全 文 ：生姜超临界提取物标准指纹图谱研究
阎东海
k河南省中药研究所 o河南 郑州 wxssswl
≈摘要   目的 }建立生姜超临界提取物的标准指纹图谱 ∀方法 }采用 ‹ °≤o选用依利特 ≤t{色谱柱 kw1y °° ≅
uxs °°ox Λ°lo以乙腈 2s1th磷酸溶液为流动相梯度洗脱 o流速 t1s °# °¬±pt o检测波长 uz{ ±°o柱温 ux ε ∀结
果 }精密度 !稳定性 !重现性各实验图谱的相似度均大于 s1|∀结论 }可以将生姜超临界提取物的指纹图谱检查列入
质量控制标准 ∀
≈关键词   生姜 ~超临界提取物 ~指纹图谱
≈中图分类号   • u{wqt ≈文献标识码   „ ≈文章编号   tsst2xvsukusszltx2txux2sw
≈收稿日期   ussy2sv2us
≈基金项目   国家 /十五 0重大科技专项项目 kusst…„zst„vy2
t|l
≈通讯作者   3 阎东海 oר¯}ksvztlyvvxuyv{o∞2°¤¬¯}¼¤±§²±ª2
«¤¬|yv ƒ ¼¤«²²q¦²°q¦±
生姜在国内是药食两用植物 o被 5中国药典 6中
收载 ∀在国际上 o姜主要以提取物的形式作为食品
添加剂使用 ∀近年来 o姜超临界提取的精姜油等深
加工产品越来越受到推崇 o这必将为姜的食品 !药品
等产品开发以及出口带来新的生机和基础 ∀但长期
以来 o姜及其提取物因缺乏国际承认的质量标准 o严
重影响了姜相关产品的开发和出口创汇 ∀经研究提
取分离了 y2姜酚对照品 o建立了生姜超临界提取物
的指纹图谱检查法 o该方法稳定 !可靠 o可用于生姜
超临界提取物的质量控制 ∀
1 仪器和试药
岛津 ≤ p ts„液相色谱仪系统 o≤ ¤¯¶¶p √³工
作站 ∀乙腈 !甲醇为色谱纯 ~磷酸等其他试剂均为分
析纯 ~y2姜酚对照品 o自制 o结构经碳谱和氢谱鉴定 o
分子式为 ≤tz ‹uw ’v o归一化法测定含量为 |{1zvh ∀
生姜超临界提取物 o河南宛西制药有限公司试制与
生 产 o 批 号 ussvtusyo ussvtutxo usswstsxo
ussxswtuo ussxsxuvo ussxsvtto ussxsztxo
ussvttuyoussvstuxousswtst{∀
2 方法与结果
2q1 色谱条件及色谱系统适用性实验 用依利特
≤t{色谱柱 kw1y °° ≅ uxs °°ox Λ°lo检测波长 uz{
±°o流速 t °# °¬±pt o柱温 ux ε o流动相采用 „乙
腈 o… s1th磷酸溶液 o按梯度洗脱 o梯度程序见表 t∀
表 t 梯度洗脱程序
τr°¬± „ rh τr°¬± „ rh
s vs xx |s
ux xx1u {s |s
wx y| {t vs
xs zu tss vs
在上述色谱条件下 o进样 y2姜酚对照品溶液 o
仪器自动计算色谱柱的理论塔板数不低于 t万 ∀
2q2 供试溶液的制备
对照品溶液的制备 精密称取 y2姜酚对照品 x
°ªo置 ts °棕色量瓶中 o加甲醇溶解并稀释至刻
度 o摇匀 o即得 k每 t °中含 y2姜酚 s1x °ªo避光低
温保存 l∀
供试品溶液的制备 精密称取生姜超临界提取
物约 s1u ªo置 ts °棕色量瓶中 o用甲醇溶解并稀
释至刻度 o摇匀 ∀精密吸取上述溶液 t °o置 x °
棕色量瓶中 o用甲醇溶解并稀释至刻度 o摇匀 o用微
孔滤膜过滤 o即得 ∀
2q3 参照物的选择及指纹图谱色谱峰的标定 由
于生姜超临界提取物中 y2姜酚为其主要有效成分 o
并且色谱峰稳定 o重现性好 o又因 y2姜酚峰处在图
谱中部 o有助于色谱峰的辨认 o因此选择 y2姜酚作
为生姜超临界提取物指纹图谱的参照物 o指纹图谱
中约 uv °¬±处的强峰为 y2姜酚色谱峰 o见图 tou∀
