全 文 ：不同生长季节银杏叶中总银杏酸的动态变化研究
鞠建明1 ,沈 　红1 ,钱士辉1 ,柯 　清2 3 ,周 　擎2 3 ,段金廒2
(11 江苏省中医药研究院 ,江苏 南京 　210028 ; 21 南京中医药大学 ,江苏 南京 　210046)
摘　要 :目的 　探索不同栽培模式银杏叶在不同生长季节中总银杏酸量变化规律。方法 　采用 HPLC 测定银杏叶
中总银杏酸的量。色谱条件为 Alltima C18色谱柱 (250 mm ×416 mm ,5μm) ,流动相甲醇21 %冰醋酸水溶液 (90 ∶
10) ,体积流量 110 mL/ min ,检测波长 310 nm ,柱温 35 ℃,进样量 20μL ,外标法计算质量分数。结果 　银杏叶中总
银杏酸范围为 0149 %～3143 %。同一栽培模式下不同采收期银杏叶中总银杏酸量呈逐月下降趋势 ,5 月量最高 ,9
月底 10 月初量最低。剪枝和移栽对银杏酸量均有明显的影响。结论 　这一变化规律为确定银杏叶的栽培模式和
采收期提供了科学依据。
关键词 :银杏叶 ;总银杏酸 ; HPLC ;不同栽培模式 ;不同采收期 ;变化规律
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2010) 02 0305 03
　　银杏叶为银杏科植物银杏 Gi nk go bi loba L1 干
燥叶 ,主要是扩张血管、改善脑循环、抑制血小板活
化因子作用 ,用于冠心病、脑血栓、哮喘和神经系统
疾病的治疗。银杏叶的主要活性成分是黄酮类 (fla2
vonoids)和萜内酯类 (terpenes) 化合物 ,还含有另一
类具有重要生理活性的组分[1 ] ,系 62烷基或 62烯基
水杨酸的衍生物 ,6 位上的侧链碳原子数可从 13 至
19 ,侧链双键数可为 0～3 个 ,因此银杏酸是一同系
混合物 ,其侧链分别为 C13 H27 ( C13 ∶0) , C15 H31
(C15 ∶0) ,C15 H29 ( C15 ∶1) , C17 H33 ( C17 ∶1) , C17
H31 (C17 ∶2) 等。银杏酸是银杏叶、银杏叶提取物
( EGb)及其制剂中的主要毒性物质 ,具有致敏性、细
胞毒性和免疫毒性等作用 ,对人类健康存在潜在危
害 ,因此银杏酸的限量是评价银杏叶制剂质量的关
键指标之一[3 ] 。
《中国药典》2005 年版一部银杏叶质量标准仅
对其活性成分总黄酮醇苷和总内酯进行了测定 ,而
对其毒性成分总银杏酸尚未做限量规定。本研究参
考有关文献[4 ,5 ] , 制定了银杏叶中总银杏酸的
H PL C 测定方法 ,对国家中药材 GA P 基地“银杏叶
GA P 邳州示范基地”种植的不同栽培模式银杏叶在
不同生长季节中总银杏酸进行了测定 ,分析了银杏
酸的动态变化规律 ,为银杏叶的合理采收和质量控
制提供了科学依据。
1 　仪器与材料
Waters 高效液相色谱仪 (Alliance2695 四元泵
及自动进样系统 ,996 二极管阵列检测器 , Empower
色谱工作站) , KQ —250 E 型医用超声波清洗器 (昆
山市超声仪器有限公司) ,Millipore Milli2Q 超纯水
制备仪 (美国) ,Met tler 万分之一及十万分之一电子
天平 (瑞士) 。
白果新酸 (批号 :1116902200501) 由中国药品生
物制品检定所提供 ,供定量测定用 ;总银杏酸 (批号 :
1115942200501)由中国药品生物制品检定所提供供
鉴别用 ;甲醇为色谱纯 ,其他试剂均为分析纯。
银杏叶样品采自银杏叶 GA P 邳州示范基地 ,
该基地引进法国规范化种植技术 ,具有规范的采叶
条件。本研究采集了不同栽培模式的银杏在 5～10
月不同采集时间的银杏叶样品 70 份。银杏叶采集
方法为 :在每一种栽培模式的试验田中随机采样 6
株 ,将 6 株树叶全部采下后混匀 ,置鼓风干燥箱中
50 ℃干燥 ,真空包装 ,避光保存 ,待样品全部采集后
同时测定 ,避免了背景干扰。
2 　方法与结果
211 　色谱条件 :色谱柱 :Alltima C18 (250 mm ×416
mm ,5μm) ;流动相 :甲醇21 %冰醋酸水溶液 (90 ∶
