全 文 ：ＥＧＣＧ抑制 ＫＭ３细胞生长和促凋亡作用机制研究
王清，李娟，谷景立，刘俊茹，曾丽金，罗绍凯
（中山大学 附属第一医院 血液科，广东 广州 ５１００８０）
［摘要］ 目的：寻找新的治疗药物及方法，提高单药或联合用药对复发难治性多发性骨髓瘤（ｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ，ＭＭ）的
治疗效果。方法：应用台盼蓝拒染法检测 ＥＧＣＧ对 ＫＭ３细胞生长抑制的影响。应用流式细胞术检测细胞凋亡。应用 ＳＹＢＲ
ｇｒｅｅｎｒｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ方法检测Ｐ６５基因的表达情况。应用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ技术检测Ｐ６５蛋白、磷酸化Ｐ６５蛋白（ｐＰ６５）、ＰＡＲＰ、
及ｃａｓｐａｓｅ３，８，９蛋白的表达变化。结果：ＥＧＣＧ抑制 ＫＭ３细胞生长、促进其凋亡。ＥＧＣＧ可以抑制 Ｐ６５基因及其蛋白的表
达，并通过激活ｃａｓｐａｓｅ诱导细胞凋亡。当与Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ联合时有协同作用。结论：ＥＧＣＧ单独作用于ＫＭ３细胞可以抑制其生
长并诱导细胞凋亡，与Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ联合时有协同效应。
［关键词］ ＥＧＣＧ；Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ；细胞凋亡；多发性骨髓瘤
［收稿日期］ ２００９０６１５
［基金项目］ 广东省自然科学基金项目（８１５１００８９０１００００６４）
［通信作者］ 李娟，Ｔｅｌ：（０２０）８７７５５７６６８８３１，Ｅｍａｉｌ：ｌｕｌｉｙｕａｎ＠
ｔｏｍｃｏｍ
尽管目前已有新药及支持治疗，但由于原发或者
获得性的耐药，多发性骨髓瘤（ｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ，
ＭＭ）仍然是一种无法治愈的浆细胞的恶性血液系统
肿瘤，因此需要寻找一种新的治疗ＭＭ的方法来增加
疗效。近几年来，ＥＧＣＧ［（）ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌ
ｌａｔｅ，又称表没食子儿茶素没食子酸酯］作为一种癌症
化疗保护剂和治疗药物受到广泛的关注，可能是由于
它对细胞生长过程及动物模型体内试验的效果显
著［１２］。ＥＧＣＧ调节肿瘤细胞的机制还不是十分清
楚。一些研究表明，ＥＧＣＧ可以抑制 ＮＦκＢ激活，诱
导癌细胞凋亡［３５］。还有些研究表明与抑制 ＭＭＰ９
的活性［６］、下调ＣＯＸ２和ＢＣＬ２，激活Ｃａｓｐａｓｅ３，９引
起凋亡等有关［７］。然而关于ＥＧＣＧ与ＭＭ关系的资
料还很少，本研究中，作者检测了ＥＧＣＧ对骨髓瘤细
胞株ＫＭ３的凋亡并对其机制进行了研究，并与Ｂｏｒｔｅ
ｚｏｍｉｂ联合观察其是否有协同作用。
１ 材料
１１ 细胞株 ＭＭ细胞系 ＫＭ３由上海第二军医大
学长征医院血液科侯健教授惠赠。
１２ 试剂 ＲＰＭＩ１６４０培养基、胎牛血清购自美国
Ｇｉｂｃｏｌ公司。ＥＧＣＧ［（）Ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌａｔｅ≥
９５％］，购自美国 Ｓｉｇｍａ公司。Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ（ＰＳ３４１，
Ｖｅｌｃａｄｅ）购自美国千禧制药公司。Ｔｒｉｚｏｌ试剂购自美
国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司。ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣａｎｄａｐｒｏｐｉｄｉｕｍ
ｉｏｄｉｄｅ（ＰＩ）ｋｉｔ购自美国ＳａｎＤｉｅｇｏ公司。逆转录试
剂盒、ＳＹＢＲＲｅａｌＴｉｍｅ试剂盒购自中国大连 Ｔａｋａｒａ
生物有限公司。ＮＦκＢｐ６５，ＰｈｏｓｐｈｏＮＦｋａｐｐａＢ
ｐ６５，ＰＡＲＰ 抗 体，Ｃａｓｐａｓｅ８，Ｃｌｅａｖｅｄ Ｃａｓｐａｓｅ９，
Ｃａｓｐａｓｅ３，ＧＡＰＤＨ抗体购自美国ＣｅｌＳｉｇｎａｌｉｎｇ公司。
１３ 仪器 流式细胞仪为美国ＢＤ公司，荧光定量
ＰＣＲ仪为美国ＡＢＭ７５００。