2q4 超临界提取物与生姜原料药材指纹图谱相关
性比较 取安徽临泉产生姜 o切片烘干 o制备生姜超
临界提取物 ∀按本研究规定的指纹图谱测定方法 o
测定获得生姜和提取物的指纹图谱进行比较 ∀结
#xuxt#
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ussz年 {月
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Χηινα ϑουρναλοφ Χηινεσε Ματερια Μεδιχα
∂ ²¯qvuo Œ¶¶∏¨ tx
„∏ª∏¶·o ussz

图 t y2姜酚对照品指纹图谱
图 u 生姜超临界提取物指纹图谱
果 }超临界提取物与生姜原料药材指纹图谱相关性
较好 o见图 vow∀
图 v 生姜原料药材的指纹图谱
图 w 生姜超临界提取物指纹图谱
2q5 全信息考察实验 进样供试品溶液 o按照本研
究规定的流动相梯度程序运行后 o继续用乙腈运行
至 txs °¬±o记录色谱图 o考察全信息情况 ∀结果表
明 o记录图谱 |s °¬±o信息已经完全 o见图 x∀
图 x txs °¬±色谱图 k全信息考察 l
2q6 空白对照实验 以甲醇代替供试品溶液 o进样
测定 o得空白对照指纹图谱 ∀结果表明 o空白对照指
纹图谱基线波动在 p t ∗ uo按姜指纹图谱正常测定
时的坐标比例 o基本上是一条直线 o见图 y∀
2q7 稳定性试验 依法制备成供试品溶液 t份 o分
别在不同时间点 ksowo{otuotyous «l进样分析 o然
后导入由国家药典会颁布的中药色谱指纹图谱相似

图 y 空白对照指纹图谱
度评价系统 „版处理 o结果共得到 tw个共有峰 o各
共有峰保留时间的 • ≥⁄kh l分别为 v1xtot1tvoso
s1tuos1s|os1ttos1ttos1tos1s{os1tvos1tuos1svo
s1stoso均小于 xh o说明保留时间相当稳定 ~各共
有峰峰面积的 • ≥⁄kh l分别为 z1vtov1s{ou1zo
v1|uo u1u{o u1{{o v1xuo x1x|o z1xyo u1svo v1|xo
w1twots1{yot1uyo其中有 t号 !z号 !{号 !tu号共 w
个共有峰峰面积的 • ≥⁄kh l大于 xh o但其单峰面
积占总峰面积的比例很小 o对指纹图谱的总体相似
度影响很小 ~各图谱及按平均法生成的对照指纹图
谱相互之间的相似度在 s1||| ∗ t1ssso说明配置好
的供试品溶液在 us «内测定 o指纹图谱非常稳定 ∀
2q8 仪器的精密度 依法制备成供试品溶液 t份 o
在仪器上连续进样分析 x次 o然后导入由国家药典
会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统 „版
处理 o结果共得到 tw个共有峰 o各共有峰保留时间
的 • ≥⁄kh l分别为 w1sxosos1sxosos1suosos1tzo
s1swos1swosos1svos1swososo均小于 xh o说明保
留时间相当稳定 ~各共有峰峰面积的 • ≥⁄kh l分别
为 tu1v|ou1{wov1wzov1syou1zuov1uvox1txots1syo
z1uzou1wzo|1v|ou1uwoz1uuov1uwo其中有 t号 !z
号 !{号 ! |! tt号 ! tv号共 y个共有峰峰面积的
• ≥⁄h大于 xh o但其单峰面积占总峰面积的比例很
小 o对指纹图谱的总体相似度影响很小 ~各图谱及按
平均法生成的对照指纹图谱相互之间的相似度在
s1||{ ∗ t1ssso表明仪器的精密度好 ∀
2q9 重现性试验 依法制备供试品溶液 x份 o在仪
器上进样分析 o然后导入由国家药典会颁布的中药
