全 文 ：ＨＰＬＣ测定番泻叶中５种主要化学成分的含量
邬秋萍２，王祝举１，唐力英１，傅梅红１，赫 炎３，方 婧１，龚千锋２
（１．中国中医科学院 中药研究所，北京 １００７００；２．江西中医学院，江西 南昌 ３３０００６；
３．中国中医科学院 中医临床基础研究所，北京１００７００）
［摘要］ 目的：建立番泻叶中主要化学成分的含量测定方法。方法：采用 ＨＰＬＣ，ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８柱（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ），流动相乙腈１％冰醋酸梯度洗脱（１０∶９０～１５∶８５～１８∶８２～２０∶８０～２５∶７５），流速１ｍＬ·ｍｉｎ－１，柱温
４０℃，检测波长２７０ｎｍ。结果：５种化学成分均达到基线分离，各成分都有较宽的线性范围和良好的线性关系。结
论：本法快速、灵敏、准确，可靠，重复性好，可用于中药番泻叶药材的质量控制。
［关键词］ 番泻叶；番泻苷Ａ；番泻苷Ｂ；芹菜素６，８二Ｃ葡萄糖苷；异鼠李素３Ｏβ龙胆二糖苷；丁内未利葡
萄糖苷；ＨＰＬＣ；含量测定
［中图分类号］Ｒ２８４１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）０４０３６３０３
［收稿日期］ ２００７０１１０
［通讯作者］ 王祝举，Ｔｅｌ：（０１０）６４０１４４１１２９７５，Ｅｍａｉｌ：ｗａｎ
ｇｚｈｕｊｕ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
番泻叶为豆科植物狭叶番泻 Ｃａｓｉａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ
Ｖａｈｌ．或尖叶番泻 Ｃ．ａｃｕｔｉｆｏｌｉａＤｅｌｉｌｅ的干燥小叶，
具有泻热导致、通便利水之功效［１］。药理试验表明
番泻叶导泻作用的活性成分主要为番泻苷 Ａ，Ｂ，
Ｃ，Ｄ［２］。《中国药典》２００５年版一部［３］、《英国药
典》１９９８年版均采用紫外分光光度法，该方法经提
取、分离、水解等操作步骤，测得总番泻苷的含量，
整个过程需避光操作，操作过程较为复杂繁琐，操
作条件要求苛刻。日本药局方中，采用高效液相色
谱法测定番泻叶中番泻苷 Ａ，Ｂ的含量，以两者之
和计算，为含量限度的依据。这种方法简单，重复
性好。作者对番泻叶中分到的５种主要化学成分
番泻苷Ａ（Ⅰ）、番泻苷 Ｂ（Ⅱ）、芹菜素６，８二Ｃ
葡萄糖苷（Ⅲ）、异鼠李素３Ｏβ龙胆二糖苷（Ⅳ）、
丁内未利葡萄糖苷（ｔｉｎｎｅｖｅｌｉｎｇｌｕｃｏｓｉｄｅ）（Ⅴ）含量
测定方法进行了研究，建立了 ＨＰＬＣ同时测定番泻
叶中５种成分含量的方法，结果表明本法快速、灵
敏、准确，可靠，重复性好，为番泻叶的质量控制提
供了依据。
１ 仪器与试药
美国Ｗａｔｅｒｓ公司高效液相色谱仪（ＷａｔｅｒｓＤｅｌｔａ
２６９５型泵，Ｗａｔｅｒｓ２９９６紫外检测器），Ｅｍｐｏｗｅｒ数据
处理系统。ＳＡＲＴＩＯＭＳ２００４ＭＰ型１／１０万电子分析
天平。
对照品Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ，Ⅳ，Ⅴ均为本实验室自制，经
ＭＳ，ＮＭＲ鉴定，ＨＰＬＣ测定纯度均在９８％以上。乙
腈为ＨＰＬＣ级（Ｆｉｓｈｅｒ公司），甲醇为色谱纯（天津四
友公司），水为重蒸水，其余试剂为分析纯。番泻叶
药材２００６年购自河北安国、广东、广西、江西、陕西、
云南药材市场以及北京金象、同仁堂、永安堂、天罡
普仁大药房，经由河南中医学院陈随清教授鉴定为
狭叶番泻Ｃ．ａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ的干燥小叶。
２ 方法与结果
２．１ 色谱条件 色谱柱 ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（４６ｍｍ×
２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相乙腈（Ａ）１％冰醋酸（Ｂ）梯
度洗脱见表１，流速１０ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２７０
ｎｍ，柱温４０℃。在该色谱条件下，样品中被测成分
