全 文 :先端部分移植于试管斜面上即可得到复壮的菌株。
[参考文献]
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StudiesonrejuvenationofArmilariamelea
WANGShufang,YANGJinling,ZHUPing,ZHUHuixin,HEHuixia
(KeyLaboratoryofBiosynthesisofNaturalProductsofMinistryofHealth,InstituteofMateriaMedica,
ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalColege,Beijing100050,China)
[Abstract] Objective:TostudytherejuvenationofArmilariameleastrain.Method:Observetheinfluencesofseveralingre
dientsanddiferentculturalmethodsontheshoestringformationoftheclonalofspringsinflask,andselectthetippartoftheshoestring
forcultivation.Result:Thestrongshoestringswereeasilyrestoredinthesemisolidmediumwithrichorganicnitrogensource.Con
clusion:ItwastheeasiestwaytorejuvenateA.meleastrainbymultiplyingtheclonalofspringsinapropermedium,togetherwiththe
properselection.
[Keywords] Armilariamelea;shoestring;rejuvenation
[责任编辑 张宁宁]
[收稿日期] 20070618
[基金项目] 国家科技攻关计划项目(2004BA721A20);国家“十一五”科技支撑计划项目(2006BAI06A1211)
[通讯作者] 郭巧生,Tel:(025)84396591,Email:gqs@njau.edu.cn
土壤因子对怀菊质量影响研究
郭巧生1,梁迎暖1,张重义2,王桃银1,汪 涛1
(1.南京农业大学 中药材研究所,江苏 南京 210095;
2.河南农业大学 中药材研究所,河南 郑州 450002)
[摘要] 目的:研究土壤因子对怀菊内在质量的影响。方法:分别测定河南温县、江苏南京和浙江桐乡三地怀
菊样品中绿原酸、总黄酮和微量元素的含量,并分析相应土壤的理化性质,测定矿质元素含量,通过相关分析和通
径分析研究土壤环境对怀菊内在质量的影响。结果与结论:结果表明三地怀菊内在质量差异显著,土壤因子对怀
菊内化学成分含量有很大的影响,其中直接作用较大的依次是脲酶活性、速效钾、CEC和速效磷的含量,而且其微
量元素与土壤矿质元素有很好的相关性,其中怀菊对土壤中镁、砷的富集能力较强。
[关键词] 怀菊;内在质量;土壤
[中图分类号]S567 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)02012306
药用菊花 ChrysanthemummorifoliumRamat.为 菊科植物,其干燥头状花序为常用中药,有散风清
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热,平肝明目的功效[1]。关于药用菊花的研究国内
外已做了大量工作,其活性成分主要有黄酮类、绿原
酸、挥发油类等[2]。目前,关于药用菊花的研究多
集中在栽培[35]、遗传育种[6,7]、类型之间的质量比
较[810]等方面。
药用菊花的品质是遗传因子、生态环境、栽培技
术及其加工条件共同作用的结果,其主要决定因素
是其遗传因子,但同时也受气候土壤及栽培管理因
素的影响,因此同一栽培类型的药用菊花存在着不
同的环境表达。环境因子按其性质可分为气候因
子、土壤因子、地形因子、生物因子和人为因子等,其
中土壤是植株吸收营养和水分的场所,同时各种环
境条件也通过土壤影响其生长发育。因此本实验研
究了不同土壤及其特性对怀菊品质的影响,初步探
讨影响其质量的主导因子,为如何保证和提高药用
