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Qualities of Whitmania pigra in different-month-age and best harvest time

不同月龄蚂蟥内在品质及最佳采收期研究



全 文 :不同月龄蚂蟥内在品质及最佳采收期研究
史红专1,郭巧生1,陆树松2,李辉1
(1南京农业大学 中药材研究所,江苏 南京,210095
2桐乡市河山欣龙特种水蛭养殖中心,浙江 桐乡,314512)
[摘要] 目的:比较不同月龄蚂蟥内在品质及生长的差异,为其药材质量控制及最佳采收期的确定提供理论依据。方
法:水分、醇溶性浸出物、总灰分、酸不溶性灰分、抗凝血酶活性测定都参考2005年版《中国药典》;结果:各月龄采集的蚂蟥其
品质均符合国家药典标准,其中醇溶性浸出物含量以9月龄蚂蟥最高,6月龄的其次,而且9月龄蚂蟥与4月龄、7月龄、11月
龄的蚂蟥有显著性差异(P<005);抗凝血酶活性含量以6月龄蚂蟥最高,10月龄其次,而且6月龄与4月龄、5月龄有显著
性差异(P<005),与其他月龄无显著性差异;6月龄的蚂蟥干重最高,与其他月份采集的有显著性差异(P<005)。结论:江
浙一带人工养殖的蚂蟥最佳采收期为11月份(即6月龄)。
[关键词] 蚂蟥;水蛭;不同月龄;内在品质;采收期
[收稿日期] 20090925
[基金项目] 国家“十一五”科技支撑项目(2006BAI06A159);浙
江省重点科研社会发展项目(2007C23029)
[通信作者]  郭巧生 ,Tel:(025)84396591;Email:gqs@
njaueducn
  水蛭科动物蚂蟥WhitmaniapigraWhitman的干
燥全体是2005年版《中国药典》收录的药材水蛭主
要基原之一,具有破血,逐瘀,通经等功效[1],是疏
血通、脑血康等众多治疗心脑血管疾病中成药的主
要原料。由于蚂蟥个体大生长速度快,近年来随着
对其生理特性等方面的深入研究[23],其人工养殖已
取得了初步成功,减缓了市场需求与水蛭药材供给
量之间的矛盾。但对药材生产而言,药材质量不容
忽视。药材质量的优劣与以其为原料的药品质量的
好坏紧密相关,尤其是对于以其为主要原料的注射
剂,稳定的药材质量显得尤为突出。作为生物体,蚂
蟥在不同生长期内体内代谢物质含量不尽相同,这
直接影响到不同采收期蚂蟥药材的品质。目前虽然
蚂蟥的人工养殖已取得初步成功,但有关不同月龄
蚂蟥内在品质的研究至今未见报道,因此,本研究根
据2005年版《中国药典》对水蛭内在品质的规定,
选取抗凝血酶活性等多种成分指标,对不同月龄蚂
蟥内在品质进行研究,同时结合不同月龄蚂蟥的生
长状况,为蚂蟥最佳采收期的确定提供理论依据。
1 材料
11 药材 水蛭样品分别于 2007年 9~12月、
2008年2~4月(每月20日采样)采自浙江省桐乡
水蛭养殖基地同一个水蛭网箱中,共7个月龄(1月
份南方地区大面积雨雪灾害,故未取样),水蛭3~4
月产卵,5月孵化,6月为1月龄。经南京农业大学
郭巧生教授鉴定为蚂蟥Wpigra。将采集的活体水
蛭(体重为G1),然后放于通风干燥箱中,50℃干燥
24h后(体重为 G2),放入打粉机中粉碎,过40目
筛,放入试剂瓶中干燥闭光保存。
12 仪器和试剂 756CRT紫外分光光度计(上海
精密科学仪器有限公司),FA1104分析天平(上海
精科天平),KQ250B超声仪(昆山市超声仪器公
司)。凝血酶40U·g-1及牛纤维蛋白原(Sigma公
司)。
2 方法
21 抗凝血酶活性的测定 按2005年版《中国药
典》方法测定[1]。取本品粉末约1g,加入09%氯
化钠溶液5mL充分搅拌,浸提30min,并时时振摇,
离心,精密量取上清液100μL,置试管(10mm×100
mm)中,加入含05%牛纤维蛋白原(以凝固物计)
的三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(取02mol·L-1
三羟甲基氨基甲烷25mL与01mol·L-1盐酸溶液
约40mL,加水至100mL,调节 pH至74)200μL
摇匀,置水溶液(37±05)℃中缓缓滴加每1mL中
含40单位的凝血酶溶液(每分钟5μL,边滴加边轻
轻摇匀)至凝固,记录消耗凝血酶溶液的体积,按下
