全 文 ：中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月

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HPLC 法测定黄连不同部位中 6 个生物碱
彭 福 1, 2，瞿显友 2，钟国跃 2，张宝喜 1, 2，王 钰 2，罗维早 2*
1. 成都中医药大学，四川 成都 611137
2. 重庆市中药研究院，重庆 400065
摘 要：目的 建立黄连不同部位中盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱
的测定方法。方法 色谱条件为 Phenomenex Gemini-NX C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈-30 mmol/L
碳酸氢铵溶液（每 1 000 mL 碳酸氢铵溶液含 7 mL 氨水及 1 mL 三乙胺）；体积流量 1.0 mL/min；检测波长 270 nm；柱温 30
℃。结果 黄连须根、根茎、叶中 6 个生物碱量具有较明显差异。经比较，黄连适宜在移栽后第 4 年采挖，7～10 月的最佳
采挖月份是 10 月。结论 该法简便、准确、分离效果好，适用于黄连主要生物碱的定量分析。
关键词：黄连；药根碱；小檗碱；巴马汀；表小檗碱；非洲防己碱；黄连碱
中图分类号：R286.022 文献标志码：A 文章编号：0253 - 2670(2012)03 - 0509 - 04
Dertermination of six alkaloids in different parts of Coptis chinensis by HPLC
PENG Fu1, 2, QU Xian-you2, ZHONG Guo-yue2, ZHANG Bao-xi1, 2, WANG Yu2, LUO Wei-zao2
1. Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, Chengdu 611137, China.
2. Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, Chongqing 400065, China.
Key words: Coptis chinensis Franch.; jateorhizine; berberine; palmatine; epiberberine; columbamine; coptisine

黄连味苦性寒，具有清热燥湿、泻火解毒之功
效[1]。其须根、剪口、叶柄和叶等可以作为黄连的
代用品[2-3]。黄连的主要成分是生物碱，本实验采用
HPLC 法对不同采收月份、不同产地黄连叶、须根
及根茎中盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小
檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀和盐酸小檗碱的量
进行测定，6 种生物碱量占总生物碱量的 95%以上，
基本能反映黄连品质的优劣，对控制黄连的质量、
合理采收、确保疗效具有重要意义。
1 仪器与试药
1.1 仪器
DGU—20A 型岛津液相色谱仪（LC solutions 色
谱系统）；KQ250DB 型数控超声波清洗器（巩义市
予华仪器有限责任公司）；AUW220D 型电子天平
（日本岛津公司）；Anke TGL—16G 型离心机（上海
安亭科学仪器厂）。
1.2 试药
盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、盐酸药根碱、盐酸
黄连碱、盐酸表小檗碱、盐酸非洲防己碱对照品均
为自制，质量分数 98%以上；乙腈为色谱纯，其余
试剂均为分析纯；黄连药材样品均由重庆市中药研
究院生药室分别于 7～10 月份采收自四川省洪雅
市，经瞿显友研究员鉴定为毛茛科植物黄连 Coptis
chinensis Franch. 的干燥根茎、须根和叶，见表 1。
2 方法
2.1 色谱条件
Phenomenex Gemini-NX C18 色谱柱（250 mm×
4.6 mm，5 μm）；流动相为 A-30 mmol/L 碳酸氢铵
溶液（每 1 000 mL 碳酸氢铵溶液含 7 mL 氨水及
表 1 样品信息
Table 1 Sample information
编号 样 品 编号 样 品
1 3 年生单株（根茎） 6 5 年生单株（须根）
2 4 年生单株（根茎） 7 3 年生单株（叶）
3 5 年生单株（根茎） 8 4 年生单株（叶）
4 3 年生单株（须根） 9 5 年生单株（叶）
5 4 年生单株（须根）

收稿日期：2011-10-15
基金项目：国家科技支撑计划项目（2007BAI40B03）
作者简介：彭 福（1986—），男，重庆市璧山县人，成都中医药大学药学院在读硕士研究生，主要从事中药化学研究。E-mail: pfooo@sina.com
*通讯作者 罗维早 Tel: (023)89029026 E-mail: loweizao@163.com
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月

