全 文 ：雷公藤甲素通过抗 ＥＲ磷酸化抑制小鼠
４Ｔ１乳腺癌增殖作用研究
潘国凤１，高建莉２，张奇３，吕圭源２，陈素红３
（１首都医科大学 附属北京世纪坛医院 中医科，北京 １０００３８；
２浙江中医药大学 药物研究所，浙江 杭州 ３１００５３；３温州医科大学 中药研究所，浙江 温州 ３２５０３５）
［摘要］ 雷公藤甲素（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ＴＰ）具有显著的抑制肿瘤作用。本研究采用ＭＴＴ法和结晶紫染色法检测ＴＰ对小鼠乳腺
癌细胞４Ｔ１增殖的影响；流式细胞仪检测ＴＰ诱导的４Ｔ１细胞凋亡率；Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测４Ｔ１中相关蛋白雌激素受体α（ｅｓｔｒｏｇｅｎ
ｒｅｐｏｒｔｅｒα，ＥＲα），磷酸化ＥＲα（ｐＥＲα），ＥＲβ，ｐＥＲβ，细胞外信号调节的蛋白激酶（ＥＲＫ），ｐＥＲＫ，ｐ３８，ｐｐ３８，ｃＪｕｎ氨基末端激
酶（ＳＡＰＫ／ＪＮＫ），ｐＳＡＰＫ／ＪＮＫ的表达。给药３０ｄ后，活体荧光示踪技术观察ＴＰ对４Ｔ１Ｌｕｃ细胞接种的 ＢＡＬＢ／ｃ雌性小鼠乳
腺癌的荧光强度，同时检测肿瘤体积和质量，计算抑瘤率。肿瘤组织苏木素伊红（ＨＥ）染色后观察病理变化；免疫组织化学法
（ＩＨＣ）分析肿瘤组织ＥＲα及ＥＲβ的表达情况。发现ＴＰ体外浓度为１００，１０，１，０１μｍｏｌ·Ｌ－１时可显著抑制４Ｔ１乳腺癌细胞
的增殖，诱导细胞凋亡。ＴＰ剂量为２００μｇ·ｋｇ－１时能抑制小鼠乳腺癌的增殖，ＴＰ的抗乳腺癌增殖作用与降低ＥＲα，ＥＲβ的磷
酸化密切相关，但与ＭＡＰＫ通路的活化无明显相关性。
［关键词］ 雷公藤甲素；小鼠４Ｔ１乳腺癌细胞；抑制增殖；雌激素受体；活体荧光示踪
［收稿日期］ ２０１３０８３０
［基金项目］ 国家自然科学基金青年项目（８１００１５６４，８１１０２８５２，
８１３０３２３５）；浙江省重点实验室项目（２０１２Ｅ１０００２）；浙江省卫生高层
次创新人才培养工程项目（浙卫发〔２０１０〕１９０号）
［通信作者］ 陈素红，Ｔｅｌ：（０５７１）８６６１３６０１，Ｅｍａｉｌ：ｃｈｅｎｓｕｈｏｎｇ０６
＠ｙａｈｏｏｃｏｍｃｎ；吕圭源，Ｅｍａｉｌ：ｌｖｇｙ＠２６３ｃｏｍ
［作者简介］ 潘国凤，博士，Ｅｍａｉｌ：ｐａｎｇｆ１２１８＠１６３ｃｏｍ
传统中药雷公藤具有多种药理作用［１］，研究表
明雷公藤有很好的抗肿瘤活性［２］，主要抗肿瘤有效
成分是雷公藤甲素（ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ，ＴＰ）。众多研究表明
ＴＰ是一种广谱肿瘤抑制剂，对乳腺癌［３］、Ｔ细胞淋
巴瘤［４５］、肝细胞癌［６７］、肺癌［８］、胰腺癌［９］、前列腺
癌［１０］等多种肿瘤具有抑制作用，其中以直肠癌细胞
株ＨＣＴ１１６和乳腺癌细胞株 ＭＣＦ７最为敏感。许
多研究资料表明，内源性或外源性雌激素水平与乳
腺癌的发生、发展密切相关［１０１２］。细胞膜及胞浆上
的雌激素受体（ｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＥＲ）与雌激素结合
后产生效应，靶器官不同，所产生的作用也不同，取
决于体内各个不同组织中 ＥＲ的含量［１３］。本课题
拟研究雷公藤甲素对小鼠乳腺癌细胞４Ｔ１增殖的影
