全 文 ：AFLP 分析唐古特大黄、掌叶大黄和药用大黄的亲缘关系研究
索风梅1 ,宋经元1 ,陈士林1 3 ,王永刚2 ,梅红芳2 ,Eiji Miki3 ,Osami Takeda3 ,谢彩香1
(11 中国医学科学院北京协和医学院 药用植物研究所 ,北京 　100193 ;21 中国医药保健品股份有限公司 ,北京 　100061 ;
31 Botanical Raw Materials Research Department , Botanical Raw Materials Division , Tsumura & Co1 3586 Yoshiwara ,
Ami2machi , Inashiki2gun , Ibaraki 30021192 , Japan)
摘 　要 :目的 　研究《中国药典》2005 年版收载蓼科大黄属 3 种大黄 (唐古特大黄、掌叶大黄和药用大黄) 的亲缘关
系。方法 　对 3 种大黄 44 份样品进行 A FL P 分析 ,同时利用 N TSYSpc22111F 软件分析其亲缘关系。结果 　8 对
选择性扩增引物中 ,扩增得到 1 255 条稳定清晰的条带 ,其中多态性条带 1 209 条 ,多态性带占总带数的 9612 %。
将 44 份大黄样品分为 2 组 2 个亚组。四川若尔盖唐古特大黄聚为第一组 ,第二组分为两个亚组 ,分别为药用大黄
和掌叶大黄。另外 ,大黄的 A FL P 分子标记谱带显示 ,3 种大黄和不同来源的大黄样品间除了具有共有带外 ,还有
一些特异带 ,说明种间甚至不同来源的样品间有一定程度的特异性。结论 　《中国药典》规定的 3 种正品大黄中 ,
药用大黄和掌叶大黄亲缘关系较唐古特大黄近 ,表明利用 A FL P 技术分析 3 种大黄的亲缘关系可行。
关键词 :大黄 ;A FL P 分析 ;亲缘关系 ;蓼科 ;大黄属
中图分类号 :R28217 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2010) 02 0292 05
AFLP Analysis on genetic relationship among Rheum ta nguticum ,
Rheum palmatum , and Rheum of f icinale
SUO Feng2mei1 , SON G Jing2yuan1 , CH EN Shi2lin1 , WAN G Yong2gang2 , M EI Hong2fang2 ,
EIJ I Miki3 , OSAMI Takeda3 , XIE Cai2xiang1
(11 Institute of Medicinal Plant Development , Chinese Academy of Medical Sciences , Chinese Peking Union Medical
College , Beijing 100193 , China ; 21 China Meheco Corporation , Beijing 100061 , China ; 31 Botanical Raw
Materials Research Department , Botanical Raw Materials Division , Tsumura & Co1 3586
Yoshiwara , Ami2machi , Inashiki2gun , Ibaraki 30021192 , Japan)
Abstract : Objective 　To investigate the genetic relationship of t hree t raditional medicinal rhubarbs
( R heum t ang uticum , R1 p al m at um , and R. of f ici nale1 Methods 　Amplified f ragment lengt h polymor2
p hism (A FL P) technology and N TSYSpc22111F software were used to st udy and analyze the affinity be2
tween 44 wild or cultivated medicinal rhubarbs f rom different p rovenances1 Results 　The 1 255 bands were
amplified by polymerase chain reactions wit h eight screened and reliable p rimers1 Among them 1 209