色谱指纹图谱相似度评价系统 „版处理 o结果共得
到 tw个共有峰 o各共有峰保留时间的 • ≥⁄h分别为
y1|osos1s|os1ttos1twos1txos1tuos1syos1syo
s1syos1sxos1svos1stoso只有 t号峰大于 xh o因为
t号峰为相对保留时间和相对峰面积都非常小的不
规则峰 o容易引起相对误差偏大 o但其对指纹图谱的
总体相似度影响很小 o其他峰保留时间都相当稳定 ~
各共有峰峰面积的 • ≥⁄h 分别为 tu1xtov1yzo
w1svo u1yvo v1vzo v1|uo x1{|o z1|yo x1zzo u1{vo
w1twov1wzov1zzou1|to其中有 t号 !z号 !{号 !|号
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„∏ª∏¶·o ussz
共 w个共有峰峰面积的 • ≥⁄h大于 xh o但其单峰
面积占总峰面积的比例很小 o对指纹图谱的总体相
似度影响很小 ~各图谱及按平均法生成的对照指纹
图谱相互之间的相似度在 s1||y ∗ t1ssso表明该方
法的重现性好 ∀
2q10 ts批生姜超临界提取物指纹图谱与标准指纹
图谱的建立 分别制备 ts个批号的生姜超临界提取
物供试品溶液 o按照上述色谱条件进样获得各指纹图
谱 o见图 zo将各指纹图谱导入国家药典会颁布的相
似度计算软件 o按平均法生成标准指纹图谱 o见图 {∀
图 z ts个批号的生姜超临界提取物指纹图谱
图 { 生姜超临界提取物标准指纹图谱
2q11 ts批生姜超临界提取物指纹图谱相似度
将 ts批生姜超临界提取物指纹图谱数据导入由国

家药典会颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统
„版处理 o结果各指纹图谱之间的相似度在
s1{y{ ∗ t1ssso各指纹图谱与按平均法生成的标准
对照指纹图谱之间的相似度在 s1|ys ∗ s1||w∀
2q12 特征指纹峰群及其峰强度的标定 将 ts批
生姜超临界提取物指纹图谱数据导入由国家药典会
颁布的中药色谱指纹图谱相似度评价系统 „版处
理 o将匹配数超过 y的色谱峰作为特征指纹峰 o据此
共标定 tw个特征指纹峰 o这 tw个色谱峰作为生姜
超临界提取物指纹图谱特征峰群 ∀再根据各单峰面
积占总峰面积的百分比 o将占总峰面积 ∴ ush者称
为超强峰 o∴ tsh 而  ush 者为强峰 o∴ xh 而 
tsh者为弱峰 o xh者为微弱峰 o据此又将 tw个特
征指纹峰分为 u个超强峰 kv号 otw号 lox个弱峰 kw
号 ox号 oy号 oz号 ots号 l和 z个微弱峰 kt号 ou
号 o{号 o|号 ott号 otu号 otv号 l∀特征指纹峰群
总面积占总峰面积的 |y1x|h ∀
2q13 特征指纹峰面积的比值 以参照物峰面积作
为 to对各特征指纹峰面积与参照物峰面积的比值统
计见表 t∀结果不同批次的生姜超临界提取物各特
征指纹峰面积的比值差异较大 o说明不同批次产品各
成分的相对量上有较大差异 ∀指纹图谱反映的是整
体概貌 o这些个体成分量上的差异对指纹图谱的整体
相似度影响不大 k见 2111o相似度在 s1|ys ∗ s1||wl∀
表 t 生姜超临界提取物各特征指纹峰面积的比值
‘²1
特征
≥t ≥u ≥v ≥w ≥x ≥y ≥z ≥{ ≥| ≥ts
• ≥⁄
rh 图谱
t s1sss s1sss s1sss s1stv s1sty s1ssz s1ssz s1stx s1ss| s1stx zx1vv s1ss{
u s1svw s1suz s1sys s1sss s1sss s1sss s1svx s1syt s1sss s1sys |t1sv s1suy
