全 文 ：黄连吴茱萸药对水提物对大鼠结肠癌
癌前病变的作用
董立!+! 石海莲!+! 季光)! 吴大正!+!
f上海中医药大学 中药研究所! 上海 +$+$)%+f上海市复方中药重点实验室! 上海 +$+$)%
)f上海中医药大学 龙华医院 脾胃病研究所! 上海 +$$$)+#
$摘要%!目的&研究黄连吴茱萸药对对I9J诱导的大鼠结肠癌癌前病变以及结肠上皮增殖和凋亡的作用( 方法#采用
I9J制备大鼠结肠癌模型)应用形态学的方法测定经过细微分离获得的完整肠腺内细胞的增殖和凋亡变化)应用甲基绿染色
和光学显微镜计数中%降结肠异变肠腺病灶数目( 结果#黄连吴茱萸药对能够明显抑制模型组动物4
内细胞凋亡明显增加$而中结肠肠腺内细胞凋亡较正常相比无明显差异$而黄连吴茱萸药对能够显著促进中%降结肠肠腺内
细胞的凋亡( 结论#黄连吴茱萸药对能够显著抑制结肠癌癌前病变4
$关键词%!黄连)吴茱萸)结肠癌)二甲肼)癌前病变)大鼠
$稿件编号%!+$$*$%%$$+
$基金项目%!上海市复方中药重点实验室开放课题基金项目
!$*Ia++%$*$$)上海市自然科学基金项目!$*a>&)($$)上海市
教委高校高水平项目建设资助项目!+$$(L8G*
$通信作者%!!吴大正$NQV#!$+)++&*($EB7#!$+)++&*($
H50BRV#,UBY?Q2D3?/@0BRV-./0
!!黄连吴茱萸药对伍用历史悠久$+ 味药的配比
不同$其组成的复方各异$药效也不同( 现代药理学
研究证明$黄连提取物具有抑制结肠癌癌前病变形
成的作用*+ $黄连和吴茱萸的多个单体成分均显示
能够抑制结肠癌细胞株增殖和生长*+5+ $有报道称单
体成分的抑癌作用不及单味药提取物*+ ( 黄连5吴
茱萸!r组成茱萸丸$用于下痢水泻$现代临床主
要用于治疗炎症性疾病( 目前$黄连吴茱萸药对对
结肠癌癌前病变的作用尚不清楚( 本研究旨在观察
黄连吴茱萸配比 r 时对 I9J诱导的大鼠结肠癌
癌前病变的作用$并初步研究其对结肠肠腺内细胞
增殖和凋亡的影响(
!材料及方法
]!试剂与仪器!I9J$亚甲蓝!8RD0B公司)碱
性品红!中国医药上海化学试剂公司( 8BC@/CRWS电
子天平!德国)9Q@C/?0%&& AJ计!瑞士)FQR.B光
学显微镜!瑞士)OV60AWS相差倒置显微镜%OV605
AWS解剖显微镜!日本(
]!黄连吴茱萸水提物的制备!黄连%吴茱萸 + 味
药购自上海华宇药业有限公司$黄连 >
学中药研究所吴立宏博士鉴定( 黄连吴茱萸经水
煎%浓缩和冷冻干燥制成水提物(
]&!动物及分组!清洁级雄性 ZRS@BC大鼠$体重
+ j$ D$上海中医药大学动物实验中心提供$合
格证号 8
连吴茱萸 r 药对组%药对高剂量组%药对中剂量
组%药对低剂量组( 药对高%中%低剂量组分别用药
$f*$$f)$$f D-[D
d
(
]Y!4
[D
d的I9J经皮下注入大鼠的颈背$制作异常肠
腺病灶!4
动物数为 $ 个( I9J溶解于 + 00/V-Fd
HIN4m)% 00/V-F
d
;B
d
$AJ#f&(
]$!肠腺细胞增殖和凋亡试验!雄性ZRS@BC大鼠$
喂药 周后$按 )$ 0D-[Dd的 I9J经皮下注入大
鼠的颈背$ 周后注入第 + 次 I9J( 在第 + 次注入
-(-
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+$$ 年 月
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9B6$ +$$
