全 文 ：一测多评法在冠脉康胶囊多种成分检测
中的应用研究
邹桂欣，尤献民，张 颖，王光函，姜 鸿
（辽宁省中医药研究院，辽宁 沈阳 １１００３４）
［摘要］ 目的：将适合于中药特点的的利用１个对照品同步测定多组分的分析方法首次应用于中药复方制剂
的质量控制中。方法：以葛根素为指标，建立冠脉康胶囊中该成分与大豆苷元及丹酚酸Ｂ的相对校正因子，用校正
因子计算大豆苷元及丹酚酸Ｂ的含量，同时对一测多评的计算与外标法实测值进行比较，并对不同品牌填料及不
同长度的色谱柱进行考查，评价一测多评法在复方制剂中应用的准确性和科学性。结果：建立了冠脉康胶囊的含
量控制方法，方法准确性评价结果表明，利用一测多评法在不同色谱柱的计算值与外标实测值之间没有显著性差
异。结论：用本法可不提供大豆苷元及丹酚酸Ｂ的对照品，只采用葛根素对照品即可同时控制三者的含量，适合中
药的多指标质量评价模式的要求。
［关健词］ 一测多评；中药复方制剂；ＨＰＬＣ；冠脉康胶囊；校正因子
［中图分类号］Ｒ２８４．１ ［文献标识码］Ａ ［文章编号］１００１５３０２（２００８）１５１８２８０４
［收稿日期］ ２００８０１１４
［基金项目］ 辽宁省科委课题（２００３２５００７）
［通讯作者］ 尤献民，Ｔｅｌ：（０２４）８６８０３１７３，Ｅｍａｉｌ：ｙｏｕｘｉａｎｍｉｎ１１２０
＠１２６．ｃｏｍ
中药制剂的多中心多靶点特点使得单一成分或
指标难以表达中药的质量，并由此提出多成分的质
量控制模式，在多成分的质量控制模式中，需要用足
够的化学对照品，但由于中药的化学对照品分离难
度大或单体不稳定或供应价格过高等因素，使得中
药制剂中的单组分测定尚存在一定的难度，多组分
的质量控制更是难以进行。王智民［１］利用中药有
效成分内在的函数关系和比例关系，提出了“一测
多评”的想法，即只测定一个成分（对照品可得到
者），来实验多个成分（对照品难以得到或难供应）
的同步测定，并成功地进行了木通药材有效成分的
同步测定。本实验将“一测多评”的方法首次应用
于中药复方制剂冠脉康胶囊的质量控制中。
冠脉康胶囊由葛根、丹参等药材组成，葛根中的
异黄酮类成分葛根素、大豆苷元以及丹参中的酚酸
类物质丹酚酸 Ｂ等均为活性药理成分，其中葛根素
对照品较易得到，而丹酚酸 Ｂ对照品价格较高且供
应不足，本方法以葛根素对照品为指标成分，建立冠
脉康胶囊中该成分与大豆苷元及丹酚酸 Ｂ的相对
校正因子，用校正因子计算大豆苷元及丹酚酸 Ｂ的
含量，同时对一测多评的计算与外标法实测值进行
比较，对不同品牌填料及不同长度的色谱柱进行考
查、评价一测多评法在中药复方制剂中的准确性和
科学性。
１ 仪器与试药
Ａｇｌｉｅｎｔ１１００高效液相色谱仪，葛根素对照品
（批号０７５２２００１０８）、大豆苷元对照品（批号１５０２
２００１０１）、丹酚酸 Ｂ（批号１１１５６２２００３０２）均由中国
药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯（山东禹
王实业有限公司禹城化工厂，批号０６１２０６０７１），水
为蒸馏水，其他试剂为分析纯。
２ 方法与结果
２．１ 方法原理［１］
假设某样品中含有ｉ个组分Ｗｉ／Ａｉ＝ｆｉ（ｉ＝１，２，
…，ｋ，…，ｍ）①。式中Ａｉ为组分ｉ的峰面积；Ｗｉ为 ｉ
的组分浓度。选取其中一组分 ｋ为内标，建立组分
ｋ与其他组分 ｍ之间的相对校正因子。ｆｋｍ＝ｆｋ／
ｆｍ＝（Ｗｋ×Ａｍ）／（Ｗｍ×Ａｋ）②。由此可导出定量计
算公式：Ｗｍ＝（Ｗｋ×Ａｍ）／（ｆｋｍ×Ａｋ）③。式中 Ａｋ
为内标物峰面积，Ｗｋ为内标物浓度。Ａｍ为其他组
分ｍ峰面积；Ｗｍ为其他组分ｍ浓度。
２．２ 一测多评方法学考察
２．２．１ 色谱条件 色谱柱 ＵｌｔｉｍａｔｅＣ１８（４６ｍｍ×