响，并进一步研究雌激素受体的活化水平与雷公藤
甲素抗乳腺癌细胞增殖的可能作用机制。
１ 材料
１１ 细胞株与动物 小鼠乳腺癌细胞株４Ｔ１及荧
光素酶标记的４Ｔ１Ｌｕｃ细胞由美国芝加哥大学何通
川教授惠赠。细胞用 ＤＭＥＭ完全培养基（含１０％
胎牛血清、青霉素１×１０５Ｕ·Ｌ－１、链霉素１００ｍｇ·
Ｌ－１），在３７℃、饱和湿度及５％ＣＯ２的细胞培养箱内
培养，每１～２ｄ传代１次。整个实验过程中用台盼
蓝染色实验检测细胞活性。雌性ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，体重
１８～２２ｇ，６０只。许可证号ＳＣＸＫ（沪）２００８００１６，ＳＰＦ
级，购于上海西普尔必凯实验动物有限公司。
１２ 试剂 ＴＰ（上海同田生物技术股份有限公司，
纯度≥９８％，批号 １２１２０５２１）；阳性对照药阿霉素
（浙江省肿瘤医院，批号０ＱＬ００７３）；ＤＭＥＭ高糖培
养液，０２５％ Ｔｒｙｐｓｉｎ，００２％ ＥＤＴＡ，０２５％ 胰酶溶
液（吉诺生物医药技术有限公司）；噻唑蓝（ＭＴＴ），
二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）（Ｓｉｇｍａ公司）；０４％ 台盼蓝溶
液，高效 ＲＩＰＡ组织／细胞裂解液（Ｓｏｌａｒｈｉｏ）；ＦＩＴＣ
ＡｎｎｅｘｉｎＶＡｐｏｐｔｏｓｉｓＤｅｔｅｃｔｉｏｎＫｉｔＩ（ＢＤＰｈａｒｍｉｎ
ｇｅｎ）；ＥＲα（Ｃ３１１），ｐＥＲα（Ｓｅｒ１１８），ＥＲβ（Ｈ１５０），
ｐＥＲβ（Ｓｅｒ８７）（ＳａｎｔａＣｒｕｚ公司）；ＭＡＰＫＦａｍｉｌｙＡｎ
ｔｉｂｏｄｙＳａｍｐｌｅｒＫｉｔ，ＰｈｏｓｐｈｏＭＡＰＫＦａｍｉｌｙＡｎｔｉｂｏｄｙ
ＳａｍｐｌｅｒＫｉｔ（ＣｅｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ）；ＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎＨｅｒｓｅｒａｄｉｓｈ
ＰｅｒｏｘｉｄａｓｅＣｏｎｊｕｇａｔｅｄ（Ｔｈｅｒｍｏｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）；Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉ
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ｎｅｓｃｅｎｔｄｅｔｅｃｔｉｏｎｒｅａｇｅｎｔ（ａｄｖａｎｓｔａ）；牛血清白蛋白
（ＢＳＡ）、磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）、ＢＣＡ蛋白浓度测定试
剂盒、Ａｃｔｉｎ抗体（βａｃｔｉｎ）、生物素标记山羊抗兔ＩｇＧ
（Ｈ＋Ｌ）二抗、生物素标记山羊抗小鼠 ＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）
二抗、改进型抗原修复液（碧云天生物技术研究
所）；ＤＡＢＰｕｆｅｒｔａｂｌｅｔｅｎ（默克公司）。苏木精伊红
（ＨＥ）染液（南京建成生物工程研究所）。
１３ 仪器 荧光倒置显微镜（ＯＬＹＭＰＵＳ）；转移电
泳槽（上海天能科技有限公司）；酶联免疫检测仪
（美国ＢｉｏＴｅＲ，美国）；化学发光成像仪（北京赛智
创业科技有限公司）；ＸＥＮＯＧＥＮＩＶＩＳＳｙｓｔｅｍ（冷泉
