全 文 ：不同产地野生和人工养殖蚂蟥内在质量比较研究
刘飞!+! 史红专! 郭巧生!! 王恬+! 陆树松)
d南京农业大学 中药材研究所! 江苏 南京 +$$*%
+d南京农业大学 动物科技学院! 江苏 南京 +$$*%
)d桐乡欣龙特种水蛭养殖中心! 浙江 桐乡 )&+#
摘要#!目的$探讨不同产地蚂蟥的内在质量差异性$为新品种筛选提供理论依据) 方法$参考中国药典(!+$$ 年版
一部测定不同产地水蛭药材的水分%醇溶性浸出物%总灰分%酸不溶性灰分%抗凝血酶活性$采用高效液相色谱法测定其黄嘌
呤$次黄嘌呤含量) 结果$江宁试验基地人工养殖品种在醇溶性浸出物%总灰分%酸不溶性灰分%抗凝血酶活性%黄嘌呤%次黄嘌
呤等含量上均相对高于其他种群$浙江桐乡基地大面积养殖品种多项指标高于野生品种) 结论#经过人工育苗%养殖的蚂蟥
品质优良$建议大面积推广养殖)
关键词#!水蛭+蚂蟥+种群+内在质量
稿件编号#!+$$*$*+($$(
基金项目#!国家科技支撑计划项目!+$$#R4:$#45*+浙江省重
点科研社会发展项目!+$$%<+)$+*
通信作者#!!郭巧生$教授$博导$主要从事中药资源学研究$PMS#
!$+(&)*#*$I50BNS#DbU321BLdMJLd.2
作者简介#!刘飞$博士$从事药用动物遗传多样性及规范化养殖
研究$ I50BNS#VS6SNLv.23#)d./0
!!蚂蟥X>-,+7)-7 ;-(/7 Z?N@0B2$其干燥全体为药
材水蛭$具有破血$逐瘀$通经之功效./ ) 其来源复
杂$在我国河北%安徽%江苏%江西%湖南%湖北等地均
有分布.+/ ) 国外学者在水蛭 O-/*<%)-;;%)-7 方面作
了大量的研究.)5%/ $国内学者对蚂蟥XC;-(/7 的研究
则多注重于药理和生理等方面.(5#/ $对水蛭的内在质
量尚缺乏系统的分析和评价) 随着水蛭的广泛开发
利用$其野生资源逐渐减少且濒临灭绝) 黄嘌呤和次
黄嘌呤通常用作温和的兴奋剂和支气管扩张剂$特别
用于治疗哮喘症状$能对抗组胺及毛果芸香碱引起的
支气管收缩.%/ ) 本研究通过对不同种群药材水蛭中
的水分%醇溶性浸出物%总灰分%酸不溶性灰分%抗凝
血酶活性%黄嘌呤%次黄嘌呤等含量的研究$比较不同
产地水蛭内在质量之间的差异$为蚂蟥人工养殖和优
良品种筛选提供理论依据)
!材料与方法
_!药材
蚂蟥样品于 +$$% 年 & 月分别采自河北衡水%江
苏溧阳%江苏射阳 ) 个野生种群和浙江桐乡欣龙特
种水蛭养殖中心%南京农业大学江宁水蛭试验基地
两个人工养殖品种$经南京农业大学中药研究所郭
巧生教授鉴定为蚂蟥XC;-(/7) 采集的蚂蟥活体样
品$放于通风干燥箱中$$ h干燥 +& ?$至全体干燥
成药材水蛭$放入打粉机中粉碎$过 &$ 目筛$放入试
剂瓶中干燥闭光保存)
_(!试剂和仪器
岛津 G<5+$4高效液相色谱系统 !岛津 G<5
+$4P$%%+N手动进样阀门$;+$$$ 色谱工作站$
%#<>P紫外分光光度计!上海精密科学仪器有限
公司$POG5#O离心机!飞鸽$Q4$& 分析天平
!上海精科天平$QZ$$ 小型高速粉碎机!天津华
鑫仪器厂$c^ +$R超声仪 !昆山市超声仪器公
司$XIGP4)+$ 型 AE计!梅特勒5托利多仪器有限
公司)
黄嘌呤!国药集团化学试剂有限公司$批号 ZG
+$$#+$$ **e$ 次黄嘌呤 !B0CMU./$ 批号 ``
$$R$$% $`**e$磷酸氢二铵)
_&!方法
_&_!水分%醇溶性浸出物%总灰分%酸不溶性灰分
的测定!参照中国药典(!+$$ 年版一部测定药
材水蛭的水分%醇溶性浸出物%总灰分%酸不溶性灰
分测定方法./ )
_&_(!抗凝血酶活性测定!按 +$$ 年版中国药
典(方法测定) 取本品粉末!过 ) 号筛约 D$精密
称定$精密加入 $d*e氯化钠溶液 0G充分搅拌$
*$(+*
第 ) 卷第 $ 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
[/Sd)$ :UULM!$
9B6$ +$$
浸提 )$ 0N2$振摇$离心$精密量取上清液 $$

