全 文 ：ＲＰＨＰＬＣ同时测定天麻中４种成分的含量
闫宝庆，张晖芬，逄楠楠，陈晓辉，于治国，毕开顺
（沈阳药科大学 药学院，辽宁 沈阳 １１００１６）
［摘要］ 目的：建立 ＲＰＨＰＬＣ同时测定天麻药材中天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛的含量。方法：采用
ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），以甲醇０１％醋酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ
－１，检测波长
２７０ｎｍ，柱温３５℃。结果：天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛分别在１９１～３８３（ｒ＝０９９９９），０６２０～１２４（ｒ＝
０９９９９），２４５～４９０（ｒ＝０９９９９），０２８０～５６３ｍｇ·Ｌ－１（ｒ＝０９９９６）与峰面积线性关系良好；平均加样回收率（ｎ＝９）均在
９６７％～９７７％，ＲＳＤ均小于１６％。结论：本法准确可靠，分离度好，适用于天麻药材中天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟
基苯甲醛的含量测定。
［关键词］ 天麻；ＲＰＨＰＬＣ；同时含量测定
［收稿日期］ ２００９０６０６
［通讯作者］ 毕开顺，博士，教授，Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６２９６，Ｅｍａｉｌ：ｂｉ
ｋａｉｓｈｕｎ＠ ｙａｈｏｏ．ｃｏｍ
［作者简介］ 闫宝庆，硕士研究生，Ｔｅｌ：（０２４）２３９８６２９６，Ｅｍａｉｌ：
ｙｂｑｙｙ１２３＠１６３．ｃｏｍ
天麻 Ｒｈｉｚｏｍａｇａｓｔｒｏｄｉａｅ为兰科植物天麻 Ｇａｓｔ
ｒｏｄｉａｅｌａｔａＢｌ．的干燥块茎，性平，味甘，具平肝息风
止痉之功效，用于治疗头痛眩晕、肢体麻木、小儿惊
风、癫痫抽搐、破伤风等症［１］，主要分布于云南、四
川、陕西、湖北、河南、吉林和西藏等地。天麻主要含
有酚类、有机酸类、含氮类、甾醇及多糖类化合
物［２］，其中天麻素、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛
等酚类化合物通常被认为是天麻的活性成分［３４］，王
莉等研究发现腺苷与天麻的药效作用相吻合，推断
其为天麻的活性成分之一［５］。《中国药典》２００５年
版（一部）天麻含量测定项下，仅对天麻素做了相关
规定，现有的对天麻进行质量控制的文献报道也主
要是依据天麻中天麻素和对羟基苯甲醇［６］的含量。
为更加客观、全面的评价天麻质量，对其进行质量控
制，本研究建立了４种成分同时测定的ＨＰＬＣ方法，
并对不同产地的天麻药材进行了含量分析。
１ 仪器与试药
岛津ＬＣ１０ＡＴ型高效液相色谱仪，ＳＰＤ１０Ａ型
紫外检测器，Ａｎａｓｔａｒ色谱工作站；ＡＢ１３５Ｓ型电子
分析天平（瑞士ＭｅｔｌｅｒＴｏｌｅｄｏ公司）；ＲＥ５２型旋转
蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）。
天麻素对照品（本实验室提供，纯度＞９８０％）、
腺苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号１１０８７９
２００２０２，纯度＞９８０％），对羟基苯甲醇和对羟基苯甲
醛对照品（均为沈阳药科大学药物化学实验室提供，
纯度＞９８０％），上述对照品纯度均采用 ＨＰＬＣ峰面
积归一化法计算；甲醇、乙腈（色谱纯，山东禹王化学
试剂厂），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯。
收集了１２批不同产地的天麻药材，经沈阳药科
大学药用植物教研室孙启时教授鉴定，为兰科植物
天麻Ｇ．ｅｌａｔａ的干燥块茎。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件及系统适应性试验 ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８色
谱柱（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相 Ａ甲醇，Ｂ
０１％醋酸水溶液；线性梯度洗脱程序：０～３０ｍｉｎ，
３％～５％ Ａ；３０～３５ｍｉｎ，５％～２０％ Ａ；３５～５５ｍｉｎ，
２０％～２５％ Ａ；流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１；检测波长２７０
ｎｍ；柱温３５℃；进样量２０μＬ。