(9612 %) bands showed polymorp hic1 The 44 different rhubarbs were categorized into two group s by clus2
ter analysis1 R1 t ang uticum belonged to Group Ⅰ, while R. p al m at um and R. of f ici nale were clustered
to Group Ⅱ1 In addition , there were some specific bands among all amplification bands1 This result indica2
ted the rhubarbs originated f rom t he different species and provenances had specific DNA bands and may be
authenticated according to the characteristics1 Conclusion 　Compared to R1 t an g uticum , t he genetic rela2
tionship between R1 p al m at um and R1 of f ci nale is closer1 A FL P Technique is p roved to be a very effec2
tive met hod to st udy t he genetic relationship s of medicinal rhubarbs1
Key words : rhubarb ; amplified f ragment lengt h polymorp hism (A FL P) ; genetic relationship ; Polygo2
naceae ; R heum L1
·292· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
3 收稿日期 :2009205220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家中医药管理局中医药行业科研专项 (200707007) ;中国医药保健品股份有限公司、日本津村与中国医学科学院药用植物
研究所合作项目资助
作者简介 :索风梅 (1976 —) ,女 ,河北邯郸人 ,硕士学位 ,主要从事药用植物资源学研究。　Tel :13641110813 　E2mail : sf m78 @1631com3 通讯作者　陈士林　Tel : (010) 62899700 　E2mail :shilinchen @implad1 ac1cn
　　大黄是世界上应用广泛的重要植物药之一 ,日
本、韩国、英国等 19 个国家的法定药典将大黄定为
可使用的药物。中国的《神农本草经》、《本草纲目》
中均有收载。大黄性寒、味苦 ,有泻火通便、活血祛
瘀、利胆退黄之功效。近代研究证明大黄还具有抗
菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、降血脂、降血压、健胃、
利胆、调节免疫等作用[ 1 ] 。《中国药典》2005 年版收
载的大黄为蓼科大黄属植物掌叶大黄 R heum p al2
m at um L1 、唐古特大黄 R1 t ang uticum Maxim1 ex
Balf1 和药用大黄 R1 of f ici nale Baill1 的干燥根及
根茎。大黄属植物在全世界有 60 种 ,我国多达 45
种 ,主要分布于青海、西藏、四川、甘肃等地 ,在青藏
高原分布有 23 种[2 ] 。目前国内外对大黄的众多研
究主要集中在化学、药理和资源调查等方面 ,而对其
种间和种内遗传分化和变异的研究则很少。杨美华
等[3 ,4 ]用 RA PD 方法对正品和伪品大黄进行指纹图
谱的研究 ,为正品和伪品大黄的基原鉴定提供分子
依据 ;同时通过对 13 种大黄属 26 个居群 49 个植物
样本叶绿体 t rnL ( UAA) / t rnF ( GAA) 间隔区的测
序分析 ,找到了大黄属分子标记 ,并由此设计了大黄
的特异性 PCR 扩增引物用于鉴别大黄。肖培根
等[5 ] 曾经对大黄属植物亲缘关系、化学成分与疗效
间联系性进行了研究 , 结果表明 , 除拉萨大黄
R heum l hasaense A. J . Li et P. K. Hsiao 外 ,本属
植物普遍含有蒽醌类衍生物 ,但具有明显泻下作用、
符合药用商品大黄标准的种类仅限制在掌叶组
Sect1 Palmata 的植物中 ,如掌叶大黄、鸡爪大黄 R1
tang uticum Maxim1 ex Regel 和药用大黄等种类 ,
但并没有研究 3 者之间的亲缘关系。
