全 文 ：络石藤高效液相色谱指纹图谱研究
刘义全１，于能江２，杨学东１，赵毅民２
（１．天津大学 药物科学与技术学院，天津 ３０００７２；
２．军事医学科学院 毒物药物研究所，北京 １００８５０）
［摘要］　目的：建立络石藤药材的高效液相指纹图谱，以评价络石藤药材的质量。方法：利用 ＨＰＬＣＶＷＤ方法，梯度洗
脱，测定了１４批络石藤样品。色谱条件为：ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），柱温３０℃；流动相Ａ
相为水，Ｂ相为甲醇，梯度洗脱（１０％～６０％ Ｂ），分析时间６０ｍｉｎ；流速０８ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２３０ｎｍ。结果：１４批络石藤
样品得到的高效液相指纹图谱有１９个共有峰，经相似度计算，１４批药材整体相似性较好，其中１０批药材之间的相似度较高，
另外４批药材相似度偏低。结论：络石藤药材的指纹图谱特征性及专属性强，可用于全面控制络石藤药材的质量。
［关键词］　络石藤；高效液相色谱；指纹图谱
［收稿日期］　２００８０９１３
［基金项目］　国家自然科学基金面上项目（３０３００４３５）
［通信作者］　于能江，Ｔｅｌ：（０１０）６６８７４６１７，Ｅｍａｉｌ：ｎｅｎｇｊｉａｎｇｙｕ＠
１６３．ｃｏｍ
　　络石藤为夹竹桃科植物络石 Ｔｒａｃｈｅｌｏｓｐｅｒｍｕｍ
ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ（Ｌｉｎｄｌ．）Ｌｅｍ．的干燥带叶藤茎。药材主
产河南、安徽、湖北、山东、广西和江苏等地。其味
苦，微寒，归心、肝、肾经。具有祛风通络，凉血消肿
的功效，用于风湿热痹，筋脉拘挛，腰膝酸痛，喉痹，
痈肿，跌扑损伤［１］。近年来，有文献报道从络石藤
中分离出具有明显防癌、抗癌的活性的化学成分，而
引起医药学界的注意［２］。并且，络石藤的乙醇提取
物在体内、体外均具有抗炎活性［３］。络石藤主要含
二苯丁酸内酯类木脂素和黄酮类化学成分［４］，其中
包括牛蒡子苷（ａｒｃｔｉｎ）、牛蒡子苷元（ａｒｃｔｉｇｅｎｉｎ）、络
石苷元（ｔｒａｃｈｅｌｇｅｎｉｎ）和络石苷元（ｔｒａｃｈｅｌｏｇｅｎｉｎ）等
木脂素类化学成分［５］以及芹菜素（ａｐｉｇｅｎｉｎ）、木犀
草素（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）和芹菜素７新橙皮糖苷（ａｐｉｇｅｎｉｎ７
Ｏｎｅｏｈｅｓｐｅｒｉｄｏｓｔｄ）等黄酮类化学成分［２］。此外，络
石藤中还含有络石苷 Ｆ（ｔｒａｃｈｅｌｏｓｐｅｒｏｓｉｄｅＦ）、络石
苷Ｂ１（ｔｒａｃｈｅｌｏｓｐｅｒｏｓｉｄｅＢ１）、络石苷 Ｄ１（ｔｒａｃｈｅｌｏ
ｓｐｅｒｏｓｉｄｅＤ１）和络石苷 Ｅ１（ｔｒａｃｈｅｌｏｓｐｅｒｏｓｉｄｅＥ１）
等三萜类化学成分［６］。目前，尚未见文献报道有关络
石藤药材及其制剂的指纹图谱研究。作者参照相关文
献［１５］，对不同产地的络石藤药材进行了指纹图谱研
究。
１　仪器与试药
Ａｇｉｌｅｎｔ１２００高效液相色谱仪，四元泵，ＶＷＤ检
测器，Ｇ１３２２Ａ自动脱气机，标准自动进样器，柱温箱，
Ａｇｉｌｅｎｔ１２００化学工作站；ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８
色谱柱（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）。甲醇为色谱纯
（Ｆｉｓｈｅｒ），其他试剂均为分析纯。对照品去甲络石苷
元（ｎｏｒｔｒａｃｈｅｌｏｇｅｎｉｎ）、络石苷元（ｔｒａｃｈｅｌｇｅｎｉｎ）、去甲
络石苷元（ｎｏｒｔｒａｃｈｅｌｏｇｅｎｉｎ）、穗罗汉松树脂酚（ｍａｔａｅ
ｒｅｓｉｎｏｌ）、络石苷（ｔｒａｃｈｅｌｏｇｅｎｉｎ）和牛蒡苷元（ａｒｃｔｉｇｅ
ｎｉｎ）均由本实验室提取分离并鉴定结构（经ＨＰＬＣ检
测，去甲络石苷对照品纯度９２４％，络石苷对照品纯
度９８６％，去甲络石苷元对照品纯度９１２％，穗罗汉
松树脂酚对照品纯度９０４％，络石苷元对照品纯度
９２２％，牛蒡苷元对照品纯度９３２％）。络石藤药材
由军事医学科学院毒物药物研究所马其云高级工程
师鉴定为夹竹桃科植物络石Ｔ．ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ的干燥带
叶藤茎，药材来源见表１。
２　方法与结果
２．１　色谱条件
ＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８色谱柱（４６ｍｍ×