菊花内在质量提供依据。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 供试样品来源
供试材料分别采自河南温县、江苏南京上峰镇、
浙江桐乡。经郭巧生教授鉴定为怀大白菊。绿原酸
和总黄酮对照品芦丁均购于中国药品生物制品检定
所(批号分别为110753200413,100080200306)。
1.1.2 土壤样品采集及前处理
用随机多点采样法,在植株根系外围采集0~
20cm的耕层土,充分混合,用四分法缩分,实验室
自然风干,磨细,分别过20,40,60目筛,供测定用。
1.1.3 数据处理及统计方法
采用SPSS统计软件对原始数据进行方差分析、
相关回归分析。应用 DPS统计分析软件进行通径
分析。
1.2 方法
1.2.1 绿原酸的含量测定
参照药典2005年版一部菊花中绿原酸含量测
定项下测定[1]。
1.2.1.1 色谱条件 Waters高效液相色谱仪系统
(515泵、2487紫外可见检测器,Breeze色谱工作
站);色谱柱 NovapakC18(39mm×150mm,4
μm);流动相01mol·L-1磷酸二氢钠缓冲液甲醇
(70∶30);流速1mL·min-1;检测波长328nm。
1.2.1.2 样品测定 取样品粉末1g,精密称定,精
密加500mL甲醇,称重,回流提取2h,放冷,用甲
醇补足减失质量,过滤,弃去初滤液,收集续滤液。
精密吸取续滤液10mL,蒸干,残渣加氯仿5mL,浸
渍3min,弃去氯仿液,挥干氯仿,加适量水使残渣溶
解,并转移至5mL量瓶中,定容至刻度,摇匀,用微
孔滤膜滤过,得到样品绿原酸溶液,分别吸取对照品
与供试液各10μL,注入液相色谱仪,测定。并依据
含水量,计算出干品中绿原酸的含量。
1.2.2 总黄酮的含量测定
参考兰昌云[11]等人的超声波提取槐花总黄酮
的方法。精密称取1g样品于100mL锥形瓶内,加
入30mL75%乙醇,60℃提取20min,减压抽滤后
加75%乙醇定容100mL,作为待测液。分别精密吸
取上述待测液2mL于10mL量瓶中,加5%亚硝酸
钠溶液03mL,使混匀,放置6min,加10%硝酸铝
溶液03mL,摇匀,放置6min,加氢氧化钠试液4
mL,再用30%的乙醇液稀释至刻度,摇匀,放置10
min,另取一量瓶,加30%的乙醇至刻度,作为对照。
于510nm波长处测定吸光度。
1.2.3 土壤理化性质的测定
土壤肥力指标的测定参考《土壤农业化学分析
方法》[12],其中土壤有机碳采用重铬酸钾容量法;碱
解氮采用碱解扩散法;速效磷采用 05mol·L-1
NaHCO3浸提钼锑抗比色法;土壤速效钾采用1mol
·L-1NH4OAc浸提火焰光度法;CEC采用NH4OAc
交换法。土壤酶活性的测定参考文献[13],磷酸酶
采用磷酸苯二钠比色法;脲酶采用苯酚钠比色法;蔗
糖酶采用硝基水杨酸比色法。
1.2.4 土壤和植株中矿质元素含量的测定
参考《农业化学手册》[14]。
2 结果与分析
2.1 不同种植地怀菊内在质量的比较
2.1.1 不同种植地怀菊内化学成分含量的比较
总黄酮对照品的回归方程是 Y=02273X+
00109(R2=09992),表明对照品的浓度与吸光
度值有较好的相关性。从表1中可以看出,三地怀
菊总黄酮的含量总体差异显著,其中以河南温县的
含量最高,江苏南京的最低,分别为 527%和
340%,且两两比较差异均显著。绿原酸对照品的
回归方程是 Y=209677X+63798(R2=09958),
表明对照品进样量与峰面积的相关性比较好。从表
1中可以看出,三地怀菊绿原酸含量总体差异显著,
其中以河南温县的含量最高为425‰,与其他两地
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比较差异显著;江苏南京的含量最低为360‰,且 江苏南京、浙江桐乡两地比较差异不显著。
表1 河南温县、江苏南京和浙江桐乡三地怀菊内在质量比较(n=3)
产地 总黄酮/% 绿原酸/‰ Zn/mg·kg-1 Ni/mg·kg-1 Mg/g·kg-1 Ca/mg·kg-1 Fe/mg·kg-1
河南温县 527±024a 425±026a 3479±068a 844±0070a 179±002a 031±002a 32457±1265a
江苏南京 340±007b 360±002b 4370±017b 380±0071b 168±001b 239±007b 33623±356a