G$
置试管!$ 00i$$ 00中$加入含 $de!牛纤
维蛋白原!以凝固物计的三羟甲基氨基甲烷盐酸
缓冲液!取 $d+ 0/S*Gf三羟甲基氨基甲烷 + 0G
与 $d 0/S*Gf盐酸溶液约 &$ 0G$加水至 $$ 0G$
调节 AE%d&+$$

G摇匀$置水溶液!)% p$dh
中缓缓滴加每 0G中含 &$ 单位的凝血酶溶液!每
分钟

G$边滴加边轻轻摇匀至凝固$记录消耗凝
血酶溶液的体积$按下式计算 Ij1

E

T1
+
E
+
X) I
为每 D含凝血酶活性单位$_*Df+1

为凝血酶
!!
溶液的质量浓度$_*Gf+1
+
为供试品溶液的质量
浓度$D*0Gf+E

为消耗凝血酶的体积$

G+E
+
为供
试品加入量$

G+Z为取样量$D+中和 个单位的凝
血酶的量$为 个抗凝血酶活性单位)
_&_&!黄嘌呤和次黄嘌呤的测定![F5HX8 色谱
柱!&d# 00i+$ 00$

0+流动相 $d$ 0/S*
G
f
!;E
&

+
EFH
&
$AE(d&+流速 d$ 0G*0N2f+检
测波长 +& 20+色谱柱温 + h+进样量 +$

G
.(/
)
由图 可知$药材水蛭中黄嘌呤和次黄嘌呤得到了
较好的分离)
4d标准品+Rd样品+d黄嘌呤++d次黄嘌呤)
图 !黄嘌呤%次黄嘌呤的EFG<图
!!黄嘌呤%次黄嘌呤供试品%对照品溶液的制备参
照刘丽芳等测定方法.*/ ) 色谱流动相选择 $d$
0/S*G
f
!;E
&

+
EFH
&
$AE(d&$$d&

0微孔滤膜
过滤)
(!结果与分析
(_!药材水蛭水分%醇溶性浸出物%总灰分%酸不溶
性灰分%抗凝血酶活性比较
由表 可知#
&
水分含量#江苏江宁 m浙江桐
乡m河北衡水 m江苏溧阳 m江苏射阳+均低于药典
!+$$ 年一部水分标准 (d$e+