A FL P ( amplified f ragment lengt h polymor2
p hism)技术被认为是迄今为止最为有效的 DNA 指
纹技术 ,因其信息量大、灵敏度高、重复性好等优点 ,
在分子系统学的研究中得到了广泛应用[ 6 ] 。它可以
一次检测到基因组中很多随机分布的位点 ,被认为
是估计个体间、群体间和种群间遗传距离的有效手
段 ,同时也是研究群体遗传多样性水平和优良育种
遗传关系的有力工具[7 ] 。在栽培植物及野生近缘种
的亲缘关系研究中 ,充分显示出巨大优越性 ,近年来
也逐渐应用于药用植物诸如牡丹、栀子、紫薇
等[8～10 ]的亲缘关系研究 ,均取得较好的研究结果。
本研究在全面调查大黄资源分布区域的基础上 ,采
用 A FL P 分子标记技术来研究 3 种大黄亲缘关系
及种间基因组的相互关系 ,寻找 3 种大黄的系统进
化与起源的分子证据 ,为科学合理地保护和利用现
有的大黄资源提供理论依据和技术支持。
1 　材料与方法
111 　材料 :本实验所使用的实验材料唐古特大黄
C1～C29采自四川若尔盖野生抚育基地 ;药用大黄
C30～C37分别采自四川阿坝松坪沟、酉阳土家族苗
族自治县、万源钟亭乡 ,皮窝乡、平武县阔达乡、阿坝
松藩县、天全县小河乡、平武县土城乡 ;掌叶大黄
C38～C44 采自甘孜州新都桥、阿坝松坪沟、甘肃礼县
白关乡、洮坪乡、铨水乡、桥头乡。经中国医学科学院
药用植物研究所林余霖研究员、中国科学院植物研究
所李安仁教授鉴定。取其幼嫩叶片 ,用纱布擦拭干
净 ,立即放于硅胶袋中 ,干燥后室温保存备用。
112 　A FL P 分析方法
11211 　基因组 DNA 的提取 :采用 CTAB 法[11 ] 提
取基因组 DNA ,并根据实验条件进行了优化。
11212 　接头和引物 :从 64 对 A FL P 引物中筛选出
8 对带型分布均匀、多态性高且分辨力强的引物进
行 A FL P 分析 ,见表 1。
11213 　酶切与连接 :本实验参照 Vos Hogers 等[6 ]
的方法并略有修改 ,首先采用 N EB ( New England
BioLabs) 公司提供的两种限制性内切酶 Mse Ⅰ和
EcoR Ⅰ对基因组总 DNA 进行双酶切 , 然后用
T4DNA 连接酶 ,将 Mse Ⅰ和 EcoR Ⅰ接头与酶切片
断连接起来 ,酶切连接一步完成 ,其中酶切体系 (20
μL) 包括对照模板 DNA :4 (50 ng/μL ) ; Adapter : 1
μL ; EcoR Ⅰ/ Mse Ⅰ:2μL ;10 ×Reaction buffer :215
μL ; 10 mmol/ L A TP : 215 μL ; T4 Ligase : 1 μL ;
A FL P2Water :7μL 。混匀离心数秒 ,37 ℃保温 5 h ,
8 ℃保温 4 h ,4 ℃过夜。
11214 　PCR 预扩增 :连接产物用预扩增引物进行
预扩增 ,预扩增的反应体系 (25μL 反应体系) 为 :酶
切连接后模板 :2μL ; Pre2amp mix :1μL ; dN TPs : 1
μL ;10 ×PCR buffer :215μL ; T aq DNA polymease :
015μL ; H2 O :18μL 。混匀 ,离心数秒 ,然后用 Gene
Amp RCR System 9600 ( Perkin Elmer ,美国) 进行
扩增 ,其反应条件为 :94 ℃变性 2 min ;然后进行 30
个循环 (94 ℃变性30 s ,56 ℃复性 30 s ,72 ℃延伸
80 s) ,最后 72 ℃延伸 5 min。
11215 　PCR 选择性扩增反应 ( 25 μL 体系 ) : 用
A FL P2TE 将预扩产物 1 ∶20 稀释 ,作为选扩模板 ;
在 012 mL 离心管中 ,依次加入 :2μL 模板 ;215μL
10 ×PCR buffer ;015μL dN TPS ;1μL EcoR Ⅰ引物
(共 8 种) ;1μL Mse Ⅰ引物 (共 4 种) ;015μL T aq
酶 ;1715μL H2 O。然后混匀 ,离心数秒 ,按下列参
·392·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
数 PCR 循环。一轮扩增参数 : 94 ℃,30 s ; 65 ℃,
30 s ;72 ℃,80 s ;以后每轮循环温度递减 017 ℃,扩
增 12 轮 ;接着按下列参数扩增 23 轮 :94 ℃,30 s ;55
℃,30 s ;72 ℃,80 s。
表 1 　DNA接头和 AFLP引物序列
Table 1 　DNA Adapters and primers sequence in AFLP
接头和引物 核苷酸序列
