全 文 ：HPLC法测定抗感胶囊中绿原酸、咖啡酸、芍药苷、木犀草苷和芦丁
褚文静 ,张 　雪 ,王 　伟 ,侯海妮 ,黄喜茹
①
(河北医科大学药学院 分析化学教研室 ,河北 石家庄 　050017)
摘 　要 :目的 　建立 HPLC 法同时测定抗感胶囊中绿原酸、咖啡酸、芍药苷、木犀草苷和芦丁的方法。方法 　采用
Diamonsil TM C18色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;柱温 30 ℃;体积流量 :110 mL/ min ;流动相 :甲醇2015 %冰醋酸 ,
梯度洗脱 ;自动进样 :20μL ;检测波长 :270 nm。结果 　在此色谱条件下 5 种成分可完全分离。绿原酸、咖啡酸、芍
药苷、木犀草苷和芦丁的线性范围分别为 01231 0～31465 0μg ( r = 11000 0) 、01037 8～01567 0μg ( r = 01999 9) 、
01292 4～41386 0μg ( r = 01999 7) ,01045 2～01678 0μg ( r = 01999 8) 、01143 8～21157μg ( r = 01999 9) 。平均回收
率绿原酸为 9815 %(RSD 为 111 %) ,咖啡酸为 9814 %(RSD 为 019 %) ,芍药苷为 9713 %(RSD 为 111 %) ,木犀草苷
为 981 6 %(RSD 为 110 %) ,芦丁为 9919 %(RSD 为 0128 %) 。结论 　该方法专属性好、准确度高 ,可用于综合评价
抗感胶囊的质量。
关键词 :抗感胶囊 ;绿原酸 ;咖啡酸 ;芍药苷 ;木犀草苷 ;芦丁 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0066 - 03
　　抗感胶囊由金银花、赤芍、绵马贯众组成 ,具有
清热解毒的功效 ,用于外感风热引起的发热、头痛、
鼻塞、喷嚏、咽痛、全身乏力、酸痛等症。目前 ,该制
剂的质量控制 ,已报道的只有以君药金银花的有效
成分绿原酸作为指标的反相高效液相色谱法[1 ] 。本
实验建立了 H PL C 法同时测定抗感胶囊中金银花
的有效成分绿原酸、咖啡酸、木犀草苷、芦丁和赤芍
的有效成分芍药苷共 5 种成分的量 ,为抗感胶囊的
质量综合评价提供依据。
1 　仪器与试药
Agilent 1200 全自动高效液相色谱仪 (二极管
阵列检测器、四元泵、柱温箱、自动控温进样器) ,
Agilent 化学工作站。
绿原酸 (批号 1107532200212) 、咖啡酸 (批号
8852200102) 、芍药苷 (批号 1107362200320) 、木犀草 苷 (批号 1117202200603) 、芦丁 (批号 008029705) 对照品均由中国药品生物制品检定所提供 ,甲醇为进口色谱纯 ,冰醋酸为分析纯 ,水为重蒸水 ,抗感胶囊由宁夏多维药业有限公司提供。2 　方法与结果211 　色谱条件 :DiamonsilTM C18 色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ;柱温 30 ℃;体积流量 :110 mL/ min ;流动相 :甲醇 (A)2015 %冰醋酸 (B) ,梯度洗脱程序 ,0～ 12 min , 34 % A ; 12～ 22 min , A 线性改变至58 % ;22～30 min ,58 % A ;自动进样 :20μL ;检测波长 :270 nm。理论塔板数按绿原酸计不低于5 000 ,按芍药苷计不低于 7 000 ,5 种组分与相邻色谱峰的分离度均大于 115 ,且各组分的色谱峰对称 ,色谱图见图 1。212 　对照品溶液的制备 :分别精密称取绿原酸、咖
12绿原酸　22咖啡酸　32芍药苷　42木犀草苷　52芦丁
12chlorogenic acid 　22caffeic acid 　32paeoniflorin 　42luteoloside 　52 rutin
图 1 　混合对照品( A) 、抗感胶囊( B)和阴性样品( C)的 HPLC图谱