２ 方法
２１ 细胞培养及药物干预 细胞培养于含 １０％
ＦＣＳ、１００Ｕ·ｍＬ－１青霉素、１００μｇ·ｍＬ－１链霉素的
ＲＰＭＩ１６４０细胞培养液的培养瓶中，置 ３７℃、５％
ＣＯ２、饱和湿度培养箱中培养。隔天换一次液。选
用对数生长期细胞进行试验。细胞和药物在３７℃、
５％ＣＯ２条件下孵育４８ｈ后收获并洗涤，进行相关检
测。ＥＧＣＧ用ＤＭＳＯ配成１０００μｍｏｌ·Ｌ－１溶液，分
装保存于－２０℃，使用前用无血清培养基稀释为所
需浓度。ＥＧＣＧ根据预实验及参照文献［８］选用
２５，５０，１００μｍｏｌ·Ｌ－１３个浓度，０μｍｏｌ·Ｌ－１为对照
组。Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ用生理盐水稀释成１００ｎｍｏｌ·Ｌ－１，
使用前用生理盐水稀释。选用 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ的 １／２
ＩＣ５０值２０ｎｍｏｌ·Ｌ
－１与ＥＧＣＧ联合检测其协同效应。
２２ 台盼蓝拒染法测定药物对细胞生长抑制 制
备单细胞悬液，并作适当稀释（约１×１０６个／ｍＬ）。
取９滴细胞悬液移入小试管中，加１滴０４％台盼
蓝溶液，混匀。在３ｍｉｎ内，用计数板分别计数活细
胞和死细胞，镜下观察，死细胞被染成淡蓝色，而活
３２
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细胞拒染。根据下式求细胞活力：活细胞率（％）＝
活细胞总数／（活细胞总数＋死细胞总数）×１００％。
２３ 流式细胞仪检测细胞凋亡（ＡｎｎｅｘｉｎⅤ ＦＩＴＣ／
ＰＩ法） 以每孔约１×１０６个细胞接种于６孔板，分
别加入实验浓度药物，同时设空白对照组，４８ｈ后
收获细胞。ＰＢＳ洗涤 ２次。将细胞重悬于 ５００μＬ
的ＢｉｎｄｉｎｇＢｕｆｅｒ，取１００μＬ细胞置于流式细胞仪专
用试管中。加 ２μＬＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ混匀后，加入
５μＬＰｒｏｐｉｄｉｕｍＩｏｄｉｄｅ，混匀；避光室温反应 ５ｍｉｎ。
用流式细胞仪检测（Ｅｘ＝４８８ｎｍ，Ｅｍ＝５３０ｎｍ）细
胞凋亡的情况。
２４ ＲＮＡ提取及 ＲＴＰＣＲ ＲＮＡ提取按照 Ｔａｋａｌａ
公司试剂盒说明书的步骤进行操作。用紫外分光光
度计测定 ＲＮＡ纯度，同时进行 ＲＮＡ定量。在０５
μＬＥｐｐｅｎｄｏｒｆ管中加入 ＯｌｉｇｏｄＴｐｒｉｍｅｒ１０μＬ、
ｄＮＴＰｍｉｘｔｕｒｅ１０μＬ、ＴｏｔａｌＲＮＡ１０μｇＲｎａｓｅｆｒｅｅ
ｄｄＨ２Ｏ加至１００μＬ。轻轻混匀６５℃，５ｍｉｎ然后
置于冰上。上述反应液１０μＬ加入５×ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ
Ｂｕｆｅｒ４０μＬ、ＲｎａｓｅＩｎｈｉｂｉｔｏｒ０５μＬ、ＰｒｉｍｅＳｃｒｉｐｔ
ＲＴａｓｅ１０μＬ、ＲｎａｓｅｆｒｅｅｄＨ２Ｏ４５μＬ，最后总体积
为２０μＬ。３０℃１０ｍｉｎ，４２℃６０ｍｉｎ，７０℃１５ｍｉｎ
后终止反应。
２５ 实时定量 ＰＣＲ（Ｒｅａｌｔｉｍｅｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅ
ａｃｔｉｏｎ） Ｐ６５基因引物 ｓｅｎｓｅ：５’ＣＡＡＣＡＡＣＣＣＣＴ
ＴＣＣＡＡＧＴＴＣＣ３’；ａｎｔｉ：５’ＴＴＣＡＣＴＣＧＧＣＡＧＡＴＣＴ
ＴＧＡＧＣ３’由上海英骏公司合成。产物长度 １８８
ｂｐ，退火温度 ６０℃。首先建立标准曲线。ＰＣＲ反
应体系：ＳＹＢＲＰｒｅｍｉｘＥｘＴａｑ１００μＬ，Ｒｏｘ０４μＬ、
上游特异性引物０４μＬ、下游特异性引物０４μＬ、
ｃＤＮＡ模版２０μＬ、ＲＮａｓｅＦｒｅｅｄＨ２Ｏ６８μＬ，最终
反应体系２０μＬ。离心混匀。按以下条件进行 ｒｅａｌ
ｔｉｍｅＰＣＲ反应：９５℃１２０ｓ，９５℃３０ｓ，６０℃３０ｓ，７２
℃ ３０ｓ。ＰＣＲ反应 ４０个循环。１８ＳｒＲＮＡ作为内
参。所有样本重复３次。应用７５００ＳｅｑｕｅｎｃｅＤｅｔｅｃ
ｔｉｏｎｓｏｆｔｗａｒｅ分析。用 ２△△ＣＴ法做相对定量。
２６ Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ 取加了适当的细胞裂解液及
蛋白酶抑制剂的细胞，用１ｍＬ移液器吹打数十遍，
促进细胞溶解，室温孵育５ｍｉｎ，４℃１５０００×ｇ离心
５ｍｉｎ，收集上清液，取少量进行 Ｂｒａｄｆｏｒｄ法蛋白浓