１５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇水二元梯度洗脱，分
析时间６０ｍｉｎ，流速０８ｍＬ·ｍｉｎ－１，检测波长２３０
ｎｍ，柱温３０℃。梯度程序见表２。
２．２　供试品溶液的制备
精密称取络石藤药材粉末５０００ｍｇ，加５０％甲醇
２５ｍＬ浸泡过夜。次日称重，超声提取３０ｍｉｎ，然后用
５０％甲醇补足失重，过０４５μｍ微孔滤膜滤，即得。
２．３　对照品溶液的制备
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第３４卷第６期
２００９年３月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
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表１　络石藤药材的来源
Ｎｏ． 产地 来源 购买日期
１ 浙江　　 北京崇光药业有限公司　　　　 ２００６６１４
２ 安徽　　 北京四方中药饮片有限公司　　 ２００６５３１
３ 安徽　　 北京松兰饮片厂　　　　　　　 ２００６５３１
４ 山东　　 北京普生霖药业有限公司　　　 ２００６５１６
５ 浙江　　 北京琪景饮片厂　　　　　　　 ２００６６１５
６ 云南　　 北京市白塔寺药品经营分公司　 ２００６５１３
７ 广西　　 中国毫州市京皖中药饮片厂　　 ２００６４１９
８ 河南　　 北京双桥燕京中药饮片厂　　　 ２００６７１８
９ 江苏　　 　石家庄乐仁堂医药股份有限公 ２００７４０３
　 　 司中药饮片厂　　　　　　　　 　
１０ 浙江　　 天津市兴达药业有限公司　　　 ２００７３２６
１１ 四川　　 四川德仁堂中药饮片有限公司　 ２００７３３１
１２ 江苏　　 河北祁新中药颗粒饮片有限公司 ２００７４１３
１３ 四川广元 四川荷花池药材市场购买　　　 ２００７３３１
１４ 四川　　 重庆众景中药饮片有限责任公司 ２００７６１３
表２　流动相梯度洗脱程序
ｔＲ／ｍｉｎ 甲醇／％ 水／％
０００ １０ ９０
１５００ ３０ ７０
４０００ ４０ ６０
６０００ ６０ ４０
精密称取络石苷和去甲络石苷对照品各１００
ｍｇ，去甲络石苷元、穗罗汉松树脂酚、络石苷元和牛
蒡苷元对照品各５０ｍｇ，分别置于６个１０ｍＬ量瓶
中，加５０％甲醇溶解定容。然后每个对照品溶液精
密量取０９ｍＬ，混合至１０ｍＬ量瓶中，加５０％甲醇
定容，摇匀，即得。
２．４　指纹图谱的建立
２．４．１　测定方法　对照品溶液和供试品溶液进样
１００μＬ，按２．１项下色谱条件分析得到色谱图。以
络石苷的色谱峰（ｓ）的保留时间和峰面积为１，计算
其他各峰的相对保留时间和相对峰面积比值。
２．４．２　精密度考察　精密称取５号样品１份，按
２．２项下制备方法制备后，按２．１色谱条件进行分
析，连续进样６次，测得各共有峰相对保留时间、相
对峰面积的ＲＳＤ均小于１５％，说明精密度良好，符
合指纹图谱要求。
２．４．３　重复性考察　精密称取５号样品６份，按
２．２项下制备方法制备后，按２．１色谱条件进行分
析，测得各共有峰相对保留时间、相对峰面积的
ＲＳＤ均小于３０％，表明重复性较好，符合指纹图谱
要求。
２．４．４　稳定性考察　精密称取５号样品１份，按
２．２项下制备方法制备后，按２．１色谱条件进行分
析，分别在０，２，４，６，８，１２，２４，４８ｈ进样，测得各共
有峰相对保留时间、相对峰面积的 ＲＳＤ均小于
１５％。结果表明，络石藤样品溶液在常温下４８ｈ
内稳定，符合指纹图谱要求。
２．５　结果
２．５．１　络石藤指纹图谱　通过考察色谱柱、流动
相、检测波长、柱温的影响后优化所得的色谱图见图
１Ａ所示，在分析时间适中的前提下，各化学成分出
柱完全，色谱峰数目相对最多，而且峰形对称性好，
大多数主要色谱峰间实现了良好的分离，丰富地体
现了络石藤中的化学成分信息。
２．５．２　络石藤指纹图谱主要色谱峰中的化学成分
鉴定　与药材指纹图谱同样色谱条件下测定的对照
品ＨＰＬＣ色谱图见图１Ｂ所示，通过比对药材指纹
图谱和对照品指纹图谱中色谱峰的保留时间，鉴定
了络石藤药材ＨＰＬＣ指纹图谱中６，１１，１３，１６，１７，１９
号色谱峰中的化学成分为去甲络石苷、络石苷、去甲
络石苷元、穗罗汉松树脂酚、络石苷元和牛蒡苷元。
６．去甲络石苷；１１．络石苷；１３．去甲络石苷元；１６．穗罗汉松树
脂酚；１７．络石苷元１９．牛蒡苷元；其余色谱峰未鉴定。
图１　５号药材（Ａ）与对照品混合溶液（Ｂ）ＨＰＬＣ图
２．５．３　不同来源的药材指纹图谱及其相似度评价