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1 mL 三乙胺），B-乙腈；梯度洗脱，0～15 min，10%
B；15～25 min，10%～20% B；25～45 min，27%～
30% B；45～50 min，30%～35% B；50～55 min，35%～
100% B。体积流量 1 mL/min；检测波长 270nm；柱
温 30 ℃；进样量 10 μL。理论板数按盐酸药根碱、
盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸
巴马汀、盐酸小檗碱峰计算均不低于 5 000。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸
表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱
6 种对照品适量，置于 50 mL 量瓶中，甲醇定容至
刻度，得到各对照品质量浓度分别为 22.2、19.0、
65.8、93.4、58.2、281.2 μg/mL 的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备[1]
取药材粉末适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，
精密加入甲醇-盐酸（100∶1）的混合液 50 mL，密
塞，称定质量，超声处理（功率 250 W，频率 40 kHz）
30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质
量，摇匀，离心（10 000 r/min），即得。
2.4 线性关系考察
精密量取“2.2”项下混合对照品溶液适量，
分别稀释 1～7 倍，得 7 个不同质量浓度的对照品
溶液，按“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以峰
面积积分值为纵坐标（Y），对照品进样量为横坐标
（X）制定标准曲线，得回归方程及线性范围，具
体见表 2。
表 2 回归方程及线性范围
Table 2 Regression equations and linear range
对照品 回归方程 r 线性范围 / μg
盐酸药根碱 Y＝4.212×104 X＋1.214×104 0.999 9 0.003 2～0.022 2
盐酸非洲防己碱 Y＝6.408×104 X－5.471×103 0.999 9 0.002 7～0.019 0
盐酸表小檗碱 Y＝3.338×104 X－3.263×104 0.999 6 0.009 4～0.065 8
盐酸黄连碱 Y＝3.811×104 X－6.566×104 0.999 9 0.013 3～0.093 4
盐酸巴马汀 Y＝4.188×104 X－3.481×104 0.999 5 0.008 3～0.058 2
盐酸小檗碱 Y＝3.942×104 X－6.651×104 0.999 8 0.040 2～0.281 2

2.5 精密度试验
精密吸取混合对照品溶液，连续进样 5 次，记
录 6 种对照品峰面积。计算得盐酸药根碱、盐酸非
洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马
汀、盐酸小檗碱峰面积 RSD 分别为 0.4%、0.8%、
0.8%、0.4%、0.6%、0.3%。
2.6 稳定性试验
取根茎 1 号黄连供试品，按“2.1”项下色谱条
件分别于 0、2、4、8、12、24 h 各进样 1 次，记录
6 种生物碱峰面积。计算得盐酸药根碱、盐酸非洲
防己碱、盐酸表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、
盐酸小檗碱峰面积的 RSD 分别为 2.4%、0.8%、
1.3%、2.6%、1.4%、2.7%。
2.7 重现性试验
取 1 号黄连根茎供试品，精密称定 6 份，按照
“2.3”项方法制备，按“2.1”项下色谱条件测定。
盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、盐
酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱峰面积 RSD 分
别为 1.4%、1.3%、1.3%、1.0%、1.3%、1.8%。
2.8 加样回收率试验[2]
精密称取盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸
表小檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱
对照品各 6.62、10.71、31.04、44.58、38.72、148.78
mg，置 50 mL 量瓶中，加 50%乙腈溶解，定容，摇
匀待用。称取 1 号黄连样品粉末 9 份，每份 0.1 g，
精密称定，加入一定量的生物碱混合对照品储备溶
液，按照“2.3”项方法制备后，按上述色谱条件定
量测定。盐酸药根碱、盐酸非洲防己碱、盐酸表小
檗碱、盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱平均
回收率分别为 100.07%、99.69%、101.60%、100.56%、
102.34、102.63%，RSD 分别为 1.19%、1.90%、0.64%、
1.39%、1.48%、1.19%
2.9 样品测定
分别取 7～10 月份采收的黄连各部位样品，按
照“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱
条件进行测定，外标法计算样品中生物碱的量，混
合对照品和样品色谱图见图 1，样品测定结果见表
3～6。
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月

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1-盐酸药根碱 2-盐酸非洲防己碱 3-盐酸表小檗碱 4-盐酸黄连碱 5-盐酸巴马汀 6-盐酸小檗碱
1-jatrorhizine hydrochloride 2-columbamine hydrochloride 3-epiberberine hydrochloride
4-coptisine hydrochloride 5-palmatine hydrochloride 6-berberine hydrochloride
图 1 混合对照品(A)和样品(B)HPLC 图
Fig. 1 HPLC chromatograms of mixed reference substances (A) and samples (B)
表 3 7 月份采收各年生植株中 6 种对照品的量 (n＝3)
Table 3 Contents of six reference substances in plantlets havested in July of every year (n＝3)
质量分数 / % 编 号 盐酸药根碱 非洲防己碱 表小檗碱 黄连碱 巴马汀 小檗碱
1 0.44 0.44 0.76 2.59 1.38 6.67
2 0.43 0.39 1.25 2.02 1.64 5.89
3 0.51 0.38 0.80 1.87 1.46 5.11
4 0.87 0.08 0.41 1.42 0.18 2.18
5 0.88 0.08 0.90 1.35 0.22 1.77
6 0.88 0.06 0.63 1.13 0.14 1.42
7 0.29 0.09 0.05 0.26 0.14 1.18
8 0.12 0.07 0.04 0.14 0.06 1.39
9 0.11 0.10 0.03 0.11 0.09 1.38
表 4 8 月份采收各年生植株中 6 种对照品的量 (n＝3)
Table 4 Contents of six reference substances in plantlets havested in August of every year (n＝3)
质量分数 / % 编 号 盐酸药根碱 非洲防己碱 表小檗碱 黄连碱 巴马汀 小檗碱
1 0.51 0.37 1.06 2.69 1.68 6.36
2 0.59 0.49 1.41 2.77 1.99 6.11
3 0.50 0.35 1.20 2.66 1.47 6.02
4 0.93 0.05 0.64 1.75 0.18 1.97
5 1.25 0.10 0.86 1.46 0.32 2.29
6 0.94 0.05 1.04 1.62 0.25 1.62
7 0.38 0.05 0.11 0.21 0.16 1.13
8 0.15 0.08 0.03 0.17 0.13 1.41
9 0.14 0.07 0.04 0.16 0.13 1.27
表 5 9 月份采收各年生植株中 6 种对照品的量 (n＝3)
Table 5 Contents of six reference substances in plantlets havested in September of every year (n＝3)
质量分数 / % 编 号 盐酸药根碱 非洲防己碱 表小檗碱 黄连碱 巴马汀 小檗碱
1 0.49 0.44 0.80 2.09 1.33 5.72
2 0.61 0.53 1.17 2.03 1.82 5.96
3 0.61 0.32 1.05 2.20 1.61 6.38
4 0.81 0.06 0.54 1.29 0.16 1.62
5 1.15 0.13 0.76 1.04 0.24 1.74
6 1.12 0.09 0.87 1.50 0.25 1.92
7 0.45 0.12 0.06 0.21 0.17 1.00
8 0.16 0.10 0.04 0.17 0.11 1.54
9 0.25 0.12 0.05 0.20 0.15 1.55
0 10 20 30 40 50
1 2 3
4
5
6
B
0 10 20 30 40 50
1
2
3 4
5
6
A
t / min
中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 43 卷 第 3 期 2012 年 3 月