在上述色谱条件下，天麻素、腺苷、对羟基苯甲
醇和对羟基苯甲醛理论塔板数均不低于１万，分离
度与拖尾因子均符合含量测定要求。对照品和天麻
样品（山东产）色谱图见图１。
２．２ 对照品溶液的制备 分别精密称取对照品天
麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛适量，置
同一２５ｍＬ量瓶中，加１０％甲醇适量使溶解并稀释
至刻度，摇匀，得质量浓度分别为３８３，１２４，４９０，
５６３ｍｇ·Ｌ－１的混合对照品溶液。
２．３ 供试品溶液的制备 取本品药材粉末（过４０
目筛）约０５ｇ，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入
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１．天麻素；２．腺苷；３．对羟基苯甲醇；４．对羟基苯甲醛。
图１ 对照品（Ａ）和天麻样品（山东产）（Ｂ）的高效液相色谱图
蒸馏水２０ｍＬ，称定质量，加热回流提取１ｈ，放冷再
称定质量，用蒸馏水补足减失的质量，离心。精密量
取上清液５ｍＬ于烧杯中，加入甲醇约２０ｍＬ，振摇３
ｍｉｎ至白色絮状沉淀产生完全，离心。上清液浓缩
至近干，残渣加 １０％甲醇溶解，转移至 ５ｍＬ量瓶
中，并用１０％甲醇稀释至刻度，摇匀，经０４５μｍ微
孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
２．４ 线性关系考察 分别精密量取混合对照品溶
液０５，１０，２５，４０，５０，１００ｍＬ置１０ｍＬ量瓶
中，加１０％甲醇稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的
系列混合对照品溶液。在上述色谱条件下进行分
析，以峰面积Ｙ对浓度Ｘ（ｍｇ·Ｌ－１）绘制标准曲线，
得天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛的回
归方程分别为：Ｙ＝１３１×１０３Ｘ－２９３×１０３，ｒ＝
０９９９９；Ｙ＝１９９×１０４Ｘ－６１７×１０３，ｒ＝０９９９９；Ｙ＝
６６０×１０３Ｘ－４５９×１０３，ｒ＝０９９９９；Ｙ＝４５５×１０４
Ｘ－７７３×１０３，ｒ＝０９９９６。
结果表明天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基
苯甲醛分别在 １９１～３８３，０６２０～１２４，２４５～
４９０，０２８０～５６３ｍｇ·Ｌ－１线性关系良好。
２．５ 精密度试验 取同一混合对照品溶液，在上述
色谱条件下连续进样６次，记录各自峰面积，计算天
麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛峰面积的
ＲＳＤ分别为 ０５％，０５％，０５％，１８％，表明本法
精密度良好。
２．６ 重复性试验 精密称取天麻（山东产）粉末
０５ｇ，按２３项下方法平行制备６份供试品溶液，
在上述色谱条件下进行分析，计算含量。天麻素、腺
苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛含量的ＲＳＤ分别
为２５％，２１％，２０％，２９％。
２．７ 稳定性试验 取同一份供试品溶液，室温放
置，分别在０，３，５，８，１２，２４ｈ进样分析，记录各自峰
面积，天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛
峰面积的 ＲＳＤ分别为１４％，１９％，１０％，１８％，
表明供试品溶液在２４ｈ内稳定。
２．８ 加样回收率试验 称取已知含量的天麻（山
东产）粉末 ９份，３份为一组，每份 ０２５ｇ，精密称
定。分别精密加入对照品适量，按２３项下方法制
成低、中、高３个浓度的供试品溶液，进样分析。天
麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对羟基苯甲醛平均回收
率（ｎ＝９）结果见表１。
２．９ 样品含量测定 分别称取各产地天麻药材粉
末（过４０目筛）约０５ｇ，精密称定，按２３项下方法
制备供试品溶液，在上述色谱条件进行分析，采用外
标法以峰面积计算天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和对
羟基苯甲醛的含量，结果见表２。
３ 讨论
比较了甲醇水，甲醇００５％磷酸水，甲醇
０１％醋酸水等流动相系统，所得色谱图表明，以甲
醇０１％醋酸水为流动相洗脱时，所测成分色谱峰
分离度较好。分别对所测 ４种成分对照品溶液在
紫外２００～４００ｎｍ进行扫描，结果表明天麻素和对
羟基苯甲醇在 ２７０ｎｍ处有最大吸收；腺苷在 ２５６
