全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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HPLC 测定不同来源大黄中蒽醌和二蒽酮类成分
王 哲，许利嘉，何春年，彭 勇，肖培根*
中国医学科学院 北京协和医学院药用植物研究所，北京 100193
摘 要：目的 建立同时测定大黄中芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和番泻苷 A、番泻苷 B 的 HPLC
法，并对不同来源的大黄样品进行测定。方法 采用 HPLC 梯度洗脱，色谱柱为 Agilent Eclipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，
5 μm）；检测波长分别为 254 nm、340 nm；体积流量为 1 mL/min；柱温为 30 ℃。结果 在一定范围内，芦荟大黄素、大黄
酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚和番泻苷 A、番泻苷 B 峰面积积分值与进样量线性关系良好，加样回收率符合要求，方
法具有较好的精密度、重现性和稳定性，可同时对多种来源大黄药材进行测定。结论 不同来源大黄的化学成分差异较大，
其中种植大黄样品中总蒽醌及总番泻苷的量均少于野生样品。
关键词：大黄；蒽醌；番泻苷；芦荟大黄素；大黄酸；大黄素；大黄酚；大黄素甲醚
中图分类号：R286.02 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2011)06 - 1114 - 05
Determination of anthraquinones and bianthrones in rhubarb from different
sources by HPLC
WANG Zhe, XU Li-jia, HE Chun-nian, PENG Yong, XIAO Pei-gen
Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College, Beijing
100193, China
Abstract: Objective To develop a HPLC method for determining the content of aloe-emodin, rhein, emodin, chrysophanol,
physcion, sennoside A, and sennoside B simultaneously. The method was used in content determination of constituents in rhubarb from
different sources. Methods The separations were carried out at 30 ℃ on an Agilent Eclipse XDB-C18 column (150 mm × 4.6 mm,
5μm) and eluted with acetonitril and water containing 0.1% phosphoric acid in gradient mode. The flow rate was 1.0 mL/min, detection
wavelengths were 254 nm for aloe-emodin, rhein, emodin, chrysophanol, physcion and 340 nm for sennoside A and sennoside B,
column temperature was 30 ℃. Results The peak areas and injection ammounts of aloe-emodin, rhein, emodin, chrysophanol,
physcion, sennoside A and sennoside B showed a good linear relationship within a certain range. The average recoveries were
standards-compliant. The method is simple, accurate and repeatable to be used in content determination of rhubarb. Conclusion The
total anthraquinones content and total sennosides content in cultivated samples are much less than those in the wild samples.
Key words: rhubarb; anthraquinone; sennoside; aloe-emodin; rhein; emodin; chrysophanol; physcion

大黄为常用中药，具有泻热通肠、凉血解毒、
逐瘀通经之功效，《中国药典》2010 年版规定大黄
药材来源于蓼科植物唐古特大黄 Rheum tanguticum
Maxin. ex Regel、掌叶大黄 R. palmatum L.和药用大
黄 R. officinale Baill. 的根和根茎[1-2]。目前对大黄的