度测定。取２５μｇ蛋白经 ＳＤＳＰＡＧＥ电泳分离。电
转移至 ＰＶＤＦ膜。ＰＶＤＦ膜经封闭液室温封阻１ｈ，
加入一抗（按抗体说明书做稀释），置于４℃摇床
过夜。用辣根过氧化物酶标记的抗鼠或抗兔二抗
（稀释度１∶２０００）检测蛋白表达。ＧＡＰＤＨ作为内
参。用成像系统进行光密度扫描，对扫描结果进行
统计学处理。
２７ 统计学分析 本部分实验数据计量资料用均数
±标准差（珋ｘ±ｓ）描述，组间计量资料采用两独立样本
Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓｔ检验。多组间计量资料在ＬＳＤ统计意义
分析后应用单因素方差分析（ｏｎｅｗａｙａｎａｌｙｓｉｓｏｆｖａｒｉ
ａｎｃｅ，ＡＮＯＶＡ）。所有数据用统计学软件 ＳＰＳＳ１３０
进行分析，Ｐ＜００５为差异具有统计学意义。
３ 结果
３１ ＥＧＣＧ介导 ＫＭ３细胞生长抑制和凋亡 用
２５，５０，１００μｍｏｌ·Ｌ－１３个浓度的 ＥＧＣＧ处理 ＫＭ３
细胞 ４８ｈ后，ＫＭ３细胞生长均受抑制，并随着
ＥＧＣＧ浓度的增加抑制作用增强。活细胞比例由对
照组（０μｍｏｌ·Ｌ－１）的（１００±３４１）％，逐渐降为
（７７２７±３３３）％，（５４５４±２７８）％，（４５００±
１７６）％，比较差别有统计学意义（Ｐ＜００１）。各剂
量组之间比较差别均有统计学意义（Ｐ＜００１）。
用流式细胞仪来检测２５，５０，１００μｍｏｌ·Ｌ－１３
个ＥＧＣＧ剂量细胞凋亡情况，发现凋亡细胞百分比
随着药物剂量增加而增加。分别为 （１２１±
１２）％，（２９５±１８）％，（３３４±２１）％。各实验
组与对照组（８５％ ±０２％）比较差别有统计学意
义（Ｐ＜００１）。实验组各组之间比较亦有统计学意
义（Ｐ＜００５）。
３２ ＥＧＣＧ通过抑制 Ｐ６５基因和蛋白表达，促进
ＫＭ３细胞凋亡 Ｗｅｓｔｅｒｎ结果表明：Ｐ６５蛋白的表达
随着药物浓度的增加逐渐下降为对照组的 ０９，
０６，０５倍（Ｐ＜００５）。ｐＰ６５蛋白的表达则下降
为对照组的０８，０５，０４倍（Ｐ＜００１）（图１）。
图１ ＥＧＣＧ在ＫＭ３细胞中对Ｐ６５和ｐＰ６５蛋白
表达的量效影响
４２
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用ＲｅａｌｔｉｍｅＰＣＲ方法检测 Ｐ６５基因的改变。
结果表明，Ｐ６５基因与对照组相比较降低了
（００９８８７±００００８１１），（０２２３５±０００１９４１），
（０４８３３±０００３２７１）倍（Ｐ＜００１），且各组之间两
两比较亦有统计学差异（Ｐ＜００１）。
３３ ＥＧＣＧ通过激活ｃａｓｐａｓｅ３，８，９及ＰＡＲＰ促进
ＫＭ３细胞凋亡 应用特异性的抗体可以识别ｐｒｏ和
ａｃｔｉｖｅｃａｓｐａｓｅ３ａｎｄ８，对于 ｃａｓｐａｓｅ９，直接用 ａｃ
ｔｉｖｅｄ，相对分子质量为３５Ｋｄａ。ＥＧＣＧ可以直接导致
ａｃｔｉｖｅｃａｓｐａｓｅ３逐渐增加（Ｐ＜００５），而ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ３
逐渐减少（Ｐ＜００５）。同样的，ａｃｔｉｖｅｃａｓｐａｓｅ８，９也
以量效形式增加 （图２）（Ｐ值均＜００５）。
图２ ＥＧＣＧ在ＫＭ３细胞中对ｃａｓｐａｓｅ３，８，９
蛋白表达的影响
另外全长的 ＰＡＲＰ（１１５ＫＤａ）经过 ＥＧＣＧ处理
后可以分裂出８５Ｋｄａ的片段且在 ＥＧＣＧ处理后以
量效方式增加（Ｐ＜００５）（图３）。
图３ ＥＧＣＧ在ＫＭ３细胞中对ＰＡＲＰ蛋白表达的影响
３４ Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ和 ＥＧＣＧ联合对 ＫＭ３细胞生长及
其凋亡的影响 在细胞增长抑制方面，０，２５，５０
μｍｏｌ·Ｌ－１组与联合 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ（２０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）组
各自单独比较，活细胞比例由（１００±３４１）％，
（７７２７±３３３）％，（５４５４±２７８）％下降至（６３６３
±３８１）％，（４５４５±２５６）％，（３１８±２０３）％，差
别均有明显统计学意义（Ｐ值均 ＜００１），在联合
Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ（２０ｎｍｏｌ·Ｌ－１）组间比较亦有统计学意