港，美国）。
２ 方法
２１ 细胞增殖能力检测 ＭＴＴ法：取对数生长期
细胞，１０×１０４个／孔接种于 ９６孔培养板，３７℃，
５％ ＣＯ２培养箱培养２４ｈ。设溶剂对照孔、空白孔、
不同浓度ＴＰ组，每组３个复孔。给药后培养４８ｈ，
每孔加入５ｇ·Ｌ－１ＭＴＴ２０μＬ，继续培养４ｈ后，终
止，每孔加入１５０μＬＤＭＳＯ，摇床低速振荡１０ｍｉｎ。
酶联免疫检测仪５７０ｎｍ波长下测定吸光度，实验重
复３次。存活率 ＝药物组平均吸光度／对照组平均
吸光度×１００％，计算细胞的存活率。
结晶紫染色法：取对数生长期细胞，５０×１０４
个／孔接种于２４孔培养板，培养２４ｈ。设溶剂对照
孔、空白孔、不同浓度 ＴＰ组，每个剂量设３个复孔。
给药后培养 ４８ｈ，弃去培养液，每孔加入 ３００μＬ
０２％结晶紫染液，室温染色３０ｍｉｎ后洗去染料，用
２０％的醋酸溶液溶解结晶，摇床振摇１０ｍｉｎ后，酶
联免疫检测仪５４０ｎｍ波长下测各孔吸光度。按上
述公式计算细胞存活率。
２２ ＦＩＴＣＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ法检测细胞凋亡率 取对
数生长期细胞，制备浓度为１×１０６个／ｍＬ细胞悬液
接种于６０ｍｍ培养皿中，置３７℃，５％ ＣＯ２培养箱
培养２４ｈ后，弃掉培养液，加入不同浓度的 ＴＰ，使
其终浓度为１０，１，０１μｍｏｌ·Ｌ－１，同时设对照组，
继续培养２４ｈ后，０２５％胰蛋白酶消化，收集细胞
置离心管，１０００ｒ·ｍｉｎ－１离心５ｍｉｎ，冷 ＰＢＳ清洗。
１×ＢｉｎｄｉｎｇＢｕｆｅｒ重悬细胞至 １×１０６个／ｍＬ，加入
ＦＩＴＣＡｎｎｅｘｉｎＶ避光孵育１５ｍｉｎ，加１０μＬＰＩ（２５０
ｍｇ·Ｌ－１）溶液染色１５ｍｉｎ后上机检测。
２３ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ法检测相关蛋白表达 取对
数生长期细胞，不同浓度 ＴＰ处理２ｈ后，０２５％胰
蛋白酶消化，收集细胞，冷ＰＢＳ清洗后加裂解液３００
μＬ（含 １％蛋白酶磷酸酶抑制剂混合液），４℃
１２０００ｒ·ｍｉｎ－１离心１５ｍｉｎ，吸取上清２４０μＬ；ＢＣＡ
法测定蛋白浓度，将不同样品调至相同浓度，５×
Ｌｏａｄｉｎｇｂｕｆｅｒ混合９５℃煮沸５ｍｉｎ充分变性蛋白。
１０％ ＳＤＳＰＡＧＥ凝胶分离样品，４００ｍＡ恒流 ２４０
ｍｉｎ转至ＰＶＤＦ膜，以相应的一抗和二抗孵育，将膜
置于凝胶成像系统中，ＥＣＬ化学发光后成像。
２４ 动物模型建立、分组及给药 ＢＡＬＢ／ｃ雌性小
鼠腹部脱毛，用异氟烷吸入式麻醉，仰卧固定，在小
鼠右侧倒数第二对乳腺脂肪垫下接种 ５×１０５个
４Ｔ１Ｌｕｃ细胞，建立小鼠乳腺癌转移模型。接种４８
ｈ后，观察肿瘤生长状况，随机分为 ５组，每组 １０
只，模型组（０９％生理盐水）、Ｄｏｘ阳性药组（１ｍｇ·
ｋｇ－１）、ＴＰ低、中、高剂量组（１００，２００，４００μｇ·
ｋｇ－１），另设未造模正常对照组。ＴＰ组分别灌胃给
予１０，２０，４０ｍｇ·Ｌ－１的ＴＰ溶液，对照组、模型组按
体重进行灌胃给予含１％ ＤＭＳＯ的生理盐水，灌胃
容积均为００１ｍＬ·ｇ－１体重，造模４８ｈ后开始给
药，每天灌１次，连续３０ｄ。阳性药 Ｄｏｘ按成人４０
ｍｇ·ｍ－２·ｄ－１换算后以１ｍｇ·ｋｇ－１剂量腹腔注射
给药，隔日给药１次。实验期间自由采食饮水。