式计算U=C1V1/C2V2W,其中 U为每1g含凝血酶
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活性单位(U·g-1),C1为凝血酶溶液的质量浓度
(mg·L-1),C2为供试品溶液的浓度(g·mL
-1),V1
为消耗凝血酶的体积(μL),V2为供试品加入量
(μL),W为取样量。
22 醇溶性浸出物测定 按 2005年版《中国药
典》一部附录ⅩA醇溶性浸出物测定法测定[1]。
23 总灰分测定法 按2005年版《中国药典》一
部附录ⅨK方法测定[1]。
24 酸不溶性灰分测定法[1] 取上项所得灰分,在
坩埚中小心加入稀盐酸约10mL,用表面皿覆盖坩
埚,置水浴上加热10min,表面皿用热水5mL冲洗,
洗液并入坩埚中,用无灰滤纸滤过,坩埚内的残渣用
水洗于滤纸上,并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。
滤渣连同滤纸移置同一坩埚中,干燥,炽灼至恒重。根
据残渣质量计算供试品中酸不容性灰分的百分含量。
25 水分含量测定 按2005年版《中国药典》一
部附录ⅨH水分测定第一法测定[1]。
26 折干率的测定 水蛭折干率 =鲜重(G1)/干
重(G2)
27 统计方法 实验数据采用 Excel2003,SPSS
115软件进行统计处理。
3 结果与分析
31 不同月龄蚂蟥体重及折干率的变化 不同月
龄蚂蟥体重及折干率的变化见表1。
表1 不同月龄蚂蟥体重与折干率的变化(珋x±s,n=50)
采集日期 月龄 G1/g/条 G2/g/条 折干率/%
200709 4 8.65±1.62d 1.00±0.18a 8.65
200710 5 17.70±2.64b 2.73±0.41d 6.47
200711 6 20.0.±1.75a 3.00±0.26e 6.67
200712 7 17.71±2.13b 2.80±0.34de 6.32
200802 9 12.53±2.22c 2.12±0.37b 5.91
200803 10 11.71±1.62c 2.31±0.32bc 5.07
200804 11 11.82±1.80c 2.42±0.37c 4.89
  注:差异显著性分析取 α=0.05水平,同一规格大小的同一列中不含有相同字母者为差异显著。
  从表1可以看出蚂蟥鲜重在11月份采集的个
体最大,体重显著大于其他月龄(P<005);9月份
采集的个体最小,体重显著小于其他月龄(P<
005);2~4月份采集的蚂蟥虽以2月份的体重最
高,但个体之间无显著性差异。
蚂蟥干重整体变化与鲜重一致,只是2~4月份
采集的蚂蟥以4月份的干重最高,且4月份与2月
份采集的蚂蟥干重存在显著性差异(P<005)。
折干率9月份(4月龄)采集时最大,4月份(11
月龄)采集时最小。
32 不同月龄药材水蛭水分、灰分、浸出物含量
以及抗凝血酶活性的比较 不同月龄药材水蛭
水分、灰分、浸出物含量以及抗凝血酶活性的变
化见表2。
表2 不同月龄药材水蛭水分、灰分、浸出物含量以及抗凝血酶活性(珋x±s,n=3)
采集日期 月龄
水分
/%
醇溶性浸出物
/%
总灰分
/%
酸不溶性灰分
/%
抗凝血酶活性
/U·g-1
200709 4 9.43±1.49a 19.01±3.10b 6.11±0.09a 0.58±0.08cd 23.33±1.15b
200710 5 9.55±0.26a 22.69±0.22ab 5.59±0.11b 0.62±0.05c 23.35±1.15b
200711 6 10.03±0.09a 24.32±0.03ab 4.65±0.06c 0.53±0.01cd 28.67±1.15a
200712 7 9.81±0.06a 21.47±5.39b 4.84±0.06c 0.50±0.01d 27.32±1.15a
200802 9 9.72±0.16ac 27.67±0.07a 4.57±0.08c 0.58±0.02d 27.32±1.15a
200803 10 10.82±0.06a 22.07±0.36ab 4.51±0.08c 0.89±0.04b 28.66±1.16a
200804 11 10.00±0.07a 19.85±0.14b 4.47±0.52c 1.34±0.24a 27.32±1.15a