２００ｍｍ，５μｍ），流动相 Ａ含 ００５％甲酸水Ｂ
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００５％甲酸甲醇，梯度洗脱程序见表１，流速１０ｍＬ
·ｍｉｎ－１，柱温２５℃，检测波长２６９ｎｍ。上述色谱
条件下，各组分分离度良好。见图１。
表１ 流动相梯度洗脱程序
ｔ／ｍｉｎ Ａ／％ Ｂ／％
０ ８０ ２０
２５ ４５ ５５
６０ ０ １００
Ａ．阴性液；Ｂ．对照品溶液；Ｃ．供试品；
１．葛根素；２．丹酚酸；３．大豆苷元
图１ 对照品、供试品及阴性液ＨＰＬＣ图
２．２．２ 对照品溶液的制备 分别精密称取葛根素、大
豆苷元及丹酚酸Ｂ对照品各适量分别置于１０ｍＬ的量
瓶中，制得各对照品的单一溶液。再分别精密吸取各
对照品适量，置同一１０ｍＬ量瓶中，甲醇溶解并稀释至
刻度，制得混合对照品溶液（葛根素０１８ｇ·Ｌ－１、丹酚
酸Ｂ００１６ｇ·Ｌ－１、大豆苷元００２４ｇ·Ｌ－１）。
２．２．３ 供试品溶液的制备 取冠脉康胶囊１０粒内
容物，混匀，取约０２ｇ，精密称定，置５０ｍＬ锥形瓶
中，精密加水２５ｍＬ，称定质量，超声处理３０ｍｉｎ，放
冷，再称定质量，用水补足减失的质量，滤过，滤液作
为供试品溶液。
２．２．４ 线性范围 精密吸取上述混合对照品溶液
２，４，８，１２，１６μＬ进样分析以进样量对峰面积积分
值进行回归处理，分别得葛根素、大豆苷元及丹酚酸
Ｂ回归方程 Ｙ＝６４０９４Ｃ－２７９（ｒ＝０９９９５），Ｙ＝
１４３２３Ｃ＋１６０３（ｒ＝０９９８５），Ｙ＝５３６９７Ｃ＋
１９９４８（ｒ＝０９９９５），其中 Ｙ代表各样品的峰面积
积分值，Ｃ分别代表葛根素、大豆苷元及丹酚酸Ｂ的
进样量，单位为 μｇ。三者在 ０３６～２８，００３２～
０２５６，００４８～０３８４μｇ线性关系良好。
２．２．５ 校正因子计算 以葛根素为内标，按２．１项
下公式②，分别计算葛根素对丹酚酸 Ｂ和大豆苷元
的校正因子，见表２。
２．２．６ 空白试验 按处方量称取各药材，除去丹
参、葛根药材，按制备工艺制备成阴性供试品，再按
表２ 葛根素对丹酚酸Ｂ和大豆苷元的校正因子
进样体积／μＬ ｆ葛／ｆ丹 ｆ葛／ｆ大
２ ０２２８ ８４５
４ ０２３３ ８４０
８ ０２２２ ８４９
１２ ０２２５ ８４６
１６ ０２２５ ８９０
供试品溶液的制备项下制备成供试品溶液，分别精
密吸取混合对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶
液各１５μＬ，分别注入液相色谱仪中，测定，图谱见
图中Ａ，Ｂ，Ｃ。试验结果表明，阴性供试液无干扰。
２．２．７ 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶
液１５μＬ，连续进样６次，记录峰面积，葛根素，丹酚
酸Ｂ和大豆苷元峰面积的 ＲＳＤ分别为 １２８％，
２４５％，２１６％，精密度试验结果良好。
２．２．８ 重复性试验 取冠脉康胶囊１０粒内容物，
混匀，取约０２ｇ，平行６份，精密称定，按供试品溶
液处理方法制备样品，测定，葛根素，丹酚酸Ｂ和大
豆苷元平均含量为９２３，０２２，０３３ｍｇ／粒，ＲＳＤ分
别为１３２％，２５１％，２３２％。
２．２．９ 加样回收率 取冠脉康胶囊１０粒内容物，
混匀，取约０１ｇ，平行６份，分别精密加入葛根素、
丹酚酸Ｂ及大豆苷元混合对照品水溶液（葛根素
２３１ｇ·Ｌ－１、丹酚酸 Ｂ５５ｍｇ·Ｌ－１、大豆苷元８２７
ｍｇ·Ｌ－１）各１ｍＬ，按供试品溶液品处理方法制备
供试品溶液，测定，计算，葛根素、丹酚酸 Ｂ及大豆
苷元的平均回收率分别为 ９６７１％，９５０２％，
９７２８％，ＲＳＤ分别为０９９％，２０７％，１５６％。
