全 文 ：的检测器。它克服了示差检测器 ( RID) 灵敏度低的
问题 ,且相对质谱 ( MS) 检测器来说运行成本更低 ,
是中药分离分析、质量控制的重要方法之一。
由实验结果发现白英中 3 种苷元的量由大到小
依次为薯蓣皂苷元、蜀羊泉次碱、氢化勒帕茄次碱。
不同产地的白英药材中 3 种苷元量的差异较大。其
中安徽亳州和福建三明的白英中 3 种苷元量均较
高 ,但内蒙古的白英中 3 种苷元量均相对较低。这
可能与气候差异有关 ,南部地区年均温度较高生长
期长而使有效成分量增加。
参考文献 :
[ 1 ] 张民庆1 抗肿瘤中药的临床应用 [ M ]1 北京 :人民卫生出版
社 , 19981
[ 2 ] 韩 重 , 黄 霁 , 何 珉 , 等1 白英抗肿瘤成分提取工艺的
研究 [J ]1 中草药 , 2006 , 37 (10) :1500215021
[ 3 ] Helmut R , Andrea P1 ( 23R)2232Hydroxysoladulcidine and
related compounds f rom S olanum panduraef orme [J ]1 Phy2 tochemist ry , 1993 , 32 (6) : 1607216091[ 4 ] Richard F K , Dale C B , William G1 Spirosolane2containingS olanum species and induction of congenital craniofacial mal2formations [J ]1 Tox icon , 1990 , 28 (8) : 87328841[ 5 ] 徐 顺 , 王林江 , 李瑞玲 , 等1 白英全草中挥发油化学成分的分析 [J ]1 时珍国医国药 , 2006 , 17 (8) : 1390213911[ 6 ] 孙立新 , 李凤荣 , 孟 楠 , 等1 HPLC 法测定中药白英中 162妊娠双烯酮的含量 [J ]1 沈阳药科大学学报 , 2008 , 25 (4) :29422961[ 7 ] 孙立新 , 孟 楠 , 何 珉 , 等1 HPLC 法测定中药白英中薯蓣皂苷元的含量 [J ]1 沈阳药科大学学报 , 2007 , 24 (1) : 292311[ 8 ] 甄会贤 , 李 平 , 张 虹 , 等 1 白英中总黄酮的含量测定[J ]1 中华中医药学刊 , 2008 , 26 (10) : 2231222331[ 9 ] 甄会贤 , 齐 烨 , 陈 扬 , 等 1 白英中总皂苷的含量测定[J ]1 时珍国医国药 , 2008 , 19 (6) : 1402214031[ 10 ] 方幼兰1 芦笋皂苷的提取纯化及其糖基组成 [J ]1 生物工程学报 , 2005 , 21 (3) : 44624501[ 11 ] 季宇彬 , 岳 磊 , 汲晨锋1 RP2HPL C2EL SD 测定芦笋皂苷中菝葜皂苷元的含量 [J ]1 中国中药杂志 , 2006 , 32 ( 12) :1236212381
RP2HPLC同时测定不同产地独一味药材中 4 种环烯醚萜苷
樊鹏程1 ,2 ,李茂星1 ,2 ,贾正平1 ,2 3 ① ,张汝学1 ,2 ,邱建国1 ,2 ,张泉龙1 ,2
(11 兰州军区兰州总医院 药剂科 ,甘肃 兰州 730050 ;21 国家中医药管理局 临床药学重点学科 ,甘肃 兰州 730050)
摘 要 :目的 建立 RP2HPLC 同时测定不同产地独一味药材中 4 种环烯醚萜苷单体量的方法。方法 采用 Sym2
metry C18色谱柱 (150 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相 :0～11 min 乙腈2水 (11 ∶89) ,11～35 min 乙腈2水 (11 ∶89～
15 ∶85) 。体积流量 :110 mL/ min ,检测波长 :235 nm。结果 山栀苷甲酯在 510～100μg/ mL 线性关系良好 ,加样
回收率为 10311 % ,RSD 为 210 %。螃蟹甲苷 Ⅱ(phloyoside Ⅱ) 在 110～50μg/ mL 线性关系良好 ,加样回收率为
9712 % ,RSD 为 113 %。番木鳖苷甲酯在 110～50μg/ mL 线性关系良好 ,加样回收率为 10113 % ,RSD 为 115 %。82
O2乙酰山栀苷甲酯在 510～100μg/ mL 线性关系良好 ,加样回收率为 10218 % ,RSD 为 112 %。10 批不同产地独一
味药材中山栀苷甲酯量为 013 %～1141 % ,螃蟹甲苷 Ⅱ量为 010 %～0145 % ,番木鳖苷甲酯量为 0102 %～213 % ,82