10) ;体积流量 :110 mL/ min ;检测波长 :310 nm ;柱
温 :35 ℃;进样量 : 20μL 。外标法计算质量分数。
在所拟色谱条件下 ,银杏叶中主要的 5 种银杏酸得
到了较好的分离 , HPL C 图见图 1。
212 　对照品溶液制备 :精密称取白果新酸对照品适
量 ,加甲醇制成 01122 0 mg/ mL 的溶液 ,作为对照
·503·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
3 收稿日期 :2009204222　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
基金项目 :国家“十五”科技攻关计划重点项目 (2004BA721A20)
作者简介 :鞠建明 (1972 —) ,男 ,江苏泰兴人 ,硕士 ,副研究员 ,主要从事中药质量标准研究及其制剂工艺研究。
Tel : (025) 85639640 　E2mail :jjm405 @sina1com3 2009 届实习生
t/ min
图 1 　银杏叶总银杏酸( A) 、白果新酸( B)和样品( C)的
HPLC图
Fig11 　HPLC Chromatograms of total ginkgolic acids
in G1 biloba leaves ( A) , ginkgolic acid ( B) ,
and samples ( C)
品溶液。另取总银杏酸对照品适量 ,加甲醇制成
01139 6 mg/ mL 的溶液 ,作为定位用对照品溶液。
213 　供试品溶液制备 :取银杏叶粉末约 110 g ,精密
称定 ,置 100 mL 三角烧瓶中 ,精密加入甲醇 20
mL ,闭塞 ,称质量 ,超声处理 45 min ,取出 ,冷却 ,称
质量 ,以甲醇补足减失的质量 ,摇匀 ,先用滤纸滤过 ,
然后用 0145μm 微孔滤膜滤过 ,作为供试品溶液。
214 　线性范围考察 :精密吸取白果新酸对照品溶液
(01167 4 mg/ mL ) 510、1010、1510、2010、2510、
3010、3510μL ,注入高效液相色谱仪 ,按上述色谱条
件测定。以进样量为横坐标 ( X) ,峰面积积分值为
纵坐标 ( Y) 进行线性回归 ,得回归方程 : Y = 51 21 ×
105 X - 5135 ×104 , r = 01999 9 ,结果表明白果新酸
在 01837～51859μg 呈良好的线性关系。
215 　精密度试验 :精密吸取同一白果新酸对照品溶
液 20μL ,注入液相色谱仪 ,按上述色谱条件重复测
定 6 次 , 测定白果新酸峰面积 , 计算其 RSD 为
018 %。
216 　稳定性试验 :对同一供试品溶液每隔 4 h 进样
1 次 ,依法测定峰面积 ,结果白果新酸和总银杏酸峰
面积积分值的 RSD 均为 015 % ,表明供试品溶液在
16 h 内稳定性较好。
217 　重现性试验 :分别取同一银杏叶药材 1 g ,共 6
份 ,精密称定 ,制备供试品溶液 ,依法测定 ,结果白果
新酸和总银杏酸质量分数分别为 0120 %、1181 % ,
RSD 分别为 112 %、111 %。
218 　回收率试验 :取银杏叶 (银杏叶药材粉末中白
果新酸为 11985 mg/ g) 9 份 ,每份约 015 g ,精密称
定 ,分别按相当于样品中白果新酸量的 80 %、
100 %、120 %的量加入对照品 ,平行处理 3 份 ,制备
供试品溶液 ,测定 ,计算回收率 ,结果平均回收率分
别为 9914 %、9811 %、10213 % , RSD 分别为 118 %、
014 %、018 %。
219 　样品测定 :将银杏叶样品分别按上述制备方法
制备供试液 ,分别精密吸取 20μL 注入液相色谱仪 ,
测定 ,计算供试品溶液中与总银杏酸对照品相应色
谱峰的总峰面积 ,以白果新酸对照品外标法计算总
银杏酸量 ,结果见表 1。
表 1 　银杏叶中总银杏酸测定结果( n = 3)
Table 1 　Determination of total ginkgolic acids in G1 biloba leaves ( n = 3)
银杏叶样品
总银杏酸/ %
