全 文 ：3　讨论
大孔树脂型号众多 ,质量差异较大 ,无统一药用
标准 ,合成原料及溶剂不易除去 ,应对树脂预处理 ,
预处理试验表明经多次超声预处理后 ,树脂破碎 ,真
空脱吸附法洗脱体积略小 ,洗脱液紫外吸收度下降
较快 ,但洗脱倍数减少优势不显著 ,考虑到树脂应用
过程中的可行性及其成本 ,本实验采用碱-醇预处理
方法 。
　　实验中的上柱液质量浓度 、解吸乙醇体积分数 、
洗脱速度 、洗脱体积等条件参考了相关文献报道[ 8]
以及预试验而确定。实验结果表明 , HP-20虽有极
高的解吸率 ,但是其吸附量较低;D-101A 对芍药苷
有较好的吸附 、洗脱能力 ,是纯化芍药苷的良好吸附
剂 ,经其纯化处理后 ,芍药苷质量分数由15.3%提
高到了 80.11%,并且验证实验表明其工艺参数稳
定 ,有一定的应用价值 。
参考文献:
[ 1] 　尹蓉莉 ,江　靖 ,张淑儒,等.大孔吸附树脂纯化白芍总苷的工
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A 的工艺研究[ J].中草药 , 2010 , 41(5):732-734.
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[ 5] 　徐晓宏 ,张铁军 ,廖茂梁,等.大孔吸附树脂分离纯化黄连总生
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(5):68-70.
高效液相色谱法测定骨刺胶囊中士的宁
王彧丽1 ,戴德雄2 ,朱　莹2＊
(1.丽水市食品药品监督管理局 , 浙江 丽水　323000;2.浙江维康药业有限公司 , 浙江 丽水　323000)
摘　要:目的　建立骨刺胶囊中士的宁的测定方法。方法　采用 HPLC 法测定 , Zo rbax Eclipse XDB-C18色谱柱
(150 mm×4.6 mm , 5 μm);流动相为乙腈-0.01 mol/ L 庚烷磺酸钠与 0.02 mo l/ L 磷酸二氢钾等量混合溶液(用
10%磷酸调节 pH 值 2.8);体积流量 0.8 mL/ min;柱温 35 ℃;检测波长 260 nm;进样量 20 μL 。结果　士的宁在
0.118 8～ 1.782 0μg 线性关系良好。平均回收率 96.34%, RSD 为 0.50%。结论　该方法简便 , 灵敏 ,专属性强 ,
重复性好 ,可作为骨刺胶囊的质量控制方法。
关键词:骨刺胶囊;士的宁;高效液相色谱
中图分类号:R286.02　　　文献标识码:A　　　文章编号:0253-2670(2010)09-1482-02
　　骨刺胶囊为《中华人民共和国卫生部药品标准》
中药成方制剂第 17册收录骨刺片改剂型品种 ,由昆
布 、骨碎补 、党参 、马钱子粉 、桂枝 、威灵仙 、牡蛎
(煅)等 15味中药组成 ,具有散风邪 ,祛寒湿 ,舒筋
活血 ,通络止痛的功效 ,用于颈椎 、胸椎 、腰椎 、跟骨
等骨关节增生性疾病 ,对风湿性 、类风湿性关节炎有
一定的疗效。马钱子粉的主要成分为士的宁 ,为有
毒成分 ,因此需对其进行严格的限量。原标准采用
薄层色谱法对士的宁进行测定 。为了严格控制药品
中士的宁 ,本实验采用 HPLC 法测定骨刺胶囊中士
的宁 ,并对其量进行了严格的限定 。
1　仪器与试药
Agilent1100液相色谱仪 ,Ag ilent 色谱工作站;
BP211D电子天平(感量 0.1 mg;0.01 mg);USC —
202超声波清洗器。
士的宁对照品(批号 110705-200005)由中国药
品生物制品检定所提供。骨刺胶囊(0.36 g/粒)由
浙江维康药业有限公司提供 。乙腈 、甲醇为色谱纯 ,
水为重蒸馏水 ,其余试剂为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件[ 1-2] :Zorbax Eclipse XDB-C18色谱柱
(150 mm ×4.6 mm , 5 μm);流动相为乙腈-0.01
mol/ L庚烷磺酸钠与 0.02 mol/L 磷酸二氢钾等量
混合溶液(用 10%磷酸调节 pH 值 2.8);体积流量
0.8 mL/min;柱温 35 ℃;检测波长 260 nm;进样量
20 μL 。
2.2　溶液的制备
2.2.1　对照品溶液的制备:士的宁对照品易溶于三
·1482· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月
＊ 收稿日期:2009-11-26　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
氯甲烷中 ,故选用三氯甲烷直接溶解制成含士的宁
0.12 mg/mL 的溶液。
2.2.2　供试品溶液的制备:取本品内容物3.6 g ,精