结果　１４批络石藤药材的指纹图谱见图２所示，其
中１９个峰是各批药材所共有的。以共有峰中的络
石苷峰（１１号峰）为参照峰，求出所有共有峰的相
对保留时间和相对峰面积，结果见表３，４。
采用国家药典委员会颁布的中药色谱指纹图谱
相似度评价系统Ａ版１０版软件，以１９个共有峰的
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图２　１４批络石藤药材的ＨＰＬＣ图
峰面积进行相似度计算，用平均数表示其相关系数
依次为：０９４３，０９３４，０８５０，０９６１，０９０４，０９５９，
０９０５，０９５９，０９６１，０７８４，０９２３，０９５５，０７４４和
０８１３。结果表明，只有第３批、第１０批、第１３批和
第１４批药材的相似度偏低，其余１０批次药材的相
似度均较高。整体来说，市售络石藤药材的质量较
均一，并且由这１４批药材建立的指纹图谱具有代表
性和专属性，能够用来鉴别络石藤药材的真伪和控
制其药材质量。
表３　各样品峰的相对保留时间比值
Ｎｏ． １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ １９
１ ０４７４０４８２０５１９０６０５０６５００７２２０７４６０８０２０８６３０９５５１０００１０３０１１０２００００１２２８１４２９１４８５１５１５１６５８
２ ０４７５０５２２０００００６０６０６５００７２３０７４７０８０３０８６３０９５５１０００１０３０１１０３１２００１２２８１４３０１４８５００００１６５７
３ ０４７４０５１８０５２５０６０５０６４４０７２３０７４７０００００８６３０９５５１０００００００１１０３１２０３００００１４２８１４８３１５１４１６５６
４ ０４７５０５１９０５２６０６０６０６４８０７２３０７４７０８０２０８６４０９５５１０００１０３０１１０３１２０５１２２７１４２８１４８３１５１４１６５６
５ ０４７５０５１９０５２７０６０６０６４９０７２３０７４７０７９９０８６４０９５５１０００１０３１１１０３１２０６１２２７１４２９１４８４１５１４１６５６
６ ０４７５０５１９０５２７０６０６０６４９０７２３０７４８０８０２０８６４０９５５１０００１０３０１１０３１２０６１２２７１４２８１４８３１５１３１６５５
７ ０４７５０５１８０５２７０６０６０６４９０７２３０７４７０８０３０８６３０９５５１０００１０２９１１０３１２０７１２２７１４２８１４８３１５１３１６５４
８ ０４７５０５１９０５２７０６０６０６５００７２３０７４７０８０３０８６４０９５６１０００１０３０１１０３１２０９１２２７１４２８１４８３１５１３１６５４
９ ０４７４０５１８０５２７０６０６０６４９０７２３０７４７０８０２０８６３０９５５１０００１０３０１１０３１２０９１２２７１４２８１４８３１５１３１６５４
１０ ０４７５０５２００５３００６０６０６５００７２３０７４７０８０２０８６３０９５５１０００１０３０１１０３１２０９１２２７１４２７１４８２１５１２１６５３
１１ ０４７４０５１８０５３００６０６０６５２０７２３０７４７０８０１０８６３０９５５１０００１０３０１１０３１２０９１２２７１４２８１４８３１５１３１６５５
１２ ０４７５０５１９０５３００６０６０６５００７２３０７４７０８０３０８６４０９５５１０００１０３０１１０３１２０９１２２７１４２８１４８３１５１３１６５５
１３ ０４７１０５１８０５３００６０７０６５００７２３０７４１０８０３０８６３０９５５１０００１０２９１１０２１１９５１２２７１４２８１４８３１５１４１６５５
１４ ０４７５０５２６０５３４０６０６０６５００７２３０７４８０８０３０８６４０９５６１０００１０２９１１１９１１９５１２２７１４２９１４８４１５１４１６５６
表４　各样品峰的相对峰面积比值
样品 １ ２ ３ ４ ５ ６ ７ ８ ９ １０ １１ １２ １３ １４ １５ １６ １７ １８ １９
１ ０１０２００３８００７０００８７００５３０２８６００６２００６５０２１８０１７２１００００１２２００７５０００００１２０００８２０２６０００２３００３４
２ ０１３００１８２００００００８６００５７０３０９０１３１０１０４０１５４０３１１１００００１６６００３９００７５０１７４００４４０２５９００００００４５
３ ０１２２００９２０１３６０２０５０１６３０２１７０１２９００００００７８０１３１１００００００００２５２０３１２０００００１５８１０７６００９７００９２