能够达到基线分离，保留时间在４７ｍｉｎ内，色谱图
见图１。
２．２ 对照品溶液的制备 精密称取对照品Ⅰ２１０
ｍｇ，Ⅱ２４４ｍｇ，Ⅲ ０７７ｍｇ，Ⅳ３２７ｍｇ，Ⅴ０７５ｍｇ，
用５０％甲醇溶解并定容至１５０ｍＬ量瓶中，配制成
每毫升含Ⅰ１４００μｇ，Ⅱ１６２７μｇ，Ⅲ ５１３μｇ，Ⅳ
２１８０μｇ，Ⅴ５００μｇ混合对照品溶液，待用。
２．３ 供试品溶液的制备 称取样品（过６０目筛）
００５ｇ，精密称定，准确加入２５ｍＬ５０％甲醇，称重，
超声提取１５ｍｉｎ，放至室温，再称重，补足减失的重
量，过滤，弃去初滤液，取续滤液用０４５μｍ微孔滤
膜过滤即为供试品溶液，备用。
·３６３·
第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
表１ 梯度洗脱条件
ｔ／ｍｉｎ Ａ／％ Ｂ／％
０ １０ ９０
５ １５ ８５
２５ ２５ ８５
２８ １８ ８２
３０ ２０ ８０
４０ ２０ ８０
４５ ２５ ７５
图１ 样品及对照品色谱图
Ａ．供试品；Ｂ．对照品；１．芹菜素６，８二Ｃ葡萄糖苷；
２．异鼠李素３Ｏ龙胆二糖苷；３．番泻苷Ｂ；４．番泻苷Ａ；
５．ｔｉｎｎｅｖｅｌｉｎ葡萄糖苷
２．４ 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液５，
１０，２０，３０，４０，５０，６０μＬ依次进样，按上述色谱条件
测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标（Ｙ），对照品
进样量（μｇ）为横坐标（Ｘ），绘制标准曲线，回归方
程见表２。
表２ 回归方程与线性范围（ｎ＝７）
测定成分 回归方程 线性范围／μｇ
Ⅰ Ｙ＝１２６×１０６Ｘ－４３２×１０３ ００７０～０８４
Ⅱ Ｙ＝１２０×１０６Ｘ－３１２×１０３ ００８２～０９８
Ⅲ Ｙ＝１８５×１０６Ｘ－４２６×１０２ ００２６～０３０
Ⅳ Ｙ＝１２５×１０６Ｘ－２４５×１０４ ０１１０～１３０
Ⅴ Ｙ＝１５８×１０６Ｘ－６７５×１０３ ００２５～０３０
注：ｒ＝０９９９９
２．５ 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液 １０
μＬ，连续进样５次，在上述色谱条件下测定各对照
品峰面积５次积分值的 ＲＳＤ分别为：Ⅰ０３３％，Ⅱ
０８０％，Ⅲ ０３４％，Ⅳ０７８％，Ⅴ１３％，表明精密度
良好。
２．６ 稳定性考察 精密吸取混合对照品溶液，分别
在０，１，２，４，８，１２，２４，４８ｈ进样，在上述色谱条件下
测定，５种对照品在４８ｈ内峰面积积分值的ＲＳＤ分
别为：Ⅰ０８９％，Ⅱ０４２％，Ⅲ ０３５％，Ⅳ０４５％，Ⅴ
１５％，说明混合对照品溶液在４８ｈ内稳定性良好。
２．７ 重复性试验 取同一样品，称取５份，按２．３
项下操作制备供试液，准确吸取供试液 １０μＬ，进
样，测定峰面积，计算含量，测得５次的平均含量Ⅰ
０５５％，Ⅱ０８６％，Ⅲ ０１８％，Ⅳ１１２％，Ⅴ０２１％，
ＲＳＤ分别为：Ⅰ１６％，Ⅱ１８％，Ⅲ ２６％，Ⅳ１６％，
Ⅴ２３％，表明重复性良好。
２．８ 加样回收率试验 称取同一已知含量的样品
５份，每份００５ｇ，精密称定后，每份加入混合对照
品溶液２５ｍＬ，按２．３项下操作制备供试液，准确吸
取供试液１０μＬ，进样，在上述色谱条件下测定，计
算回收率，结果见表３。
表３ ５种成分加样回收率
测定
成分
样品含量
／ｍｇ
加入量
／ｍｇ
测得量
／ｍｇ
回收率
／％
平均值
／％
ＲＳＤ
／％
Ⅰ ０２９３ ０３５０ ０６４３ １０００ １０２１ １２３
０２９２ ０６５２ １０２９
０２９４ ０６５１ １０２０
０２９５ ０６５４ １０２６
０２９２ ０６５３ １０３１
Ⅱ ０４７７ ０４０７ ０８８７ １００７ １０２４ １４２
０４７６ ０８９０ １０１７
０４７８ ０９０２ １０４２
０４７９ ０９０１ １０３７
０４７５ ０８８９ １０１７
Ⅲ ００９３ ０１２８ ０２１８ ９７７ ９９７ １３１
００９２ ０２１９ ９９２
００９３ ０２２１ １０００
００９３ ０２２２ １００８
００９２ ０２２１ １００８
Ⅳ ０６８７ ０５４５ １２３３ １００２ ９８３ １４８
０６８６ １２２２ ９８３
０６９０ １２１５ ９６３
０６９１ １２３１ ９９１
０６８４ １２１６ ９７６