密称定 ,置圆底烧瓶中 ,精密加三氯甲烷 30 mL ,浓
氨水 1 mL ,超声提取 75 min ,放冷 ,滤过 ,以少量三
氯甲烷洗涤药渣 ,合并滤液 ,水浴蒸干三氯甲烷 ,残
渣加三氯甲烷使溶解 ,定量转移至 10 mL 量瓶中 ,
加三氯甲烷至刻度 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.2.3　阴性溶液的制备:按处方制备除马钱子以外
的空白片 ,并按供试品溶液的制备方法制备阴性
溶液 。
2.3　方法专属性考察:按上述色谱条件分别对对照
品溶液 、供试品溶液和阴性溶液进行分析 ,结果无干
扰 ,见图 1。
＊-士的宁
＊-st rych nine
图 1　对照品(A)、骨刺胶囊(B)和阴性对照(C)的 HPLC
图谱
Fig.1　HPLCChromatograms of strychnine reference
substance(A), Guci Capsula(B),
and negative sample(C)
2.4　线性关系考察:精密称取士的宁对照品 15.0
mg ,置 25 mL量瓶中 ,加三氯甲烷溶解并稀释至刻
度。再精密吸取上述溶液 0.2 、0.5 、1.0 、1.5 、3.0
mL 置 5 mL 量瓶中 ,加三氯甲烷稀释并定容至刻
度。分别精密吸取上述溶液 5μL 注入液相色谱仪 ,
记录色谱图 ,得回归方程为Y =2 330.171 463 X -
28.081 839 , r =0.999 95。结果表明士的宁在
0.118 8 ～ 1.782 0μg 线性关系良好。
2.5　精密度试验:精密吸取 0.12 mg/mL 士的宁对
照品溶液 5μL ,注入液相色谱仪 ,进行测定 ,重复进样
6次 ,测定士的宁峰面积 ,计算得其 RSD为 0.57%。
2.6　重现性试验:取批号为 20050702 骨刺胶囊样
品 1.8 g ,共 6份 ,制备供试品溶液 ,进行测定 ,计算
得士的宁质量分数的 RSD为 1.50%。
2.7　稳定性试验:取批号为 20050702骨刺胶囊样
品 ,制备供试品溶液 , 于室温下放置 0 、2 、4 、6 、8 、
16h ,进样 , 测定士的宁峰面积 , 计算得其 RSD 为
0.57%。表明供试品溶液在 16 h内稳定。
2.8　回收率试验:取批号为 20050702骨刺胶囊样
品约 1.00 g ,精密称定 , 共取 6 份 ,分别精密加入
0.44 、0.55 、0.66 mg 士的宁对照品 ,制备供试品溶
液 ,进行测定 , 计算回收率 , 结果平均回收率为
96.34%, RSD为 0.50%(n=6)。
2.9　样品测定:取 8批骨刺胶囊样品(批号分别为
20050701 、 20050702 、 20050901 、 20060702 、
20060903 、20070101 、20070102 、20070201), 制备供
试品溶液 ,按上述色谱条件测定 ,以外标法计算样品
中士的宁的质量分数 , 结果分别为 0.13 、0.20 、
0.13 、0.17 、0.15 、0.17 、0.17 、0.20 mg/粒。考虑到
本品中士的宁随原料有一定波动及装量的影响 ,以
及考虑大生产实际 ,暂定本品每粒含马钱子粉以士
的宁计为 0.13 ～ 0.21 mg 。
3　讨论
取士的宁对照品溶液按色谱条件测定 ,对士的
宁进行紫外波长(200 ～ 400 nm)扫描 ,在 255 nm 波
长处有最大吸收 ,同时参考《中国药典》2005 年一部
马钱子粉项下内容 ,确定测定波长为 260 nm 。
依据《中国药典》2005 年一部马钱子粉项下内
容 ,对乙腈-0.01 mol/L 庚烷磺酸钠与 0.02 mo l/L
磷酸二氢钾等量混合溶液(用 10%磷酸调节 pH 值
2.8)的比例 、流动相体积流量 、柱温等做了相应筛
选 ,最终确定以乙腈-0.01 mol/L 庚烷磺酸钠与
0.02 mol/ L 磷酸二氢钾等量混合溶液(用 10%磷酸
调节 pH 值 2.8)为流动相 。
本实验对超声处理和回流提取进行了比较 ,结
果显示超声提取优于回流提取的提取效果 ,故选择
超声提取。同时还对提取溶液氯仿的体积 20 、30 、
40 mL 进行了考察 ,结果表明提取体积对提取效果
影响差异不大 ,故选择溶剂的体积为 30 mL。
参考文献:
[ 1] 　陈　莹 ,袁　丹 , 孔令锋 ,等.HP LC 法测定仙蟾胶囊中士的
宁 、脂蟾毒配基和华蟾酥毒基[ J].中草药 , 2008 , 39(1):58-60.
[ 2] 　中国药典[ S].一部. 2005.
·1483·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 9 期 2010 年 9 月