Fig11 　HPLC Chromatograms of mixed reference substances ( A) , Kanggan Capsula ( B) , and negative sample ( C)
·66· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009205231
　　基金项目 :河北省中医药局资助项目 (05057) ;河北省科技厅科技项目 (062761372)
　　作者简介 :褚文静(1981 —) ,女 ,河北赞皇人 ,在读硕士研究生 ,从事药物分析研究。Tel : (0311) 86265623 　E2mail :wenjingchu @163. com
　　3 通讯作者　黄喜茹　Tel : (0311) 86265623 　E2mail :hxiru @1631com
啡酸、芍药苷、木犀草苷、芦丁对照品适量 ,置 25 mL
棕色量瓶中 ,用 50 %甲醇溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,
即得质量浓度分别为 18418、3718、29214、9014、
28716μg/ mL 的对照品储备液 ,在 4 ℃条件下保
存。分别精密吸取上述对照品储备液 215、210、
210、110、110 mL 置 10 mL 量瓶中 ,用 50 %甲醇稀
释至刻度 ,摇匀 ,即得质量浓度分别为 4612、7156、
58148、9104、28176μg/ mL 的混合对照品溶液。
213 　供试品试液的制备 :取抗感胶囊 5 粒 ,倾出全
部内容物 ,混匀 ,精密称取 01693 2 g (约相当于 115
粒) ,置 50 mL 具塞锥形瓶中 ,精密加入 70 % 甲醇
10 mL ,浸渍 12 h ,称定质量 ,超声处理 30 min ,取
出 ,放冷 ,称定质量 ,用 70 %甲醇补足减失的质量 ,
摇匀 ,减压滤过 ,精密量取续滤液 215 mL 置 10 mL
量瓶中 ,用 70 %甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,用 0145μm
微孔滤膜滤过 ,取续滤液 ,即得。
按抗感胶囊的生产工艺制备缺金银花、赤芍的
阴性制剂 , 并按照供试品溶液的制备方法同法制备
阴性溶液。
214 　线性关系考察 :取混合对照品溶液过 0145μm
滤膜后 ,按上述色谱条件分别进样 5、15、25、35、45、
55、65、75μL ,记录色谱峰面积 ,以峰面积对进样质
量进行线性回归 ,得各组分的回归方程、相关系数及
线性范围 ,见表 1。
215 　检测限的测定 :取混合对照品溶液逐步稀释
后 ,注入高效液相色谱仪 ,以峰高为基线噪音 3 倍
计 ,绿原酸、咖啡酸、芍药苷、木犀草苷和芦丁的最低
检测限分别为 27171、11100、23514、11109、23166
ng/ mL 。
表 1 　组分的线性回归方程和相关系数
Table 1 　Linear regression equation and correlation
coeff icient of components
化合物 回归方程 r 线性范围/μg
绿原酸　A = 970168 C - 81 969 11 000 0 01 231 0～31465 0
咖啡酸　A = 2 56117 C - 21 741 7 01 999 9 01 037 8～01567 0
芍药苷　A = 115198 C - 21 829 8 01 999 7 01 292 4～41386 0
木犀草苷 A = 2 46412 C - 01 082 1 01 999 8 01 045 2～01678 0
芦丁　　A = 1 13919 C + 31 119 01 999 9 01 143 8～21157 0
216 　专属性试验 :取阴性溶液过 0145μm 滤膜后 ,
按上述色谱条件进样 20μL ,结果表明阴性样品对
所测组分无干扰。
217 　精密度试验 :按上述色谱条件 ,取混合对照品
溶液 20μL 注入高效液相色谱仪 ,连续进样 6 次 ,绿
