全 文 ：ＨＰＬＣ测定黄山药中伪原薯蓣皂苷的含量
荆文光，张启伟，刘安
（中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００）
［摘要］　目的：建立ＨＰＬＣ测定中药黄山药中伪原薯蓣皂苷含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法，ＭｅｒｃｋＰｕｒｏ
ｓｐｈｅｒＳＴＡＲＲＰ１８ｅ色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙腈水梯度洗脱，流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２０３ｎｍ，柱温
４０℃。结果：伪原薯蓣皂苷在此色谱条件下获得良好分离，含量测定的线性范围００８～４００μｇ（Ｒ２＝０９９９９），平均加样回
收率为９９９％，ＲＳＤ２３％。结论：首次建立了高效液相色谱法测定黄山药药材中伪原薯蓣皂苷含量的方法，该方法准确、可
靠，可用于黄山药药材及其制剂质量控制的方法。
［关键词］　黄山药；伪原薯蓣皂苷；ＨＰＬＣ
［收稿日期］　２００９０４２６
［基金项目］　《中国药典》２０１０版一部标准研究（ＹＸ２３１～２３２）项目
［通信作者］　刘安，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９３８，Ｅｍａｉｌ：Ｌａ６２＠１６３．
ｃｏｍ
　　黄山药 ＤｉｏｓｃｏｒｅａｐａｎｔｈａｉｃａＰｒａｉｎｅｔＢｕｒｋ．又名
姜黄草、老虎姜，是多年野生草质缠绕藤本植物，为
中国特有的薯蓣科薯蓣属植物，其根状茎具有活血
化瘀，行气止痛的功效［１］。以其根茎提取物（主要
为甾体总皂苷）为主要原料的地奥心血康胶囊临床
用于治疗冠心病、心绞痛等心肌缺血疾病［２］。目前
文献多报道黄山药、穿龙薯蓣和地奥心血康胶囊中
薯蓣皂苷的含量测定［３］，有关伪原薯蓣皂苷的含量
测定方法尚未见报道。伪原薯蓣皂苷（ｐｓｅｕｄｏｐｒｏ
ｄｉｏｓｃｉｎ）是地奥心血康中含量较高的甾体皂苷成分，
也是其活性成分之一［４５］，因而是反映药材和制剂质
量的一个重要指标。本研究首次建立高效液相色谱
法测定黄山药中伪原薯蓣皂苷的含量方法。
１　仪器与试药
岛津ＬＣ１０Ａｖｐ液相色谱仪（二元高压梯度泵、
自动进样器、柱温箱、紫外检测器），安捷伦１１００液
相色谱仪（四元低压输液泵、自动进样器、柱温箱、
二极管阵列检测器和ＡｌｔｅｃｈＥＬＳＤ２０００蒸发光散射
检测器），配备相应的仪器工作站；国产实验室纯水
机；ＡＮＤＧＲ２０２１／１０万电子天平。Ｍｅｒｃｋ色谱纯乙
腈；甲醇、乙醇、正丁醇等为分析纯；水为超纯水。
伪原薯蓣皂苷对照品是从地奥心血康原料中分
离得到，经波谱分析确定结构。经 ＨＰＬＣ以峰面积
归一化计，对照品纯度为９８０％。黄山药药材由邓
思杨从四川、贵州等地采集，共１０批药材，编号为
１～１０（表１），均经中国中医科学院中药研究所付桂
芳主管技师鉴定为薯蓣科植物黄山药 Ｄ．ｐａｎｔｈａｉｃａ
的根茎。
表１　１０批黄山药药材的样品
Ｎｏ． 产地 生态环境 采收日期 收集日期
１ 四川西昌市安哈镇 人工种植 ２００８０２２４ ２００８０２２４
２ 四川甘孜州九龙县 野生　　 ２００６１２０８ ２００８０３０１
３ 云南昭通市大观县 野生　　 ２００７１２０５ ２００８０３０１
４ 贵州贵阳　　　　 野生　　 ２００７１２２０ ２００８０３０１
５ 湖南邵东县　　　 野生　　 ２００６０５０１ ２００８０３１１
６ 四川西昌宁南县　 野生　　 ２００８０２０１ ２００８０３１１
７ 四川甘孜州泸定县 野生　　 ２００８０３１２ ２００８０３１８
