
欧前胡素和芍药苷提取率为指标，采用 L9(34) 正交
试验法，对羌黄祛痹颗粒处方药材醇提工艺进行了
筛选。
1 仪器与材料
Agilent 1100 高效液相色谱仪；VWD 紫外检测
器；H.H.S 型电热数字显示恒温水浴锅（金坛市华
峰仪器有限公司）；RE—3000 旋转蒸发仪（上海亚
荣生化仪器厂）；TDL—5—A 离心机（上海安亭科
学仪器厂制造）；SHZ—IIID 型循环水真空泵（上海
亚荣生化仪器厂）；DEF—6050 型真空干燥箱（上
海新苗医疗器械制造有限公司）；DN—300 型静态
提取罐、JN—300 型静态浓缩罐（国营常熟制药机
械厂）；XK3130 型电子秤 [Mettler Toledo（常州）
称重设备系统有限公司]。
异欧前胡素（批号 0827-200105）、芍药苷（批
号 0736-200117）对照品购自中国药品生物制品鉴
定所；甲醇、乙腈（色谱纯），水（超纯水），其余
试剂均为分析纯。
处方中 7 味药材均购自连云港合兴堂中药饮片
加工厂，经江苏康缘药业股份有限公司吴舟主任药
师鉴定，其中片姜黄为姜科植物温郁金 Curcuma
wenyujin Y. H. Chen et C. Ling 的干燥块根、羌活为
伞形科植物羌活 Notopterygium incisum Ting ex H.
T. Chang 的干燥根茎及根、当归为伞形科植物当归
Angelica sinensis (Oliv.) Diels 的干燥根、赤芍为毛茛
科植物芍药 Paeonia lactiflora Pall. 的干燥根、海桐
皮为豆科植物刺桐 Erythrina arborescens Roxb. 的
收稿日期：2011-12-27
作者简介：徐忠坤（1979—），黑龙江省宁安市人，工程师，研究方向为中药制剂工艺的研究。Tel: 13812344975 E-mail: hfh1919@sina.com
*通讯作者 萧 伟 E-mail: wzhzh-nj@tom.com
网络出版时间：2012-08-16 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/12.1108.R.20120816.1040.003.html
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 9 期 2012 年 9 月
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干燥树皮、白术为菊科植物白术 Atractylodes
macrocephata Koidz. 的干燥根茎、甘草为豆科植物
甘草 Glycyrrhiza uralensis Fisch. 的干燥根茎。
2 方法与结果
2.1 异欧前胡素定量测定[5]
2.1.1 色谱条件 色谱柱为 Phenomenex Luna C18柱
（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相为甲醇-水（72︰
28），检测波长 315 nm，体积流量 0.6 mL/min，柱温
30 ℃，理论板数按异欧前胡素峰计算不低于 2 000。
2.1.2 线性关系考察 精密称取异欧前胡素对照品
6.72 mg，置 25 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻
度，摇匀，得质量浓度为 268.8 µg/mL 的对照品储
备液，分别精密吸取上述储备液 1.0、2.0、3.0、5.0、
10.0 mL，置 20 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇
匀，即得。分别进样 10 µL，以进样质量浓度为横
坐标（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得
回归方程 Y＝31 478 X－7 022.4，r＝0.999 9，结果
表明异欧前胡素在 13.44～134.40 µg/mL 呈良好线
性关系。
2.1.3 异欧前胡素对照品溶液的制备 精密称取异
欧前胡素对照品适量，加甲醇制成 20.2 μg/mL 对照
品溶液。
2.1.4 供试品溶液的制备 分别按 L9(34) 正交设
计表对样品进行提取，并将提取液回收乙醇，浸膏
加辅料适量，制成干燥提取物，分别称取相当于生
药 1.7 g 的干膏粉，置 50 mL 三角烧瓶中，加入正
己烷 15 mL，超声 20 min，滤过，滤液减压浓缩至
干，加入 5 mL 甲醇使溶解，用微孔滤膜滤过，得
滤液，作为供试品溶液。
分别吸取上述两种溶液各 5 µL 注入液相色谱
仪进行测定，计算异欧前胡素的量。
2.2 芍药苷定量测定[6-7]
2.2.1 色谱条件 色谱柱为 Phenomenex Luna C18
柱（250 mm×4.6 mm，5 µm），以乙腈为流动相 A，
以水（含 0.08%磷酸、0.08%三乙胺）为流动相 B，
进行梯度洗脱：0～17 min，15%～85% A；18～25
min，85%～15% A；26～32 min，15%～85% A；检
测波长 230 nm，体积流量 1.0 mL/min，柱温 30 ℃，
理论板数按芍药苷峰计算不低于 4 000。
2.2.2 线性关系考察 精密称取芍药苷对照品
15.26 mg，置 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至
刻度，摇匀，得质量浓度为 305.2 μg/mL 对照品储
备液，分别精密吸取上述储备液 1.0、2.0、4.0、6.0、
8.0 mL 置 10 mL 量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，