EcoR Ⅰ接头 5′2CTC GTA GAC TGC GTA CC23′
5′2AA T TGG TAC GCA GTC TAC23′
MseⅠ接头 5′2GAC GA T GA G TCC T GA G23
5′2TAC TCA GGA CTC A T23′
EcoR Ⅰ预扩增引物
EcoR Ⅰ选择性圹增引物 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CA23′
　(5 ng ·μL - 1 )
E1 5′GAC T GC GTA CCA A T T CAAC23′
E2 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CAA G23′
E3 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CACA23′
E4 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CACT23′
E5 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CACC23′
E6 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CACG23′
E7 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CA GC23′
E8 5′2GAC TGC GTA CCA A TT CA GG23′
MseⅠ预扩增引物
MseⅠ选择性圹增引物 5′2GAC GA G TCC T GA GTA AC23′
　(30 ng ·μL - 1 )
M1 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACA A23′
M2 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACA C23′
M3 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACA G23′
M4 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACA T23′
M5 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACT A23′
M6 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACT C23′
M7 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACT G23′
M8 5′2GA T GA G TCC T GA GTA ACT T23′
　　所有 PCR 扩增反应均在 Gene Amp PCR Sys2
tem 9600 ( Perkin Elmer ,美国)上进行。
11216 　PCR 产物检测 :取 1 μL PCR 产物加上 1
μL 内标 ( GEN E2MAR K500) 和 1 μL 变性液于 95
℃放置 2 min ,冰浴 ,然后置于 - 20 ℃冰箱用于电泳
检测。选扩产物的检测条件为 : 1) 预电泳 : 20～30
min ;2)点样 ;3)电泳 :215 h (电压 1 200 V) 。电泳大
约 1 h ,小片段会先跑到胶的底部 ,测序仪激光管开
始收集条带。电泳结束后 ,打开胶图即可分析结果。
(胶图由测序仪软件自动生成 ,条带密集处为小片
段 ———胶图下方) 。
所使用的电泳仪为北京 D G—Ⅲ双稳数显电泳
仪 ,电泳槽为 D G—3D 大型水平电泳槽 ,均为北京
鼎国生物技术有限责任公司生产。
11217 　A FL P 图谱和数据分析 :利用 ABI PRISM
377 Sequencer 进行 A FL P 多态性分析 ,选择 Run
Module : GS Run 36F22400 即可采集到清晰的
A FL P 指纹图谱 ;再利用 GeneScan311 软件将 44 份
样品、8 对引物组合扩增出的电泳图谱转化为相对
分子质量数据 ,再根据图谱中同一位置 DNA 带的
有无 ,转化为 0 ,1 数据矩阵。
用 N TSYSpc22111F 软件进行数据分析 ,对原始
矩阵用 SimQual 程序求 DICE 相似系数矩阵 ,并获得
相似系数矩阵。用 SHAN 程序中的 UPGMA 方法进
行聚类分析 ,并通过 Tree plot 模块生成聚类图。
2 　结果与分析
211 　模板质量检测与定量 :高质量的基因组 DNA
是 A FL P 实验和数据分析成功的前提。采用优化