醇溶性浸出物
含量#江苏江宁 m浙江桐乡 m江苏溧阳 m河北衡
水m江苏射阳+均高于 +$$ 年 中国药典(标准
d$e+
(
总灰分含量#浙江桐乡m江苏江宁m江苏
射阳m河北衡水 m江苏溧阳+均低于药典标准
$d$e+
)
酸不溶性灰分含量#江苏江宁 m浙江桐
乡m江苏射阳 m江苏溧阳 m河北衡水+江苏江宁的
高于药典标准 +d$e$其余产地的均低于药典标准
+d$e$但与达标的浙江桐乡差异不显著+
1
抗凝血
酶活性江宁人工养殖m溧阳m桐乡m射阳m河北衡
水$且均高于药典标准!#d$ _)
表 !不同产地药材水蛭中水分%灰分%浸出物%抗凝血酶活性比较结果!
#
Mp?$)j)
种 群 水分=e 醇溶性浸出物物=e 总灰分=e 酸不溶性灰分=e 抗凝血酶活性=_*Df
浙江桐乡 d) p$d* B\ +&d+) p$d+* \ d&+ p$d$# B d* p$d$+ B\ +&d$ p+d+ 河北衡水 d$$ p$d) B\ +d%( p$d+# . &d&% p$d$# . d$$ p$d$ . +$d$ p$d$ 江苏射阳 *d($ p$d# . *d%# p$d)( J d$( p$d$# \ d( p$d$) \ +d) pd( 江苏溧阳 $d#* p$d)$ \ +)d& p$d&# \ )d$$ p$d$ J d+) p$d$( . )%d& pd( B
江苏江宁 d+ p$d) B +*d& p$d)+ B d# p$d$+ \ +d+ p$d$ B )(d# pd( B
!!注#不同小写字母表示邓肯检验 e水平差异显著!表 + 同)
(_(!黄嘌呤%次黄嘌呤含量的测定
(_(_!黄嘌呤%次黄嘌呤线性范围考察!标准曲线
的制备#精密称取黄嘌呤%次黄嘌呤混合对照溶液
$d$$d+$$d&$$d#$$d($d$ 0G于 $ 0G量瓶中$加
水至刻度$摇匀+分别进样 +$

G$按色谱条件测定
其峰面积$以进样量!

D为横坐标$峰面积为纵坐
*(+*
第 ) 卷第 $ 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
[/Sd)$ :UULM!$
9B6$ +$$
标$计算 + 种成分的回归方程!) j)分别为黄嘌呤
3j)& #*4f+ (%d$/j$d**( #+次黄嘌呤 3j
%$ +*)4f$ &#%$/j$d**( *
(_(_(!精密度实验!按上述色谱条件$分别精密吸
取黄嘌呤%次黄嘌呤混合对照品溶液$连续进样
次$每次进样 +$