义（Ｐ＜００５）。
ＥＧＣＧ０，２５，５０μｍｏｌ·Ｌ－１３个不同浓度作用
于ＫＭ３细胞４８ｈ，细胞的凋亡率为（８５±０２）％，
（１２１±１２）％，（２９５±１８）％，联合Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ４８ｈ
后细胞的凋亡率上升到（９０±０１）％，（２５±２３）％，
（４５５±３１）％，差别均有显著统计学意义（Ｐ＜００５；
后两者 Ｐ＜００１）。联合 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ的各组间比较，
亦有统计学意义（Ｐ＜００５）。
在Ｐ６５基因下降倍数方面，加Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ与单药
ＥＧＣＧ各组比较，３组的下降倍数分别为（００２６６５±
０００１３０１）∶０；（０３４９０６±００００２５２）∶（００９８８７±
０００３２７１）；（０６８８９±００００８８９）∶（０２２３５±０００１
９４１）（Ｐ值均＜００１））。加Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ组之间亦有显
著统计学意义（Ｐ＜００１）。
在Ｐ６５及 ｐＰ６５蛋白表达上，加有Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ组
其表达明显降低，且随着药物剂量增加，作用增强
（Ｐ均 ＜００５））。ｃａｓａｐａｓｅ３，８，９以及 ｃｌｅａｖｅｄ
ＰＡＲＰ的表达则随着药物剂量的增加而增加（Ｐ均
＜００５），且两组间均有统计学意义（Ｐ＜００５）
（图４，５）。
图４ ＥＧＣＧ联合Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ对细胞ＮＦｋＢ／Ｐ６５和ｐＰ６５
蛋白表达的影响
４ 讨论
在最近几年来，ＥＧＣＧ由于它的肿瘤化疗保护
特性受到了广泛关注。它的肿瘤抑制特性也有很多
文献报道，主要集中在抑制肿瘤细胞生长和促进其
凋亡［５，９１０］。细胞凋亡是一种复杂的细胞死亡过
程，受多种因子调控且涉及细胞内多个因子的作用。
是一套完整而有序的过程。研究表明ＥＧＣＧ可通过
多种途径诱导肿瘤细胞凋亡。如作用于单核细胞性
白血病 Ｕ９３７细胞的 ＥＧＣＧ可直接与细胞膜上的死
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图５ ＥＧＣＧ联合Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ对细胞ｃａｓｐａｓｅ３，８，９
蛋白表达的影响
亡受体 Ｆａｓ结合，激活 ｃａｓｐａｓｅ８导致凋亡［１１］。
ＥＧＣＧ在人结肠腺癌细胞 ＨＴ２９中则主要通过线粒
体途径激活 ｃａｓｐａｓｅ９、ｃａｓｐａｓｅ３导致细胞凋亡［１２］。
Ｓｈａｍｍａｓ等［１３］发现 ＥＧＣＧ可以在量效及时效依赖
方式引起ＭＭ细胞（ＩＮＡ６和ＡＲＰ细胞株）生长阻滞
及后续的凋亡，指出６７ＫｄａＤ的层黏连蛋白受体 １
（ＬＲ１）在调节ＥＧＣＧ的活性中起重要作用。本研究
结果表明 ＥＧＣＧ抑制 ＫＭ３细胞生长，诱导细胞凋
亡，且随着药物浓度的增加，作用逐渐增强。进一步
对其机制研究发现，ＥＧＣＧ可以抑制 Ｐ６５基因的表
达，导致Ｐ６５及磷酸化 Ｐ６５蛋白的降解，从而抑制
ＮＦκＢ的转录活性。同时 ＥＧＣＧ可以激活 ｃａｓｐａｓｅ
８，９，３和 ＰＡＲＰ导致后续的一系列细胞凋亡。与
ＳａｎｊａｙＧｕｐｔａ［１４］在 ＥＧＣＧ对人类表皮癌 Ａ４３１细胞
研究结果相似。本研究首次在多发性骨髓瘤 ＫＭ３
细胞里发现ＥＧＣＧ可以抑制Ｐ６５基因及其蛋白表达
并激活ｃａｓｐａｓｅ８，９，３诱导瘤细胞凋亡。蛋白酶抑
制剂Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ的出现在多发性骨髓瘤的治疗上是
一个重要的里程碑，它的出现使得 ＭＭ的 ＣＲ及 ＰＲ
率明显提高，然而在一项Ⅱ期临床试验研究中发现，
仅３５％复发难治的 ＭＭ病人对 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ有反
应［１５］。作者对 ＥＧＣＧ联合 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ对 ＫＭ３细胞