８ 云南丽江　　　　 栽培　　 ２００８０３２５ ２００８０３２７
９ 四川西昌　　　　 野生　　 ２００８０３２８ ２００８０３２８
１０ 四川凉州雷波县　 野生　　 ２００８０２０１ ２００８０４０８
２　方法与结果
２．１　色谱条件
ＭｅｒｃｋＰｕｒｏｓｐｈｅｒＳＴＡＲＲＰ１８ｅ色谱柱（４６ｍｍ
×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相Ａ为乙腈，Ｂ为水，梯度洗
脱条件：０～２５ｍｉｎ，Ａ３０～４０％，Ｂ７０～６０％；２５～
２５，５ｍｉｎＡ４０～３０％，Ｂ６０～７０％；２５５～４０ｍｉｎＡ
３０％ Ｂ７０％。流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２０３ｎｍ，
进样量１０μＬ，柱温４０℃。对照品 ＨＰＬＣ图谱见图
１。理论板数按伪原薯蓣皂苷峰计算应不低于
８０００。
２．２　对照品溶液的制备
精密称取伪原薯蓣皂苷对照品约１０ｍｇ，精密
称定，置于１０ｍＬ的量瓶中，加７５％乙醇溶液至刻
度，摇匀，制成质量浓度０１０２ｇ·Ｌ－１的溶液。
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Ａ．对照品；Ｂ．样品；１．伪原薯蓣皂苷。
图１　对照品和样品ＨＰＬＣ图
２．３　供试品溶液的制备
取黄山药粉末（过四号筛）约２ｇ，精密称定，置
１００ｍＬ锥形瓶中，精密加７５％乙醇５０ｍＬ，称定质
量，密塞，放置过夜；超声处理（功率２５０Ｗ，频率４０
ＫＨｚ）３０ｍｉｎ；冷却至室温后，再次称定质量，并用
７５％乙醇补足失重，摇匀，滤过，弃去初滤液，精密量
取续滤液２５ｍＬ，置蒸发皿中蒸干，向残渣中加甲醇
溶解并转移至５ｍＬ容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，
超声１ｍｉｎ促溶，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
２．４　方法学考察
２．４．１　线性关系考察　用７５％乙醇制备伪原薯蓣
皂苷的一系列标准溶液（０６～２０００ｍｇ·Ｌ－１），质
量浓度分别为８６２４，１７２４８，４３１２，８６２４，２１５６，
３２３４，４３１２ｍｇ·Ｌ－１，分别进样。色谱条件下测
定，以峰面积（Ｙ）对照品质量浓度（Ｘ）进行线性回
归，回归方程为Ｙ＝５８６２Ｘ＋６２５２，ｒ２＝０９９９９，显
示伪原薯蓣皂苷在８～４００ｍｇ·Ｌ－１（进样量１０μＬ）
呈现良好的线性关系，纵轴截距约相当于标准曲线
中最低浓度（８ｍｇ·Ｌ－１）样品主峰峰面积的１０％，
或相当于含量测定浓度（１００ｍｇ·Ｌ－１）样品主峰峰
面积的１％，相关系数 Ｒ２＞０９９９９，证明在该浓度
范围内线性关系良好。以对照品样品测定，最低检
测限约为０６ｍｇ·Ｌ－１（进样量１０μＬ）。
２．４．２　精密度与稳定性试验　精密称定黄山药粉
末（过四号筛）２ｇ，按２３项下制成供试品溶液，重
复进样 ６次，测定峰面积，相对标准偏差小于
０２５％。
对照品溶液在冰箱（４℃）中储存 １４ｄ后，测
量，含量稳定；供试品溶液在室温下（避光）储存４８
ｈ内稳定，某些样品在室温下放置４８ｈ以上，或在冰
箱中放置３ｄ后，下层有絮状混浊，但用０４５μｍ膜
过滤后进样，含量无明显改变。
２．４．３　重复性试验　取同一批黄山药药材样品（８
号样品），按前述样品处理方法平行制备６份，在确
定的色谱条件下，进行伪原薯蓣皂苷含量测定，ＲＳＤ
２０％，重复性良好。
２．４．４　加样回收率试验　采用加样回收法，以已测
含量样品为本底样品，进行了相当于含量测定浓度
