全 文 ：ＥｆｅｃｔｓｏｆＷｅｉｎａｏｋａｎｇｃａｐｓｕｌｅｏｎｉｎｔｒａｃｅｐｈａｌｉｃｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｓｙｓｔｅｍａｎｄ
ｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｆｒｅｅｒａｄｉｃａｓｉｎｃｈｒｏｎｉｃｃｅｒｅｂｒａｌｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎｒａｔｓ
ＸＵＬｉ，ＬＩＵＪｉａｎｘｕｎ，ＣＯＮＧＷｅｉｈｏｎｇ，ＷＥＩＣｕｉｅ
（ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＸｉｙｕａｎＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００９１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｏｂｓｅｒｖｅｔｈｅｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｎｄｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆＷｅｉｎａｏｋａｎｇｃａｐｓｕｌｅ（ＷＮＫ）ｏｎｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ
ｒａｔｓｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｈｒｏｎｉｃｃｅｒｅｂｒａｌｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｂｉｌａｔｅｒａｌｃｏｍｍｏｎｃａｒｏｔｉｄａｒｔｅｒｉｅｓｏｆｒａｔｓｗｅｒｅｌｉｇａｔｅｄ．Ｒａｔｓｗｅｒｅｉｎｔｒａ
ｇａｓｔｒｉｃａｌｙａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｅｄｗｉｔｈＷＮＫ４ｗｅｅｋｓａｆｔｅｒｔｈｅｌｉｇａｔｉｏｎ．Ａｆｔｅｒ８ｗｅｅｋｓｏｆａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｔｔｉｍｅｏｆｒａｔｓｏｎｆｉｎｄｉｎｇｔｈｅ
ｐｌａｔｆｏｒｍｉｎＭＯＲＲＩＳｗａｔｅｒｍａｚｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄ，ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ｃｏｎｔｅｎｔｏｆａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ（ＡＣｈ）ｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄｂｙＨＰＬＣ
ＥＣＤ，ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｅｓｔｅｒａｓｅ（ＡＣｈＥ）ａｎｄｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ（ＳＯＤ），ｃｏｎｔｅｎｔｏｆｍａｌｏｎａｌｄｅｈｙｄｅ（ＭＤＡ）ｗａｓｍｅａｓｕｒｅｄ
ｂｙｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ａｆｔｅｒ４８ｗｅｅｋｓｏｆａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ，ｔｈｅｔｉｍｅｏｆｆｉｎｄｉｎｇｔｈｅｐｌａｔｆｏｒｍｉｎＷＮＫｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｓｈｏｒｔｅｒｔｈａｎｉｎｔｈｅｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ，ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＡＣｈＥｉｎｂｒａｉｎｔｉｓｓｕｅｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｄｕｃｅｄ（Ｐ＜００５），ｃｏｎｔｅｎｔｏｆＡＣｈｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ
ｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｄ（Ｐ＜００５００１），ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＳＯＤｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｒｅｉｎｆｏｒｃｅｄ（Ｐ＜００５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＷＮＫｃａｐｓｕｌｅｃａｎｉｍｐｒｏｖｅｔｈｅ
ｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔｉｎｄｕｃｅｄｂｙｃｈｒｏｎｉｃｃｅｒｅｂｒａｌｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，ａｎｄｉｔｓｍｅｃｈａｎｉｓｍｍａｙｂｅａｓｓｏｃｉａｔｅｄｗｉｔｈｒｅｉｎｆｏｒｃｉｎｇｔｈｅｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆ
ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌａｎｄｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｓｙｓｔｅｍ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｗｅｉｎａｏｋａｎｇｃａｐｓｕｌｅ（ＷＮＫ）；ｃｈｒｏｎｉｃｃｅｒｅｂｒａｌｈｙｐｏｐｅｒｆｕｓｉｏｎ；ｃｏｇｎｉｔｉｖｅｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ；ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅ，ｆｒｅｅｒａｄｉｃａｌ
［责任编辑　古云侠］
β细辛醚对慢性点燃癫痫大鼠脑组织
ｃｆｏｓ表达的影响
方永奇，方若鸣，方更利，江　盠，傅思莹
（广州中医药大学 第一附属医院 实验中心，广东 广州 ５１０４０５）
［摘要］　目的：研究β细辛醚对慢性点燃癫痫大鼠脑组织即早基因ｃｆｏｓ表达的影响。方法：大鼠随机分为β
细辛醚高、中、低（２００，１００，５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１）剂量组，阳性药对照组（苯妥英钠３６ｍｇ·ｋｇ－１），模型对照组（基
质），灌胃给药。以青霉素点燃大鼠慢性癫痫，采用 ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法测定海马 ｃｆｏｓ的表达，免疫组化法测定脑皮质
ｃｆｏｓ的表达。结果：β细辛醚能显著增强癫痫大鼠脑内ｃｆｏｓ的表达，且呈量效关系。海马ｃｆｏｓ的表达量：β细辛醚
高、中、低剂量组为（１１３９４５±１５５５６），（１１０９５６±１３４０３），（１１０３７３±２３５８２）ＣＮＴ·ｍｍ２，基质对照组
（９２０５４±２０３２０）ＣＮＴ·ｍｍ－２，苯妥英钠组（１１０６２６±１８６２４）ＣＮＴ·ｍｍ２。皮质ｃｆｏｓ阳性细胞数：β细辛醚高、
中、低剂量组为（８７１±２２），（７６３±１３），（５９９±１３）个，基质对照组（３９３±２６）个，苯妥英钠组（９５２±１１）
个。结论：β细辛醚能增强癫痫大鼠脑内ｃｆｏｓ的表达，是机体重要的抗癫痫反应。
［关键词］　β细辛醚；癫痫；ｃｆｏｓ；基因表达
［中图分类号］Ｒ２８５．５　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００１５３０２（２００８）０５０５３４０３
［收稿日期］　２００７０３０５
［通讯作者］　方永奇，Ｔｅｌ：（０２０）３６５９１４５０，Ｅｍａｉｌ：Ｆａｎｇｙｑ２＠
１６３．ｃｏｍ
　　β细辛醚是中药石菖蒲的主要有效成分，分子
量小（２０８）、脂溶性强，极易透过血脑屏障进入脑组
织［１］。其对动物脑电有抑制作用，主要功效为镇静
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第３３卷第５期
２００８年３月
　　　　　　　　　
　　　 中 国 中 药 杂 志
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Ｍａｒｃｈ，２００８
安神［２］。最近笔者观察到 β细辛醚对癫痫有确切
的疗效［３］，能降低癫痫大鼠脑皮质 Ｓ１００Ｂ蛋白和神
经肽Ｙ的含量［４］。本研究进一步观察 β细辛醚对
慢性点燃癫痫大鼠脑组织ｃｆｏｓ表达的影响。
１　材料
１．１　动物
ＳＤ大鼠５０只，雌雄各半，体重１８０～２２０ｇ，购
自广东省医学实验动物中心，合格证号：ＳＣＸＫ（粤）
２００３０００２，粤监证字２００５ＡＯ１０。
１．２　仪器
蛋白电泳仪及电转膜装置（ＰＨＡＲＭＡＣＩＡ）；凝
胶成像系统与 Ｑｕａｎｔｉｔｙ－Ｏｎｅ分析软件（ＢＩＯ－
ＲＡＤ）；ＡＥ－２００电子分析天平（Ｍｅｔｌｅｒ）；３Ｋ３０高速
冷冻离心机（ＳＩＧＭＡ）；石蜡包埋机、脱水机、切片机
（ＬＥＩＣＡ），ＯＬＹＭＰＵＳ显微镜。
１．３　试剂
蛋白抽提试剂盒（默克公司）；蛋白定量试剂盒
（上海申能博采生物工程公司）；蛋白质分子量标准
（上海华舜生物工程公司）；兔抗 ｃｆｏｓ一抗，二抗为
山羊抗兔ＡＰ（ｃｅｌｓｉｇｎａｌｉｎｇｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ，批号
