全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 4 期 2011 年 4 月

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RP-HPLC 法测定普乐安片中槲皮素和山柰素
郑国平
浙江省舟山市食品药品检验所，浙江 舟山 316000
摘 要：目的 建立 RP-HPLC 法测定普乐安片中槲皮素和山柰素的方法。方法 色谱柱为 Hypersil ODS2 C18（250 mm×4.6
mm，5 μm），流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（49∶51），体积流量 1.0 mL/min，检测波长 360 nm，柱温 25 ℃，进样量 10 μL。
结果 槲皮素和山柰素分别在 1.526～305.300 μg/mL（r＝1.000 0）、2.26～451.90 μg/mL（r＝1.000 0）线性关系良好；平均
回收率分别为 98.05%（RSD＝1.72%）和 99.82%（RSD＝1.23%）。结论 方法操作简便、准确，重现性好，可用于普乐安
片的质量控制。
关键词：普乐安片；槲皮素；山柰素；反相高效液相色谱；质量控制
中图分类号：R286.02 文献标志码：B 文章编号：0253 - 2670(2011)04 - 0719 - 03
RP-HPLC determination of quercetin and kaempferol in Pule’an Tablets
ZHENG Guo-ping
Zhoushan Municipal Institute for Food and Drug Control of Zhejiang Province, Zhoushan 316000, China
Key words: Pulean Tablets; quercetin; kaempferol; RP-HPLC; quality control

普乐安片收载于《中华人民共和国卫生部药品
标准》中药成方制剂第十四册，由油菜花花粉经适
宜加工制成，具补肾固本的功效，用于治疗肾气不
固、腰膝酸软、尿后余沥或失禁，及慢性前列腺炎、
前列腺增生具有上述症候者。原标准中的质控方法
为氮测定法。油菜花粉中含有丰富的黄酮类化合物，
以山柰素和槲皮素及其葡萄糖苷为主[1]；黄酮苷类
化合物是油菜花粉的主要活性成分之一[2]，具有缓
解动脉粥样硬化和前列腺异常、降低胆固醇、调节
内分泌的作用[3-4]。曾有文献报道采用 HPLC 法对普
乐安片中槲皮素[5]和芦丁[6]进行测定。本实验建立
了 RP-HPLC 法同时测定普乐安片中槲皮素和山柰
素[7]的方法，为有效控制该药品质量提供依据。
1 仪器与材料
Agilent 1200 高效液相色谱系统（四元泵、自动
进样器、DAD 检测器，安捷伦科技有限公司）；
Agilent-Chemstation 色谱工作站。Sartorius ME235P
电子天平（感量 0.1 mg；0.01 mg，上海三踏生物科
技有限公司）；USC—502 超声处理器（上海波龙电
子设备有限公司）。
槲皮素（批号 100081-200907，质量分数 96.5%）
和山柰素（批号 110801-200808，质量分数 95.9%）
对照品购自中国药品生物制品检定所；普乐安片为
市售，来源于浙江康恩贝制药股份有限公司（批号
0906042、0911104、1002065）和楚雄老拨云堂药业
有限公司（批号 0907010）；甲醇为色谱纯，水为重
蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
依利特 Hypersil ODS2 C18色谱柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.4%磷酸溶液（49∶
51）；检测波长 360 nm；体积流量 1.0 mL/min；柱
温 25 ℃；进样量 10 μL。
2.2 溶液的制备
2.2.1 混合对照品溶液的制备 精密称取槲皮素对
照品 15.82 mg、山柰素对照品 11.78 mg，分别置 25
mL 量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，分别
得槲皮素、山柰素对照品储备液。精密吸取槲皮素
对照品储备液 1 mL、山柰素对照品储备液 2 mL，
置 50 mL 量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为混合

收稿日期：2010-08-31
作者简介：郑国平（1964—），男，浙江舟山人，副主任中药师，从事中药质量分析和质量标准研究工作。
Tel: (0580)2044948 E-mail: zgp0580@126.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 42 卷 第 4 期 2011 年 4 月

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对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液的制备 取普乐安片 10 片，精密
称定，除去包衣，研细；取约 1 g，精密称定，置具
塞锥形瓶中，精密加入甲醇 20 mL，密塞，称定质
量，超声处理 30 min，放冷，再称定，用甲醇补足
减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液 10 mL，
置 100 mL 锥形瓶中，加甲醇 10 mL、25%盐酸溶液
5 mL，摇匀，置水浴中加热回流 30 min，迅速冷却
至室温，转移至 50 mL 量瓶中，用甲醇稀释至刻度，
摇匀，用 0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.2.3 阴性对照液的制备 按处方组成，取除花粉
外的糊精适量，按照普乐安片的制备工艺和供试品
溶液的制备方法制成阴性对照液。
2.3 专属性考察
按上述色谱条件分别取混合对照品溶液、供试
品溶液和阴性对照液进样分析，结果阴性无干扰。
见图 1。









1-槲皮素 2-山柰素
1- quercetin 2- kaempferol

图 1 混合对照品（A）、供试品（B）和阴性样品（C）的
HPLC 色谱图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances
(A), sample (B), and negative sample (C)