２．２．１０ 样品测定 分别精密吸取供试品、混合标
准品及单一标准品（葛根素）溶液各５，１０，１５μＬ注
入高效液相色谱仪，测定。分别采用一测多评法和
外标一点法计算冠脉康胶囊中葛根素，丹酚酸 Ｂ和
大豆苷元的含量，见表３。
表３ 冠脉康成品中葛根素、丹酚酸Ｂ及大豆苷元含量
ｍｇ／粒
批次 葛根素
丹酚酸Ｂ
一测多评法 外标法
大豆苷元
一测多评法 外标法
１ ９２３ ０２１９ ０２２０ ０３３１ ０３３６
２ ９１９ ０２１７ ０２１５ ０３３５ ０３３０
３ ９２５ ０２２１ ０２１７ ０３３３ ０３２９
试验结果表明，采用一测多评方法及外标法所
测得的冠脉康胶囊中葛根素、丹酚酸 Ｂ及大豆苷元
的含量基本一致，说明本方法可行。
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２．３ 一测多评方法耐用性和系统适应性评价
２．３．１ 色谱柱考察及峰专属性考察 取２．２．２项
下混合对照品溶液，进样 ５，１０，１５μＬ，测定，
按２．２．５项下计算葛根素对丹酚酸Ｂ和大豆苷元
的校正因子。本试验在 Ａｇｉｌｅｎｔ１１００高效液相色谱
系统上考察了不同填料、不同品牌及不同柱长的９
根色谱柱，结果见表４，５，各色谱峰的分离度及
拖尾因子见表６。
由表４可以看出，在不同的色谱柱填料及不同
柱长情况下所得到的校正因子基本一致。
表４ 不同色谱柱测得校正因子（ｎ＝３）
色谱柱
长度
／ｃｍ
校正因子
ｆ葛／ｆ丹 ｆ葛／ｆ大
Ｕｔｉｍａｔｅ ２０ １０６ １０１１
ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２ ２０ １０３ １０１５
ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８ ２５ １１０ １０２３
ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８ ２５ １０８ １０１７
ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８ ２０ １１２ １０１８
ＴｈｅｒｍｏＯＤＳＨｙｐｅｒｓｉｌ ２０ １０７ １０１４
ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８ １５ １０９ １００８
ＣｅｎｔｕｒｙＳＩＬＣ１８ＥＰＳ ２０ １０５ １０３９
ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ ２０ １０６ １０１２
表５ 各组分保留时间及相对照保留时间差（ｎ＝３）
色谱柱 ＲＴ葛根素 ＲＴ丹酚酸ＢＲＴ葛根素 ＲＴ丹酚酸Ｂ ＲＴ大豆苷元ＲＴ葛根素 ＲＴ大豆苷元
Ｕｔｉｍａｔｅ １２９７ １４１６ ２７１３ １７５８ ３０５５
ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ ２９７３ １３４４ ２３１７ １６１４ ２５８７
ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８ １６４４ １４１４ ３０５８ １７３５ ３３７９
ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８ １０５０ １３８１ ２４３１ １６５０ ２７００
ＨｙｐｅｒｓｉｌＣ１８ １１９２ １３４９ ２５４１ １６３４ ２８２６
ＴｈｅｒｍｏＯＤＳＨｙｐｅｒｓｉｌ １０４９ １３０７ ２３５６ １６６５ ２７１４
ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８ ９７７ １４３２ ２４０９ １６５３ ２６３０
ＣｅｎｔｕｒｙＳＩＬＣ１８ＥＰＳ １１８３ １３５０ ２５３３ １６７４ ２８５７
ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ １３８４ １３４９ ２７３３ １７８３ ３１６７
表６ 部分色谱柱各组分拖尾因子
色谱柱 ＲＴ葛根素 拖尾因子 ＲＴ丹酚酸Ｂ 拖尾因子 ＲＴ大豆苷元 拖尾因子
Ｕｔｉｍａｔｅ １２９６ ０９８ ２７１１ １０９ １７４７ １０１
１２９７ ０９９ ２７１２ １１１ １７４８ ０９８
１２９８ ０９８ ２７１６ １０７ １７６８ １０２
ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ２ ９５６ ０９８ ２３２０ １１４ ２５９１ ０９９
９７９ ０９９ ２３１８ １０２ ２５８４ ０９８
９８４ １０１ ２３１３ １１１ ２５８６ １００
ＤｉａｍｏｎｓｉｌＣ１８ １６６０ ０９６ ３０６７ １０９ ３３８４ １０１
１６４５ ０９９ ３０５６ １０６ ３３８１ ０９８
１６２７ １００ ３０５１ １０５ ３３７２ ０９９
ＥｃｌｉｐｓｅＸＤＢＣ１８ ９８１ ０９７ ２４１３ １０９ ２６３７ １０２
９７８ １０２ ２４０８ １０４ ２６２６ １０１
９７２ ０９９ ２４０６ １０９ ２６２７ １００
ＫｒｏｍａｓｉｌＣ１８ １３８０ ０９８ ２７３０ １０８ ３１４５ １０１
１３７４ ０９９ ２７３２ １１２ ３１８２ ０９９
１３９８ ０９９ ２７３７ １０６ ３１７４ ０９８
由表５可见，尽管不同的色谱填料及柱长会影
响到各检测组分的出峰时间，但参照王智民的色谱
法定位方法，即采用相对保留时间差进行定性，知道
标准峰的保留时间，加上相对保留时间差，即能够正
确判断出目标峰的准确峰位置。由表６可见，葛根
素及大豆苷元的拖尾因子接近１０，色谱峰对称度
较好，而丹酚酸Ｂ的色谱峰则略有后拖。
３ 讨论
本试验以冠脉康胶囊为例，通过方法学试验、方
法的耐用性试验及系统适应性试验，对“一测多评”
方法应用于中药复方制剂的技术适应性及可行性进
行了初步探讨。结果表明，采用一测多评法计算的
含量结果与常规的外标试验方法所得的含量没有显
著性差异，试验中在不同色谱柱上所得到的丹酚酸
Ｂ及大豆苷元的校正因子具有普适性，可以实现在
丹酚酸 Ｂ及大豆苷元对照品缺少的情况下，通过较
易得到的葛根素对照品与丹酚酸 Ｂ与大豆苷元之
间的相对保留时间差进行色谱峰进行定位，再利用
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葛根素对照品及相对校正因子计算含量，以实现对
中药复方制剂的多组分的质量控制。
本试验方法的关健是待测色谱峰的定位问题。
中药制剂的复杂性决定了ＨＰＬＣ图谱中色谱峰会较
多，因此如何在众多的色谱峰中将待测色谱峰准确
定位，是能否将“一测多评”方法成功应用的关健问
题。解决此问题有如下方法：一是为色谱方法，即利
用色谱峰的相对保留时间进行定位，此方法较为简
便，在待测化合物的化学性质相近的情况下使用，实
用性较好。二是光谱方法，同样的成分，在不同的色
谱柱及色谱仪器中的保留时间会有差异，但他们的
光谱性质相同或相似，能通过对所有不同的流出时
间点的光谱与纯物质之间的光谱时行比对，再结合
目标峰所在原色谱簇的保留时间信息，即能正确判
断出目标峰的准确峰位置 ［１］。三是光谱相关色谱
法，李博岩［２３］提出了光谱相关色谱的新概念，利用
联用色谱的光谱信息与色谱信息，判断复杂中药色
谱图中的组分相关性和表征不同实验条件下所得的