v t1sss t1sss t1sss t1sss t1sss t1sss t1sss t1sss t1sss t1sss p t1sss
w s1twt s1uvw s1uw| s1utt s1usz s1utw s1twt s1uxu s1uvw s1uxt t{1t{ s1usz
x s1tuy s1s|s s1t{{ s1vyu s1v{v s1v{z s1tux s1t{t s1s|s s1t{z xv1yx s1t|{
y s1tsv s1uvv s1uy{ s1uus s1uuw s1usu s1s|t s1uzu s1uuy s1uy| u|1sv s1t||
z s1sss s1sss s1vts s1u|y s1u|v s1vsw s1ut{ s1vtt s1vt{ s1vux xt1v{ s1ut{
{ s1sss s1s|v s1tsx s1sy| s1szu s1szv s1sss s1s|x s1s|w s1tsy xv1sw s1syw
| s1sss s1sss s1svx s1s{w s1szx s1s{v s1sux s1svu s1sty s1svw z{1ys s1svx
ts s1s|y s1v|u s1wvu s1vus s1vsw s1vtx s1s|t s1wvu s1v|s s1wvv v{1vu s1u||
tt s1sss s1sxy s1sxv s1sv| s1svv s1sv{ s1stw s1sxv s1sxu s1sxw wy1sw s1svz
tu s1sss s1sxs s1swy s1sws s1sv{ s1swv s1sss s1swx s1sw| s1swz xs1|y s1svv
tv s1sy| s1sww s1s{| s1s{t s1syy s1syy s1sss s1s|| s1sww s1s{w wu1xz s1sx|
tw s1|uu t1uwu u1y|| t1w|z t1vyz t1ust s1{{y u1{{u t1uvv u1yuy ww1ts t1xs|
2q14 非特征峰面积 将匹配数少于等于 x的的色
谱峰作为非特征指纹峰 o非特征峰占总峰面积的百
分比统计结果 }在按平均法生成的对照指纹图谱中 o
各非特征峰占总面积的比在 s1svh ∗ t1x|h ~ts批
生姜超临界提取物各指纹图谱中 o非特征峰占总峰
面积的百分比均不大于总峰面积的 tsh ∀
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3 结论
在上述色谱条件下 o分别精密吸取参照物溶液
与供试品溶液各 ts ˏo注入高效液相色谱仪 o分别
记录色谱图 |s °¬±∀供试品指纹图谱与对照指纹图
谱经计算机模拟相似度计算软件计算相似度均应大
于 s1|∀此方法结论可作为生姜超临界提取物的指
纹图谱检查列入质量控制标准 ∀
4 讨论
4q1 色谱柱选择 实验比较了 v种不同厂家 !不同
性质的色谱柱对生姜超临界提取物样品溶液的分离
效果 o结果依利特 ≤t{色谱柱和 „ª¬¯¨ ±·≥… ≤t{色谱柱
均比较理想 o其色谱图基线较平 o分离较好 o且各色
谱峰分布均匀 o峰型较锐 ~„¬¦«µ²°…²±§2„± ≤t{色谱
柱得到的色谱图峰型不锐 o峰不对称 o时间拖后 ∀又
考虑到依利特色谱柱容易得到 o价格便宜 o实验室使
用较普遍 o所以 o生姜超临界提取物的指纹图谱测定
选用依利特 ≤t{色谱柱 ∀
4q2 检测波长的选择 实验首先测定了 y2姜酚的紫
外吸收光谱 o其在 uz{ ±°处有最大吸收 ∀参考 y2姜
酚的紫外吸收光谱 o实验分别记录比较了生姜超临界
提取物在不同波长 kuxsouysouzsouz{ou|sovssovtso
vusovvsovwsovxsovysovzs ±°l的指纹图谱 o结果以