O2乙酰山栀子苷甲酯量为 1105 %～2195 %。结论 实验建立的环烯醚萜苷测定方法准确可靠 ,适于独一味药材中
环烯醚萜苷类量的测定。不同产地独一味药材中环烯醚萜苷量存在较大差异。
关键词 :RP2HPL C ;独一味 ;环烯醚萜苷
中图分类号 :R28216 文献标识码 :A 文章编号 :025322670 (2010) 0320483203
独一味来源于唇形科独一味属植物独一味
L amiop hlomis rot at a (Bent h1 ) Kudo 的全草或根
及根茎 ,主产于甘肃、西藏、青海、云南、四川等省区 ,
为传统藏药 ,藏语称“大巴”、“打巴布”“尕果拉”等。
其根及根茎或全草入药 ,药材表面枯黄色或黄褐色 ,
质坚硬、干枯、气腥臭 ,是我国藏、蒙、纳西等民族民
间常用药之一 ,具有止血、镇痛消肿、活血化瘀、补
髓、行气、续筋骨等功效[ 1～3 ] 。2005 年版《中国药
典》中该药材仅对其中的木樨草素作定量测定[ 4 ] ,未
对环烯醚萜苷类成分进行测定。近年来研究越来越
集中于其环烯醚萜苷类成分 ,并有报道其主要活性
成分为环烯醚萜苷类成分[ 5 ,6 ] ,故单纯控制木樨草
素的量不能有效控制独一味药材内在质量 ,以致影
响生产相关产品的质量及药材临床应用的安全有
效。有报道应用分光光度法测定独一味药材中总环
烯醚萜苷的量[7 ] ,钱大玮等[8 ] 用 H PL C 法测定了独
·384·中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期 :2009206208
基金项目 :兰州军区医药卫生科研基金资助项目 (L XH2200409) ;甘肃省科技攻关项目 (2 GS0542A432014214)
作者简介 :樊鹏程 (1980 —) ,男 ,主管药师 ,硕士 ,主要从事中药分析研究。E2mail :fpch2001 @yeah1 net3 通讯作者 贾正平 Tel : (0931) 8994652 E2mail :jiazp166 @sina1com
一味中环烯醚萜苷类成分硬糙苏苷 C (p hlorigido2
side C) 的量 ,本实验建立了梯度 RP2HPL C 同时测
定不同产地独一味药材中 4 种环烯醚萜苷单体量的
方法 ,并对不同产地独一味药材进行定量测定 ,比较
分析不同产地独一味药材质量。
1 仪器与试药
111 仪器 :Waters 高效液相色谱仪 (600 高效液相
色谱泵、996 二极管阵列检测器 ,600 控制器 , Mil2
lennium32 色谱工作站) (美国 ,Waters) ,AS5150 超
声发生器 (上海医用分析仪器厂) 。
112 试药 :4 种环烯醚萜苷单体对照品 (本实验室
提取并经制备液相色谱纯化 ,质量分数 > 9810 %) ;
甲醇均为色谱纯 ;水为注射用水。独一味药材分别
采于甘肃、西藏、云南 3 个省不同产地的 10 批样品。
2 方法与结果
211 色谱条件 : Symmet ry C18 色谱柱 (150 mm ×
416 mm ,5μm) ,流动相 : 0～11 min 乙腈2水 (11 ∶
89) ,11～35 min 乙腈2水 (11 ∶89～15 ∶85) 。体积 流量 :110 mL/ min ,检测波长 :235 nm ,柱温为室温。212 混合对照品溶液的制备 :精密称取山栀苷甲酯215 mg、螃蟹甲苷 Ⅱ(p hloyoside Ⅱ) 1125 mg、番木鳖苷甲酯 1125 mg、82O2乙酰山栀子苷甲酯 215 mg置同一 25 mL 量瓶中 ,用甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,即得。213 供试品溶液制备 :取独一味粉末 (过 60 目筛)约 013 g ,精密称定 ,置 25 mL 具塞锥形瓶中 ,精密加入甲醇 10 mL ,密塞 ,称定质量。于 60 ℃水浴温浸提取 1 h ,取出 ,放凉 ,再称定质量 ,用甲醇补足减少的质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。214 专属性试验 :分别取对照品溶液、供试品溶液各 20μL ,注入高效液相色谱仪 ,按 211 项色谱条件试验。结果表明 ,供试品溶液的色谱图中均有与 4种环烯醚萜苷成分保留时间相同的吸收峰且与其他成分分离较好 ,不同独一味药材样品在相应位置无干扰峰。表明本方法测定山栀苷甲酯专属性强 ,色谱图见图 1。
12山栀苷甲酯 22螃蟹甲苷Ⅱ 32番木鳖苷甲酯 4282O2乙酰山栀苷甲酯
