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]
[1]
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[J]
$%rv23
,2002,5(4):257
[2]
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[J]
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,2007,18(27):2102
[3]
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[J]
$%$-,kï23
,2006,13(2):94
[4]
9èê
2 J+£¤,ø/0öþ
[J]
s-,
[
,2007,23(12):1812
[5] SeraK,QingR,AdamP,etalDiferentialradiationsensitiza
tionofhumancervicalcancercellinesbytheproteasomeinhibi
torvelcade(bortezomib,PS341)[J]ArchGynecolObstet,
2008,279(7):41
[6]
£5
,
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,
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,
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2
G¥
K562
$%
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[J]
$%,øE`
,2008,24
(7):964
[7] MosaddikMAInvitrocytotoxicityoftanshinonesisolatedfrom
SalviamiltiorhizaBungeagainstP388lymphocyticleukemiacels
[J]Phytomedicine,2003,10(8):682
[8]
VPH
,
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,
9è
,
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2
ⅡANCIH460rv$%
øyuæY\]ù
[J]
$,0
,2005,28(4):
301
[9] HuangX,HalickaHD,TraganosF,etalCytometricassess
mentofDNAdamageinrelationtocelcyclephaseandapoptosis
[J].CelProlif,2005,38(4):223
[10] DunneAL,MothersilC,RobsonT,etalRadiosensitizationof
coloncancercellinesbydocetaxd:Mechanismsofaction[J].
OncolRes,2004,14(9):447
[11] ChristaB,JoshK,YveteD,etalRadiosensitizationofcervical
cancercelsviadoublestrandDNAbreakrepairinhibition[J]
GynecolOncol,2008,11(10):93
[12] XueW,ZenderL,HernandoE,etalSenescenceandtumour
clearanceistriggeredbyp53restorationinmurinelivercarcinomas
[J]Nature,2007,445:656
[13] LiontasA,YegerHCurcuminandresveratrolinduceapoptosis
andnucleartranslocationandactivationofp53inhumanneuro
blastoma[J]AnticancerRes,2004,24(2):987
EfectsofcryptotanshinoneonproliferationandapoptosisofHela
cellineofcervicalcancer
YEYintao,XUWenqing,ZHONGWei
(InstituteofRadiationMedicine,ChineseAcademyofMedicalSciences,Tianjin
KeyLaboratoryofMolecularNuclearMedicine,Tianjin300192,China)
[Abstract] Objective:ToinvestigatetheproliferationefectsandapoptosisinductionofcryptotanshinoneonHelacellineof
cervicalcancerMethod:TheMTTassaywasusedtodetectthegrowthinhibitionratesofHelacelsat24,48,72hwhichcultured
withcryptotanshinoneindiferentconcentrationsThecelcycledistributionandapoptosisweremeasuredbyflowcytometryTheprotein
expressionsofE6,p53andp21werestudiedbyWesternblotResult:Thediferentconcentrations(0516mg·L-1)ofcryptotan
shinonehadcytotoxicityonHelacels,whichwereclearlydoseandtimedependentTheIC50of24,48,72hwere178,817,655
mg·L-1,respectivelyCelsweretreatedwithcryptotanshinonewhichhadsignificantefectsoncelcycleofHelacel,andinduced
apoptosisWesternblotshowedcryptotanshinonedecreasedexpressionsofHPVE6andincreasedexpressionsofp53andp21proteins
Conclusion:CryptotanshinonehadsignificantcytotoicandradiosensitizationefectsoncervicalcancerHelacelsOneofthemecha
nismmaybethatitmightmakesignificantG0/G1phasearestandinducedapoptosis,adecreaseinSphase,andrestorethefunctionof
p53toinduceapoptosisinHelacelstokilthetumorcel
[Keywords] cervicalcancer;Helacel;cryptotanshinone;apoptosis;proteinp53;proteinp21
doi:10.4268/cjcmm20100125
[
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