G$测定各对照品的峰面积$计算
得黄嘌呤$次黄嘌呤的 >8X分别为 )d+e$)d#e)
结果表明$精密度良好)
(_(_&!黄嘌呤%次黄嘌呤含量的测定!由表 + 可
知$研究结果表明$不同产地药材水蛭黄嘌呤和次黄
嘌呤含量差异显著!$n$d$$总蛋白含量差异比
较明显) 黄嘌呤含量从高到低为江苏江宁m江苏射
阳m河北衡水m浙江桐乡 m江苏溧阳+次黄嘌呤含
量从高到低为浙江桐乡m江苏江宁m江苏射阳m河
北衡水m江苏溧阳)
表 +!不同产地药材水蛭中黄嘌呤%次黄嘌呤含量!)j#e
种群 黄嘌呤 次黄嘌呤
浙江桐乡 $d)( . $d%) .
河北衡水 $d))) J d&) B
江苏射阳 $d++ M $d#&& J
江苏溧阳 $d&# \ $d%*$ .
江苏江宁 $d&* B d+( &!讨论
&_!醇溶性浸出物%总灰分%酸不溶性灰分含量
其灰分结果显示 个种群蚂蟥的总灰分含量均
符合药典要求+酸不溶性灰分江苏江宁人工养殖的
比药典标准偏高$浙江桐乡人工养殖品种接近限量
标准$其他都符合药典标准! n+d$e) 江宁人工
养殖的蚂蟥酸不溶性灰分含量略高于药典标准$但
与浙江桐乡的差异不显著$说明人工养殖的品种含
有的硅酸盐类化合物偏多$这可能与人工养殖蚂蟥
生长的环境有关$人工养殖的蚂蟥活动范围及活动
量相对野生环境中的小$饲料投喂量多$因此可能导
致蚂蟥体内无机物含量偏高$根据郭巧生.$/ %史红
专./的研究结果表明$水蛭体内含有丰富的重金属
元素和无机元素$但重金属元素与其内在成分之间
的关系还有待今后进一步研究)
&_(!抗凝血酶活性分析
抗凝血酶活性是中国药典(+$$ 年版新增加
的含量测定指标$可以很直接的反应蚂蟥内在质量$
结果显示 个种群均高于药典标准$蚂蟥道地产区
江苏%浙江明显高于非道地药材主产区河北衡水$且
江宁人工养殖最高$其结果与史红专./等对野生和
人工养殖蚂蟥不同炮制品内在质量的比较研究结果
一致$人工养殖其抗凝血酶活性显著高于野生养殖
品种) 因此可以认为人工集约化养殖有利于提高药
材质量$可进一步推广养殖$而其他几个种群也明显
高于药典标准$说明该地区适合蚂蟥生长$可为下一
步的人工选育提供丰富的物质材料) 根据史红
专./等研究结果表明生晒品高于酒制$高于滑石粉
烫$分析其原因可能为酒精%滑石粉烫引起蚂蟥蛋白
质变性$特别是滑石粉烫高温引起蛋白变性较为严
重$而蚂蟥其抗凝血酶活性的成分主要是一些复合
抗凝蛋白$部分蛋白质的变形必然引起抗凝血酶活
性的降低$因此在生产中建议尽量采用吊干%阴干%
冻干的低温干燥方法$尽可能减小高温引起蛋白变
性而导致品质下降)
参考文献#
. /!中国药典-一部.8/-+$$#%d
. + /!肖培根-新编中药志 d第 & 卷.9/-北京#化学工业出版$
+$$##&$-
. ) /!;NK/2/lO:$ PN@/lBI4$ 8MSMY2MlcO-RN/S/DN.BSB.@NlN@6/V
A?BC0B./S/DN.BSAC/AMC@NMU/V@?MB2@N./BDLSB2@./0ASM7! ?NCL5
JN2$ ASBU0BKBSNKCMN2 N2?N\N@/C$ AC/U@BDSB2JN2 VC/0@?MSMM.?
ENCLJ/0MJN.N2BSNU.W/-RNLSIKUA RN/S9MJ$ ***$+( !+#
#%)d
. & /!;NK/2/lO:$ PN@/lBI4$ 8MSMY2MlcO-4U@B\SMAC/U@B.6.SN2
SNKMUL\U@B2.MAC/JL.MJ \6@?M0MJN.N2BSSMM.? O-/*<%0MJN.N2B5
SNU.W/-FC/U@BDH@?MCGNANJ 9MJNB@$ ***$(!#d
. /!;BDB?B0BP$ _KM2Bc$ HL0NP$ M@BS-G/.BSNYB@N/2 /VSMM.? M75
.N@B@/C6AMA@NJM$ B0M0\MC/V@?MOO;OAMA@NJMU$ N2 @?M.M2@CBS
2MCl/LUU6U@M0/VBSMM.? !X>-,+7)-7 ;-(/7 \6N00L2/?NU@/5
.?M0NU@C6B2J N2 UN@L ?6\CNJNYB@N/2.W/dMU$***$
+*%!#d
. # /!;NK/2/lO:$ IR>/0B2M2K/$ RQ[B2NLU?N2$ M@BS-P?MMVM.@
/VACMABCB@N/2U/VENCLJ/0MJN.N2BSNUSMM.?MU/2 X;40M@?6SB@N/2
