全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 3 期 2011 年 3 月

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元胡止痛片 HPLC 指纹图谱研究
王云龙 1, 2，李延雪 2，邵礼梅 2，许世伟 2，冯振来 2，杨立志 2，姜雪敏 2
1. 沈阳药科大学药学院，辽宁 沈阳 110016
2. 鸡西市药品检验所，黑龙江 鸡西 158100
摘 要：目的 建立元胡止痛片 HPLC 指纹图谱。方法 采用 Extent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为 0.1%磷酸
溶液（三乙胺调 pH 6.5，A）-甲醇（B），梯度洗脱程序为：0～45 min，88%～40% A；45～70 min，40%～20% A；70～75 min，
20%～10% A；75～80 min，10%～5% A；80～85 min，5% A；检测波长 280 nm，柱温 35 ℃，体积流量 1.0 mL/min。结果 在
HPLC 色谱指纹图谱中，确定了 16 个共有峰，建立了元胡止痛片的共有模式，在 14 批元胡止痛片样品中有 10 批样品的指
纹图谱相似度在 0.9 以上。结论 本法结果准确、重现性好，为元胡止痛片 HPLC 指纹图谱质量控制提供了参考。
关键词：元胡止痛片；相似度；指纹图谱；共有模式；质量控制；高效液相色谱法
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)03 - 0495 - 03
HPLC fingerprint of Yuanhu Zhitong Tablets
WANG Yun-long1, 2, LI Yan-xue2, SHAO Li-mei2, XU Shi-wei2, FENG Zhen-lai2, YANG Li-zhi2, JIANG Xue-min2
1. School of Pharmacy, Shenyang Pharmaceutical University, Shenyang 110016, China
2. Jixi Institute for Drug Control, Jixi 158100, China
Key words: Yuanhu Zhitong Tablets; similarity; fingerprint; common model; quality control; HPLC

元胡止痛片为《中国药典》2010 版[1]一部品种，
由延胡索（醋制）与白芷两味中药组成，具有理气、
活血、止痛的功效；现版药典仅对其中的延胡索乙
素进行了质量控制，文献报道[2-6]的多是对其 1 种
或少数几种成分进行测定，而能够从整体上表征其
内在特征的指纹图谱研究[7-8]则鲜见报道。本实验
采用 HPLC 法研究了元胡止痛片指纹图谱，为其质
量控制提供了参考。
1 仪器与试药
岛津 2010A 高效液相色谱仪，配置四元泵、紫
外检测器、自动进样器、柱温箱、LC Soluion 色谱
工作站；AG285 电子分析天平。延胡索乙素（批号
110726-200409)、欧前胡素（批号 110826-200410）
与异欧前胡素（批号 110827-200407）对照品均由
中国药品生物制品检定所提供；水为重蒸馏水；甲
醇为色谱纯。共收集 14 批元胡止痛片，其来源见
表 1。
2 方法与结果
表 1 元胡止痛片来源
Table 1 Sources of Yuanhu Zhitong Tablets
样品 来 源 样品 来 源
1 广西天天乐药业 1 8 广西九连山药业 1
2 吉林六福堂药业 9 广西九连山药业 2
3 山东鲁抗大禹制药厂 10 广西世彪药业 1
4 山西旺龙药业 11 广西世彪药业 2
5 广西天天乐药业 2 12 四川大千药业
6 天津同仁堂药业 1 13 四川蜀中制药厂
7 天津同仁堂药业 2 14 四川省尚善制药厂

2.1 色谱条件
采用 Extent C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），
流动相为 0.1%磷酸溶液（三乙胺调 pH 6.5，A）-
甲醇（B）梯度洗脱，洗脱程序为：0～45 min，88%～
40% A；45～70 min，40%～20% A；70～75 min，20%～
10% A；75～80 min，10%～5% A；80～85 min，5% A；
检测波长 280 nm，柱温 35 ℃，体积流量 1.0 mL/min。

收稿日期：2010-06-15
作者简介：王云龙（1978—），男，黑龙江省鸡西市人，主管药师，沈阳药科大学在职硕士研究生，现工作单位为黑龙江省鸡西市药品检验所，
从事中药质量检验。Tel: 13836528326 E-mail: wangyunlong090@sina.com
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2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 分别取欧前胡素、延胡
索乙素、异欧前胡素对照品适量，精密称定，置 50
mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，制成质量
浓度分别为 160.0、74.0、86.4 µg/mL 的混合对照品
溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取 20 片元胡止痛片，糖
衣片除去糖衣，研细，取约 2.0 g 片粉，精密称定，
置具塞三角瓶中，精密加甲醇-氨水（20∶1）50 mL，
称定质量，超声提取 30 min，放冷，重复操作 1 次，
并用甲醇-氨水（20∶1）补足减失的质量，提取液
滤过后，摇匀，经 0.45 μm 微孔滤膜滤过，取续滤
液，即得。
2.3 方法学验证
2.3.1 精密度试验 取广西九连山药业 1 样品，按
“2.2.2”项下方法操作，在上述色谱条件下，重复进
样 6 次，记录色谱指纹图谱。结果各色谱峰对内参
比峰（13 号峰，欧前胡素）的相对保留时间和相对
峰面积的 RSD 值均小于 3.0%，符合指纹图谱要求。
2.3.2 重现性试验 取广西九连山药业 1 元胡止痛
片样品 6 份，每份 20 片，按“2.2.2”项下方法操作，
在上述色谱条件下进样分析，计算各色谱峰的相对
保留时间和相对峰面积，其 RSD 值均小于 5.0%，
符合指纹图谱要求。
2.3.3 稳定性试验 取广西九连山药业 1 样品，按
“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，于室温下放置，
分别于 0、2、4、8、12、24 h 进样分析，计算各色
谱峰的相对保留时间和相对峰面积，其 RSD 值均
小于 5.0%，结果表明，元胡止痛片样品溶液在 24 h
内稳定。
2.3.4 样品测定 按“2.2.2”项下方法制备 14 批供
试品溶液，进样测定，记录色谱图。
2.4 指纹图谱的建立
2.4.1 参照峰的选择 欧前胡素为元胡止痛片中主
要药理活性成分之一，且其量较大易于辨认，峰面
积稳定，出峰时间居中，分离度较好，故选定欧前
胡素为 HPLC 指纹图谱的参照峰。
2.4.2 特征峰的确定 以 14 批 10 个厂家不同批号
的元胡止痛片为对象进行指纹图谱研究。获得包括
欧前胡素（13 号峰）在内的 16 个色谱峰。通过比
对保留时间和对照品加入法，指认了其中 3 个色谱
峰，分别为欧前胡素（13 号峰）、延胡索乙素（14
号峰）、异欧前胡素（16 号峰）。色谱图见图 1。
13
14
16