４ ００５７００６２００６５０１２５００６３０２２７０１１０００５５０１２３０１１５１０００００８９０１２６０１８６００６５００７６０５３３００４３００７９
５ ０１０１００５６００４６００９７００４７０２９２００５５００５４０１１５０１０７１０００００６６０１５３００４５００２６００６００５１４００６３００９４
６ ００９９００５７００６６０１０７００５５０２５２０１０６００９４０２３２０１７１１００００１２０００８３００６２００９１００７６０３４４００４９０１２３
７ ００９７００５９００６９０１０９０１２００１５９０１１７００８００２０９０１６０１００００１２２０２２３０１２４０１５００２０４１２３８０１０６０２０９
８ ０１５７００４２０１２５００９８００８２０３２６０１１８０１３１０１７５０３５７１００００１９９００６２００４７０２２５０１１２０３５８００４８０１０４
９ ０１４７００５８０１０１０１１７００９１０３６１０１２８００９９０２０１０１９９１００００１２５００８６００８５００９５０１１６０４３０００５９０１１２
１０ ０２３６０１０１０１４６０１８７０２７００２１２０１６９０１１７０１７４０２００１００００１５２０５１２０００００１７１０６７１２７８２０２９００８６１
１１ ０２１３００７３０１１３０１７４０１３７０２３２０１６８０１４９０２１５０１９２１００００２１５０３３３０１５００１７５０３３２１１４６０１５３０２９７
１２ ０１７０００６５０１２５０１３０００９９０２７８０１２８０１４５０２６７０２３６１００００２２０００９６００９００１２２００８１０３２６００２９００５４
１３ ０１７１０５３００１４５０００００２０６０２３２０００００２０９０１６７０７４４１０００１５１９０２０２０３２７２５５２０２９３０５７９００００１０８３
１４ ０１０７０１９２０１２６００７６０１８４０１９６０１１００２２５０２０８０３７７１００００８５１０２４２０１３８０９５４０１３６０２７４０００００３１９
３　讨论
３．１　提取和色谱条件的考察
该实验通过考察不同提取方法、提取溶剂、剂料
比、提取时间、提取次数对络石藤主要木脂素成分的
提取效果后确定了以上的最优提取条件。通过考察
流动相及洗脱方式、检测波长、色谱柱、柱温等色谱
条件对指纹图谱中色谱峰数目、对称性、分离度及分
析时间的综合影响后优化确定了以上的色谱条件。
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３．２　指纹图谱的化学成分信息
指纹图谱是否含有丰富的化学成分信息决定了
指纹图谱的质量及其扩展应用价值，化学成分信息
的丰富不但可以说明指纹图谱是否涵盖了药材中的
化学成分类型以及色谱峰中化学成分的类型和结
构，而且，可以直接指出不同来源药材的主要区别化
学成分和为药效和毒性出现异常时提供最初的快速
化学成分基础。在后续的研究中将进一步利用
ＤＡＤ和ＥＳＩＭＳ的检测方法得到大部分主要色谱峰
的紫外吸收图谱、分子量和质谱裂解信息，通过与已
有化合物和文献资料进行比对推断出可能的化学结
构。
３．３　药材相似度结果的分析
从相似度结果可知，不同产地和来源的络石藤
药材具有较好的相似度，但第３，１０，１３，１４批药材的
相似度偏低，分析原因为第３批药材各化学成分含
量均较低，药材质量欠佳，第１０批药材各成分相对
含量与其他批次药材存在差异较大，第１３，１４批药
材指纹图谱类似，但与其他批次药材在形态和相对
含量上均存在明显差异。第１３，１４批药材均产自四
川，因此指纹图谱的差异与产地间可能存在一定的
相关性，需进一步扩大样本量，通过聚类分析等手段
进行分析验证。
［参考文献］
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［２］　西部三省，韩英梅．络石藤化学成分及其抗癌活性［Ｊ］．国外医
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ＳｔｕｄｙｏｎＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＴｒａｃｈｅｌｏｓｐｅｒｍｕｍｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ
ＬＩＵＹｉｑｕａｎ１，ＹＵＮｅｎｇｊｉａｎｇ２，ＹＡＮＧＸｕｅｄｏｎｇ１，ＺＨＡＯＹｉｍｉｎ２
（１．ＳｃｈｏｏｌｏｆＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７２，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙａｎｄｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ，ＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｉｌｉｔａｒｙＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００８５０，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｅｓｔａｂｌｉｓｈＨＰＬＣｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｆｏｒｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｏｆＴｒａｃｈｅｌｏｓｐｅｒｍｕｍｊａｓｍｉ
ｎｏｉｄｅｓ．Ｍｅｔｈｏｄ：ＴｈｅａｎａｌｙｓｉｓｗａｓｐｅｒｆｏｒｍｅｄｏｎａＺＯＲＢＡＸＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８ａｎａｌｙｔｉｃａｌｃｏｌｕｍｎ（４６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）ｗｉｔｈ
Ｈ２Ｏ（Ａ）ａｎｄｍｅｔｈａｎｏｌ（Ｂ）ａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅｓｉｎｇｒａｄｉｅｎｔｍｏｄｅ．Ｔｈｅｅｌｕｔｉｎｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｗｅｒｅ０－１５ｍｉｎ，ｃｈａｎｇｅｄｆｒｏｍ１０％ Ｂｔｏ３０％
Ｂ；１５－４０ｍｉｎ，ｔｏ４０％ Ｂ；４０－６０ｍｉｎ，ｔｏ６０％ Ｂ．Ｔｈｅｃｏｌｕｍｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓｓｅｔａｔ３０℃ ａｎｄｔｈｅｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ０８ｍＬ·ｍｉｎ－１
ｗｉｔｈｔｈｅｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｏｆ２３０ｎｍ．Ｒｅｓｕｌｔ：ＴｈｅＨＰＬＣｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＴ．ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ，ｓｈｏｗｉｎｇ１９ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃ
ｐｅａｋｓ，ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｆｒｏｍ１４ｌｏｔｓｏｆＴ．ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ．ＴｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｏｆｅｖｅｒｙｌｏｔｏｆＴ．ｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓｗａｓｃａｌｃｕｌａｔｅｄａｓｇｏｏｄｉｎｇｅｎｅｒａｌ，
ｔｈｅｓｉｍｉｌａｒｉｔｙｏｆ１０ｌｏｔｓｗａｓａｂｏｖｅ０９ａｎｄｔｈｅｏｔｈｅｒ４ｌｏｔｓｈａｄｌｏｗｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴｈｅｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔｏｆＴ．ｊａｓ
ｍｉｎｏｉｄｅｓｗｉｔｈｈｉｇｈｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙｃａｎｂｅｕｓｅｄｔｏｃｏｎｔｒｏｌｉｔｓｑｕａｌｉｔｙ．
［Ｋｅｙｗｏｒｄｓ］　Ｔｒａｃｈｅｌｏｓｐｅｒｍｕｍｊａｓｍｉｎｏｉｄｅｓ；ＨＰＬＣ；ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ
［责任编辑　王亚君］
·０３７·
第３４卷第６期
２００９年３月
　　　　　　 　 　 　 　 　　　　　　 　 　 　 　
Ｖｏｌ．３４，Ｉｓｓｕｅ　６
　Ｍａｒｃｈ，２００９