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表 6 10 月份采收各年生植株中 6 种对照品的量 (n＝3)
Table 6 Contents of six reference substances in plantlets havested in October of every year (n＝3)
质量分数 / % 编 号 盐酸药根碱 非洲防己碱 表小檗碱 黄连碱 巴马汀 小檗碱
1 0.52 0.36 0.67 2.19 1.42 5.59
2 0.55 0.48 1.31 2.48 2.05 7.04
3 0.45 0.28 1.17 1.95 1.37 4.98
4 0.90 0.07 0.57 1.47 0.18 1.84
5 0.77 0.07 0.84 1.47 0.23 1.64
6 0.76 0.04 0.80 1.11 0.20 1.40
7 0.54 0.09 0.12 0.40 0.18 1.07
8 0.13 0.07 0.04 0.14 0.11 1.30
9 0.20 0.08 0.07 0.20 0.16 1.61

3 讨论
黄连一般在移栽后 5 年收获，须根、叶片经干
燥去泥沙杂质后，亦可入药，残留叶柄及细渣筛净
后可作兽药[4]。因黄连根茎生物碱量最能反映黄连
品质，所以对不同采挖时间的黄连根茎生物碱量进
行研究，结果表明 4 年生单株生物碱量略高于 5 年
生单株，3 年生单株最次，因此认为黄连宜在其移
栽后第 4 年采挖。
已有研究报道[4]黄连宜在11月上旬至降雪前采
挖，《中国药典》2010 年版规定黄连按干燥品计算，
以盐酸小檗碱计，含小檗碱不得少于 5.5%，表小檗
碱不得少于 0.80%，黄连碱不得少于 1.6%，巴马汀
不得少于 1.5％[1], 根据本实验测定，在 7～10 月份
采收的 4 年生黄连均具有较佳品质，所以认为黄连
在 7 月至降雪前均宜采挖，但 7～10 月份的最佳采
挖月份是 10 月。
本研究建立了 HPLC 同时测定黄连不同部位 6
种主要生物碱的方法，该方法简便、快速、可用于
黄连的质量控制。不同部位黄连各生物碱量不同，
从 7～10 月份样品测定结果可知，除盐酸药根碱外，
其余 5 个生物碱（盐酸非洲防己碱、盐酸表小檗碱、
盐酸黄连碱、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱）量在根茎
中均最高；除盐酸非洲防己碱外，其余 4 个生物碱
在须根中的量均高于叶。从黄连不同部位生物碱量
来看，传统用药部位（根茎）是黄连药用化学成分
富集的主要部位，但非传统用药部位（须根、叶）
也含有一定量的药用化学成分，须根中盐酸药根碱
的含量甚至超过了根茎，而其盐酸小檗碱的量甚至
达到或超过一些小檗属植物根的量[5]。因此建议利
用黄连根茎的同时，也要积极开发利用其非传统药
用部位，通过提取其生物碱减少资源的浪费，实现
黄连药材资源的可持续发展。
参考文献
[1] 中国药典 [S]. 一部. 2010.
[2] 方忻平, 王天志, 张 浩, 等. 黄连属植物根、根及叶
生物碱的研究 [J]. 中药材, 1989, 12(3): 33-35.
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汤中盐酸小檗碱、表小檗碱、药根碱、盐酸巴马汀和
甘草酸 [J]. 中草药, 2011, 42(2): 285-287.
[4] 宫 涛, 魏盼盼, 张正海. 黄连规范化栽培方法 [J].
药用植物, 2009, 12(11): 37-39.
[5] 张金渝, 王 波, 金 航, 等. 云南黄连不同部位有效
成分及生物量的比较研究 [J]. 中国中药杂志, 2008,
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