即得。分别进样 10 μL，以进样质量浓度为横坐标
（X），峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得回归
方程 Y＝12 340 X－4 343.6，r＝1.000 0，结果表明
芍药苷在 30.52～244.16 μg/mL 呈良好的线性关系。
2.2.3 对照品溶液的制备 取芍药苷对照品适量，
精密称定，加甲醇制成 40 µg/mL 对照品溶液。
2.2.4 供试品溶液的制备 分别按 L9(34) 正交设
计表对样品进行提取，并将提取液回收乙醇，浸膏
加辅料适量，制成干燥提取物，研细，取约 0.3 g，
精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 50%甲醇 25
mL，称定质量，超声（250 W，40 kHz）提取 30 min，
放冷，称定质量，用 50%甲醇补足减失的质量，滤
过，取续滤液，即得。
分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液 10
µL，注入液相色谱仪进行测定，计算芍药苷的量。
2.3 醇提工艺的优化研究[8-10]
取 335.6 g 药材（处方药材量的 1/5）进行提取
试验，依据预试验结果，选用异欧前胡素和芍药苷
的提取率为考察指标，对乙醇体积分数（A）、提取
时间（B）、乙醇用量（C）、提取次数（D）进行考
察，采用 L9(34) 正交表进行试验，结果采用综合评
分法进行分析（权重系数均为 0.5），结果见表 1，方
差分析见表 2。
提取率＝提取液中指标成分的量/药材中指标成分的量
综合评分＝芍药苷提取率×0.5＋异欧前胡素提取率×0.5
从直观分析可知，各因素影响大小顺序为 A＞
D＞B＞C，方差分析可知，相对于乙醇用量，乙醇
体积分数对提取工艺影响最显著（P＜0.05），其次
是提取次数（P＜0.05），提取时间和对提取工艺无
显著影响。因素效应曲线显示提取 3 次比提取 2 次
提取率略有升高，提取 60 min 比提取 30 min 提取
率有所升高。结合生产实际综合考虑，羌黄祛痹颗
粒的最佳提取工艺为 A3B2C1D2，即采用 5 倍量 95%
乙醇提取 2 次，每次 60 min。
2.4 提取工艺验证试验
按最佳醇提工艺进行 3 批验证试验，结果芍药
苷提取率分别为 70.28%、70.81%、70.62%，异欧前
胡素提取率分别为 71.36%、71.58%、71.29%。可知，
各项指标接近，重复性良好，证实正交试验结果分
析准确。
3 讨论
根据羌黄祛痹颗粒复方中含有脂溶性、水溶性
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表 1 L9(34) 正交试验设计及结果
Table 1 Design and results of L9(34) orthogonal test
试验号 A / % B / min C / 倍 D / 次 芍药苷提取率 / % 异欧前胡素提取率 / % 综合评分
1 75 (1) 30 (1) 5 (1) 1 (1) 59.46 52.15 55.805
2 75 (1) 60 (2) 6 (2) 2 (2) 64.25 57.58 60.915
3 75 (1) 90 (3) 8 (3) 3 (3) 66.37 59.25 62.810
4 85 (2) 30 (1) 6 (2) 3 (3) 66.25 65.56 65.905
5 85 (2) 60 (2) 8 (3) 1 (1) 64.28 60.18 62.230
6 85 (2) 90 (3) 5 (1) 2 (2) 68.65 63.45 66.050
7 95 (3) 30 (1) 8 (3) 2 (2) 69.52 72.12 70.820
8 95 (3) 60 (2) 5 (1) 3 (3) 72.21 73.25 72.730
9 95 (3) 90 (3) 6 (2) 1 (1) 63.15 68.36 65.755
K1 59.843 64.177 64.862 61.263
K2 64.728 65.292 64.192 65.928
K3 69.768 64.872 65.287 67.148
R 9.925 1.115 1.095 5.885
表 2 方差分析
Table 2 Analysis of variance
因 素 偏差平方和 自由度 F 值 显著性
A 147.770 2 80.793 P＜0.05
B 1.903 2 1.040
D 57.884 2 31.648 P＜0.05
C（误差） 1.829 2
F0.05(2, 2)＝19.0 F0.01(2, 2)＝99.0
和挥发油成分的特点，预试验设计 3 种提取工艺，
分别采用了提取挥发油、水提醇沉法，稀醇热提法
以及醇提水提醇沉法。本课题组对 3 种工艺所得提
取物进行镇痛、抗炎药理实验筛选，结果表明醇提
水提醇沉提取物对二甲苯致小鼠耳肿具有抑制趋
势，与空白对照组比较具有统计学差异（P＜0.05）；
对热板法小鼠痛阈有升高作用，与给药前相比具有
统计学差异，与空白对照组相比也具有统计学差异
（P＜0.05、0.01）[11-12]。醇提水提醇沉法制得提取
物具有作用强、毒性低的特点，优于其他提取方法。
为将处方药材中的活性成分充分提取出来，本实验
对其醇提工艺进行了优选。本研究选择异欧前胡素
和芍药苷提取率作为醇提工艺考察指标，得到最佳
醇提工艺为采用 5 倍量 95%乙醇提取 2 次，每次 60
min，试验表明，最佳工艺稳定，可行。
参考文献
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