后的 CTAB 法提取大黄的基因组 DNA ,可有效去
除多糖和酚类的干扰。通过琼脂糖凝胶电泳检测显
示 :点样孔杂质少 ,DNA 无降解 ,带型整齐 ,质量浓
度在 150 ng/μL 左右 ,见图 1。经紫外分光光度计
检测 A 260 / A 280比值为 1180～1183 ,计算 DNA 质量
浓度与电泳检测相比基本一致。
图 1 　大黄基因组 DNA琼脂糖凝胶电泳图
Fig11 　Agarose gel electrophoresis of genomic DNA
of three traditional medicinal rhubarbs
212 　酶切连接的结果检验 :A FL P 实验过程要经过
基因组 DNA 提取、酶切、连接、预扩增、选择性扩
增、聚丙烯酰胺凝胶电泳等一系列步骤。其中酶切、
连接是否完全直接影响到 A FL P 实验结果的准确
性 ,因此需要对连接结果进行检验 ,而预扩增电泳结
果可间接反映出连接的效果。从图 2 可以看出 ,
DNA 酶切片段凝胶电泳后分散呈均匀的弥散状 ,扩
增片段大多集中在 250～1 600 bp ,说明酶切较完
全 ,接头连接较好。
213 　选择性扩增结果及 A FL P 扩增图谱分析 :引
物具有较好的稳定性和多态性是下一步基因组扩增
成败的关键因素 ,尤其是对于种内的扩增 ,由于种内
个体之间除自然变异外 ,基因型没有太大的差异 ,如
果没有多态性强、稳定性好的引物很难区别个体内
的差异 ,因此在大量的引物中筛选出合适的组合就
显得尤为重要 ,本实验通过对 64 对引物组和的筛
选 ,选出 8 对具多态性和清晰度都较高的引物组合 ,
共扩增获得 1 255 条带 ,平均每对引物组合产生
·492· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
图 2 　预扩增产物琼脂糖凝胶电泳图
Fig12 　Agarose gel electrophoresis of AFLP pre2
amplif ication products
156188 条带 ,其中 1 209 条带是多态性的 ,多态位点
百分率为 9414 %～9914 % ,平均为 9612 % ,种间的
区分率为 100 % ,见表 2。可以看出 A FL P 检测大黄
的遗传多样性效率很高 ,具有的多态性位点比较丰
富。图 3 显示引物组合 E2A GG/ M2CT G 对部分供
试样品进行 A FL P 选择性扩增的聚丙烯酰胺凝胶
电泳图。该引物在 44 份大黄样品中共扩增出位点
160 个 ,其中多态性位点 153 个 ,占 9516 %。可见大
黄种间在 DNA 结构上存在相当大的差异 ,具有较
高的遗传多样性 ,是 A FL P 技术分析 3 种大黄亲缘
关系的基础 ,可作为鉴定不同品种和不同产地大黄
的依据。
表 2 　8 对引物对大黄的选择性扩增的多态性和多态率
Table 2 　Polymorphism amplif ied by eight selected
primer combinations from three
traditional medicinal rhubarbs
引物组合 扩增谱带数 多态性谱带
多态位点
百分率/ %
　　E2A GC/ M2CAA 148 143 961 6
　　E2A GC/ M2CA G 158 153 961 8
　　E2A GC/ M2CA T 150 142 941 7
　　E2A GC/ M2CT G 178 177 991 4
　　E2A GG/ M2CAA 143 138 961 5
　　E2A GG/ M2CA G 160 151 941 4
　　E2A GG/ M2CA T 158 152 961 2
　　E2A GC/ M2CT G 160 153 951 6
　　总和 1 255 1 209
　　平均 157 151 961 2
214 　《中国药典》收载 3 种大黄的聚类分析 :基于大
黄样本间的遗传距离 Nei (1972) 系数进行 UPGMA
聚类分析 ,可直观分析种间和种内的遗传关系 (图 4) 。
经过比较分析得到如下结果 : (1)在系统树状图中 ,当
遗传相似性水平取 0171 时 ,可以将品种明显分为 2
组 ,第 1 组包括的样品数较多 ,共有 29 份 ,全部为四
川若尔盖的唐古特大黄 ,第 2 组包括 15 份大黄样品 ,
在相似系数 0172 处分为两个亚组 ,来自四川阿坝松
坪沟、酉阳土家族苗族自治县、万源钟亭乡等不同产
地的药用大黄全部聚在一起 ,甘肃礼县的白关乡、洮
图 3 　泳道 1～29 为四川若尔盖野生抚育基地唐古
特大黄的 AFLP扩增谱带( E2AGG/ M2CTG)
Fig13 　Banding patterns 1 —29 of R1 t anguticum