13-欧前胡素 14-延胡索乙素 16-异欧前胡素
13- imperatorin 14- tetrahydropalmatine 16- isoimperatorin

图 1 元胡止痛片对照色谱图
Fig. 1 HPLC reference chromatogram
of Yuanhu Zhitong Tablets

2.4.3 元胡止痛片样品聚类分析 将各色谱峰面积
相对于称样量与平均片重量化，得到 14×16 矩阵，
应用“SPSS”软件对其进行系统聚类分析，采用组
间均联法（ between-groups lingkage ），以余弦
（cosine）作为样品相似性的测度。聚类分析将 14
批元胡止痛片样品分为 2 类，结合色谱峰面积相对
于称样量与平均片重量化，可判定第 I 类为较好的，
第 II 类为一般品。聚类结果见图 2。



图 2 元胡止痛片聚类谱系图
Fig. 2 Hierarchial cluster analysis
of Yuanhu Zhitong Tablets

2.4.4 指纹图谱共有模式确立与相似度评价 结合
聚类分析和峰面积量化结果，选取第 I 类 10 批样品
建立共有模式。将此 10 批样品色谱图导入“中药色
谱指纹图谱相似度评价系统·研究版（2004 A）”，选
取“时间窗”宽度为 0.5 min，经校准后，软件即生
成“对照谱图”。参与共有模式建立的样品色谱图和
生成的对照谱图以及共有模式图谱见图 3。
再将对照谱图和 14 批样品色谱图全部导入“中
药色谱指纹图谱相似度评价系统·检验版（2004 B）”，
软件即可计算出样品与对照谱图的相似度数据。试
13
14
8
9
6
7
11
4
5
1
3
10
2
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0 5 10 15 20 25
0 20 40 60 80
t / min
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S-对照指纹图谱
S- reference HPLC fingerprint
图 3 元胡止痛片对照图谱与 14 批样品图谱
Fig. 3 Reference HPLC fingerprint for 14 samples
of Yuanhu Zhitong Tablets

验分析结果表明，相似度分析结果与系统聚类结果
一致，两种方法得到了相互验证。根据相似度和聚
类分析结果，结合色谱峰面积相对于称样量与平均
片重量化，可确定相似度在 0.90 以上的样品质量较
好，0.90 以下的为质量较差，结果见表 2。

表 2 元胡止痛片相似度结果
Table 2 Similarity of Yuanhu Zhitong Tablets
样品 相似度 样品 相似度
1 0.903 8 0.968
2 0.823 9 0.959
3 0.796 10 0.782
4 0.912 11 0.922
5 0.936 12 0.857
6 0.941 13 0.930
7 0.979 14 0.931

3 讨论
考察了 3 种不同型号色谱柱：Extent C18柱（250
mm×4.6 mm，5 μm）、SB C18柱（250 mm×4.6 mm，
5 μm）、Eclipse-XDB C18柱（250 mm×4.6 mm，5
μm）。结果表明，Extent C18柱分离出的色谱峰分离
度好、峰数多、稳定性好。故选择 Extent C18 柱为
分析色谱柱。
由于元胡止痛片的化学成分复杂，极性范围大，
故选择了梯度洗脱。在流动相筛选中，曾尝试过甲
醇-乙酸水，甲醇-磷酸水，乙腈-乙酸水，乙腈-磷酸
水系统。结果显示，乙腈系统分离效果较差，且易
产生基线漂移；而甲醇-乙酸水，甲醇-磷酸水系统
都有较好的分离度，相比之下，甲醇-磷酸水系统的
基线更为稳定，色谱峰个数较多，磷酸水溶液 pH
值参照延胡索指纹图谱选择 6.5，因此选择甲醇-
0.1%磷酸水溶液（三乙胺调 pH 6.5）系统为 HPLC
分析的流动相系统。
采用紫外检测器对元胡止痛片样品进行不同吸
收波长考察，包括 230、254、280、310 nm。结果
表明，280 nm 处各色谱峰强度大、信息丰富、特征
性强，故选择 280 nm 为检测波长。
根据延胡索与白芷的成分及其测定普遍采用的
提取方法，采用甲醇-氨水（20∶1）为提取溶剂。
分别比较了超声振荡和加热回流两种提取方法，结
果表明两种方法得到的 HPLC 指纹图谱全貌和各个
色谱峰强度无明显差别，因超声提取法更为简便，
且不易破坏有效成分，适合大量样品的快速提取，
因此选择超声振荡提取法。
参考文献
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胡止痛片中延胡索乙素的含量 [J]. 时珍国医国药 ,
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48-51.

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