全 文 ：不同产地板蓝根药材中 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ的含量比较
安益强１，２，贾晓斌１，２，昌莉丽３，施峰２
（１．江苏省中医药研究院 中药新型给药系统重点实验室 国家中医药管理局名医名方适宜剂型
重点研究室，江苏 南京 ２１００２８；２．江苏大学 药学院，江苏 镇江 ２１２０１３；
３河南农业大学，河南 郑州 ４５０００２）
［摘要］ 目的：建立板蓝根中抗病毒有效成分 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ的高效液相色谱测定方法，测定不同产地板蓝根中 ｃｌｅｍａｓ
ｔａｎｉｎＢ的含量。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱为ＺＯＲＢＡＸＳＢＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为乙腈水１１∶
８９；流速为１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长为２２５ｎｍ，柱温为３０℃。结果：ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ在００６１５～１８４４１μｇ与峰面积线性关系
良好（ｒ＝０９９９５），平均加样回收率为９７７４％，ＲＳＤ１４％；测得８批板蓝根中ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ的质量分数为０２６９～０９００ｍｇ
·ｇ－１，其中以河北安国产板蓝根药材中ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ含量最高，安徽阜阳、河北承德和安徽亳州产的次之，其他几个产地的含
量相对略低，甘肃岷县产的最低。结论：该方法准确、可靠，可用于板蓝根药材的测定。
［关键词］ 高效液相色谱法；板蓝根；ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ；含量测定
［收稿日期］ ２００８１１１７
［基金项目］ 江苏省中医药领军人才项目（２００６）；苏州市科技计划
（ＳＳＹ０６０６）
［通信作者］ 贾晓斌，博士，研究员，Ｔｅｌ：（０２５）８５６３７８０９，Ｅｍａｉｌ：
ｊｘｉａｏｂｉｎ２００５＠ｈｏｔｍａｉｌ．ｃｏｍ
［作者简介］ 安益强，江苏大学 ２００６级研究生，Ｔｅｌ：（０２５）
８５６３７８０９，Ｅｍａｉｌ：ａｎｙｈｅ２００６＠ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ．ｃｎ
板蓝根为常用抗病毒中药，始载于《神农本草
经》，至今已有 ２０００多年的历史，《中国药典》
（２００５年版）一部收载为十字花科植物菘蓝 Ｉｓａｔｉｓ
ｉｎｄｉｇｏｔｉｃａＦｏｒｔ．的干燥根［１］，主产于安徽、河北、甘
肃、河南等省，具有清热解毒、凉血利咽之功效，广泛
用于治疗多种疾病，如流感、腮腺炎、温病发热、发
斑、风热感冒、咽喉肿烂、流行性乙型脑炎、肝炎等疾
病［２］。现代研究表明，板蓝根中的成分主要是生物
碱类和苯丙素类，ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ［７Ｓ，８Ｒ，８′Ｒ（＋）
落叶松树脂醇４，４′二ＯβＤ吡喃葡萄糖苷］是板
蓝根中最主要的苯丙素类成分之一［３４］，具有显著的
抗病毒活性［５］；本试验采用高效液相色谱法对板蓝
根中的ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ含量进行测定，同时采用该方
法测定不同产地板蓝根中 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ的含量，以
期为选出优质药材提供依据。
１ 仪器与试药
１．１ 仪器 Ａｇｉｌｅｎｔ１２００型高效液相色谱仪（包括
四元泵，自动进样器，ＤＡＤ二极管阵列检测器）；
ＫＱ５２００型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公
司）；ＢＰ２１１Ｄ分析电子天平（德国 Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ公司，
１／１０万）；ＲＥ５２９９型旋转蒸发仪（巩义市予华仪器
有限责任公司）。
１．２ 试药 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ对照品（北京格润得科技
有限公司，ＨＰＬＣ测定，归一化法计算其纯度≥
９８％，批号２００８０３００）；河北安国、河北承德、黑龙江
大庆、甘肃岷县产板蓝根药材均购于河北安国市百
合中药饮片有限公司（批号分别为０７１２３０，０８０３０１，
０７１２２５，０８０１０１）；安徽阜阳、安徽太和产板蓝根为广
州白云山和记黄埔中药有限公司ＧＡＰ基地提供（批
号分别为０７１２２４；０８０３０５）；河南禹州和安徽亳州产
板蓝根为２００７年１１月于当地采收，以上药材均由
南京中医药大学生药学教研室吴德康教授鉴定为十
字花科植物菘蓝 Ｉｉｎｄｉｇｏｔｉｃａ．的干燥根；乙腈
（ＴＥＤＩＡ公司，色谱纯），甲醇、乙醇（南京化学试剂
有限公司，分析纯），水为超纯水。
２ 方法与结果
２．１ 色 谱 条 件 ＺＯＲＢＡＸ ＳＢＣ１８色 谱 柱
（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为乙腈水 １１∶
８９；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２２５ｎｍ，柱温３０
℃。色谱图见图１。
２．２ 对照品溶液的制备 称取 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ对照
品约２０ｍｇ，精密称定，置于５ｍＬ的量瓶中，加甲
醇至刻度，摇匀，制成质量浓度为０４０９８ｇ·Ｌ－１的