２５ 肿瘤体积、瘤重及肿瘤生长曲线检测 造模第
５天用游标卡尺第１次测量瘤体长径 Ｌ（ｍｍ）和短
径Ｗ（ｍｍ），之后每隔 ２ｄ测 １次，根据公式 Ｖ＝
（Ｌ＋Ｗ）ＬＷ（０２６１８）［１４］，计算瘤体积 Ｖ（ｍｍ３），绘
制各组肿瘤生长曲线。末次给药后２４ｈ，称动物体
重后颈椎脱臼处死，观察腹部两侧血管的粗细，拍
照。剖取移植瘤体组织称重。计算抑瘤率 ＝（１－
治疗组平均瘤重／对照组平均瘤重）×１００％。
２６ 活体荧光成像和肺部转移灶的计数 给药第
３０天，每组选取５只小鼠，每只注射荧光素酶底物
０１ｍＬ，吸入式麻醉后进行活体荧光成像检测。末
次给药后２４ｈ，剖取肺，１０％福尔马林溶液灌注后固
定，４８ｈ后计数肺表面的转移瘤结节数。
２７ 苏木素伊红染色（ＨＥ） 每组选取３个肉瘤
组织用多聚甲醛固定，最大切面取材，切片机切片
（厚度为８μｍ），进行ＨＥ染色。普通光学显微镜观
察各组病理表现和特点，数码相机采集图像。
２８ 免疫组化染色 石蜡切片经二甲苯、梯度乙醇
处理后，ＰＢＳ（ｐＨ７４）冲洗 ３次，每次３ｍｉｎ。切片
置于改进型柠檬酸钠抗原修复液（ｐＨ８０）中，微波
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处理 １５ｍｉｎ，室温冷却，ＰＢＳ冲洗 ３次，每次 ５ｍｉｎ。
随后加入 ５０Ｌ的３％ Ｈ２Ｏ２去离子水室温孵育 １０
ｍｉｎ，以消除内源性过氧化物酶活性。封闭后加入相
应一抗，３７℃孵育 ４ｈ，ＰＢＳ冲洗 ３次，加入生物素
标记的二抗，孵育１５ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗后加Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ
ＨｅｒｓｅｒａｄｉｓｈＰｅｒｏｘｉｄａｓｅＣｏｎｊｕｇａｔｅｄ工作液，孵育 １５
ｍｉｎ，ＰＢＳ冲洗后，加入新鲜配置的 ＤＡＢ显色溶液，
显色 ５～１０ｍｉｎ。自来水冲洗，苏木素复染 １５ｍｉｎ。
分化液分化５ｓ，自来水冲洗，脱水后树胶封片，光学
显微镜观察。
２９ 统计学处理 采用统计分析软件 ＳＰＳＳ１７０
进行统计学处理。连续型变量用 珋ｘ±ｓ表示，分别采
用单因素方差分析（ＯｎｅｗａｙＡＮＯＶＡ）、两两比较的
Ｓｔｕｄｅｎｔ′ｓｔｔｅｓｔ分析实验结果，Ｐ＜００５为有显著性
差异。
３ 结果
３１ ＴＰ对小鼠乳腺癌细胞４Ｔ１增殖的影响 ＭＴＴ
法和结晶紫法分别检测 ＴＰ对４Ｔ１细胞增殖的抑制
作用。ＭＴＴ法结果显示，ＴＰ在０１～１００μｍｏｌ·Ｌ－１
均可显著性抑制 ４Ｔ１细胞增殖（Ｐ＜００５，Ｐ＜
００１），ＩＣ５０为 １００μｍｏｌ·Ｌ
－１，呈明显的浓度依赖
性。结晶紫法染色发现，ＴＰ在 ００１～１００μｍｏｌ·
Ｌ－１，对４Ｔ１细胞有抑制增殖作用（Ｐ＜００１），ＴＰ１
μｍｏｌ·Ｌ－１时，存活率仅为对照组的１１％。
３２ ＴＰ对肿瘤生长和转移的抑制作用 与模型组
比较，ＴＰ各剂量组与 Ｄｏｘ组从给药第４天开始，肿
瘤体积大小有显著性差异（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）。给
药４～２８ｄ，中剂量组一直具有较强的抑制肿瘤生长
的作用（Ｐ＜００５，Ｐ＜００１）。与模型组相比，Ｄｏｘ
阳性对照组（Ｐ＜００１）和 ＴＰ中剂量组（Ｐ＜００５）