化学成分和药理作用研究都比较深入[3-5]，认为蒽醌
类成分是其主要活性物质，游离蒽醌类成分具有抗
菌活性[6]，大黄酸等具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等
多种药理作用[7]；番泻苷 A、番泻苷 B 等二蒽酮类
化合物是其泄下活性的主要成分[8]。《中国药典》
2010 年版、2005 年版将总蒽醌的量作为大黄的主要
质量控制指标，但对番泻苷 A、番泻苷 B 的量没有
要求，显然专属性和客观性都不足。为客观地评价
和控制大黄的质量，不少学者开始研究大黄中番泻
苷类成分的量[9-10]，并已有相应多成分测定方法的
报道[11-12]。本实验收集 3 种共 27 批正品大黄，以及
11 种共 15 批伪品大黄的样品，以 5 种游离蒽醌类
成分和 2 种番泻苷类成分为指标，采用 HPLC 法同

收稿日期：2011-01-16
基金项目：国家重点基础发展研究计划（2006CB504701）；国家科技重大专项（2008ZX10005-004）；国家自然科学基金重点项目（30530860）
作者简介：王 哲（1981—），男，吉林延吉人，博士研究生，主要从事中药资源的调查和研究。Tel: (010) 62818235 E-mail: biopharm-wang@qq.com
*通讯作者 肖培根 Tel: (010)63011294 E-mail: xiaopg@public.bta.net.cn
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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时测定这 7 种成分，为深入研究大黄成分及其疗效
间的关系提供参考。
1 仪器与试药
岛津 LC—20A 系列高效液相色谱仪，包括系统
控制器，四元泵、在线脱气装置，自动进样器，SPD
二极管阵列检测器、数据处理工作站；AL204 型电
子天平（Mettler Toledo 公司）；HS—10260B 型超
声仪（河北恒奥公司）。
芦荟大黄素（批号 110795-200806）、大黄酸（批
号 110757-200206）、大黄素（批号 110756-200110）、
大黄酚（批号 110796-200716）、大黄素甲醚（批号
110758-200611）购自中国药品生物制品检定所；番
泻苷 A（批号 A0182）、番泻苷 B（批号 A0183）购
自成都曼斯特公司，以上对照品质量分数均大于
98%；乙腈为色谱纯，水为超纯去离子水，其余试
剂均为分析纯。大黄样品由笔者实地采集，经中国科
学院植物研究所李安仁教授鉴定。所有样品都保存于
中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Agilent Eclipse XDB-C18 色谱柱（150 mm×4.6
mm，5 μm），Agilent Zorbax Extend C18 保护柱（10
mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为 0.1%磷酸水（A）-
乙腈（B），线性梯度洗脱，0～27 min，13% B；27～
40 min，13%～16% B；40～47 min，16% B；47～
50 min，16%～38% B；50～60 min，38%～53% B；
60～65 min，53%～60% B；65～75 min，60% B；
进样量 10 μL；柱温 30 ℃；体积流量 1 mL/min；
检测波长分别为 254 nm（芦荟大黄素、大黄酸、大
黄素、大黄酚和大黄素甲醚）、340 nm（番泻苷 A
和番泻苷 B）。色谱图见图 1 和 2。
2.2 对照品溶液的配制
参照文献方法[13]，精密称取芦荟大黄素、大黄
酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、番泻苷 A、番
泻苷 B 对照品适量，加入甲醇-水（3︰2）溶解并定
容，分别制成 81.1 μg/mL 芦荟大黄素、80.5 μg/mL
大黄酸、89.4 μg/mL 大黄素、81.4 μg/mL 大黄酚、
61.0 μg/mL 大黄素甲醚、110.0 μg/mL 番泻苷 A、95.6
μg/mL 番泻苷 B 对照品储备液。
2.3 供试品溶液的制备
取大黄药材粉末（过 40 目筛）约 0.2 g，精密
称定，置具塞三角瓶中，加入 80%甲醇 30 mL，称
其质量，超声提取 1 h，放冷，用 80%甲醇补足损


1-芦荟大黄素 2-大黄酸 3-大黄素 4-大黄酚 5-大黄素甲醚
1-aloe-emodin 2-rhein 3-emodin 4-chrysophanol 5-physcion
图 1 对照品（A）及大黄样品（B）HPLC 图（254 nm）
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substance (A)
and R. palmatum (B) (254 nm)


1-番泻苷 B 2-番泻苷 A
1- sennnoside B 2- sennoside A
图 2 对照品（C）及大黄样品（D）HPLC 图（340 nm）
Fig. 2 HPLC chromatograms of reference substance (C)