12shanzhiside met hylester 22phloyoside Ⅱ 32loganin met hylester 4282O2acetyl shanzhiside met hylester
图 1 混合对照品( A) 、独一味地上部分样品( B) 、独一味根样品( C)高效液相色谱图
Fig11 HPLC Chromatograms of mixed reference substances ( A) , samples in aerial parts of L1 rotata ( B) ,
and samples in root parts of L1 rotata
215 标准曲线的制备 :分别精密吸取混合对照品溶
液 011、110、210、410、510、810、1010 mL 置 10 mL
量瓶中 ,各加甲醇至刻度 ,摇匀。分别进样 20μL 。
以峰面积积分值 ( A ) 为纵坐标 ,浓度 ( C) 为横坐标 ,
进行线性回归 ,得到标准曲线方程 :山栀苷甲酯 A =
14 19611 C + 1 00615 , r = 01999 7 ,线性范围 510～
100μg/ mL ;螃蟹甲苷 ⅡA = 744 919 C + 8 19513 ,
r = 01999 9 ,线性范围 110～50μg/ mL ;番木鳖苷甲
酯 A = 16 29610 C + 17 63414 , r = 01999 8 ,线性范
围 110 ～ 50 μg/ mL ; 82O2乙酰山栀苷甲酯 A =
9 53315 C + 12 41214 r = 01999 7 ,线性范围 510～
100μg/ mL 。
216 精密度试验 :准确吸取含山栀苷甲酯 50μg/
mL 、螃蟹甲苷 Ⅱ25μg/ mL 、番木鳖苷甲酯 25μg/
mL 、82O2乙酰山栀苷甲酯 50μg/ mL 的混合对照品
溶液 20μL ,重复进样 5 次 ,测定山栀苷甲酯、螃蟹
甲苷 Ⅱ、番木鳖苷甲酯、82O2乙酰山栀苷甲酯面积 ,
计算 RSD ,结果山栀苷甲酯、螃蟹甲苷 Ⅱ、番木鳖苷
甲酯、82O2乙酰山栀苷甲酯峰面积积分值的 RSD 分
别为 117 %、114、112 %、111 %。
217 重现性试验 :分别取同一批药材粉末 (过 60 目
筛) 6 份 ,每份 011 g ,精密称定 ,制备供试品溶液。
各精密吸取 20μL ,分别进样 ,测定山栀苷甲酯峰面
积 ,计算山栀苷甲酯、螃蟹甲苷 Ⅱ、番木鳖苷甲酯、82
O2乙酰山栀苷甲酯质量分数的 RSD 分别为 118 %、
115 %、110 %、112 %。
218 稳定性试验 :精密吸取同一供试品溶液 20
μL ,分别于 0、2、4、6、8、24 h 进样测定 ,结果表明 ,24
h 内各次测得山栀苷甲酯、螃蟹甲苷 Ⅱ、番木鳖苷甲
酯、82O2乙酰山栀苷甲酯峰面积积分值的 RSD 分别
为 211 %、117 %、115 %、116 %。
219 回收率试验 :采用加样回收率测定法 ,分别称
·484· 中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
取同一批号药材粉末 (过 60 目筛) 0105 g 共 6 份 ,精
密称定 ,各加入混合对照品溶液 (5μg/ mL ) 10 mL ,
按照 21 3 项下方法制备供试品溶液 ,测定 4 种环烯
醚萜苷单体量 ,计算回收率 ,结果山栀苷甲酯为
10311 % , RSD 为 210 % ; 螃蟹甲苷 Ⅱ回收率为
9712 % , RSD 为 113 % ; 番木鳖苷甲酯回收率为
10113 % ,RSD 为 115 % ; 82O2乙酰山栀苷甲酯回收
率为 10218 % ,RSD 为 112 %。
2110 样品测定 :分别取 10 批样品粉末 (过 60 目
筛)各 013 g ,按 212 和 213 方法制备对照品和供试
品溶液 ,按 211 色谱条件进行 4 种环烯醚萜苷单体
测定。结果表明 ,10 批样品中含山栀苷甲酯量为
0112 %～1141 % ,螃蟹甲苷 Ⅱ量为 010 %～0145 % ,
番木鳖苷甲酯量为 0102 %～2127 % ,82O2乙酰山栀
苷甲酯量为 1105 %～2195 % ,结果见表 1。
表 1 独一味药材不同产地和采集部位的 4 种环烯醚萜苷
单体测定结果( n = 2)
Table 1 Determination of four iridodid glycoside
monomers in L1 rotata from different
habitats and collection parts ( n = 2)
样品
编号
产地 部位
采集
时间
山栀苷
甲酯/
(mg·g - 1 )
螃蟹甲
苷Ⅱ/
(mg·g - 1 )