瘤重轻于模型组的瘤重。而 ＴＰ低、高剂量组瘤重
无显著降低。Ｄｏｘ阳性对照组、ＴＰ低、中、高剂量组
的抑 瘤 率 分 别 为 ３８３４％，１４４０％，１６１７％，
３２６％。Ｄｏｘ阳性对照组、ＴＰ中、低剂量组的肺部
转移灶数量少于模型组，ＴＰ高剂量组的肺部转移灶
数量率多于模型组，但都无统计学差异，见表１。
表１ ＴＰ对４Ｔ１乳腺癌小鼠肿瘤生长的影响（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
Ｔａｂｌｅ１ ＴｈｅｅｆｅｃｔｏｆＴＰｏｎｍｉｃｅ４Ｔ１ｔｕｍｏｒｇｒｏｗｔｈ（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／μｇ·ｋｇ－１
肿瘤体积／ｍｍ３
给药４ｄ 给药１６ｄ 给药２８ｄ 瘤重／ｇ
抑瘤率
／％
转移灶
／个／只
对照 － － － － － － －
模型 － ５５０１±６０３ ５２９９６±１０６０７ １３２７１５±２１０９３ １０１±０１６ － ６２０±４１５
阳性 １０００ ４２７６±１８２９１） ３５３８４±６８０９２） ８５８９３±１１５６８２） ０６２±００９２） ３８３４ ５２０±３２７
ＴＰ １００ ４２４３±９４６２） ４２６５６±１５５３６ １２５４４１±２４７６５ ０８６±０１８ １４４０ ５００±４８５
２００ ４４４３±１１６４２） ３９３１９±５２２９２） １１２９２８±２０７２８１） ０８４±０１４１） １６１７ ２８０±４１５
４００ ４０５４±１２６８２） ４７０１７±２２７７３ １４０１５０±５０８６７ ０９７±０１６ ３２６ ７８０±７６３
注：与模型组相比１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜００１。
３３ ＴＰ给药３０ｄ对４Ｔ１Ｌｕｃ荷瘤小鼠肿瘤组织荧
光强度的影响 给药 ３０ｄ后，活体荧光成像显示
ＴＰ各剂量组肿瘤部位的发光强度都小于模型组，但
是无统计学差异。造模小鼠可见肺部活体荧光信
号，提示出现肺部转移灶，见图１。
３４ ＴＰ诱导 ４Ｔ１细胞凋亡 ＦＩＴＣＡｎｎｅｘｉｎＶ／ＰＩ
法对不同浓度雷公藤甲素处理２４ｈ的４Ｔ１小鼠乳
腺癌细胞进行染色，流式细胞仪对细胞凋亡率进行
分析，结果显示雷公藤甲素１０，１，０１μｍｏｌ·Ｌ－１３
个浓度都显著诱导４Ｔ１细胞的凋亡，凋亡率分别为
６３８％，４９６％，２３３％（对照组凋亡率为１９９％）。
各造模组可见原位肿瘤接种和肺部转移灶部位的荧光，图中从左至
右依次为模型组、阳性对照组、ＴＰ中剂量组。
图１ ＴＰ给药３０ｄ后小鼠活体荧光成像
Ｆｉｇ１ ＢｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇｏｆＴＰｔｒｅａｔｅｄｔｕｍｏｒｂｅａｒｉｎｇ
ｍｉｃｅａｆｔｅｒ３０ｄｔｒｅａｔｍｅｎｔ
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ＴＰ显著增强凋亡晚期细胞和坏死细胞的比例，凋亡
晚期细胞比例由对照组的７７％分别上升为１２０％
（ＴＰ为０１μｍｏｌ·Ｌ－１），２１５％（ＴＰ１μｍｏｌ·Ｌ－１）
和２６７％（ＴＰ１０μｍｏｌ·Ｌ－１）；坏死率由对照组的
０９％分别上升为 ５２％（ＴＰ０１μｍｏｌ·Ｌ－１），
１７９％（ＴＰ１μｍｏｌ· Ｌ－１）和 ３０７％ （ＴＰ１０