  注:差异显著性分析取 α=0.05水平,同一规格大小的同一列中不含有相同字母者为差异显著。
  从表2可以看出4~11月龄的药材水蛭各项指
标都符合2005年版药典的要求。水分含量各组别
无显著差异;醇溶性浸出物含量为 9月龄 >6月
龄>5月龄>10月龄 >7月龄 >11月龄 >4月龄,
其中9月龄与4,7,11月龄之间有显著性差异(P<
005),其余组别之间无显著性差异;总灰分含量4
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月龄>5月龄 >6月龄 >7月龄 >9月龄 >10月
龄>11月龄,4,5月龄与其他月龄之间有显著性差
异(P<005);酸不溶性灰分以11月龄最高且与其
他组别之间有显著性差异(P<005),9月龄最低且
与其他组别之间有显著性差异(P<005);抗凝血
酶活性6月龄最高,4月龄最低,其中6,7,9~11月
龄之间无显著性差异,4月龄和5月龄之间无显著
性差异,而4,5月龄与6,7,9~11月龄之间差异性
显著(P<005)。
4 讨论
41 不同月龄蚂蟥内在品质的变化 从本研究
结果可以看出,各月龄采集的蚂蟥其水分、总灰
分、酸不溶性灰分的含量均低于 2005年版药典
指标,醇溶性浸出物和抗凝血酶活性含量均高于
2005年版《中国药典》指标,说明人工养殖的蚂
蟥作为药材其质量符合药典要求。其中醇溶性
浸出物的变化与抗凝血酶活性的含量有一定的
相关性,说明醇溶性浸出物中可能含有抗凝血成
分,这点有待今后进一步研究。总灰分是指中药
材经加热炽灼灰化遗留下的无机物,仅含有一定
量的无机盐,酸不溶性灰分主要为不溶于稀盐酸
的砂石、泥土、石灰粉等硅酸盐类化合物。本研
究结果显示随着月龄的增加,总灰分呈由高到低
的变化趋势,酸不溶性灰分基本呈递增趋势,这
可能与蚂蟥从 11月下旬开始一直生活在泥里,
取样时易沾染上泥土等杂质有关。
42 不同月龄蚂蟥体重及折干率的变化 蚂蟥
是雌雄同体的软体动物,目前江浙一带人工养殖
蚂蟥,一般在 3~4月份开始让蚂蟥交配产卵,
4~5月份进行人工孵化,6月份将刚孵化的蚂蟥
幼苗放在幼苗养殖池养殖一个月,6月底或 7月
初将幼苗放到水蛭养殖池进行规模化养殖。蚂
蟥是变温动物,适宜生长的温度为15~25℃,在
这个范围内,随着温度的升高其饱食量和摄食率
明显增加[3],7~8月份的水温基本符合蚂蟥生
长的要求,而 9~10月份水温最适宜其生长,所
以在此期间其生长最快,11月份上旬温度基本符
合其生长要求,到 11月下旬开始气温一般会低
于15℃,蚂蟥摄食减弱,生长缓慢,进入 12月
份,蚂蟥开始冬眠,不再进食,只是钻入水下泥土
中靠皮肤呼吸和吸收一些营养进行代谢,直到 3
月份,气温开始回升至15℃以上时,蚂蟥又开始
进食,准备交配产卵。从本实验的结果来看也符
合蚂蟥的这一生理特性,从 10月份开始蚂蟥体
重增加,11月份最高,12月份开始体重反而下
降,3月份开始体重又有所回升。同时折干率也
符合这一特性,9月份折干率最高,说明此时蚂蟥
体内水分含量高,生长最快,11月份开始折干率
逐渐下降,说明蚂蟥生长旺盛期渐过,体内水分
含量逐渐减少。
43 蚂蟥最佳采收期的确定 首先考察内在品质,
根据药典规定,醇溶性浸出物和抗凝血酶活性代表
了药材水蛭主要活性成分的含量,本研究结果显示
从各月龄采集的蚂蟥其品质均符合国家药典标准,
都可以入药。其中醇溶性浸出物含量以2月份(9
月龄)最高,11月份(6月龄)其次;抗凝血酶活性含
量以 11月份(6月龄)采集的最高,3月份(10月
龄)其次;如果仅从这两个指标上,初步可以筛选出
11月份(6月龄)、2月份(9月龄)、3月份(10月龄)
采集的蚂蟥活性成分含量较高。
其次从蚂蟥的产量和经济效益上考察,蚂蟥干
重的高低代表了产量的高低,本研究结果显示11月
份采集的蚂蟥干重最高,12月份其次,11月份比12
月份每条蚂蟥干重相差02g,若每亩以常规密度4
万条计,则每亩至少可增产8kg。
再者江浙一带从11月下旬开始便开始进入冬
季,气温普遍低于10℃,常常伴有阴雨天气,如果采
收期延后,一方面增加了采收及管理成本;另一方面
不利于蚂蟥的晾晒和储存,造成发霉、腐烂等,影响
了药材质量,造成不必要的浪费;此外本研究结果显
