全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43卷 第 3期 2012年 3月

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HPLC 法测定杏香兔耳风中绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素
冯育林 1, 2，张武岗 1, 2，孙丽仁 2，何明珍 1，罗晓健 1, 2*，王跃生 1，杨世林 1, 2
1. 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心，江西 南昌 330006
2. 江西中医学院，江西 南昌 330006
摘 要：目的 建立杏香兔耳风中绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素的测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定杏
香兔耳风中绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素的量。色谱条件为 DiamonsilTM C18柱（250 mm×40 mm, 5 μm）；流动
相甲醇（A）-0.1%磷酸水（B），梯度洗脱（0～15 min，28% A；15～25 min，28%～40% A；25～50 min，40% A）；体积流
量 1.0 mL/min；检测波长 328 nm；柱温室温。结果 杏香兔耳风中绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素的线性范围分
别为 0.132～1.32、0.078～0.78、0.034～0.34 μg，平均加样回收率分别为 99.1%、103.1%、99.3%。结论 该方法快速简便、
精密度好、灵敏度高，可用于杏香兔耳风中绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素的同时测定。
关键词：杏香兔耳风；绿原酸；3, 5-二咖啡酰奎宁酸；木犀草素；HPLC
中图分类号：R286.022 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)03 - 0513 - 02
Determination of chlorogenic acid, 3, 5-dicaffeoylquinic acid, and luteolin
in Ainsliaea fragrans by HPLC
FENG Yu-lin1, 2, ZHANG Wu-gang1, 2, SUN Li-ren2, HE Ming-zhen1, LUO Xiao-jian1, 2, WANG Yue-sheng1,
YANG Shi-lin1, 2
1. National Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation in Chinese Mateia Medica, Nanchang 330006, China
2. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330006, China
Key words: Ainsliaea fragrans Champ.; chlorogenic acid; 3, 5-dicaffeoylquinic acid; luteolin; HPLC

杏香兔耳风 Ainsliaea fragrans Champ.为菊科
兔耳风属植物，主产江苏、浙江、江西、福建等地，
生于山坡灌木林下，沟边草丛等处。具有清热利湿、
凉血解毒等功效，用于治疗虚劳咳血、湿热黄疸、
水肿、痈疽肿毒等病症[1]。《江西省中药材标准》
中记载其用于慢性宫颈炎、白带、毒蛇咬伤等[2]。
目前，HPLC法方便、快捷、准确，已经成为中药
材质量控制的主要方法[3-4]。本实验采用高效液相
法对绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素进行
测定，为制定杏香兔耳风质量标准及临床应用提供
依据。
1 仪器与试药
Agilent 1100型高效液相色谱仪，Agilent 1100
色谱工作站，二极管阵列检测器，Mettler AE240型
十万分之一电子天平（Mettler瑞士），RE51CS旋转
蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。绿原酸、3, 5-二咖
啡酰奎宁酸和木犀草素对照品均由本实验室自制
（质量分数大于 98%）。杏香兔耳风为市售药材（批
号分别为：201001、201002、201003），经江西中医
学院杨世林教授鉴定为菊科植物杏香兔耳风
Ainsliaea fragrans Champ.的干燥全草。甲醇为色谱
纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
DiamonsilTM C18 色谱柱（250 mm×40 mm, 5
μm）；流动相：甲醇（A）-0.1%磷酸水（B），梯度
洗脱（0～15 min，28% A；15～25 min，28%～40%
A；25～50 min，40% A）；体积流量 1.0 mL/min；
检测波长 328 nm；柱温室温。色谱图见图 1。
2.2 对照品溶液的制备
分别精密称取绿原酸对照品 13.21 mg、3, 5-二咖
啡酰奎宁酸对照品7.80 mg、木犀草素对照品3.73 mg，