ｎｍ处有最大吸收；对羟基苯甲醛在２８０ｎｍ处有最
大吸收。综合考虑，在波长２７０ｎｍ条件下进行测
定，各成分均能得到较好的响应值。
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表１ ４种成分的加样回收率（ｎ＝９）
化合物
样品中
量／μｇ
加入量
／μｇ
测得量
／μｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
天麻素 １１９４３ ６０００ １７７９１ ９７５ ９７７ １２
１１９５２ ６０００ １７８９８ ９９１
１１９４８ ６０００ １７７２１ ９６２
１１９４３１２０００ ２３８１５ ９８９
１１９６２１２０００ ２３５４６ ９６５
１１９４３１２０００ ２３７１９ ９８１
１１９４８１８０００ ２９７８４ ９９１
１１９４８１８０００ ２９５３２ ９７７
１１９５２１８０００ ２９２８１ ９６３
腺苷 ２９１ １８０ ４６５ ９６７ ９６７ １３
２９１ １８０ ４６４ ９６１
２９１ １８０ ４６２ ９５０
２９１ ３００ ５８９ ９９３
２９２ ３００ ５８２ ９６７
２９１ ３００ ５８１ ９６７
２９１ ４２０ ６９１ ９５２
２９１ ４２０ ７０１ ９７６
２９１ ４２０ ６９８ ９６９
对羟基苯甲醇 １０００ ５００ １４８８ ９７６ ９７０ １６
１００１ ５００ １４９４ ９８６
１００１ ５００ １４７６ ９５０
１０００ １０００ １９５１ ９５１
１００２ １０００ １９８４ ９８２
１０００ １０００ １９６６ ９６６
１００１ １４４０ ２４１０ ９７９
１００１ １４４０ ２４２４ ９８８
１００１ １４４０ ２３７７ ９５６
对羟基苯甲醛 ２００ １００ ２９６ ９６０ ９６８ １４
２００ １００ ２９９ ９９０
２００ １００ ２９５ ９５０
２００ ２００ ３９１ ９５５
２００ ２００ ３９２ ９６０
２００ ２００ ３９７ ９８５
２００ ３００ ４８８ ９６０
２００ ３００ ４９０ ９６７
２００ ３００ ４９５ ９８３
在供试品溶液制备过程中，分别对提取溶剂
（甲醇、乙醇、蒸馏水以及不同比例的甲醇水、乙醇
水溶液）、提取方式（超声、加热回流）进行了考察，
结果表明用４０倍量的蒸馏水回流提取１ｈ为最佳
提取条件。采用蒸馏水回流提取时，提取液中因含
有较多多糖类物质较为黏稠，为去除多糖类化合物
对含量测定的干扰，在供试品溶液制备过程中，加入
表２ 不同产地天麻药材中天麻素、腺苷、对羟基苯甲醇和
对羟基苯甲醛的质量分数（ｎ＝３） μｇ·ｇ－１
药材来源 天麻素 腺苷 对羟基苯甲醇 对羟基苯甲醛
贵州 ５９７１ １４１９ ４５３９ ３３９６
重庆 ６５０５ ６６０７ ４９８３ ５１８９
长春 ３１０１ ３１１４ １２３８ １８６８
新疆 ７４２８ １７３３ ５０１７ ６７１０
沈阳 ６９１３ ９９４５ ４１３６ ５９０６
哈尔滨 ９４９５ ９１５９ ５１０７ ５２９４
吉林 ５２５８ ２７９２ ５２８８ ６０１７
河南 ８３３３ １６２３ ５６３４ ６２９７
陕西 １８１０ １２０４ ２６５９ ３８６５
四川 １１４３×１０４ ８１５７ ４２５４ ６０６９
云南 １９６９ ４０３８ １３６５ ５０８４
山东 ４７７５ １１６４ ４００１ ７９９４
甲醇作为多糖沉淀剂。
目前关于天麻药材质量控制方法《中国药典》
２００５年版（一部）仅以天麻素作为质量控制指标，但
中药发挥其药效作用主要是其多个成分的协同作
用，以某一单一成分作为质量控制指标的方法不能
全面的评价其质量。本实验所建立的对４种成分进
行含量测定的 ＨＰＬＣ方法，为完善天麻的质量控制
方法提供依据。
［参考文献］
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上海：上海科学技术出版社，１９９９：７１６．
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进展［Ｊ］．药品评价，２００５，２（４）：３０９．
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ＧａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａＢｌ．ｉｓａｃｔｉｖｅｉｎｔｈｅａｎｔｉｏｘｉｄａｔｉｏｎａｎｄＧＡＢＡｅｒｇｉｃ
ｎｅｕｒｏｍｏｄｕｌａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｒａｔｂｒａｉｎ［Ｊ］．ＪＥｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ，２０００，