μｍｏｌ·Ｌ－１）。
３５ ＴＰ抑制４Ｔ１荷瘤小鼠在体肿瘤增殖和肺部转
移 病理切片显示，模型组肿瘤细胞较大，细胞核
大，排列密集。ＴＰ（２００μｇ·ｋｇ－１）组肿瘤组织中细
胞明显较疏散，细胞核较小，坏死区域增加。肺组织
切片可见，模型组小鼠肺转移瘤病灶区域（图中黄
色阴影标记部分）较大，转移灶处细胞密集，且明显
大于正常肺组织细胞。ＴＰ各给药组肺组织中均可
见肺转移瘤病灶，其中ＴＰ（２００μｇ·ｋｇ－１）转移瘤病
灶面积最小，ＴＰ（１００μｇ·ｋｇ－１）次之，见图２。
黄色部分显示为肺组织中的转移部位。
图２ 组织ＨＥ染色结果及肿瘤组织中ＥＲα，ＥＲβ的表达情况
Ｆｉｇ２ Ｈｅｍｏｔｏｘｙｌｉｎ＆ＥｏｓｉｎｓｔａｉｎｉｎｇｏｆｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｓａｎｄｔｈｅＥＲαａｎｄＥＲβｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎｔｕｍｏｒｔｉｓｓｕｅｓ
３６ ＴＰ抑制肿瘤组织中 ＥＲα，ＥＲβ的表达，抑制
ＥＲα，ＥＲβ磷酸化 与模型组比较，ＴＰ中剂量组的
ＥＲα，ＥＲβ表达明显减弱，特别是 ＥＲα的表达。西
点法的结果显示，与对照组相比，ＴＰ各给药组ＥＲα，
ＥＲβ，ｐＥＲα，ｐＥＲβ的蛋白表达都随着浓度的增加
而下调，ＴＰ１μｍｏｌ·Ｌ－１处理细胞 ２ｈ后，ＥＲα，
ＥＲβ，ｐＥＲα，ｐＥＲβ的蛋白表达水平分别降低至对
照组的７５．６％，５６２％，６４０％，９２７％。ＴＰ对４Ｔ１
细 胞 ＥＲＫ，ｐＥＲＫ，ｐ３８，ｐｐ３８，ＳＡＰＫ／ＪＮＫ 及
ｐＳＡＰＫ／ＪＮＫ的表达水平无影响，见图３。
４ 讨论
ＢＡＬＢ／ｃ小鼠移植４Ｔ１乳腺癌转移模型类似于
高侵入性人类ＩＶ期转移性乳腺癌，采用荧光报告基
团标记细胞构建此模型，结合活体动物体内荧光成
像技术，可实时活体观测动物体内肿瘤细胞的生长
和转移。本研究采用以上技术，研究雷公藤甲素对
４Ｔ１乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤生长及转移的作用，并进
一步从雌激素受体水平与 ＭＡＰＫ信号传导通路探
索其可能的作用机制。
研究证实ＴＰ对小鼠乳腺癌细胞４Ｔ１有明显的
与对照组相比１）Ｐ＜０．０５，２）Ｐ＜０．０１。
图３ ＴＰ对 ４Ｔ１细胞 ＥＲα，ＥＲβ，ｐＥＲα，ｐＥＲβ，ＥＲＫ，
ｐＥＲＫ，ｐ３８，ｐｐ３８，ＳＡＰＫ／ＪＮＫ，ｐＳＡＰＫ／ＪＮＫ表达的影响
Ｆｉｇ３ ＥＲα，ＥＲβ，ｐＥＲα，ｐＥＲβ，ＫＲＫ，ｐＥＲＫ，ｐ３８，ｐｐ３８，
ＳＡＰＫ／ＪＮＫ，ａｎｄｐＳＡＰＫ／ＪＮＫｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＴＰｔｒｅａｔｅｄ４Ｔ１ｃｅｌｓ
抑制增殖作用，能诱导细胞凋亡。动物实验结果表
明，雷公藤甲素也能抑制４Ｔ１小鼠乳腺癌细胞在体
的增殖。此外，与模型组比较 ＴＰ各给药组小鼠肺
转移瘤病灶区面积减小，其中中剂量组面积最小。
提示ＴＰ剂量为２００μｇ·ｋｇ－１时可能具有潜在的抑
制肿瘤转移的作用。
有报道指出，ＴＰ对 ＥＲα蛋白介导的人乳腺癌
细胞 ＭＣＦ７增殖抑制作用的机制可能与下调 ＥＲα
表达、诱导细胞凋亡相关［１５］。本研究也显示，ＴＰ抑