Ⅴ ０１０７ ０１２５ ０２３３ １００８ １０１３ １０６
０１０７ ０２３３ １００８
０１０７ ０２３３ １００８
０１０８ ０２３４ １００８
０１０７ ０２３６ １０３２
２．９ 样品测定 按２．３项下操作制备供试液，准确
吸取供试液１０μＬ，进样，在上述色谱条件下测定，
结果见表４。
表４ 各地区市售番泻叶药材质量分数 ％
样品来源 Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ
广东 ０４８ ０５９ ０１６ １０３ ００５
云南 ０４３ ０６８ ０１５ １０２ ０１５
江西 ０５１ ０７３ ０１７ １５８ ０１５
陕西 ０６６ １０２ ０２０ １０３ ０２１
广西 ０４５ ０５８ ０１７ ０７２ ００４
金象大药房 ０４７ ０７３ ０１７ ０９８ ０１６
永安堂 ０５６ ０９０ ０１５ １７１ ０２５
同仁堂 ０５３ ０８１ ０１８ １２７ ０２３
天罡普仁药店 ０５４ ０８５ ０２０ １６０ ０２１
安国 ０５５ ０８７ ０１９ １２３ ０２３
３ 讨论
曾应用乙腈１％冰醋酸（２０∶８０）和乙腈１％冰
醋酸（１５∶８５）流动相洗脱，效果不理想，使用前者
时，番泻苷Ｂ与异鼠李素３Ｏβ龙胆二糖苷两者的
峰形完全重合在一起，而使用后者时，番泻苷 Ａ与
·４６３·
第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８
ｔｉｎｎｅｖｅｌｉｎ葡萄糖苷的保留时间太长，峰形也不好。
经过筛选选用乙腈１％冰醋酸梯度洗脱，使得番泻
苷Ｂ与异鼠李素３Ｏβ龙胆二糖苷两者达到基线
完全分离。
对回流、冷浸、超声等３种提取方法进行比较，
结果超声提取１５ｍｉｎ较回流提取０５ｈ的提取效果
明显提高，而冷浸过夜方法则提取效果较差，加热时
间越长提取率明显降低，所以采用超声提取方法，推
测可能与番泻苷 Ａ，Ｂ遇热很不稳定有关。作者还
对不同的提取溶剂Ｈ２Ｏ，甲醇，３０％甲醇，５０％甲醇，
７０％甲醇进行考察，结果表明，用５０％甲醇提取率
最高。同时，对超声提取时间进行了１０，１５，２０，３０
ｍｉｎ的比较，结果１５ｍｉｎ即可提取完全，所以超声时
间选择１５ｍｉｎ。
番泻苷 Ａ，Ｂ是番泻叶泻下作用的主要活性成
分，此外番泻叶中还含有大量的黄酮类成分。本实
验为控制番泻叶的质量，建立了 ＨＰＬＣ定量检测方
法，同时测定了番泻苷 Ａ，Ｂ以及芹菜素６，８二Ｃ
葡萄糖苷、异鼠李素３Ｏβ龙胆二糖苷、ｔｉｎｎｅｖｅｌｉｎ
葡萄糖苷等番泻叶中３种主要黄酮类成分的含量，
结果表明，各地区市售番泻叶中异鼠李素３Ｏβ龙
胆二糖苷的含量最高，其次是番泻苷 Ａ，Ｂ，芹菜素
６，８二Ｃ葡萄糖苷、ｔｉｎｎｅｖｅｌｉｎ葡萄糖苷的含量。该
结果为番泻叶的进一步开发以及质量控制提供了参
考依据。
［参考文献］
［１］ 田 莉，刘 圣，陈象清，等．番泻叶导泻作用的药理学研究概
况［Ｊ］．基层中药杂志，２００４，１４（１）：５３．
［２］ ＳＨａｙａｓｈｉ，ＡＹｏｓｈｉｄａ，ＨＴａｎａｋａ，ｅｔａｌ．Ａｎａｌｙｔｉｃａｌｓｔｕｄｉｅｓｏｎｔｈｅ
ａｃｔｉｖｅｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｃｒｕｄｅｄｒｕｇｓ．ＩＶ．Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓｅｎｎｏ
ｓｉｄｅｓｉｎｓｅｎｎａａｎｄｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏ
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．ＣｈｅｍＰｈａｒｍＢｕｌ，１９８０，２８：４０６．
［３］ 中国药典［Ｓ］．一部．２００５：２８５．
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｉｖｅｐｒｉｍａｒｙｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎ
ＣａｓｓｉａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａｂｙＨＰＬＣ
ＷＵＱｉｕｐｉｎｇ２，ＷＡＮＧＺｈｕｊｕ１，ＴＡＮＧＬｉｙｉｎｇ１，ＦＵＭｅｉｈｏｎｇ１，ＨＥＹａｎ１，ＦＡＮＧＪｉｎｇ１，ＧＯＮＧＱｉａｎｆｅｎｇ２