and R. palmatum (D) (340 nm)
失的质量，混匀，滤过，取续滤液过 0.22 μm 微孔
滤膜，取续滤液作为供试品溶液。
2.4 线性关系考察
精密移取芦荟大黄素储备液，用甲醇-水（3∶2）
1
2
3
4
5
A
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
A
1
2
3
4
5
B
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
B
t / min
1
2
C
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
C 1
1
2
D
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90
t / min

1
2
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稀释至 0.243～12.165 μg/mL 的系列标准溶液，取上
系列标准溶液进样 10 μL，以峰面积积分值为纵坐
标，质量浓度为横坐标制作标准曲线，得到芦荟大
黄素的回归方程为 Y＝9 620 X＋134，r＝0.999 9，
线性范围 0.243～12.165 μg/mL。同法测得其他 6 种
成分的回归方程和线性范围分别为大黄酸：Y＝
14 479 X－1 516，r＝0.999 8，线性范围 0.403～
20.125 μg/mL；大黄素：Y＝8 195 X－1 194，r＝
0.999 9，线性范围 0.268～13.410 μg/mL；大黄酚：
Y＝25 152 X－1 739，r＝1.000 0，线性范围 0.651～
32.560 μg/mL；大黄素甲醚：Y＝6 044 X－813，r＝
0.999 8，线性范围 0.610～30.510 μg/mL；番泻苷 A：
Y＝18 555 X－7 369，r＝0.999 9，线性范围 2.20～
110.00 μg/mL；番泻苷 B：Y＝35 862 X－678，r＝
0.999 6，线性范围 1.91～95.60 μg/mL。
2.5 精密度试验
精密吸取供试品溶液，进样 10 μL，连续进样 6
次。测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、
大黄素甲醚、番泻苷A和番泻苷B的峰面积积分值，
计算其 RSD 分别为 0.53%、0.45%、0.68%、0.88%、
0.78%、1.17%、1.24%。
2.6 重现性试验
取 6 份大黄药材粉末 0.2 g，精密称定，制备供
试品溶液，分别进样 10 μL。测定芦荟大黄素、大
黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、番泻苷 A 和
番泻苷 B 的质量分数，计算其 RSD 分别为 0.72%、
0.88%、0.95%、0.67%、0.85%、1.53%、1.78%。
2.7 稳定性试验
取供试品溶液，分别于制备后 0、2、4、6、8、
12、24 h 进样 10 μL。测定芦荟大黄素、大黄酸、
大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、番泻苷 A 和番泻苷
B峰面积，计算其RSD分别为 0.81%、1.60%、1.38%、
0.81%、0.85%、1.66%、1.91%。
2.8 加样回收率试验
取大黄药材样品 6 份，每份 0.2 g，精密称定，
分别精密加入混合对照品溶液，制备供试品溶液，
进样 10 μL。测定芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、
大黄酚、大黄素甲醚、番泻苷 A 和番泻苷 B，计算
其加样回收率分别为 99.75%、97.31%、102.55%、
104.09%、96.02%、103.24%、101.29%；RSD 分别
为 0.92%、1.64%、2.49%、1.95%、1.12%、2.26%、
2.05%。
2.9 大黄药材样品测定
称取各批样品 0.2 g，精密称定，制备供试品溶
液，进样 10 μL，测定全部 42 批样品，每批平行测定
3 次，以外标法用峰面积积分值计算大黄药材中主要
成分量，结果见表 1。
本实验测定了 3 种来源，27 批《中国药典》2010
年版规定的大黄药材，结果显示不同批样品间成分
差异较大，而生长方式是造成这种差异的主要原因。
实验所测定的 5 批野生唐古特大黄中含有的总蒽醌
为 0.184%～2.236%，平均值为 0.861%；总番泻苷
为 0.946%～1.335%，平均值为 1.091%。4 批种植唐
古特大黄含有的总蒽醌为 0.109%～0.895%，平均值
为 0.480%；总番泻苷为 0.052%～0.631%，平均值
为 0.238%。5 批野生掌叶大黄含有的总蒽醌为
0.280%～1.182%，平均值为 0.733%；总番泻苷为
0.142%～2.170%，平均值为 1.135%。8 批种植掌叶
大黄含有的总蒽醌为 0.030%～1.904%，平均值为
0.410%；总番泻苷为 0.050%～0.683%，平均值为
0.147%。 3 批野生药用大黄含有的总蒽醌为
0.252%～0.469%，平均值为 0.370%；总番泻苷为
0.199%～0.755%，平均值为 0.459%；2 批种植药用