浙江桐乡 430±026c 379±024b 3822±086c 2268±0550c 195±001c 165±006c 29428±3767a
产地 Se/mg·kg-1 Cu/mg·kg-1 Cd/mg·kg-1 Pb/mg·kg-1 Cr/mg·kg-1 As/mg·kg-1 Hg/mg·kg-1
河南温县 015±003a 1607±004a 021±001ab 991±011a 000±000a 278±004a 005±000a
江苏南京 014±002a 1164±060b 020±001a 747±032b 360±049b 499±002b 007±000b
浙江桐乡 018±001a 1506±022a 022±000b 462±010c 000±000a 2183±011c 005±000a
注:置信区间的置信度为P=95%;表中a,b,c为新复极差比较P<005差异显著性,余同
2.1.2 不同种植地怀菊内微量元素含量的比较
从表1中可以看出三地怀菊中均含有人体必需
的微量元素铅,铁,锌,硒,镍,镁等。其中除铁和硒
的含量没有差异之外,其余均有明显的差异,其中
镍,镁,硒,镉,砷的含量以浙江最高,锌,钙,铁,汞,
铬的含量以江苏最高,铜,铅的含量以河南最高,其
中关于重金属铬的含量,河南和浙江两地因含量甚
少均未检出。这说明三地怀菊内微量元素含量有明
显的差异,这些差异除与其本身的吸收特性不同之
外,还与其生长环境的改变有关,这些差异导致上
述结果的出现。下面将会进一步分析土壤环境与怀
菊内微量元素的相关性,初步阐明产生这种变化的
部分原因。药用菊花内微量元素含量的改变会在一
定程度上改变它的药理药效,这是因为微量元素是
中药归经和药性物质基础的重要组成部分,其特点
是数量少,功能作用大,对许多生物分子的活性往
往起到关键调控的作用。这可能也是许多药用植物
引种后其内在质量及药效发生改变的原因之一。
2.1.3 不同种植地怀菊内重金属元素的含量分析
根据《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》
规定,从表1中可以看出河南、南京2个种植地怀菊
中铅的含量超过标准中的规定(≤50mg·kg-1),
同时三地怀菊中砷的含量全部超出标准中的规定
(≤20mg·kg-1),其他重金属的含量均在限量值
之内,但是相应土壤中铅,砷的含量并未超标,这在
一定程度上说明怀菊对于某一元素可能存在较大的
富集特性,从而造成了其在怀菊药材内的大量积累,
同时怀菊内重金属含量的高低还受到周围的大气环
境、水质以及农药肥料的施用等的影响。
2.2 不同种植地土壤理化性质分析
由表2可以看出三地的土壤为中性和偏碱性土
壤,其土壤肥力状况明显不同,其中速效养分碱解
氮、速效磷和速效钾的含量均有明显差异,综合考虑
以河南的速效养分偏高,江苏除速效钾含量较高外,
其他均偏低,而速效磷的含量以浙江土样最高,其速
效钾的含量最低。CEC(直接反映了土壤的保肥、供
肥性能和缓冲力)含量以江苏的最高,浙江的最低,
说明江苏土壤本身的保肥供肥能力并不差,只是因
为栽培时追施肥料过少,使其速效养分偏低。有机
质含量以河南的含量最高,江苏的最低,分别为
1635,971g·kg-1,两两比较差异显著。土壤磷
酸酶、脲酶的活性以河南的最高,蔗糖酶活性以浙江
的最高,从酶活性与土壤有机质的结果可以看出,土
壤酶活性的高低在一定程度上同样反映着肥力的好
坏,这与刘建新[17]的研究结果是一致的。
2.3 不同种植地土壤中矿质元素含量的比较
表2 河南温县、江苏南京和浙江桐乡三地土壤的理化性质分析(n=3)
产地 pH 碱解氮/mg·kg-1 速效磷/mg·kg-1 速效钾/mg·kg-1 CEC/cmol·kg-1
河南温县 806 2870±099a 2148±016a 15954±708a 1203±021a
江苏南京 730 1400±099b 1033±049b 18897±396b 1500±007b
浙江桐乡 782 2100±099c 2172±049a 14153±651a 1021±023c
产地 有机质/g·kg-1 磷酸酶/mg·g-1·d-1 脲酶/mg·g-1·d-1 蔗糖酶/mg·g-1·d-1
河南温县 1635±070a 060±004a 3224±027a 597±017a