amplif ied by selected primer combination
( E2AGG/ M2CTG)
坪乡、铨水乡、桥头乡的掌叶大黄先聚在一起 ,再和甘
孜州新都桥的掌叶大黄聚为一组。AFLP 聚类结果
表明 :药用大黄和掌叶大黄的遗传距离较近 ,二者先
聚在一起 ,与四川若尔盖的唐古特大黄相距较远 ,表
明药用大黄和掌叶大黄的亲缘关系相对唐古特大黄
较近。( 2) 3 种大黄的亲缘关系和来源有一定相关
性 ,但并不十分明显 ,其特征可概括为大聚集 ,小混
杂 ,在聚类图中 ,不同产地的药用大黄和甘肃礼县的
掌叶大黄明显分开 ,二者又与唐古特大黄分成两组 ,
但在每一组或亚组中 ,不同来源和产地的大黄有相互
混杂的现象 ,如在药用大黄亚组中 ,四川阿坝松坪沟
和重庆酉阳土家族苗族自治县的样品聚在了一起 ,而
与阿坝其他样品遗传距离相对较远 ;另外四川阿坝州
松坪沟的掌叶大黄却与药用大黄组聚在一起 ,引起这
种结果的可能是由于长期的引种驯化 ,使其基因型发
生改变造成的。(3) 从聚类图中还可以看出 ,3 种大
黄的遗传变异极为丰富 ,即使是来源地相同的大黄也
表现较大的遗传变异 ,如甘肃礼县的掌叶大黄 ,它们
之间的相似系数仅为 0178～0182 ,四川若尔盖的野生
抚育唐古特大黄单独聚为一类 ,其相似系数为 0173～
0181 ,均表现出较大的遗传分化 ,说明大黄的人工选
择程度很低。
3 　讨论
本研究根据遗传距离对 3 种大黄 44 份样品进
行 U P GMA 聚类 ,结果显示 :药用大黄和掌叶大黄
聚为一组 ,表明其遗传距离和亲缘关系较近 ,这与吴
家坤等在国产大黄属的新分类群中的研究结论有一
·592·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
系数
图 4 　3 种大黄基于遗传距离的 UPGMA聚类图
Fig14 　UPGMA Dendrogram of three kinds
of rhubarbs based on genetic distances
定的相似性 ,该研究初步认为药用大黄和掌叶大黄
实为一种 ———即秦岭大黄 ,是地区性特有种 ,也可能
是掌叶组类群中较原始种系的孑遗后裔 ,其发生演
进与古今秦岭植物地理演变密切关联[12 ] ,目前国内
外关于大黄亲缘关系的文献较少 ,肖培根等曾对大
黄属植物从化学成分、疗效与亲缘关系的联系性进
行了研究 ,把包括 3 种大黄在内的掌叶组作为一个
整体 ,将它与波叶组、心叶组等 6 个组进行比较研究
其亲缘关系[5 ] 。本研究在此基础上首次应用 A FL P
分析技术对掌叶组内的药典收载 3 种大黄 (药用大
黄、掌叶大黄和唐古特大黄)的亲缘关系远近进行探
讨 ,进一步证实了应用 A FL P 技术分析药用植物亲
缘关系的可行性。
了解大黄遗传变异的空间分布格局对于制定科
学的保护和开发策略有着重要的意义。大黄的
A FL P 实验结果表明 ,44 份不同来源的 3 种大黄样
品均能用 A FL P 技术遗传距离的远近较好地区分
开来 ,从大黄的 A FL P 分子标记谱带来看 ,3 种大黄
和不同来源的大黄样品间除了具有共有带外 ,还有
一些特异带 ,说明种间甚至不同来源的样品间都有
一定程度的特异性 ,可以作为分子鉴定的重要依据。
同时对于四川若尔盖的唐古特大黄 ,由于其遗传变
异性系数较大 ,保护时应充分予以重视以保护特有
基因和基因多样性 ,同时本研究通过 8 对高效的引
物 ,共扩增出 1 255 条带 ,多态性条带共计 1 209 条 ,
多态位点百分率平均为961 21 %。可见 , A FL P检
测大黄的遗传多样性效率很高 ,也表明 A FL P 分析
产生的总条带数、多态性条带、多态率都明显高于
RA PD、ISSR 等分析方法 ,表现出高效、快速、准确
和多态性丰富等特点 ,可以作为品种鉴别和亲缘关
系的参考依据。
　　同时 ,通过本研究可以得出 3 种大黄不同样品
间的遗传距离和地理分布并没有显著的相关性 ,如
在掌叶大黄亚组中 ,四川甘孜州新都桥的大黄与甘
肃礼县的大黄明显分开 ,但在药用大黄亚组中 ,四川
阿坝松坪沟和重庆酉阳土家族苗族自治县的样品聚
在了一起 ,而与阿坝其他药用大黄样品遗传距离相
对较远 ,造成这种结果的原因可能是由于 A FL P 分
析是直接从 DNA 分子水平上检测碱基序列的变
化 ,是对整个基因组 DNA 多态性检测的综合结果 ,
而物种的表观性状随海拔等地理环境的变化而具有
高度的可塑性或变异性 ,从而二者的聚类结果出现
不同程度的差异。在自然界中 ,物种的遗传和变异
现象非常复杂 ,需要深入地了解其内在的遗传变异
规律 ,才可以得出较为客观的结论。
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