全 文 ：HPLC法测定祛风止痛胶囊中羟基红花黄色素 A
吴
锋1 ,豆久锋1 ,陈忠良2 * 
( 1. 浙江大学医学院附属第一医院,浙江 杭州
310003; 2
金华市药品检验所, 浙江 金华
321000)
摘
要:目的
建立祛风止痛胶囊中羟基红花黄色素 A 的测定方法。方法
色谱柱为 Zorbax Eclipse XDBC18
( 150 mm 4
6 mm, 5
m) ;流动相:甲醇0
5%磷酸溶液( 25! 75) ; 检测波长为 403 nm; 柱温为 35 ∀ ; 体积流量为
1
0 mL / min; 进样量为 10
L。结果
羟基红花黄色素 A进样量在0
026~ 1
050
g 呈良好的线性关系( r= 0
999 7) ,样
品平均回收率为 98
66% , RSD为 1
71%。结论
此方法操作简便、专属性强、灵敏度高、重现性好, 可用于祛风止
痛胶囊中羟基红花黄色素 A 的控制。
关键词:祛风止痛胶囊; 羟基红花黄色素 A ;高效液相色谱
中图分类号: R286
02


文献标识码: B


文章编号: 02532670( 2010) 11181702


祛风止痛胶囊由红花、独活、老鹳草等 7味中药
材组成,具有祛风止痛、舒筋活血、强壮筋骨的功效,
用于四肢麻木, 腰膝疼痛,风寒湿痹等症。红花黄色
素是红花的主要水溶性组分, 为多种黄酮类混合物,
具有活血通经、祛疲止痛的功效,其中小分子有效成
分羟基红花黄色素 A 是红花的主要药效物质, 是评
价红花及其制剂质量的主要指标[ 1] , 且原标准没有
关于红花的任何控制项目。因此本实验建立了祛风
止痛胶囊中羟基红花黄色素 A 的测定方法,为更好
地控制祛风止痛胶囊的质量提供了参考依据。
1
仪器与试药


Ag ilent 1200 高效液 相色谱 仪, 梅特 勒
XS105DU 分析天平。


羟基红花黄色素 A 对照品由江西本草天工科
技有限公司提供,经 HPLC法鉴定基质量分数大于
97% ;祛风止痛胶囊为威阳步长制药有限公司生产。
水为娃哈哈纯净水, 甲醇为色谱纯(默克公司) ,其余
为分析纯。
2
方法与结果
2
1
色谱条件:色谱柱为 Zo rbax Eclipse XDBC18
( 150 mm 4
6 mm, 5
m) ; 流动相: 甲醇0
5%磷
酸溶液 ( 25 ! 75) ; 检测波长为 403 nm; 柱温为 35
∀ ;体积流量为 1
0 mL/ min;进样量为 10
L。理
论板数按羟基红花黄色素 A 峰计算大于 4 000。
2
2
对照品贮备液的制备:称取羟基红花黄色素 A
对照品 52
52 mg, 置 100 mL 量瓶中,加 25%甲醇
溶解并稀释至刻度, 摇匀,即得。
2
3
供试品溶液的制备:取本品内容物,研细,称取
约 2
5 g, 精密称定, 精密加 25%甲醇 25 mL, 称定
质量,超声处理 30 min,放冷,用 25%甲醇补足减失
的质量,离心, 取上清液用微孔滤膜 ( 0
45
m)滤
过,取续滤液,即得。
2
4
线性关系考察: 精密量取羟基红花黄色素 A
对照品贮备液 5 mL,置 100 mL 量瓶中,加 25%甲
醇稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密吸取对
照品溶液 1、5、10、20、30、40
L 分别注入液相色谱
仪(每份重复进样 2次) , 按上述色谱条件测定峰面
积。以峰面积为纵坐标,质量浓度为横坐标,绘制标
准曲线,得回归方程 Y = 2 049
4 X + 45
21( r =
0
999 7) , 表明进样量在 0
026~ 1
050
g 呈良好
的线性关系。
2
5
阴性空白试验:取处方中除红花外的另外药味
按制法制成阴性样品, 按供试品溶液的制备方法制
成阴性对照溶液,并按上述色谱条件测定。结果在
羟基红花黄色素 A 对照品峰相应的位置未见其他
的干扰峰,见图 1。
t/ min
* 羟基红花黄色素 A
* hydroxysaf flor yel low A
图 1
羟基红花黄色素 A对照品( A)、祛风止痛胶囊(B)
和阴性样品( C)的 HPLC色谱图
Fig
1
HPLC Chromatograms of hydroxysafflor yellow A
reference substance ( A) , Qufeng Zhitong Capsula
(B) , and negative sample ( C)
#1817#中草药
Chinese Traditional and Herbal Drugs
第 41 卷第 11 期 2010 年 11月
收稿日期: 20100312






















* 通讯作者
陈忠良
T el: ( 0579) 82301314
2
6
精密度试验:分别精密吸取羟基红花黄色素 A
对照品溶液 10
L 重复进样 6次, 测定峰面积值, 结
果峰面积的 RSD为 0
59%。
2
7
重现性试验:分别称取批号为 080706的供试
品 6份,制备供试品溶液并测定羟基红花黄色素 A
的质量分数,结果其 RSD为 0
92%。
2
8
稳定性试验: 取供试品溶液于制备后 2、4、8、
12、24、32 h分别进样 5
L, 测定羟基红花黄色素 A
的峰面积值, 计算得其 RSD 为 1
85%。结果表明
供试品溶液在 32 h内稳定。
2
9
回收率试验:精密称取批号为 080706的样品
(含羟基红花黄色素 A0
25 mg/ g) 6份, 分别精密加
入羟基红花黄色素 A 对照品溶液 5、5、10、10、15、15
mL,制备供试品溶液,按上述方法测定,计算回收率,
结果平均加样回收率为 98
66%, RSD为 1
71%。
2
10
样品的测定: 3批样品制备供试品溶液, 在上
述色谱条件进样测定, 以峰面积计算羟基红花黄色
素 A的质量分数,结果见表 1。
3
讨论
3
1
流动相的选择: 羟基红花黄色素A是一种小
表 1
祛风止痛胶囊中羟基红花黄色素 A 的测定结果
Table 1
Determination of hydroxysafflor yellow A
in Qufeng Zhitong Capsula
批
号 羟基红花黄色素 A/ ( m g # g- 1)
080706
0
25
20050626 0
31
20061213 0
28
分子黄酮类成分, 呈弱酸性,故在流动相中加入少量
的磷酸溶液抑制其离解, 改善其峰形及分离效果。
∃中国药典%2005年版一部红花项下流动相为甲醇
乙腈0
7%磷酸溶液( 26! 2! 72) ,通过试验发现选
用甲醇0
5%磷酸溶液( 25!75)可得到比药典方法
更好的峰形, 理论板数达到 4 000以上,而且分析时
间适中。
3
2
提取溶剂及方法的选择: 曾用甲醇、50%甲醇、
25%甲醇作为提取溶剂进行加热回流及超声处理的
比较试验,结果显示 25%甲醇超声处理 30 min提取
效率最高。操作中发现直接滤过比较困难,为解决滤
过难的问题采用了离心后再用微孔滤膜滤过方法。
参考文献:
[ 1]
侯世斌,李江伟,苏幼红, 等
羟基红花黄色素 A 人工抗原的
制备[ J]
中草药, 2008, 39( 10) : 14831486

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第 41 卷第 11 期 2010 年 11月