uz{ ±°波长得到的指纹图谱为最佳 o其色谱图基线
较平 o色谱信息较多 o色谱峰较锐 o色谱峰分离较好 o
且各色谱峰分布均匀 ∀所以 o生姜超临界提取物指纹
图谱测定选择 uz{ ±°为检测波长 ∀
4q3 流动相系统的选择 比较了乙腈 2s1th磷酸溶
液 o甲醇 2s1th磷酸 o乙腈 2vs °°²¯ # pt醋酸盐缓冲
溶液 k³‹ w1sl等流动相系统对生姜超临界提取物指
纹图谱的分离效果 ∀结果以乙腈 2s1th磷酸溶液和
乙腈 2vs °°²¯ # pt醋酸盐缓冲溶液 k³‹ w1sl均较
好 o其色谱图基线较平 o分离较好 o各色谱峰分布均
匀 o峰型较锐 ∀考虑到 vs °°²¯# pt醋酸盐缓冲溶液
k³‹ w1sl配置较麻烦 o所以 o生姜超临界提取物指纹
图谱测定选择乙腈 2s1th磷酸溶液为流动相 ∀
4q4 稳定性 !精密度 !重现性实验中 o部分峰的
• ≥⁄h较大 o原因是这些色谱峰峰面积很小 o容易引
起较大的相对误差 o这符合实情 ∀曾见一些报道笼
统地介绍说 }稳定性 !精密度 !重现性实验的各相对
峰面积均小于 vh或均小于 xh o又没有列出具体数
据 o如果其指纹图谱中出现有峰面积较小的弱峰
k这种现象是经常的 lo其真实性是值得怀疑的 ∀
4q5 作者检查分析了 ts个不同批次的生姜超临界
提取物的指纹图谱 结果各特征指纹峰面积的比值
差异较大 o说明不同批次产品各成分个体的相对量
上有较大差异 ∀但指纹图谱反映的是整体概貌 o这
些个体成分量上的差异对指纹图谱的整体相似度影
响不大 ots个不同批次的生姜超临界提取物的指纹
图谱相似度仍在 s1|ys ∗ s1||w∀也曾见一些报道 o
检查 ts批或 ts批以上不同批次 k甚至不同品种 !不
同产地 l的药材 o结果各共有指纹峰面积的比值的
• ≥⁄h竟然小于 s1to这也是值得怀疑的 ∀
Στυδψ ον ΗΠΛΧ φινγερπριντ οφ ΣΦΕ γινγερ εξτραχτ
≠ „‘⁄²±ª2«¤¬
(Ηεναν Ινστιτυτε οφ ΤραδιτιοναλΧηινεσε µ εδιχινε, Ζηενγζηου wxsssw, Ηεναν)
[ Αβστραχτ] Οβϕεχτιϖε: ײ ¶¨·¤¥¯¬¶«¤¶·¤±§¤µ§©¬±ª¨ µ³µ¬±·²©≥ƒ∞ ª¬±ª¨ µ ¬¨·µ¤¦·q Μετηοδ : ‹ °≤ ° ·¨«²§º¤¶∏¶¨§º¬·« ¨¯¬·¨
«¼³¨ µ¶¬¯ ’⁄≥ ¦²¯∏°± kw1y °° ≅ ux ¦°o x Λ°l~ °²¥¬¯¨ ³«¤¶¨ º¤¶¤¦¨·²±¬·µ¬¯¨ 2s1th ³«²¶³«²µ¬¦¤¦¬§¶²¯∏·¬²± °¬¬·∏µ¨ ¬± ªµ¤§¬¨±·
°²§¨ º¬·«¤©¯²º µ¤·¨ ²©t1s °# °¬±pt ~ §¨ ·¨¦·¬²± ¯¨ ±ª·«º¤¶u{s ±°~ ¦²¯∏°± ·¨°³¨ µ¤·∏µ¨ º¤¶ux ε q Ρ εσυλτ: ׫¨ ¶¬°¬¯¤µ¬·¼ ²© √¨2
µ¨¼ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·¶º¤¶¥¤ªª¨ µ·«¤± s1| ¬± ³µ¨¦¬¶¬²± ·¨¶·¶o ¶·¤¥¬¯¬·¼ ·¨¶·¶¤±§µ¨³¨ ¤·¬²± ·¨¶·¶q Χονχλυσιον: ׫¨ ° ·¨«²§¦¤± ¥¨ ∏¶¨§©²µ·«¨
∏´¤¯¬·¼ ¦²±·µ²¯ ²©≥ƒ∞ ª¬±ª¨ µ ¬¨·µ¤¦·q
[ Κεψ ωορδσ] ª¬±ª¨ µ~ ≥ƒ∞ ¬¨·µ¤¦·~ ©¬±ª¨ µ³µ¬±·
≈责任编辑 鲍 雷  
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