原酸、咖啡酸、芍药苷、木犀草苷和芦丁的峰面积
RSD 分 别 为 0136 %、0155 %、0184 %、0134 %、
0117 %。
218 　重现性试验 :取批号为 080206 的样品 ,制备 6
份供试品溶液 ,各进样 20μL ,测定 ,计算得绿原酸、
咖啡酸、芍药苷、木犀草苷和芦丁的平均质量分数分
别为 18117 mg/ g ( RSD 为 0135 %) 、11246 mg/ g
( RSD 为 111 %) 、45118 mg/ g ( RSD 为 0181 %) 、
01305 8 mg/ g ( RSD 为 110 %) 、21673mg/ g (RSD 为
0194 %) 。
219 　稳定性试验 :取批号为 080206 的供试品溶
液 ,分别于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 进样 20μL ,测
定 ,计算得绿原酸、咖啡酸、芍药苷、木犀草苷和芦丁
峰面积的 RSD 分别为 118 %、115 %、0176 %、
110 %、0152 %。表明供试品溶液 24 h 内稳定。
2110 　回收率试验 :精密称取批号 080206 抗感胶囊
内容物 69133 mg ,置 50 mL 具塞锥形瓶中 ,分别加
入不同体积的绿原酸、咖啡酸、芍药苷、木犀草苷、芦
丁对照品溶液 (绿原酸、咖啡酸、芍药苷测定时的加
入体积为 112、116、210、214、218 mL ;木犀草苷、芦
丁测定时的加入体积为 016、018、110、112、114
mL) ,制备供试品溶液 , 测定并计算各成分的回收
率 ,结果回收率分别为 981 5 %、9814 %、9713 %、
9816 %、9919 % , RSD 分别为 111 %、019 %、111 %、
110 %、0128 %( n = 5) 。
2111 　样品测定 :按供试品溶液制备方法制备 3 个
批号的抗感胶囊供试品溶液 ,在上述色谱条件下 ,每
个样品溶液平行测定 3 次 ,按回归方程计算样品中
5 个活性成分的质量分数 ,结果见表 2。
表 2 　抗感胶囊中 5 种有效成分的测定结果( n = 3)
Table 2 　Determination of f ive active components in Kanggan Capsula ( n = 3)
批　号
绿原酸
质量分数/
(mg ·粒 - 1)
RSD/
%
咖啡酸
质量分数/
(mg ·粒 - 1)
RSD/
%
芍药苷
质量分数/
(mg ·粒 - 1)
RSD/
%
木犀草苷
质量分数/
(mg ·粒 - 1)
RSD/
%
芦丁
质量分数/
(mg ·粒 - 1)
RSD/
%
080206 81 163 01 02 01 562 2 11 07 201 37 01 43 01137 9 0173 11201 01 11
080910 81 201 01 59 01 561 0 01 76 201 48 01 38 01138 5 1124 11118 01 97
080912 81 186 01 76 01 568 9 01 93 201 06 11 16 01132 6 0185 11237 01 68
·76·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
3 　讨论
311 　检测波长的选择 :用二极管阵列检测器分别对
5 种成分进行全波长扫描得知 ,绿原酸、咖啡酸、芍
药苷、木犀草苷和芦丁的最大吸收波长分别为 327、
324、232、350、357 nm ,为兼顾各组分的检测信号强
度和检测灵敏度 ,选择 270 nm 作为检测波长。
312 　流动相的选择 :分别考察了甲醇2水、乙睛2水、
乙睛2014 %磷酸、乙腈2011 %磷酸溶剂系统 ,分离结
果均不理想。采用甲醇2015 %冰醋酸作流动相 ,进 行梯度洗脱可将 5 个组分完全分离 ,且基线稳定 ,峰形好 ,出峰快 ,缩短了分析周期 ,降低了成本。313 　超声溶剂及超声时间的考察 :为了从抗感胶囊内容物中最大限度地提取出各种有效成分 ,实验对超声溶剂和超声时间进行了考察 , 结果表明 ,用70 %甲醇提取的有效成分数目多 ,峰面积较大 ;超声30 min 即能提取完全。参考文献 :[ 1 ] 　栾　雨 ,曹云飞 1 RP2HPLC 法测定抗感胶囊中绿原酸的含量[J ]1 江苏大学学报 :医学版 ,2006 ,16 (1) :642651