（１．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ；
２．ＪｉａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｎａｎｃｈａｎｇ３３０００４，Ｃｈｉｎａ；
３．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢａｓｉｃＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＣｈｉｎａＡｃａｄｅｍｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００７００，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］ Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｒｉｍａｒｙｃｈｅｍｉｃａｌｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓｉｎｔｈｅｌｅａｖｅｓｏｆＣａｓ
ｓｉａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅＨＰＬＣｗｉｔｈＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｃｏｌｕｍｎｗａｓｕｓｅｄ，ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅ１％ ａｃｅｔｉｃａｃｉｄ
（１０∶９０１５∶８５１８∶８２２０∶８０２５∶７５）ｉｎａｇｒａｄｉｅｎｔｍａｎｎｅｒｗａｓｕｓｅｄａｓａｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ，ｗｉｔｈｆｌｏｗｒａｔｅｏｆ１ｍＬ·ｍｉｎ－１，ｃｏｌｕｍｎｔｅｍ
ｐｅｒａｔｕｒｅａｔ４０℃ ａｎｄｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈａｔ２７０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔ５ｅｆｅｃｔｉｖｅｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓａｌｓｅｐａｒａｔｅｄｗｅｌａｎｄ
ｓｈｏｗｅｄｇｏｏｄｌｉｎｅａｒｉｔｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｒａｐｉｄ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｃｒｅｄｉｂｌｅａｎｄｒｅｐｅａｔａｂｌｅ．Ｉｔｃａｎｂｅａｐ
ｐｌｉｅｄｔｏｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆＦｏｌｉｕｍＳｅｎｎａｅ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］ Ｃａｓｉａａｎｇｕｓｔｉｆｏｌｉａ；ｓｅｎｎｏｓｉｄｅＡ；ｓｅｎｎｏｓｉｄｅＢ；ａｐｉｇｅｎｉｎ６，８ｄｉＣｇｌｙｃｏｓｉｄｅ；ｉｓｏｒｈａｍｎｅｔｉｎ３Ｏβｇｅｎｔｉｏｂｉｏｓｉｄｅ；
ｔｉｎｎｅｖｅｌｉｎｇｌｙｃｏｓｉｄｅ；ＨＰＬＣ
［责任编辑 张宁宁
櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗
櫗
櫗
櫗
櫗
櫗
櫗
櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗櫗
櫗
櫗
櫗
櫗
櫗
櫗
櫗
毉
毉
毉
毉
］
投稿请登录《中国中药杂志》网站：
ｗｗｗ．ｃｊｃｍｍ．ｃｏｍ．ｃｎ；ｗｗｗ．中国中药杂志．ｃｏｍ
·５６３·
第３３卷第４期
２００８年２月
中 国 中 药 杂 志
ＣｈｉｎａＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭａｔｅｒｉａＭｅｄｉｃａ
Ｖｏｌ．３３，Ｉｓｓｕｅ ４
Ｆｅｂｒｕａｒｙ，２００８