收稿日期：2011-07-12
基金项目：国家自然科学基金资助项目（81102787）；国家“十一五”科技支撑计划资助项目（2006BAI06A01-01）；国家“重大新药创制”科
技重大专项（2009ZX09103-352）
作者简介：冯育林（1977—），男，江西抚州人，博士，副教授，研究方向为中草药活性成分及质量标准研究。E-mail: fengyulin2003@hotmail.com
*通讯作者 罗晓健 Tel: (0791)7119619 E-mail: luoxj98@126.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43卷 第 3期 2012年 3月

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1-绿原酸 2-3, 5-二咖啡酰奎宁酸 3-木犀草素
1-chlorogenic acid 2-3, 5-dicaffeoylquini acid 3-luteolin
图 1 对照品(A)和样品(B)的 HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of reference substances (A)
and sample (B)
置 100 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，
摇匀，即得混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取杏香兔耳风全草样品 0.5 g，置圆底
烧瓶中，加入 50 mL 70%乙醇溶液，回流提取 30
min，滤过，取滤液 40 mL减压蒸干后用甲醇溶解，
转移至 50 mL 棕色量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇
匀，即得。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品溶液 1、2、4、6、8、
10 μL 注入液相色谱仪，在上述条件下进行分析，
测定对照品色谱峰面积。以进样量为横坐标（X），
峰面积为纵坐标（Y），进行线性回归，得到回归方
程。绿原酸 Y＝3 700.8 X＋14.741，r＝0.999 2，在
0.132～1.32 μg呈良好的线性关系；3, 5-二咖啡酰
奎宁酸 Y＝8 308.7 X－11.583，r＝0.999 4，在
0.078～0.78 μg呈良好的线性关系；木犀草素 Y＝
3 451.4 X－69.919，r＝0.999 4，在 0.034～0.34 μg
呈良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取杏香兔耳风供试品（批号 201001）溶液 1
份，进样 10 μL，重复进样 6次，测定峰面积，计
算得绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀草素峰面
积的 RSD分别为 0.87%、1.43%、2.48%。
2.6 稳定性试验
取供试品（批号 201001）溶液，分别于 0、2、
4、8、12、24 h进样 10 μL进行分析，测定色谱峰
面积，计算得绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和木犀
草素峰面积的 RSD分别为 1.46%、1.66%、2.48%。
2.7 重现性试验
取杏香兔耳风样品（批号 201001）5份，制备
供试品溶液，进样测定，计算得绿原酸、3, 5-二咖
啡酰奎宁酸和木犀草素质量分数的 RSD 分别为
1.35%、1.10%、2.69%。
2.8 加样回收率试验
精密称取适量杏香兔耳风样品（批号 201001）
0.25 g，分别精密加入一定量的对照品溶液，按供试
品溶液制备方法处理，测定，计算绿原酸、3, 5-二
咖啡酰奎宁酸、木犀草素的回收率分别为 99.1%、
103.1%、99.3%；RSD分别为 2.55%、2.86%、2.39%。
2.9 样品测定
取 3份杏香兔耳风药材，制备供试品溶液，进
样测定峰面积，按回归方程计算绿原酸、3, 5-二咖
啡酰奎宁酸和木犀草素的平均质量分数分别为
3.88、3.50、0.130 mg/g。
3 讨论
本研究采用甲醇-0.1%磷酸水梯度洗脱，得到较
好的分离度，且保留时间适当。本方法可以很好地
测定杏香兔耳风中绿原酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸和
木犀草素，可以为杏香兔耳风的质量控制提供参考
和科学依据。
参考文献
[1] 江苏新医学院. 中药大辞典 [M]. 上海: 上海人民出版
社, 1977.
[2] 江西省卫生厅. 江西省中药材标准 [M]. 南昌: 江西科
学技术出版社, 1997.
[3] 李 蓉, 秦民坚. HPLC法测定薄叶鸢尾中 5种异黄酮
[J]. 中草药, 2011, 42(2): 297-299.
[4] 陈根顺, 徐丽芳, 李 鹏. 草珊瑚的 HPLC指纹图谱研
究 [J]. 中草药, 2011, 42(2): 293-296.


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