江苏南京 971±011b 047±003b 824±093b 421±010b
浙江桐乡 1502±011c 047±001b 1085±064c 889±011c
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从表3可以看出,三地土壤中矿质元素含量均
有一定的差异,其中镁,钙,铁,硒,铅,铜的含
量以河南最高,铬,汞的含量以江苏最高,锌,
镍,镉,砷的含量以浙江最高。这说明三地土壤除
理化性质有明显差异外,其矿质元素含量也有很大
的差异,这在很大程度上同样影响着怀菊的品质。
2.4 土壤污染的现状评价
土壤中污染元素评价参数为铜,铅,镉,砷,铬,
汞等6项,评价标准采用中华人民共和国农业行业
标准(NY/T3912000)中土壤中各项污染物的浓度
限值,对照标准,从表3中可以看出,浙江、江苏两地
土壤中镉的含量超出标准中规定的≤030mg·
kg-1,南京汞的含量超出标准中规定的≤030mg·
kg-1,其他指标均在限定值内。
表3 河南温县、江苏南京和浙江桐乡三地土壤中矿质元素分析(n=3)
产地 Zn/mg·kg-1 Ni/mg·kg-1 Mg/g·kg-1 Ca/mg·kg-1 Fe/g·kg-1 Se/mg·kg-1
河南 6932±060a 2580±015a 322±011a 918968±34967a 2068±090a 052±000a
江苏 6938±190a 2598±068a 256±008b 87355±1252b 1756±035b 042±001b
浙江 17903±265b 2890±028b 042±003c 1525±088c 2019±030a 051±001a
产地 Cu/mg·kg-1 Cd/mg·kg-1 Pb/mg·kg-1 Cr/mg·kg-1 As/mg·kg-1 Hg/mg·kg-1
河南 3573±104a 029±001a 3133±042a 6473±138a 597±011a 010±001a
江苏 2351±075b 052±000b 2868±017b 11266±393b 1052±033b 097±007b
浙江 2189±036b 053±001b 2701±071c 5954±176a 1186±013c 016±000a
2.5 土壤理化性质对怀菊内化学成分的影响
从表4中的相关性分析结果可以看出,总黄
酮、绿原酸与土壤理化性质均有一定的相关性,除
CEC、速效钾与总黄酮、绿原酸呈负相关外,其他
均为正相关。土壤pH与总黄酮、绿原酸均有较好
的相关性,相关系数为 0973,0903。总黄酮与
碱解氮达显著相关,与速效磷的相关性为0845,
从而说明土壤中的速效养分对怀菊品质有很大的影
响。土壤酶活性除蔗糖酶对化学成分相关性较小之
外,其他均有较强的相关性,这是因为土壤酶活性
的高低对土壤中有机质、氮、磷的形态和含量都一
定的影响,从而间接影响化学成分的含量。土壤有
机质与总黄酮、绿原酸的相关系数分别为0938和
0843。同时从表4中也可以看出,土壤中的CEC、
有机质、土壤酶活性与土壤中的速效养分均有一定
的相关性,其中 CEC与速效钾相关性显著,而且
有机质与碱解氮、速效磷、速效钾的相关系数分别
为0936,0978,-0839。这说明土壤中的速效
养分既受土壤本身基本特性的影响,又受栽培措施
的影响。
表4 怀菊内化学成分与土壤理化性质的相关性分析
因素 pH 碱解氮 速效磷 速效钾 CEC 有机质 磷酸酶 脲酶 蔗糖酶 总黄酮 绿原酸
pH 1
碱解氮 0972 1
速效磷 0945 0842 1
速效钾 -0765 -0593 -0933 1
CEC -0765 -0592 -0933 1000 1
有机质 0992 0936 0978 -0839 -0838 1
磷酸酶 0743 0879 0484 -0138 -0137 0655 1
脲酶 0806 0922 0568 -0235 -0235 0727 0995 1
蔗糖酶 0557 0347 0798 -0961 -0961 0655 -0142 -0043 1
总黄酮 0973 1000 0845 -0597 -0597 0938 0877 0920 0352 1
绿原酸 0903 0978 0713 -0414 -0413 0843 0959 0982 0146 0977 1
去除因子之间的相互作用,从表5中可以看出通