示从11月开始水蛭基本生活在泥土中进行冬眠,身
上容易附着泥土等杂质,造成酸性不溶性灰分含量
的增加,从而影响药材质量。
综合上述诸多因素,无论从药材质量还是经济
效益上来讲江浙一带人工养殖的蚂蟥其最佳采收期
应该为11月份。
[参考文献]
[1] 中国药典一部[S]2005:57,附录20
[2] 史红专,刘飞,郭巧生宽体金线蛭耗氧率与窒息点的初步研
究[J]中国中药杂志,2005,30(23):1817
[3] 史红专,刘飞,郭巧生温度对蚂蟥生长及摄食规律影响的初
步研究[J]中国中药杂志,2006,31(23):1944
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QualitiesofWhitmaniapigraindiferentmonthageand
bestharvesttime
SHIHongzhuan1,GUOQiaosheng1,LUShusong2,LIHui1
(1InstituteofChinesemedicinalmaterials,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing210095,China)
2HeshanXinlongSpecialLeechBreedingCenter,Tongxiang314512,China)
[Abstract] Objective:DynamicchangesofqualityandgrowthofWhitmaniapigrawereinvestigatedtoprovidetheoreticalbasis
forqualitycontrolanddeterminationofoptimalharvesttimeMethod:Thecontentsofmoisture,ethanolsolubleextractive,totalash,
andacidinsolubleash,aswelasantithrombinactivityweredeterminedaccordingtoChinesepharmacopoeia(2005edition)Result:
QualitiesofWpigracolectedfromdiferentgrowthstagesmetthestandardsofChinesepharmacopoeia(2005edition)Thehighest
amountofethanolsolubleextractwasfoundin9monthold,Wpigra,folowedby6monthagedonesAndtherewassignificant
diferencebetween9montholdand4monthold,7montholdand11monthold(P<005)Thehighestantithrombinactivitywasde
tectedin6montholdWpigra,folowedby10montholdSignificantdiferencesofantithrombinactivitywerefoundbetween6month
oldand4montholdones,and5monthold(P<005),however,therewerenosignificantdiferencebetween6montholdoneswith
othersamplesElevenmontholdWpigragotthemostdryweight,andthereweresignificantdiferencebetween11montholdones
withothersamples(P<005)Conclusion:November,namelyfor6montholdartificialcultivatedWpigrawasthebestharvest
timeinJiangsuandZhejiangprovinces
[Keywords] Whitmaniapigrawhitman;hirudo;monthages;internalquality;harvesttime
[责任编辑 王亚君]
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