的８０％（８０ｍｇ·Ｌ－１）、１００％（１００ｍｇ·Ｌ－１）和
１２０％（１２０ｍｇ·Ｌ－１）３个浓度水平下的加样实验。
９次实验评价回收率为９９９％，ＲＳＤ２３％，结果见
表２。
表２　伪原薯蓣皂苷回收率测定结果
测定序号 回收率／％ 组内平均／％ 组间平均／％
１２０％１ １００４ 　 　
１２０％２ ９８４ １００２±１７４ 　
１２０％３ １０１９ 　 　
１００％１ ９８２ 　 　
１００％２ ９６４ ９８９±３０４ ９９９±２３０
１００％３ １０２２ 　 　
８０％１ １０２２ 　 　
８０％２ ９７５ １００６±２７０ 　
８０％３ １０２１ 　 　
２．５　样品含量测定
按含量测定方法，将对照品溶液和供试品溶液
分别注入液相色谱仪，计算样品中伪原薯蓣皂苷的
含量。共测定１０批样品，测定结果见表３。
表３　１０批样品含量测定结果
药材产地或购买地 质量分数／％
四川西昌市安哈镇 ０１９５
四川甘孜州九龙县 ００１９
云南昭通市大观县 ０１０７
贵州贵阳　　　　 ００１８
湖南邵东县　　　 ００７６
云南丽江　　　　 ０１０７
四川西昌宁南县　 ００１７
四川甘孜州泸定县 ０１６５
云南丽江　　　　 ００１４
四川西昌　　　　 ００１６
３　讨论
文献报道采用ＨＰＬＣ测定了黄山药药材中薯蓣
皂苷的含量［６］，但通过对１０批药材的薄层鉴别后发
现个别批次的药材中薯蓣皂苷的含量比较低，且薯
蓣皂苷为水难溶性皂苷，而伪原薯蓣皂苷的极性较
大，在甲醇和水中的溶解性更好。色谱性质表现以
ＨＰＬＣ为例，在 ＲＰＨＰＬＣ色谱中其 Ｒｔ较薯蓣皂苷
小，更易于洗脱分离。同时伪原薯蓣皂苷含量较高，
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具有较好的心脑血管活性，而且还是地奥心血康胶
囊的内控标准中含量测定成分。因此本研究选取了
伪原薯蓣皂苷作为药材和制剂含量测定的指标更有
实际意义。
黄山药中的皂苷类成分可采用水、低级脂肪醇
类进行提取，因而先后实验了甲醇、乙醇、７５％乙醇、
５０％乙醇和正丁醇作为提取溶剂，超声、热回流的提
取方法，结果显示７５％乙醇≥甲醇 ＞５０％乙醇≥甲
醇＞正丁醇，超声的效果优于回流提取。同时考察
了超声时间（１５，３０，６０ｍｉｎ）和超声功率（５０，２５０，
５００Ｗ），最终选择２５０Ｗ，４０ＫＨｚ超声提取３０ｍｉｎ，
可保证提取完全。样品粉末均过四号筛，在考察精
密度中发现，不经预先浸泡的样品可能提取不完全；
实际操作中，７５％乙醇在密塞（磨口瓶和瓶塞、用封
口膜密封）的情况下放置过夜并超声３０ｍｉｎ后，几
乎不会挥发损失重量，但为保证准确性，并根据中国
药典习惯，故最终确定的提取方法。
流动相的选择 在早期的研究中，使用乙腈水
（３１∶６９）等度洗脱的流动相系统，在所使用的３支
色谱柱上，伪原薯蓣皂苷（ｐｓｅｕｄｏｐｒｏｔｏｄｉｏｓｃｉｎ）的保
留时间为１４～２０ｍｉｎ，理论板数约为８０００。在之后
的进一步实验中发现，某些样品中在主峰前后洗脱
的成分会干扰主成分的测定。故采用乙腈水梯度
洗脱的流动相系统。在梯度洗脱下，原样品中的干
扰成分可与主成分良好分离；同时，梯度洗脱条件下
获得的峰型更尖锐（理论板数由８０００增至１５０００
以上），避免了其它可能存在成分的干扰。同时，检
测限也由等度洗脱下的约３ｍｇ·Ｌ－１提高到约０６
ｍｇ·Ｌ－１。可见，采用梯度洗脱可以获得更为尖锐
的色谱峰，并最终制定的流动相为：乙腈水梯度洗
脱，初始比例为３０％乙腈，至２５ｍｉｎ时，乙腈比例线
性变化至４０％。流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；为保持色谱