的作用进行了研究。在细胞增长，诱导凋亡方面，发
现联合用药组的作用明显强于单用ＥＧＣＧ组。联合
用药组在抑制Ｐ６５基因及其 Ｐ６５，Ｐｐ６５蛋白方面的
作用亦明显强于 ＥＧＣＧ单药组。同时也做了对
ｃａｓｐａｓｅ３，８，９及ＰＡＲＰ的影响，结果也发现联合
用药组对其激活的作用强于 ＥＧＣＧ单药组，显示
ＥＧＣＧ与 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ有协同效应。研究结果表明
ＥＧＣＧ单药或联合 Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ可作为治疗 ＭＭ的一
种新方法，为临床应用提供了新思路。
［参考文献］
［１］ ＳｅｎＴ，ＭｏｕＬｉｋＳ，ＤｕｔａＡ，ｅｔａｌＭｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｅｆｅｃｔｏｆｅｐｉ
ｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅ（ＥＧＣＧ）ｉｎｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆｇｅｌａｔｉｎａｓｅ
Ａ（ＭＭＰ２）ｉｎｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｅＭＣＦ７［Ｊ］Ｌｉｆｅ
Ｓｃｉ，２００９，８４（７８）：１９４
［２］ ＮａｇａｒａｊａｎＳ，ＮａｇａｒａｊａｎＲ，ＢｒａｕｎｈｕｔＳＪ，ｅｔａｌＢｉｏｃａｔａｌｙｔｉｃａｌｙ
ｏｌｉｇｏｍｅｒｉｚｅｄｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎｗｉｔｈｐｏｔｅｎｔａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｖｅ
ａｃｔｉｖｉｔｙｆｏｒｈｕｍａｎｂｒｅａｓｔｃａｎｃｅｒｃｅｌｓ［Ｊ］Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，２００８，１３
（１１）：２７０４
［３］ ＡｈｍａｄＮ，ＧｕｐｔａＳ，ＭｕｋｈｔａｒＨＧｒｅｅｎｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｅｐｉｇａｌｏ
ｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｙｍｏｄｕｌａｔｅｓｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢ
ｉｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｓｖｅｒｓｕｓｎｏｒｍａｌｃｅｌｓ［Ｊ］ＡｒｃｈＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓ，
２０００，３７６（２）：３３８
［４］ ＳｕｒｈＹＪ，ＣｈｕｎＫＳ，ＣｈａＨ，ｅｔａｌＭｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓｕｎ
ｄｅｒｌｙｉｎｇｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅａｃｔｉｖｉｔｉｅｓｏｆａｎｔｉ－ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙｐｈｙｔｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌｓ：ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｉｏｎｏｆＣＯＸ２ａｎｄｉＮＯＳｔｈｒｏｕｇｈｓｕｐｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｏｆＮＦｋａｐｐａＢａｃｔｉｖａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＭｕｔａｔＲｅｓ，２００１，４８０，２４３
［５］ ＧｕｐｔａＳ，ＨａｓｔａｋＫ，ＡｆａｑＦ，ｅｔａｌＥｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅｏｆｃａｓｐａｓｅｓｉｎ
ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒ
ｋａｐｐａＢａｎｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，２００４，２３
（１４）：２５０７
［６］ 张岚翠，沈生荣，孙世利，等锌离子存在下 ＥＧＣＧ对前列
腺癌细胞生长的影响［Ｊ］分子细胞生物学报，２００８，４１
（６）：４４３
［７］ ＣｈｕｕＣＰ，ＣｈｅｎＲＹ，ＫｏｋｏｎｔｉｓＪＭ，ｅｔａｌＳｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆａｎ
ｄｒｏｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓｉｇｎａｌｉｎｇａｎｄｐｒｏｓｔａｔｅｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｇｅｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
ｂｙ（）ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅｉｎｄｉｆｅｒｅｎｔｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎｓｔａｇｅｓｏｆ
ＬＮＣａＰｐｒｏｓｔａｔｅｃａｎｃｅｒｃｅｌｓ［Ｊ］ＣａｎｃｅｒＬｅｔ，２００９，２７５（１）：
８６
［８］ ＭａｓｏｏｄＡＳｈａｍｍａｓ，ＰａｏｌａＮｅｒｉ，ＨｅｍａｎｔａＫｏｌｅｙ，ｅｔａｌＳｐｅｃｉｆｉｃ
ｋｉｌｉｎｇｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａｃｅｌｓｂｙ（）ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌ
ｌａｔｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｇｒｅｅｎｔｅａ：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｍ
ｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０８（８）：２８０４
［９］ ＮｏｄａＣ，ＨｅＪ，ＴａｋａｎｏＴ，ｅｔａｌＩｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｂｙｅｐｉｇａｌ
ｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅｉｎｈｕｍａｎｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄＢｃｅｌｓ［Ｊ］Ｂｉｏ
ｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００７，３６２（４）：９５１
［１０］ ＹａｎｇＧＹ，ＬｉａｏＪ，ＫｉｍＫ，ｅｔａｌＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆｇｒｏｗｔｈａｎｄｉｎｄｕｃ
ｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｈｕｍａｎｃａｎｃｅｒｃｅｌｌｉｎｅｓｂｙｔｅａｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ
［Ｊ］Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，１９９８，１９（４）：６１１
［１１］ ＨａｙａｋａｗａＳ，ＳａｅｋｉＫ，ＳａｚｕｋａＭ，ｅｔａｌ．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓｉｎｄｕｃｔｉｏｎｂｙ
ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎｇａｌａｔｅｉｎｖｏｌｖｅｓｉｔｓｂｉｎｄｉｎｇｔｏＦａｓ［Ｊ］Ｂｉｏｃｈｅｍ
ＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ，２００１，２８５（５）：ｌ１０２．