番木鳖苷
甲酯/
(mg·g - 1 )
82O2乙酰山
栀苷甲酯/
(mg·g - 1 )
1
甘肃玛
曲县
地上
部分
2003208
314
415
014
141 4
2
甘肃玛
曲县
地上
部分
2004208
812
411
2217
291 5
3
甘肃玛
曲县
地上
部分
2005208
618
219
315
191 8
4
甘肃玛
曲县
地上
部分
2007208
141 1
010
311
141 9
5
甘肃玛
曲县
地上
部分
2008208
515
318
014
151 6
6
西藏
地上
部分
2007208
410
016
019
211 4
7
西藏
地上
部分
2008208
717
310
113
131 8
8
云南德
钦县
地上
部分
2007208
319
012
012
231 9
9
甘肃玛
曲县
根
2004208
219
313
014
141 4
10
云南德
钦县
根
2007208
112
013
013
101 5
3 讨论
本实验采集的样品共涉及 3 个省、区 (市) 的 9
批不同产地 (包括部分同一产地不同采集时间的样
品) ,样品涵盖了目前主要的独一味原药材主产地 ,
具有一定的代表性。测定结果表明 ,10 批独一味药
材山栀苷甲酯的质量分数为 0112 %～1141 % ,其中
以甘肃玛曲县所采集独一味地上部分 (4 号) 量最高
(1141 %) ,云南德钦县所采集独一味根部 (10 号) 量
最低 (0112 %) 。螃蟹甲苷 Ⅱ量为 010 %～0145 % ,
其中以甘肃玛曲县所采集独一味地上部分 (1 号) 量
最高 (0145 %) ,云南德钦县 (8 号) 所采集独一味量
较低 (0102 %) ,同时同一产地不同年份螃蟹甲苷 Ⅱ
量差异较大 ,2007 年甘肃玛曲县所采集独一味地上
部分 (4 号) 中未测到螃蟹甲苷 Ⅱ,可能同不同年份
独一味的生长环境变化有关。番木鳖苷甲酯量为
0102 %～2127 % ,其中以甘肃玛曲县所采集独一味
地上部分 (2 号) 量最高 (2127 %) ,云南德钦县所采
集独一味根部 (8 号) 量最低 (0102 %) 。82O2乙酰山
栀苷甲酯量为 1105 %～2195 % ,其中以甘肃玛曲县
所采集独一味地上部分 (2 号) 量最高 (310 %) ,云南
德钦县所采集独一味根部 (10 号) 量最低 (111 %) 。
实验结果显示野生独一味根据其产地不同各环烯醚
萜苷单体量差异较大 ,提示独一味相关生产厂家在
原料药购置时有必要对该类进行检测。同时测定同
一产地同一时间不同部位独一味中山栀苷甲酯量结
果提示 ,独一味地上部分 2 种主要环烯醚萜苷山栀
苷甲酯及 82O2乙酰山栀苷甲酯量高于根部。该结
果提示采收时可只采集地上部分而保留根部以有利
于水土保持和独一味资源的再生 ,并相应地保护当
地较为脆弱的资源环境 ,但样本量较少尚需进一步
研究验证 ,以期为独一味药材的资源保护提供依据。
参考文献 :
[ 1 ] 曾 阳1 藏药独一味的研究进展 [J ]1中草药 ,2001 ,32 (12) :
1141211431
[2 ] 张 凤 ,孙连娜 ,陈万生 1 独一味的化学成分及药理作用 [J ]1
药学实践杂志 ,2008 ,26 (3) :16921711
[ 3 ] 黄 英 ,郭 凯 ,杨 婷 ,等1 独一味胶囊对大鼠机械性皮肤损
伤的促愈合作用[J ]1华西药学杂志 ,2008 ,23 (3) :28822911
[ 4 ] 中国药典[ S]1一部1 20051
[ 5 ] Li M , Jia Z , Hu Z , et al1 Experimental study on t he hemo2
static activity of t he Tibetan medicinal herb L amiophlomis ro2
tate [J ]1 Phytother Res , 2008 , 22 : 75927651
[6 ] 桑育黎 ,郝延军 1 藏药独一味化学成分及测定方法研究进展
[J ]1中草药 ,2006 ,37 (10) :附 92附 101
[ 7 ] 李茂星 ,贾正平 ,沈 涛 ,等1 分光光度法测定藏药独一味及其
制剂中总环烯醚萜苷的含量[J ]1中药新药与临床药理 ,2006 ,
17 (1) :452471
[ 8 ] 钱大玮 ,段金廒 ,朱玲英 ,等 1 HPLC 测定独一味中 Phlorigido2
side C 的含量[J ]1中国药科大学学报 ,2004 ,35 (6) :54925511
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