径分析与相关分析有很大的差异,其中对总黄酮直接
作用较大的是速效钾含量和脲酶的活性,分别为
-104和116;其次为CEC的含量,为081;有机质
和pH主要是通过影响其他因子间接作用于总黄酮,
间接作用分别为149和100。对绿原酸直接作用较
大的同样是速效钾含量和脲酶活性,分别为-099和
095;其次是速效磷的含量,为064;有机质、pH和磷
酸酶主要是通过影响其他因子而间接作用于绿原酸,
间接作用分别为120,138,116。
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表5 土壤因子对怀菊内化学成分的通径分析结果
成分
pH
直接 间接
碱解氮
直接 间接
速效磷
直接 间接
速效钾
直接 间接
CEC
直接 间接
总黄酮 001 100 029 067 050 049 -104 020 081 -164
绿原酸 -042 138 027 069 064 024 -099 032 034 -101
成分
有机质
直接 间接
磷酸酶
直接 间接
脲酶
直接 间接
蔗糖酶
直接 间接
总黄酮 -048 149 -066 134 116 -040 020 045
绿原酸 -026 120 -038 116 095 -011 -039 084
2.6 怀菊内微量元素与土壤矿质元素相关性分析
怀菊与土壤中微量元素存在一定的相关性,锌,
镍,镁,钙,铁,硒,铜,镉,铅,铬,砷,汞的相关系数分
别为 -0131,0958,-0799,-0903,-0605,
0625,0594,0037,0985,0996,0750,0998。
其中汞的相关性最好,相关性显著。其次相关性较
好的是镍,钙,铅,铬,其中怀菊中镉的含量与土壤的
相关性最差。从中可以看出怀菊内大部分微量元素
均与土壤有较好的相关性,因此可以通过控制土壤
环境来改变怀菊的内在品质。
从表6中的富集系数可以看出,由于生长环境
的改变,怀菊对于各微量元素的富集能力也发生了
一定的改变,这说明种植环境在一定程度上可以改
变药用植物体内的代谢机制,从而改变它对某些微
量元素的选择性吸收和富集能力。从各微量元素富
集系数的均值可以看出,怀菊对镁,砷的富集能力较
强,分别是197,093,其次是铜,镉,锌,镍。同时
也可以看出怀菊对于某种元素的吸收可能存在一个
最佳范围,在这个范围内土壤某一元素含量的提高
可能会提高怀菊对相应元素的富集能力,而高于或
低于这个范围并不一定会促进它的吸收能力。
3 讨论
表6 河南温县、江苏南京和浙江桐乡三地怀菊微量元素的富集系数比较
地点 Zn Ni Mg Ca Fe Se Cu Cd Pb Cr As Hg
河南温县 050 033 055 000 002 028 045 074 032 000 047 047
江苏南京 063 015 066 000 002 034 050 039 026 003 047 007
浙江桐乡 021 078 470 011 015 035 069 042 017 000 184 034
均值 045 042 197 004 006 032 054 052 025 001 093 030
由于成土因素和过程的不同(包括自然因素和
人为因素),使得每种土壤具有自身的理化生物特
性,也就形成了特有的土壤生物作用,而土壤矿质元
素作为植物的“营养库”,它们对植物的生长发育、
产量、初生和次生代谢物质的种类、数量均有很大的
影响,所以研究药用植物的土壤环境时,首先要研究
它们赖以生存的土壤理化性质。以上的分析结果可
以看出对怀菊化学成分直接作用最大的均为脲酶和
速效钾,其次是速效磷和 CEC。土壤酶是土壤的组
成成分之一,数量虽少,但作用很大,能促进土壤有
机物质和矿质化合物的转化,在碳,氮,磷,硫等重要
营养元素的生物学循环中起重要作用,因此可以认
为土壤酶是表征土壤中物质、能量代谢旺盛程度和
土壤质量水平的一个重要生物指标[15]。而速效养
分可以作为直接的营养被植物吸收,从而提高其产
量和质量,因此在无法改变土壤本身的固有特性时,
可以通过追施不同比例的有机肥来提高药用植物的
品质。
药用植物生长不仅需要必需的营养元素,而且还
能有选择性地吸收和富集某些人体所必需的有益的
微量元素,这些元素是临床中防病治病作用的重要物
质基础之一。从研究结果可以看出,怀菊对于不同的
元素其富集特性是不一样的,目前关于微量元素与药
用植物药效之间关系的研究越来越多[16],可见药用