对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备 取板蓝根药材粉末（过
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第３４卷第１４期
２００９年７月
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Ａ．对照品；Ｂ．板蓝根药材；１．ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ。
图１ 对照品与样品ＨＰＬＣ图
４０目筛）约０４０ｇ，精密称定，置５０ｍＬ具塞锥形瓶
中，加５０％甲醇２５ｍＬ，超声提取（功率２５０Ｗ，频率
２０ｋＨｚ）４５ｍｉｎ，取出过滤，并用１０ｍＬ５０％甲醇洗
涤药渣，收集滤液，６０℃减压浓缩至干，残渣加５０％
甲醇适量溶解，并定容于５ｍＬ量瓶中，摇匀，０４５
μｍ微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。
２．４ 线性关系考察 精密量取浓度为０４０９８ｇ·
Ｌ－１的对照品溶液１５ｍＬ，置于１０ｍＬ的量瓶中，加
５０％甲醇至刻度，摇匀，得到质量浓度为６１４７ｍｇ
·Ｌ－１的对照品溶液；分别精密吸取该对照品溶液
１，３，６，１０，１５，２０，３０μＬ，按照２．１项下色谱条件依
次进样，以进样量（Ｘ）为横坐标，峰面积（Ｙ）为纵坐
标绘制标准曲线，回归方程为 Ｙ＝２２２８Ｘ＋８１８，
ｒ＝０９９９５，ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ进样量在 ００６１５～
１８４４１μｇ与峰面积成良好的线性关系。
２．５ 精密度试验 精密吸取浓度为 ６１４７ｍｇ·
Ｌ－１的对照品溶液１０μＬ，在同一条件下重复进样６
次，以对照品峰面积进行计算，ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ峰面积
的ＲＳＤ０１８％，表明仪器精密度良好。
２．６ 稳定性试验 取待测板蓝根药材供试品溶液，
按２．１项下色谱条件操作，分别在０，２，４，８，１６，２０，
２４ｈ进样，测定峰面积，按峰面积计算得 ＲＳＤ
１１％。
２．７ 重复性试验 取同一批次的板蓝根药材约
０４ｇ，平行称定６份，按２．３项下方法操作，制备供
试品溶液６份，每份精密吸取１０μＬ按２．１项下色
谱条件测定，测得 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ的质量分数为
０４６３０ｍｇ·ｇ－１，ＲＳＤ１１％。
２．８ 加样回收率试验 取已知 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ质量
分数的板蓝根粉末约０２０ｇ，精密称定９份，每３份
加入相同量的ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ对照品，按２．３项下方
法操作，制备供试品，测定。９次测定平均回收率为
９７７４％，ＲＳＤ１４％（ｎ＝９），结果见表１。
表１ 板蓝根药材加样回收率
样品中量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
００９２７ ００９４３ ０１８５６ ９８５２
００９２７ ００９４３ ０１８４２ ９７０３
００９２７ ００９４３ ０１８３３ ９６０７
００９２７ ００７３８ ０１６６７ １００３０
００９２７ ００７３８ ０１６５１ ９８１０ ９７７４ １４
００９２７ ００７３８ ０１６３６ ９６１０
００９２７ ０１１０６ ０２００８ ９７７４
００９２６ ０１１０６ ０２０２１ ９９０１
００９２６ ０１１０６ ０１９９７ ９６８４
２．９ 样品测定 称取不同产地的板蓝根药材约
０４ｇ，精密称定，按２．３项下方法操作，制成供试品
溶液，按２．１项下色谱条件进行测定，并计算各样品
中ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ的含量，８个产地的样品中 ｃｌｅｍａｓ
ｔａｎｉｎＢ的含量见表２。
表２ 不同产地药材中的ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ（ｎ＝３）
药材产地 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ／ｍｇ·ｇ－１ ＲＳＤ／％
河北承德 ０４６３ １８
河北安国 ０９００ ０７
安徽阜阳 ０５１５ １１
安徽太和 ０３９５ １１
安徽亳州 ０４２２ １６
河南禹州 ０３５２ １０
甘肃岷县 ０２６９ １４
黑龙江大庆 ０３２７ １６
３ 讨论
现有研究表明，板蓝根中多种成分具有抗病毒
活性，其中包括生物碱类、苯丙素类、有机酸类、糖蛋
白类、核苷类等，由此可知，板蓝根发挥抗病毒活性
的物质基础是多类组分共同发挥作用而达到的整体
效果［６］。ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ是苯丙素类中主要的成分之
一，具有显著的抗病毒活性，本试验建立了板蓝根中
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抗病毒活性成分ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ的高效液相色谱测定
方法，可使其获得很好的分离，且具准确、重复性好
等特点。
本实验比较了甲醇水、乙腈醋酸水、乙腈水洗
脱系统，结果表明以乙腈水洗脱系统分离效果最
好。２００～４００ｎｍ全波长扫描，发现 ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ
的最大吸收波长是２２５ｎｍ，其次是２７６ｎｍ，故选择
检测波长为２２５ｎｍ。
在样品提取过程中，比较了甲醇、乙醇、５０％甲
醇、水几种提取溶媒，结果表明以５０％甲醇为最佳