I9J后 +&$&( ?$处死动物$观察药物对肠腺细胞增
殖和凋亡的影响(
][!测定经过细微分离获得的完整肠腺内凋亡细
胞和有丝分裂细胞的频率和空间分布!给药干预和
模型制备方法同肠腺细胞增殖和凋亡试验$在第 +
次注入I9J后 +&$&( ?$动物经腹腔注射 +g乌拉
坦!$f$ 0F-[Dd 麻醉$剖腹$取结肠$用 bCQ]S5
>R2DQC液清洗$测量结肠全长$以升结肠为起点$以
降结肠末端为终点( 在结肠的 g处和 *$g处$取
.0长的结肠一段$分别定为中段结肠%降结肠标
本$所有标本的厚度为 $f .0$行 EWQVDQ2 染色*#+ (
去肌层$用微细的分针分离肠腺$在光学显微镜
! i&$$下$计算每条肠腺中凋亡核和有丝分裂核
的数目$每个动物随机地挑选 $ j+$ 条肠腺进行测
定( 每条肠腺的纵向长度从底部至开口处$被分成
$ 个等份$计算每个等份中的凋亡核和有丝分裂核
的数目(
]%!异变肠腺病灶!B]QCB2@.C6A@T/.R$4
液清洗$测量结肠全长$步骤同 ][( 沿着纵轴剪开
整段结肠$使黏膜面朝上$$g中性福尔马林固定$
随后行 $f+g甲基蓝染色( 光镜! i&$下观察4
$
8k$表示( 采用
/2Q5,B64;O\4检验( 9l$f$ 表示有统计学
意义(
!结果
]!黄连吴茱萸药对水提物对 I9J诱发大鼠结
肠上皮增殖的影响!饲养 +&$&( ?$I9J组动物中
结肠肠腺内细胞增殖指数较正常动物分别增加了
f#$+f$ 倍$药对组较 I9J组动物中结肠肠腺内
细胞增殖指数分别降低了 #(f+g$%f#g)I9J组
动物降结肠肠腺内细胞增殖指数较正常动物分别增
加了 )$f%+ 倍$药对组较 I9J组动物降结肠肠腺
内细胞增殖指数分别降低了 #(f*g$&(f#g!表 (
进一步分析中段结肠和远段结肠肠腺腺窝增殖核的
空间分布$发现在中段结肠和远段结肠用 I9J处
理后 +& ?$腺窝增殖核明显增加$主要分布在腺窝开
口到底部的 j# 的分区$增殖核增加最集中的部位
在 + j) 分区( 应用黄连吴茱萸药对处理后$由
I9J刺激造成的肠腺增殖明显减少(
表 !黄连吴茱萸药对对大鼠结肠单个肠腺细胞增殖的影响!
$
8k$$-e
组别
中结肠=个 降结肠=个
+& ? &( ? +& ? &( ?
正常 -*# k$-&# -%+ k$-+# -& k$-)) -# k$-(
I9J -$
k$-++
+
-+& k$-#
+
&-# k$-)&
+
&-+& k$-%)
+
药对 -#+
k$-+#
)
+-++ k$-+)
)
-&+ k$-)
)
+-( k$-++
)
!!注#与正常组比较9l$f$$+9l$f$)与I9J组比较)9l$f$!表 + 同(
]!黄连吴茱萸药对水提物对I9J诱发大鼠结肠
上皮凋亡的影响!饲养 +&$&( ?$I9J组动物中结肠
肠腺内细胞凋亡数较正常动物无明显差异$药对组较
I9J组动物中结肠肠腺内细胞凋亡数明显增加)
I9J组动物降结肠肠腺内细胞凋亡数较正常动物明
显增加$药对显著促进I9J组动物降结肠肠腺内细
胞的凋亡!表 +( 进一步分析中段结肠和远段结肠
肠腺腺窝凋亡核的空间分布$发现在中段结肠和远段
结肠在用I9J处理后 +& ?$腺窝凋亡核明显增加$主
要分布在腺窝开口到底部的 j 的分区$凋亡核增
加最集中的部位在 + j)分区( 应用黄连吴茱萸药对
处理后$能明显促进凋亡核的增加( 根据中段结肠和
远段结肠肠腺腺窝的增殖和凋亡的空间分布比较来
看$增殖和凋亡具有相同的空间分布(
表 +!黄连吴茱萸药对对大鼠结肠单个肠腺细胞凋亡的影响!