系统的稳定，采用了４０℃柱温。鉴于目前商品化的
高效液相色谱仪大多均配备了多元泵和柱温箱，所
采用的上述色谱条件具有较好的通用性。
［参考文献］
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［Ｍ］．北京：科学出版社，２００６：５．
［６］　王铁杰，刘中博，文琪臖，等．ＲＰＨＰＬＣ法测定黄山药和穿龙薯
蓣中薯蓣皂苷的含量［Ｊ］．中药材，２００５，２８（１２）：１０７４．
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｓｅｕｄｏｐｒｏｄｉｏｓｃｉｎｉｎＤｉｏｓｃｏｒｅａｐａｎｔｈａｉｃａｂｙＨＰＬＣ
ＪＩＮＧＷｅｎｇｕａｎｇ，ＺＨＡＮＧＱｉｗｅｉ，ＬＩＵＡｎ
（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａｍｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｐｓｅｕｄｏｐｒｏｄｉｏｓｃｉｎｉｎＤｉｏｓｃｏｒｅａｐａｎｔｈａｉｃａａｎｄｐｒｏ
ｖｉｄｅｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃｂａｓｉｓｆｏｒｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｉｔａｎｄｉｔｓｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｃａｒｉｅｄｏｕｔｏｎａＭｅｒｃｋＰｕｒｏｓｐｈｅｒＳＴＡＲＲＰ
１８ｅｃｏｌｕｍｎｅｌｕｔｅｄｗｉｔｈａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅａｎｄｗａｔｅｒａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｍｏｄｅ．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２０３ｎｍ，ａｎｄｔｈｅｆｌｏｗ
ｒａｔｅｗａｓ１０ｍＬ·ｍｉｎ－１．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｐｓｅｕｄｏｐｒｏｄｉｏｓｃｉｎｉｎＤ．ｐａｎｔｈａｉｃａｅｘｔｒａｃｔｗａｓｗｅｌｓｅｐａｒａｔｅｄ．Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｉｓｂｅｔｗｅｅｎ
００８００～４００μｇ，ｒ＝０９９９９．ＴｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙａｎｄＲＳＤａｒｅ９９９％ ａｎｄ２３％，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｆｏｒ
ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｐｓｅｕｄｏｐｒｏｄｉｏｓｃｉｎｉｎＤ．ｐａｎｔｈａｉｃａｉｓｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅａｎｄｃａｎｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＤ．ｐａｎｔｈａｉ
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［责任编辑　王亚君］
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