［１２］ ＣｈｅｎＣ，ＳｈｅｎＧ，ＨｅｂｂａｒＶ，ｅｔａｌＥｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅｉｎ
ｄｕｃｅｄｓｔｒｅｓｓｓｉｇｎａｌｓｉｎＨＴ２９ｈｕｍａｎｃｏｌｏｎａｄｅｎｏｃａｒｃｉｎｏｍａｃｅｌｓ
［Ｊ］Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ，２００３，２４（８）：ｌ３６９．
［１３］ ＳｈａｍｍａｓＭＡ，ＮｅｒｉＰ，ＫｏｌｅｙＨ，ｅｔａｌＳｐｅｃｉｆｉｃｋｉｌｉｎｇｏｆｍｕｌｔｉ
６２
第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９
ｐｌｅｍｙｅｌｏｍａｃｅｌｓｂｙ（
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ｆｒｏｍｇｒｅｅｎｔｅａ：ｂｉｏｌｏｇｉｃａｃｔｉｖｉｔｙａｎｄｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ［Ｊ］
Ｂｌｏｏｄ，２００６，１０８（８）：２８０４
［１４］ ＳａｎｊａｙＧｕｐｔａ，ＫｅｄａｒＨａｓｔａｋ，ＦａｒｕｋｈＡｆａｑ，ｅｔａｌＥｓｓｅｎｔｉａｌｒｏｌｅ
ｏｆｃａｓｐａｓｅｓｉｎｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅｍｅｄｉａｔｅｄｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎｏｆ
ｎｕｃｌｅａｒｆａｃｔｏｒｋａｐｐａＢａｎｄｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，
２００４，２３（１４）：２５０７
［１５］ ＲｉｃｈａｒｄｓｏｎＰＧ，ＢａｒｌｏｇｉｅＢ，ＢｅｒｅｎｓｏｎＪ，ｅｔａｌＡｐｈａｓｅ２ｓｔｕｄｙ
ｏｆｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂｉｎｒｅｌａｐｓｅｄ，ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙｍｙｅｌｏｍａ［Ｊ］ＮＥｎｇｌＪ
Ｍｅｄ，２００３，３４８（２６）：２６０９
ＭｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＥＧＣＧｉｎｈｉｂｉｔｓＫＭ３ｃｅｌｓｇｒｏｗｔｈａｎｄｉｎｄｕｃｔｓｃｅｌｓａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ＷＡＮＧＱｉｎｇ，ＬＩＪｕａｎ，ＧＵＪｉｎｇｌｉ，ＬＩＵＪｕｎｒｕ，ＺＥＮＧＬｉｊｉｎ，ＬＵＯＳｈａｏｋａｉ，
（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｅｍａｔｏｌｏｇｙ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｕｎＹａｔｓｅｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１００８０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｉｎｏｒｄｅｒｔｏｆｉｎｄｎｅｗｔｒｅａｔｍｅｎｔｔｏｅｎｈａｎｃｅｔｈｅｅｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆｓｉｎｇｌｅａｇｅｎｔｏｒｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｄｒｕｇｓｏｎｒｅｌａｐｓｅｄ
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［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ （－）ｅｐｉｇａｌｏｃａｔｅｃｈｉｎ３ｇａｌａｔｅ；Ｂｏｒｔｅｚｏｍｉｂ；ｃｅｌａｐｏｐｔｏｓｉｓ；ｍｕｌｔｉｐｌｅｍｙｅｌｏｍａ
［责任编辑 张宁宁］
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第３４卷第２３期
２００９年１２月
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ ２３
Ｄｅｃｅｍｂｅｒ，２００９