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制肿瘤组织中ＥＲα，ＥＲβ的表达，抑制 ＥＲα，ＥＲβ磷
酸化，但不影响 ＭＡＰＫ通路蛋白的磷酸化，提示雷
公藤甲素主要起到抑制肿瘤增殖的作用，其机制与
抑制ＥＲα，ＥＲβ的表达和磷酸化有关，但 ＴＰ的抑制
肿瘤增殖作用与ＭＡＰＫ通路的活化无关。
［参考文献］
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Ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅｉｎｈｉｂｉｔｓｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎｂｙｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｎｇｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｏｆ
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２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＭａｔｅｒｉａｌＭｅｄｉｃａ，ＺｈｅｊｉａｎｇＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ３１００５３，Ｃｈｉｎａ；
３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＷｅｎｚｈｏｕＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｅｎｚｈｏｕ３２５０３５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅｅｆｅｃｔｓｏｆｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ（ＴＰ）ｏｎ４Ｔ１ｍｉｃｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｅｉｎｖｉｔｒｏａｎｄ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ｔｒｉｐｔｏｌｉｄｅ；４Ｔ１ｍｉｃｅｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒ；ｔｕｍｏｒｃｅｌｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｅｓｔｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒ；ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅｉｍａｇｉｎｇ
ｄｏｉ：１０．４２６８／ｃｊｃｍｍ２０１３２３２８
［责任编辑 张宁宁］
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第３８卷第２３期
２０１３年１２月
Ｖｏｌ３８，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２０１３