大黄含有的总蒽醌分别为 0.277%和 0.740%，平均
值为 0.509%；总番泻苷分别为 0.126%和 0.535%，
平均值为 0.325%。
3 讨论
与传统方法相比，本实验在测定蒽醌量基础上，
同时测定番泻苷类成分，增加了方法的专属性。该
方法经过 42 批不同样品验证，显示出其专属、稳定、
可行，能有效地反映中药大黄的内在质量。
研究所涉及的各项因素均经过最优化，供试品
制备环节比较了不同梯度的甲醇溶液，提取时间、
提取方法对各成分的提取效果；色谱条件在保证分
离度的前提下，缩短了分离时间；通过对对照品进
行全波长扫描确定检测波长，结果显示游离蒽醌在
250 nm 附近有最大吸收，番泻苷在 260 nm 和 330～
350 nm 有最大吸收，考虑到所测定的样品来源复杂
并参考文献报道[9-10]，为防止各成分间相互间干扰，
选择 254 nm 检测蒽醌类成分，340 nm 检测番泻苷
类成分；研究所选取的 7 种对照品为大黄的主要成
分，具有显著的生物活性，且容易购买，便于分析
工作的开展。
大黄是常用药材，市场需求量大。但一直以来，
市场上总是有少量伪品的存在。早期研究显示[14]，
正品大黄与伪品大黄主要区别为是否含有番泻苷类
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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表 1 大黄原药材中 7 种成分质量分数（n = 3）
Table 1 Determination of seven constituents in rhubarb (n = 3)
植物来源 产地 采集时间 AE R E C P TA SA SB TS
四川松潘野生 2009-07-13 0.313* 0.362* 0.493# 0.471* 0.720* 2.360 0.883 0.452 1.335
四川阿坝野生 2009-07-12 0.093 0.223 0.067 0.164 0.256 0.804 0.815 0.429 1.243
青海循化野生 2008-09-30 0.033 0.068 0.041 0.069 0.124 0.334 0.613 0.333 0.946
青海野生 2007-09-06 0.012 0.056 0.012 0.034 0.070 0.184 0.649 0.339 0.998
甘肃玛曲野生 2007-09-13 0.068 0.169 0.065 0.129 0.192 0.623 0.637 0.309 0.946
四川茂县种植 2009-07-15 0.083 0.023 0.066 0.283 0.439 0.895 0.099 0 0.099
青海大通种植 2008-09-28 0.011 0.050 0.008 0.033 0.034 0.136 0.119 0.050 0.169
四川阿坝种植 2009-07-11 0.073 0.021 0.045 0.372 0.270 0.782 0.052 0 0.052
唐古特大黄
Rheum tanguticum
青海河南种植 2008-10-03 0.009 0.025 0.009 0.015 0.051 0.109 0.395 0.236 0.631
甘肃天祝野生 2008-10-06 0.023 0.054 0.046 0.055 0.102 0.280 0.864 0.489 1.353
四川康定野生 2009-07-06 0.123 0.189 0.140 0.177 0.269 0.898 1.452 0.718 2.170
西藏野生 2007-08-22 0.129 0.192 0.126 0.098 0.295 0.841 0.962 0.483 1.445
青海互助野生 2007-08-29 0.048 0.280 0.026 0.178 0.183 0.464 0.095 0.047 0.142
甘肃野生 2007-09-12 0.156 0.138 0.169 0.247 0.473* 1.182 0.398 0.169 0.567
四川康定种植 2009-07-06 0.317* 0.514* 0.199 0.335 0.513* 1.904 0.230 0.068 0.298
云南香格里拉种植 2009-09-12 0.011 0.013 0.012 0.026 0.064 0.125 0.543 0.140 0.683
甘肃天祝种植 2008-10-06 0.010 + 0.021 0.017 0.081 0.129 0 0.050 0.050
青海泽库种植 2008-10-02 + 0.009 + 0.012 0 0.021 0.057 0.095 0.152
甘肃宕昌种植 2008-10-24 0.020 + 0.038 0.149 0.235 0.442 0 0 0
甘肃宕昌种植 2008-10-16 0.019 0.010 0.022 0.099 0.109 0.259 0 0 0
甘肃宕昌种植 2008-10-26 0.017 0.011 0.014 0.064 0.083 0.191 0 0 0
掌叶大黄
R. palmatum
甘肃礼县种植 2008-09-21 0.023 0.014 0.022 0.063 0.066 0.189 0 0 0
四川绵阳野生 2007-09-20 0.018 0.069 0.034 0.055 0.076 0.252 0.445 0.309 0.755