5 月 12 日 5 月 31 日 6 月 15 日 7 月 1 日 7 月 15 日 8 月 1 日 8 月 15 日 9 月 2 日 9 月 16 日 10 月 3 日 平均值
四年生 11 78 21 52 2100 1167 11 86 11 14 1124 1106 11 04 01 86 1152
四年生低剪一年 11 87 21 30 1185 2112 11 76 11 52 1152 1111 11 00 11 13 1162
四年生低剪两年 21 97 21 68 2164 2125 11 38 11 23 1152 1135 01 98 01 69 1177
五年生低剪三年 31 43 31 05 2146 2159 21 22 11 70 1161 1107 11 14 01 49 1198
三年生低剪后高剪 21 67 21 35 2126 2103 11 78 11 44 1130 0197 01 84 01 50 1161
三年生 (移栽) 11 81 21 18 2101 1154 11 38 01 95 1112 0185 01 70 01 64 1132
三年生 (未移栽) 21 21 21 52 1192 1189 11 94 11 59 1161 1139 11 17 11 23 1180
平均值 21 39 21 51 2116 2101 11 76 11 37 1142 1111 01 98 01 72
3 　讨论
311 　不同栽培模式的银杏叶在不同季节总银杏酸
的动态变化分析 :由表 1 可见 ,在同栽培模式下 ,不
同采收期的银杏叶中总银杏酸量基本呈逐月下降趋
势 ,5 月份量最高 ,9 月底 10 月初量最低。将不同栽
培模式相同采集时间的银杏叶总银杏酸量进行平均
则更清晰地显示这一变化趋势 (2151 % →0172 %) 。
具体在什么时间采叶 ,还要结合银杏叶中总黄酮和
总内酯的量 ,即以活性成分量高 ,总银杏酸量低的银
杏叶作为优质银杏叶原料。
由同一栽培模式下银杏叶在 5～10 月总银杏酸
平均质量分数可以看出 ,经过剪枝后银杏叶中总银
杏酸量有逐年增加的趋势 (1152 % →1198 %) ,而经
过二次剪枝后量比不剪枝有所增加 ;三年生移栽银
杏叶中总银杏酸量明显低于不移栽。
312 　银杏叶中总银杏酸 H PL C 方法的确定 :采用
·603· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
H PL C 法测定银杏叶提取物中总银杏酸量的文献报
道较多 ,而测定银杏叶中总银杏酸量不多见。本研
究参考《中国药典》2005 年版银杏叶提取物中总银
杏酸的检测方法 ,以供试品溶液中与 5 种银杏酸对
照品相应色谱峰的峰面积之和 ,对白果新酸对照品
峰面积 ,用外标法计算总银杏酸量 ,方法学研究结果
表明 ,本法操作简便、重现性好、精密度高 ,可用于银
杏叶中总银杏酸量限度的检测。
313 　供试品制备方法的确定 :根据银杏酸的理化性
质 ,在供试品制备过程中 ,比较了甲醇回流、甲醇超
声、石油醚回流 3 种提取方法 ,根据所拟色谱条件 ,
测得总银杏酸峰面积 ,表明甲醇提取量明显高于石
油醚提取 ,而甲醇超声和回流没有明显差异 ,为了操
作方便 ,选择甲醇超声作为最适宜的提取方法。另
比较了不同提取时间对总银杏酸量的影响 ,结果以
甲醇超声提取 30、45、60、90、120 min 银杏叶中总银
杏 酸 的 量 分 别 为 01173 %、01180 %、01177 %、
01179 %、01177 % ,表明超声提取 45 min 即可把银
杏酸提取完全 ,故选择超声提取时间为 45 min。
参考文献 :
[ 1 ] 　Jaggy H , Koch E1 Chemist ry and biology of alkylphenols f rom
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[ 5 ] 　鞠建明 ,钱士辉 ,钱大玮 ,等1 银杏半同胞家系种质资源质量的
分析与评价[J ]1林业科技开发 ,2007 ,21 (6) :312331
RP2HPLC法测定菊花中 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷和绿原酸