菊花内微量元素具有多方面的生理功能,对人体健康
起着重要的作用[17]。因此可以根据其对微量元素的
富集特性采取相应的栽培管理措施来保证和提高怀
菊的品质。种植“安全、有效”的中药材,除与其符合
国家标准的生产基地有很大关系之外,也与药材本身
的吸收特性有很大的关系,以上结果中怀菊对土壤中
砷有较高的富集系数可能是造成药材中砷含量超标
的原因之一,而且生长环境的改变会在一定程度上改
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变植物的发育以及生理特性,从而改变其对金属离子
的吸收,造成某一元素的超标。
本实验首次研究了可控生态因子———土壤因子
对怀菊品质的影响,由于无先期研究可供参考,此项
研究从定性认识入手,初步筛选了影响怀菊品质土
壤因子,并定量分析了每种因子的作用大小,土壤因
子中对总黄酮直接作用较大的依次是脲酶、速效钾
和CEC,对绿原酸直接作用较大的是脲酶、速效钾
和速效磷,而且怀菊内微量元素与土壤中矿质元素
有很好的相关性,其中怀菊对土壤中镁,砷的富集能
力较强。这为进一步开展药用菊花的生长发育、产
量品质形成影响因子的深入研究提供了参考依据。
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EfectsofsoilfactoronqualityofChrysanthemummorifolium
originatedfromWenxiancounty
GUOQiaosheng1,LIANGYingnuan1,ZHANGZhongyi2,WANGTaoyin1,WANGTao1
(1.InstituteofChineseMedicinalMaterials,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China;
2.InstituteofChineseMedicinalMaterials,HenanAgriculturalUniversity,Zhengzhou450002,China)
[Abstract] Objective:TostudytheefectsofsoilfactorontheChrysanthemummorifoliumoriginatedfromWenxiancounty
(i.e“huaiju”).Method:Thecontentofflavonoid,chlorogenicacidandmicroelementof“huaiju”gatheredatHenanwenxian,Jiang
sunanjingandZhejiangtongxiangwascomparedandphysicalandchemicalpropertiesandmineralelementofsoilwereanalyzedforstud
yingtheefectson“huaiju”qualitythroughpathandcorelationanalysis.ResultandConclusion:Thequalityof“huaiju”gathered
atHenanwenxian,JiangsunanjingandZhejiangtongxiangwasobviouslydiferent.Soilfactorliketheureaseactivity,CECandavailable
K,Phasgreaterefectonthechemicalcomponentcontentof“huaiju”.The“huaiju”,inwhichmicroelementandmineralelementof
soilhavebeterrelativity,absorbsMg,Asofsoilwel.
[Keywords] ChrysanthemummorifoliumoriginatedfromWenxiancounty(i.e.“huaiju”);quality;soilfactor
[责任编辑 张宁宁]
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第33卷第2期
2008年1月
中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
Vol.33,Issue 2
January,2008