四川松潘野生 2009-07-13 0.050 0.039 0.033 0.107 0.160 0.389 0.162 0.037 0.199
云南玉龙野生 2009-09-15 0.070 0.129 0.058 0.077 0.135 0.469 0.284 0.138 0.422
四川成都种植 2007-09-18 0.034 0.013 0.018 0.081 0.130 0.277 0.366 0.157 0.523
药用大黄
R. officinale
云南玉龙种植 2009-09-17 0.071 0.069 0.053 0.207 0.340 0.740 0.106 0.020▲ 0.126
甘肃清水种植 2008-10-13 0.044 0 0.028 0.251 0.422 0.745 0 0 0 河套大黄
R. hotaoense 内蒙古太仆寺旗野生 2009-07-28 0 0 0 0.026 0.022 0.048 0 0 0
新疆阿勒泰野生 2009-07-01 0 0 0.112 0.684* 0.870* 1.666 0 0 0 天山大黄
R. wittrockii 新疆温泉野生 2009-06-26 0 0 0.070 0.639* 0.489* 1.198 0 0 0
西藏野生 2007-08-20 0 0 0.132 0.252 0.392 0.776 0 0 0 藏边大黄
R. australe 四川壤塘野生 2009-07-15 0 0 0 0 0.058 0.058 0 0 0
四川松潘种植 2009-07-13 0 0 0.015 0.081 0.093 0.189 0 0 0 华北大黄
R. franzenbachii 内蒙古呼和浩特野生 2009-07-30 0 0 0 + 0.056 0.056 0 0 0
牛尾七 云南德钦野生 2009-09-30 0 0 0.133 0.252 0.013 0.399 0 0 0
丽江大黄 云南玉龙野生 2009-09-17 0 0 0.313* 0.766* 0.611* 1.689 0 0 0
心叶大黄 四川雅江野生 2009-07-07 0.014 0 0.084 0.499* 0.258 0.854 0 0 0
红脉大黄 西藏萨迦野生 2009-08-07 0 0 1.086# 0.284 0.545* 1.915 0 0 0
苞叶大黄 云南丽江野生 2009-09-10 0 0 0.532* 0.658* 0.868* 2.059 0 0 0
西藏大黄 西藏江孜野生 2009-08-15 0.264* 0 0.835# 0.164 0.394 1.657 0 0 0
菱叶大黄 青海曲马莱野生 2009-08-19 0.010 0 0.028 0.026 0.021 0.085 0 0 0
AE-芦荟大黄素 R-为大黄酸 E-为大黄素 C-为大黄酚 P-为大黄素甲醚 TA-总游离蒽醌 SA-番泻苷 A SB-番泻苷 B TS-总番泻苷
+-检测出，但远低于线性范围 *-表示进样量为 5 μL #-进样量为 2 μL ▲-进样量为 20 μL
AE-aloe-emodin R-rhein E-emodin C-chrysophanol P-physcion TA-total anthraquinones SA-sennoside A SB-sennoside B TB-total
sennosides +-trace level and the content less than LOQ *-injected amount 5 μL #- injected amount 2 μL ▲-injected amount 20 μL
成分及大黄酸。应用本研究所建立的 HPLC 法，通
过对番泻苷类成分及大黄酸的测定，可以有效地对
正品及伪品大黄药材进行鉴别。
笔者在采样中发现，许多大黄药材为种植品。
目前没有这些种植大黄与野生大黄化学成分差异的
研究。本研究发现，种植大黄和野生大黄的化学成
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 6 期 2011 年 6 月

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分及其量均有差异。主要表现为种植大黄不含或含
较少量的番泻苷类成分，同时蒽醌类成分量也少于
野生大黄。因采集样品数量有限，很难通过数学统
计方法证明种植品与野生品间确有显著差异，但通
过比较平均量发现，野生大黄样品中所含总蒽醌量
大约为种植样品的 2 倍，而所含总番泻苷量约为种
植样品的 4～5 倍。研究显示，部分种植大黄药材（四
川茂县、阿坝，甘肃天祝），仅含有 1 种番泻苷类成
分；而部分种植品（甘肃礼县、宕昌）中未检测到
番泻苷类成分。通过对化学成分的比较显示出种植
大黄样品质量较差，对其进行临床应用及相关研究
应当慎重。
对大黄伪品的研究主要是验证该方法的科学
性，但通过对这些样品的分析发现，伪品大黄均不
含有番泻苷 A、B 和大黄酸，通过该方法可以有效
区分正品大黄与伪品大黄。同时发现，部分伪品中
某些游离蒽醌量较高，如红脉大黄、丽江大黄、天
山大黄，除此以外，苞叶大黄、西藏大黄的样品中
游离蒽醌量均大于 1%。以上结果提示，可以对这
类资源较丰富的伪品大黄进行相应的开发及利用。
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