2.4 线性关系考察
精密吸取槲皮素对照品储备液，用甲醇稀释成
1.526、7.632、38.162、76.325、152.650、305.300 μg/mL
的槲皮素系列对照品溶液；同法制备 2.260、11.298、
56.488、112.975、225.960、451.900 μg/mL 的山柰
素系列对照品溶液；分别进样测定，记录峰面积；
以峰面积对相应成分的质量浓度进行线性回归，得
回归方程分别为：槲皮素Ｙ＝39.611 7 X－42.485 8，
r＝1.000 0，表明槲皮素在 1.526～305.300 μg/mL 与
峰面积呈良好线性关系；山柰素 Y＝40.536 5 X－
24.039 6，r＝1.000 0，表明山柰素在 2.260～451.900
μg/mL 与峰面积呈良好线性关系。
2.5 精密度试验
取批号为 1002065 的样品制备供试品溶液，连
续进样 6 次，测定，计算槲皮素峰面积的 RSD 为
0.82%，山柰素峰面积的 RSD 为 0.58%。
2.6 稳定性试验
取同一样品（批号 1002065）溶液，分别于第 0、
2、4、6、8、10、13、16 h 进样测定，计算槲皮素
峰面积的 RSD 为 1.02%，山柰素峰面积的 RSD 为
0.98%，表明样品溶液在 16 h 内稳定。
2.7 重现性试验
取供试样品（批号 1002065）6 份，每份 1.0 g，
精密称定，制备供试品溶液，进样测定，计算槲皮
素质量分数的 RSD 为 1.58%，山柰素质量分数的
RSD 为 1.41%。
2.8 回收率试验
精密称取样品（批号 100265）6 份，每份 0.5 g，
精密称定，分别精密加入槲皮素对照品储备液 0.8
mL 和山柰素对照品储备液 3.0 mL，制备供试品溶
液，依法测定，计算得槲皮素和山柰素的平均回收
率分别为 98.05%（RSD＝1.72%）、99.82%（RSD＝
1.23%）。
2.9 样品测定
取市售的 2 个厂家共 4 个批号的普乐安片，制
备供试品溶液，测定，结果见表 1。

表 1 样品测定结果（n＝2）
Table 1 Determination of sample (n = 2)
批 号 槲皮素/(mg·g−1) 山柰素/(mg·g−1)
0906042 0.723 2.171
0911104 0.773 2.387
1002065 0.825 2.375
0907010 0.702 2.015

3 讨论
据文献报道，槲皮素、山柰素在油菜花粉中主
要以苷的形式存在，须经过水解以后才能检测[1]。
比较了甲醇-酸水直接回流提取（A 法）和先甲醇提
取再用甲醇-酸水回流水解（B 法）2 种提取方法，
结果显示 A 法提取液中杂质太多，影响槲皮素、山
柰素的分离，而 B 法提取完全，除杂效果较好，故
确定采用 B 法。
0 5 10 15 20 25
1 2
1
2
0 5 10 15 20 25
0 5 10 15 20 25
t / min
A
B
C
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考虑到槲皮素和山柰素在高温、高酸下易分解
氧化，本研究以回流时间（20、30、40 min）、水解
温度（80、100 ℃）、酸度[甲醇-25%盐酸（4∶1）、
甲醇-25%盐酸（2∶1）、甲醇-盐酸（4∶1）、甲醇-20%
盐酸（4∶1）、甲醇-20%盐酸（2∶1）]为考察指标
进行试验，结果在酸度为甲醇-25%盐酸（4∶1），
水解温度 100 ℃，回流 30 min 的提取效果最好。
柱温对分离效果有一定的影响，经比较发现柱
温 25 ℃时，槲皮素和山柰素的出峰效果较好。
该药品原标准定量测定项下控制其氮的量，专
属性不强。本实验采用 HPLC 法同时测定该药品中
槲皮素和山柰素的量，结果表明该方法简便，结果
准确，重现性好。建议标准增加此方法作为该药品
的质量控制标准。
参考文献
[1] 郭娟丽, 张培成, 张智武. 油菜花粉的化学成分研究
[J]. 中国中药杂志, 2009, 34(10): 1235-1237.
[2] 杨必成, 杨义芳. 花粉治疗前列腺疾病的物质基础研
究进展 [J]. 中草药, 2009, 40(1): 144-149.
[3] 胡东辉. 油菜花粉对前列腺增生的临床治疗 [J]. 中国
医药导报, 2009, 6(13): 251.
[4] 李 坤, 杨义芳, 李永辉. 油菜花粉抗前列腺增生与炎
症的活性部位研究 [J]. 中草药, 2010, 41(5): 798-802.
[5] 周利章, 韩 静. HPLC 法测定普乐安片中槲皮素的含
量 [J]. 中国药品标准, 2007, 8(1): 53-55.
[6] 王 勤, 冯高平, 陈小琴. HPLC 法测定普乐安片中芦
丁的含量 [J]. 西北药学杂志, 2006, 21(1): 5-6.
[7] 刘素香. HPLC 法测定金刚藤颗粒中山柰素的含量 [J].
中草药, 2004, 35(3): 284-285.






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