提取溶媒；以５０％甲醇为提取溶媒，比较了３种不
同的提取方法，冷浸法、回流提取法、超声提取法，结
果后者提取效果明显优于前两种提取方法；采用超
声提取法，分别考察了加入不同体积提取溶剂的提
取效果，结果表明２５，３５，５０ｍＬ提取量无明显差别，
故选择５０％甲醇２５ｍＬ进行提取；采用超声提取法，
加入５０％甲醇２５ｍＬ，又分别考察了提取不同提取
时间的提取量，结果表明从超声提取４５ｍｉｎ后，延
长提取时间，提取量无明显差别，故提取时间选择
４５ｍｉｎ。
不同产地的板蓝根所含ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ含量差别
较大，其中河北安国产要比甘肃岷县产板蓝根含量
高３倍多，由此可知，进行不同产地的板蓝根比较研
究具有重要意义。
［参考文献］
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ｄｉｆｅｒｅｎｔｇｒｏｗｉｎｇａｒｅａｓ
ＡＮＹｉｑｉａｎｇ１，２，ＪＩＡＸｉａｏｂｉｎ１，２，ＣＨＡＮＧＬｉｌｉ，ＳＨＩＦｅｎｇ２
（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＮｅｗＤｒｕｇＤｅｌｉｖｅｒｙＳｙｓｔｅｍｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｆｏｒＣｌｉｎｉｃａｌ
ＥｆｅｃｔｉｖｅＰｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎｏｆＳｔａｔｅＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＪｉａｎｇｓｕＰｒｏｖｉｎｃｉａｌＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｊｉｎｇ２１００２８，Ｃｈｉｎａ；
２．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈｅｎｊｉａｎｇ２１２０１３，Ｃｈｉｎａ；
３ＨｅｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＺｈｅｎｇｚｈｏｕ４５０００２，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｎＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢｗｈｉｃｈｈａｓａｎｔｉｖｉｒａｌａｃｔｉｖｉｔｙｉｎＲａｄｉｘ
ＩｓａｔｉｄｉｓａｎｄｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢｉｎｔｈｅｄｒｕｇｓｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｏｒｉｇｉｎｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：Ｔｈｅｓａｍｐｌｅｓｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｏｎａｎ
ＺＯＲＢＡＸＳＢＣ１８（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎｗｉｔｈｔｈｅｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｏｆａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｗａｔｅｒ（１１∶８９）．Ｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ１０ｍＬ·
ｍｉｎ－１．Ｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓｓｅｔａｔ２２５ｎｍ．Ｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３０℃．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢｗａｓ
００６１５１８４４１μｇ（ｒ＝０９９９５），ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９７７４％，ＲＳＤｗａｓ１４％ （ｎ＝９）．ＴｈｅｃｏｎｔｅｎｔｓｏｆｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢｗｅｒｅ
ｉｎｔｈｅｒａｎｇｅｏｆ０２６９０９００ｍｇ·ｇ－１ｉｎＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｆｒｏｍｄｉｆｅｒｅｎｔｏｒｉｇｉｎｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｏｆｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎ
ＢｉｎＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓｗａｓａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅ，ｗｈｉｃｈｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｅｖａｌｕａｔｅｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ ＨＰＬＣ；ＲａｄｉｘＩｓａｔｉｄｉｓ；ｃｌｅｍａｓｔａｎｉｎＢ；ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
［责任编辑 王亚君］
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