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ＳｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＧａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａｂｙ
ＲＰＨＰＬＣ
ＹＡＮＢａｏｑｉｎｇ，ＺＨＡＮＧＨｕｉｆｅｎ，ＰＡＮＧＮａｎｎａｎ，ＣＨＥＮＸｉａｏｈｕｉ，ＹＵＺｈｉｇｕｏ，ＢＩＫａｉｓｈｕｎ
（ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｙ，ＳｈｅｎｙａｎｇＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００１６，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｄｅｖｅｌｏｐａｒｅｖｅｒｓｅｄｐｈａｓｅＨＰＬＣｍｅｔｈｏｄｆｏｒｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇａｓｔｒｏｄｉｎ，ａｄｅｎｏｓｉｎ，４
ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌａｎｄ４ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅｉｎＲｈｉｚｏｍａＧａｓｔｒｏｄｉａ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＡＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×２５０ｍｍ，５
μｍ）ｗａｓｕｓｅｄｗｉｔｈａｍｅｔｈａｎｏｌｗａｔｅｒ０１％ ａｃｅｔｉｃａｃｉｄｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍ．Ｔｈｅｅｌｕａｔｅｓｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄａｔ２７０ｎｍ，ｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ
１０ｍＬ·ｍｉｎ－１ａｎｄｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３５℃．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｌｉｎｅａｒｒａｎｇｅｏｆｇａｓｔｒｏｄｉｎ，ａｄｅｎｏｓｉｎ，４ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌａｎｄ
４ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅｗｅｒｅ１９１３８３（ｒ＝０９９９９），０６２０１２４（ｒ＝０９９９９），２４５４９０（ｒ＝０９９９９），０２８０５６３ｍｇ·Ｌ－１
（ｒ＝０９９９６），ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ（ｎ＝９）ｏｆｔｈｅｆｏｕｒｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｗｅｒｅ９６７％９７７％，ＲＳＤ＜１６％．Ｃｏｎｃｌｕ
ｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｉｓａｃｃｕｒａｔｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅａｎｄｒｅｌｉａｂｌｅｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｇａｓｔｒｏｄｉｎ，ａｄｅｎｏｓｉｎ，４ｈｙｄｒｏｘｙｂｅｎｚｙｌａｌｃｏｈｏｌａｎｄ４ｈｙｄｒｏｘｙ
ｂｅｎｚａｌｄｅｈｙｄｅｉｎＲｈｉｚｏｍａＧａｓｔｒｏｄｉａ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｇａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａ；ＲＰＨＰＬＣ；ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ
［责任编辑 王亚君］
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