苍耳丸的质量标准研究
林 　宏
①
(天津市儿童医院 ,天津 　300074)
摘 　要 :目的 　建立苍耳丸的质量控制方法。方法 　采用薄层色谱法对连翘、苍耳子、白芷进行定性鉴别 ,采用高
效液相色谱法测定金银花中绿原酸。结果 　薄层色谱法对检出连翘、苍耳子、白芷进行鉴别 ; HPL C 法定量绿原
酸 ,绿原酸在 01106 5～21130 0μg 与峰面积的线性良好 ( r = 01999 9) ,平均回收率为 10310 % ,RSD 为 015 %( n =
6) 。结论 　该方法简便、准确、重复性好 ,可有效控制苍耳丸的质量。
关键词 :苍耳丸 ;连翘 ;苍耳子 ;白芷 ;薄层色谱 ;绿原酸 ;高效液相色谱
中图分类号 :R286102 　　　文献标识码 :B 　　　文章编号 :0253 - 2670 (2010) 01 - 0068 - 03
　　苍耳丸由菊花、金银花、连翘、苍耳子、白芷等 7
味中药组成 ,具有清热解毒 , 通鼻窍之功效 ,用于治
疗鼻窦炎 ,疗效甚佳 ,临床应用多年。为了有效控制
制剂质量 ,本实验采用薄层色谱法对方中连翘、苍耳
子、白芷进行了鉴别 ,并采用高效液相色谱法对苍耳
丸中的绿原酸进行了测定 ,方法简便易行 ,可以用于
控制产品质量。
1 　仪器与试药
L C —2010A 高效液相色谱仪 (日本岛津) ;L C
solution 色谱工作站 ;双频恒温数控超声波清洗器
(昆山市超声仪器有限公司) 。
绿原酸对照品 (批号 1107532200413) 、连翘苷
对照品 (批号 1108212200609) 、苍耳子对照药材 (批
号 1211682200604) 、白芷对照药材 (批号 1209452
200707) 均由中国药品生物制品检定所提供 ;乙腈、
磷酸为色谱纯 ,水为纯净水 ,其他试剂为化学纯 ;硅
胶 G薄层板 (青岛海洋化工厂) ;苍耳丸 (本院自制 ,
批号为 20080922、20081103、20090101) 。
2 　薄层色谱鉴别
211 　白芷的 TL C 鉴别[1 ] :取本品 (批号 20080922)
9 g ,加硅藻土 4 g ,研匀 ,加乙醚 40 mL ,超声处理 2
次 ,每次 5 min ,滤过 ,药渣备用 ,滤液挥干 ,残渣加
醋酸乙酯 1 mL 使溶解 ,作为供试品溶液。另取白
芷对照药材 015 g ,加乙醚 10 mL ,同法制成对照药
材溶液。再按处方配比 ,取除白芷外的其他药味 ,按
供试品溶液的制备方法制得阴性对照溶液。照薄层
色谱法[2 ]试验 ,吸取上述 3 种溶液各 2～4μL ,分别
点于同一硅胶 G 薄层板上 ,以石油醚 (30～60 ℃)2
乙醚 (3 ∶2) 为展开剂 ,在 25 ℃以下展开 ,取出 ,晾
干 ,置紫外光灯 (365 nm) 下检视。结果在供试品色
谱中 ,在与对照药材色谱相应的位置上 ,显相同颜色
的荧光斑点 ,阴性对照溶液无此斑点 ,见图 1。
212 　苍耳子的 TL C 鉴别 :取 211 项下的药渣 ,挥干
溶剂 ,加无水乙醇 50 mL ,加热回流 40 min ,滤过 ,滤
液蒸干 ,残渣加甲醇 3 mL 使溶解 ,静置 ,取上清液
作为供试品溶液。另取苍耳子对照药材 1 g ,加无水
乙醇 20 mL ,加热回流 40 min ,滤过 ,滤液蒸干 ,残渣
加甲醇 1 mL 使溶解 ,作为对照药材溶液。再按处
·86· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 1 期 2010 年 1 月
①　　收稿日期 :2009203223
　　作者简介 :林　宏 (1969 —) ,女 ,黑龙江省甘南县人 ,高级工程师 ,医学硕士 ,主要从事医院药学工作。
Tel : (022) 23519506 　E2mail :eoylinvip @1261com