$
8k$$-e
组别
中结肠=个 降结肠=个
+& ? &( ? +& ? &( ?
正常 -+& k$-++ -++ k$-) $-(# k$-+) -$ k$-&
I9J -++ k$-) -&# k$-+ -&$
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药对
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]&!黄连吴茱萸药对抑制大鼠结肠癌癌前病变
!4
!表 )(
表 )!黄连吴茱萸药对抑制大鼠结肠癌癌前病变的作用
组别 - 剂量=D-[Dd 4
I9J $ d )%f% k+f#
药对 $ $f ))f& k)f%
* $f)
#f% kf+
* $f*
f# kf
!!注#与I9J组比较9l$f$(
&!讨论
自MRCU >G首次提出 4
指标$具有抑制4
诱导的结肠癌癌前病变的作用( 本研究证明黄连%
吴茱萸具有剂量依赖性抑制二甲肼所致的异变肠腺
病灶!4
细胞增生的失调和细胞凋亡降低是肿瘤细胞永
生化和肿瘤形成的 + 个重要环节$本研究采用肠腺
微分离技术考察 I9J诱导的大鼠结肠肠腺内细胞
增殖和凋亡动力学变化并研究黄连吴茱萸药对对大
鼠结肠肠腺内细胞增殖和凋亡动力学的影响( 研究
结果表明$致癌剂二甲肼能够促进大鼠结肠黏膜上
皮增殖$黄连吴茱萸药对有抑制二甲肼所致的结肠
黏膜上皮增殖( 在促进凋亡方面$发现黄连吴茱萸
药对具有明显的促进结肠上皮凋亡的作用(
肠腺细胞增生由位于腺体基部大干细胞起始$
增殖旺盛的肠腺细胞上行并多于腺体中下部出现(
在正常黏膜$凋亡细胞即使出现亦为鲜见$I9J诱
导后$凋亡细胞有所增加$这可能是机体为维持增殖
和凋亡相对平衡的负反馈机制导致的( 而且$I9J
诱导的肠腺细胞增殖和凋亡增加具有空间分布选择
性$主要分布在腺窝开口到底部的 j# 分区$增殖
核增加最集中的部位在 + j) 分区( 黄连吴茱萸药
对干预后$对细胞增殖的抑制和细胞凋亡的促进都
集中在肠腺的中下部$提示$黄连吴茱萸药对对细胞
增殖和凋亡动力学的影响具有空间选择性$这与
I9J诱导后$细胞增殖和凋亡动力学变化是一
致的(
黄连吴茱萸药对抑制 I9J诱导的大鼠结肠
4
殖和凋亡动力学的影响可能具有空间选择性(
本研究首次提出应用黄连吴茱萸药对治疗结肠
癌的前景$为今后将黄连吴茱萸药对研发成新型
的抗结肠癌和其他肿瘤例如食道癌%胃癌等的药
物提供数据支持(
$参考文献%
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>?RY/0BBUR78.W@QVBCRBQ/2 BY/760Q@?B2Q5R2UW.QU
B]QCB2@.C6A@T/.RT/C0B@R/2 R2 CB@./V/2*X+fMR/VG?BC0MWV$
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*++!EW[WUBb$ JR]R6BK$ 9W@/? 9$ Q@BVf:2?R]R@R/2 ]6]QC]QCR2Q/T
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$责任编辑!张宁宁%
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