沈 　智1 ,张文婷2 ,黄琴伟2 ,陈丽珏1 ,赵维良2 3
(浙江中医药大学药学院 ,浙江 杭州 　310053 ; 21 浙江省食品药品检验所 ,浙江 杭州 　310004)
摘 　要 :目的 　建立菊花中 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、绿原酸 3 种成分定量测定的方法 ,并对 4 种菊花 3
种成分的量进行比较。方法 　采用高效液相色谱法在同一色谱条件 (色谱柱为 Shimadzu V P2ODS 250 mm ×416
mm ,5μm ;流动相 :乙腈2011 %磷酸梯度洗脱 ;体积流量 :110 mL/ min ;柱温 :30 ℃) 下对菊花中 3 种成分同时进行
定量测定。结果 　3 , 52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草苷、绿原酸分别在 01039 1～ 01781 0 μg ( r = 11000 0) ,
01013 2～01396 0μg ( r = 11000 0) ,01017 0～01510 0μg ( r = 01999 3) 线性关系良好。3 者的平均回收率分别为
9717 %(RSD = 217 %) ,10117 %(RSD = 115 %) ,9810 %(RSD = 112 %) 。结论 　所建立的方法可在同一色谱条件下
检测出 3 个成分 ,4 种菊花的 3 种成分量有不同程度的差别。
关键词 :菊花 ;3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸 ;木犀草苷 ;绿原酸 ; HPLC
中图分类号 :R28216 　　　文献标识码 :A 　　　文章编号 :0253 2670 (2010) 02 0307 04
　　菊花 Chrysant hem um mori f ol i um Ramat1 为
常用中药 ,具有散风清热 ,平肝明目之功效。用于治
疗风热感冒 ,头痛眩晕 ,目赤肿痛 ,眼目昏花。《中国
药典》2005 年版菊花项下收载了亳菊、滁菊、杭菊和
贡菊 4 个品种 ,并设定了绿原酸定量测定项目[1 ] 。
目前国内对菊花定量测定的报道有 :用 RP2HPL C
对木犀草苷以及芹菜苷和金合欢苷进行测定[2 ,3 ] ;
用 GC 对菊花中的挥发油进行测定[4 ] ;用薄层扫描
法对菊花中的木犀草素进行测定[5 ] 。菊花中黄酮类
成分量较高 ,其中木犀草苷临床和药理作用明显[6 ] ,
另外 ,菊花中的 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸具有抗呼
吸道病毒活性[7 ,8 ] ,因此两者均可作为菊花质量控
制的指标。本实验用 RP2HPL C 对《中国药典》收载
的 4 种菊花中的 3 ,52O2双咖啡酰基奎宁酸、木犀草
苷和绿原酸 3 个指标成分同时进行了测定 ,目前未
见同时测定这 3 种成分的相关报道。该研究为全面
控制菊花的质量提供了依据。
1 　仪器与试药
111 　仪器 : 岛津高效液相色谱仪 L C —20A T
(D GU —20AS 在线脱气机 , SIL —10A T 自动进样
器 ,SPD —M20A 二极管阵列检测器 , CTO —20A T
柱温箱) ,色谱工作站 L C Solution。KQ —300VDB
型双频数控超声波清洗仪 (昆山市超声仪器有限公
司) 。
·703·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs 　第 41 卷第 2 期 2010 年 2 月
3 收稿日期 :2009204220　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
作者简介 :沈　智 (1983 —) ,男 ,浙江桐乡人 ,硕士研究生 ,研究方向为中药有效成分及质量标准研究和药物分析。　
Tel :15868486360 　E2mail :sz831104 @1261com3 通讯作者　赵维良　Tel : (0571) 86452373 　E2mail :zwl @zjyj1org1cn