N2 @?MCB@SNlMC.W/-;BL.?26MX/KN[6UU8?K/S6RN/S;BLKN$ **$
!&#+d
. % /!cN0X>$ cB2DcZd40N2/B.NJ UMbLM2.M/VANDLB0MCN2$ B2
B2@NU@BUN2 @6AMAC/@MBUMN2?N\N@/CVC/0@?M\S//J UL.KN2DSMM.?
O-/*<%)-;;%)-7.W/-ILC/AMB2 WRN/.?M0$**($ +&!)##*+d
. ( /!史红专$刘飞$郭巧生-宽体金线蛭耗氧率与窒息点的初步研
究.W/$中国中药杂志$+$$$)$!+)#(%d
. * /!史红专$刘飞$郭巧生-温度对蚂蟥生长及摄食规律影响的初
步研究.W/-中国中药杂志$+$$#$)!+)#*&&d
.$/!郭巧生$刘飞 $史红专-水蛭及其养殖基地农药与重金属残留
分析.W/-中国中药杂志$+$$#$)!+#%#)d
./!刘飞$史红专$郭巧生$等-蚂蟥内脏器官和皮肤的组织结构
观察.W/-中国中药杂志$+$$#$)!++#(&*d
*+(+*
第 ) 卷第 $ 期
+$$ 年 月
!!!!!! ! ! ! ! ! !!!! ! ! ! !
[/Sd)$ :UULM!$
9B6$ +$$
.+/!刘丽芳$曾群$金蓉莺$等-中药水蛭各部位提取物对高分子
葡聚糖所致大鼠血瘀模型的影响.W/$中成药$+$$)$+!%#
(*d
.)/!谭毓治$徐彭$张孝友$等-去头水蛭醇提物抗血栓作用的研
究.W/$中国中药杂志$***$+&!$##++d
.&/!史红专$刘飞$郭巧生-温度和体重对蚂蟥人工繁殖影响的研
究.W/-中国中药杂志$+$$#$)!+&#+$)$-
./!史红专$郭巧生$刘飞$等-野生和人工养殖蚂蟥不同炮制品
内在质量的比较研究 .W/-中国中药杂志$+$$%$)+ !+&#
+#%-
.#/!万竹青$郭巧生$刘飞$等-采收期内水蛭活性成分动态变化
的研究.W/$ 中成药$+$$%$+*!+#()#d
.%/!王筠默$王恒芬-神农本草经校证.9/-长春#吉林科学技术
出版社$*((#&$-
/?+J,D,A-?@HAFEC ?@UF,.-AC ?IE-II>D>@AJ?JF.,A-?@?IV-.E
,@EKD>>E-@S >1-,+6)-6 8-(/6
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UAM.NMUUMSM.@N/2-;>AB?E# P?M./2@M2@U/V@?M0/NU@LCM$ BS./?/SM7@CB.@NlM$ @/@BSBU?$B.NJ5N2U/SL\SMBU?$B2J @?MB.@NVNlN@6/VB2@NASB@M5
SM@BDDCMDB@N/2 M2Y60M/V,NSJ B2J @?M\CMMJN2DXC;-(/7 ,MCMJM@MC0N2MJ \6@?M0M@?/JU,MCMJM@MC0N2MJ N2 !+$$ MJN@N/2-P?M./2@M2@U7B2@?N2MB2J ?6A/7B2@?N2M\6EFG<-7>HF.A# :@U?/,MJ @?B@@?M./2@M2@U/V@?MBS./?/SM7@CB.@NlM$ @/@BS
BU?$ B.NJ5N2U/SL\SMBU?$ B2@NASB@MSM@BDDCMDB@N/2 M2Y60M$ B2J 7B2@?N2MB2J ?6A/7B2@?N2M./2@M2@/V@?M\CMMJN2DA/ALSB@N/2 N2 ;B21N2D
BCMSB@N/2U-9B26bLBSN@6N2JM7MU/V@?M\CMMJN2DN2 ]?M1NB2DP/2D7NB2D\BUM,MCM\MVMC@?B2 @?M,NSJ-/?@T.FH-?@# P?M\CMMJN2DXC
;-(/7 BCMD//J N2 bLBSN@6$ :@ULDDMU@MJ SBCDM5U.BSMAC/0/@N/2 /VBbLB.LS@LCMd
.a>C V?DEH/!X>-,+7)-7 ;-(/7+ SMM.?+ ?NCLJ/+ A/ALSB@N/2U+ bLBSN@6+ \CMMJN2D
E?-# bQ(Y`NT\T++(&
责任编辑!王亚君#
*)(+*
第 ) 卷第 $ 期
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