４０６８８７５４），牛血清白蛋白，ＮＢＴ／ＢＣＩＰ染色试剂盒
（华美）。免疫组化试剂：兔抗鼠多克隆 ｃｆｏｓ抗体
（武汉博士德公司，批号ＢＡ０２０７）。
１．４　β细辛醚制备
石菖蒲购于广州中医药大学第一附属医院，经
鉴定为天南星科植物石菖蒲ＡｃｏｒｕｓｔａｔａｒｉｎｏｗｉＳｃｈｏｔ
的干燥根茎。提取石菖蒲挥发油，精制得到 β细辛
醚，经中国广州分析测试中心三大光谱（ＧＣ／ＭＳ，
ＮＭＲ，ＩＲ）检测，证实其成分为 β细辛醚，纯度为
９９５５％。
２　方法
２．１　分组与给药
大鼠随机分为 ５组，β细辛醚高、中、低（１００，
５０，２５ｍｇ·ｋｇ－１）剂量组，阳性对照组（苯妥英钠３６
ｍｇ·ｋｇ－１），阴性对照组（山梨醇甲酯）。灌胃给药，
每日２次。
２．２　青霉素（ＰＧ）点燃大鼠癫痫实验
大鼠ｉｐＰＧ８×１０５Ｕ·ｋｇ－１，每周２次，连续４
周。停药１周后，用相同剂量 ＰＧ测试，先记录测试
时的发作级别，再给药７ｄ，每日２次。末次给药３０
ｍｉｎ后，给相同剂量ＰＧ点燃癫痫。
２．３　ｃｆｏｓ表达的检测
实验动物用４％水合氯醛 ｉｐ麻醉，后断头取海
马－８０℃保存，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ备用；取大脑额叶皮质
１０％福尔马林固定，免疫组化法备用。
２．３．１　Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法　取大鼠海马３００ｍｇ，抽提
蛋白并定量。蛋白电泳及 ｗｅｓｔｅｒｎ杂交蛋白上样量
为５０μｇ。所得电泳凝胶在凝胶成像系统拍照，并
用分析软件进行分析。
２．３．２　免疫组化法　将固定好的大脑额叶皮质常
规切片，采用博士德公司推荐的ＳＰ法。
每张切片于显微镜下取 ５个不同的 ４００倍视
野，观察ｆｏｓ免疫组化阳性反应的强度，计数阳性细
胞数目。
２．４　统计方法
实验数据用ＳＰＳＳ１１０软件进行统计。多组数
据用方差分析，两两比较用ｔ检验。
３　结果
３．１　β细辛醚对癫痫大鼠脑内ｃｆｏｓ表达的影响
Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法和免疫组化法检测结果均显示，
β细辛醚能显著增强癫痫大鼠海马和脑皮质 ｃｆｏｓ
的表达，且呈明显的量效关系（表１）。
表１　β细辛醚对癫痫大鼠脑内ｃｆｏｓ表达的影响
（珋ｘ±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
／ｍｇ·ｋｇ－１
·ｄ－１
海马
／ＣＮＴ·ｍｍ－２
皮质阳性细胞数
／个
β细辛醚 ２００ １１３９４５±１５５５６１） ８７１±２２２）
　 １００ １１０９５６±１３４０３１） ７６３±１３２）
　 ５０ １１０３７３±２３５８２ ５９９±１３２）
山梨醇甲酯 － ９２０５４±２０３２０ ３９３±２６
苯妥英钠 ３６ １１０６２６±１８６２４１） ９５２±１１２）
　　注：与山梨醇甲酯组比较１）Ｐ＜００５，２）Ｐ＜０００１
４　讨论
ｃｆｏｓ是一种即早基因（细胞受刺激后立即表达
的基因）。神经元兴奋可导致 ｆｏｓ蛋白快速、大量、
一过性表达，因此，ｆｏｓ蛋白的表达可作为神经元兴
奋的特异性标记物［５，６］，在癫痫、脑外伤、学习记忆
功能、神经内分泌和神经药理等基础研究中有重要
意义。由于ｃｆｏｓ基因的表达具有刺激特异性、细胞
特异性和时程特异性；故不同刺激所诱发的癫痫模
型，其ｆｏｓ表达的部位及持续时间不同［７］。有报道
癫痫大鼠脑ｃｆｏｓ表达增强，抗癫痫药物能抑制ｃｆｏｓ
的表达［８，９］。
但另一方面，ｃｆｏｓ及其蛋白产物不仅作为核内
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信使参与细胞内的信息传递过程，而且参与细胞的
正常生长、分化及神经功能可塑性变化等生理功能。
能促进神经元的生长生存及分化，延缓神经元的衰
老，使其保持活力，改善学习记忆能力［１０，１１］。
本实验分别用 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法和免疫组化法检
测大鼠海马和脑皮质 ｃｆｏｓ的表达，结果显示，β细
辛醚能显著增强大鼠脑内ｃｆｏｓ的表达，且呈明显的
量效关系。笔者在实验中［３］观察到，β细辛醚有显
著抗癫痫作用，能降低癫痫的发作级别、延长发作潜
伏期、减少ＷＤＳ次数。这提示 ｃｆｏｓ并不是癫痫发
病的动因。相反，ｃｆｏｓ可作为转录因子作用于后期
反应基因（ＬＲＧ）而引起持续时间较长的后期反应。
作者推测在慢性癫痫模型中，由于 β细辛醚的干预
作用，使ｃｆｏｓ蛋白表达上调并促进 ＬＲＧ的表达，通
过生成更多的抑制性神经递质及其受体、神经营养
因子等，减少异常放电，抑制癫痫发作，减轻脑组织
损伤，即ｃｆｏｓ蛋白的表达上调及其对 ＬＲＧ的后续
效应是β细辛醚发挥抗癫痫作用的有效环节。
［参考文献］
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［１１］　ＮｉｋｏｌａｅｖＥ，ＷｅｒｋａＴ，ＫａｃｚｍａｒｅｋＬ．ｃｆｏｓｐｒｅｔｏｏｎｃｏｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓ
ｓｉｏｎｉｎｒａｔｂｒａｉｎａｆｔｅｒｌｏｎｇｔｅｒｍｔｒａｉｎｉｎｇｏｆｔｗｏｗａｙａｃｔｉｖｅａｖｏｉｄ
ａｎｃｅｒｅａｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＢｅｈａｖＢｒａｉｎＲｅｓ，１９９２，４８：９１．
Ｅｆｅｃｔｓｏｆβａｓａｒｏｎｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｆｏｓｉｎｋｉｎｄｌｉｎｇｅｐｉｌｅｐｓｙｒａｔｂｒａｉｎ
ＦＡＮＧＹｏｎｇｑｉ，ＦＡＮＧＲｕｏｍｉｎｇ，ＦＡＮＧＧｅｎｇｌｉ，ＪＩＡＮＧＹｏｎｇ，ＦＵＳｉｙｉｎｇ
（ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ５１０４０５，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｅｆｅｃｔｓｏｆβａｓａｒｏｎｅｏｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙｅａｒｌｙｇｅｎｅｃｆｏｓｉｎｋｉｎｄｌｉｎｇｅｐｉｌｅｐｓｙｒａｔ
ｂｒａｉｎ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｒａｔｓｗｅｒｅｒａｎｄｏｍｌｙｄｉｖｉｄｅｄｉｎｔｏβａｓａｒｏｎｅｇｒｏｕｐｓ（２００，１００，５０ｍｇ·ｋｇ－１·ｄ－１），ｄｉｆｅｔｏｉｎｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（３６
ｍｇ·ｋｇ－１）ａｎｄｍｏｄｅｌｇｒｏｕｐ．Ｔｈｅｒｅｍｅｄｙｗａｓａｄｍｉｎｉｓｔｅｒｅｄｏｒａｌｙ．Ｔｈｅｅｆｅｃｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｋｉｎｄｌｉｎｇｅｐｉｌｅｐｓｙｍｏｄｅｌｉｎｄｕｃｅｄｂｙ
ｐｅｎｉｃｉｌｉｎ，ｔｈｅｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｆｏｓｗｅｒｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ（ｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓ）ａｎｄｉｍｍｕｎｏｈｉｓｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ（ｃｏｒ
ｔｅｘ）．Ｒｅｓｕｌｔ：βａｓａｒｏｎｅｃｏｕｌｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｆｏｓｉｎｋｉｎｄｌｉｎｇｅｐｉｌｅｐｓｙｒａｔｂｒａｉｎ，ａｎｄｓｈｏｗｉｔｓｑｕａｎｔｉｔｙｅｆｅｃｔ
ｒｅｌａｔｉｏｎ．Ｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｆｏｓｉｎｈｉｐｐｏｃａｍｐｕｓｗａｓ（１１３９４５±１５５５６），（１１０９５６±１３４０３），（１１０３７３±２３５８２）ＣＮＴ·
ｍｍ２ｉｎβａｓａｒｏｎｅｇｒｏｕｐｓ，９２０５４±２０３２０ｉｎｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｎｄ１１０６２６±１８６２４ｉｎｄｉｆｅｔｏｉｎｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｎｕｍ
ｂｅｒｏｆｃｆｏｓｐｏｓｉｔｉｖｅｃｅｌｗａｓ８７１±２２，７６３±１３ａｎｄ５９９±１３ｉｎβａｓａｒｏｎｅｇｒｏｕｐｓ，３９３±２６ｉｎｍｏｄｅｌｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ，ａｎｄ
９５２±１１ｉｎｄｉｆｅｔｏｉｎｇｒｏｕｐ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：βａｓａｒｏｎｅｃａｎｏｂｖｉｏｕｓｌｙｉｎｃｒｅａｓｅｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｆｏｓｉｎｅｐｉｌｅｐｓｙｒａｔｂｒａｉｎ．
Ｉｔｉｓｏｎｅｏｆｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｅｐｉｌｅｐｓｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　βａｓａｒｏｎｅ；ｅｐｉｌｅｐｓｙ；ｃｆｏｓ；ｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ
［责任编辑　古云侠］
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