中药色谱图，从而实现仪器的系统误差的化学计量
学校准。基于光谱相关色谱的方法判断复杂中药色
谱图的组分相关性，实现同一中药样本在不同实验
条件下所得的色谱指纹图谱的相同组分保留时间漂
移的局部最小二乘校正，为合理评价指纹图谱的品
质提供较为实用的工具，也使“一测多评”法在复杂
中药制剂中的应用成为可能。本实验中色谱图中的
色谱峰相对较少，因此对待测峰的定位采用了第一
种方法，效果良好。
本实验首次将“一测多评”法应用于中药复方
制剂的含量测定中，为在中药对照品短缺的现实情
况下，对中药制剂多成分的质量控制进行有益的探
索。但目前该法还只能限于同一生产品种的初步快
速筛查，若要推广到整个中药复方制剂质量控制中，
尚需进一步研究。
［参考文献］
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［３］ 李博岩，梁逸曾，胡 芸，等．中药色谱指纹图谱组分保留时间
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Ｎｅｗｍｅｔｈｏｄｏｆｍｕｌｔｉｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎｂｙｏｎｅｍａｒｋｅｒｎｅｗｍｅｔｈｏｄｆｏｒ
ｑｕａｌｉｔｙｅｖａｌｕａｔｉｏｎｏｆＧｕａｎｍａｉｋａｎｇｃａｐｓｕｌａ
ＺＯＵＧｕｉｘｉｎ，ＹＯＵＸｉａｎｍｉｎ，ＺＨＡＮＧＹｉｎｇ，ＷＡＮＧＧｕａｎｇｈａｎ，ＪＩＡＮＧＨｏｎｇ
（ＬｉａｏｎｉｎｇＡｃａｄｅｍｙｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ１１００３４，Ｃｈｉｎａ）
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ｍｅｔｈｏｄｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｃｏｍｐａｒｉｎｇｔｈｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄｃｏｎｔｅｎｔｓｗｉｔｈｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔ：Ｔｈｅａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄｓｗｅｒｅｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ，ａｎｄ
ｉｔｈａｓｂｅｅｎｎｏｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｄｉｆｅｒｅｎｃｅｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｃａｌｃｕｌａｔｅｄｃｏｎｔｅｎｔｓａｎｄｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｃｏｎｔｅｎｔｓ．Ｃｏｎｃｕｌｓｉｏｎｓ：Ｔｈｅｍｅｔｈｏｄｃａｎｃｏｎｔｒｏｌ
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Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．
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［责任编辑 鲍 雷］
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