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Rapid determination of thiabendazole residue in barbary wolfberry fruit byion exchange chromatography and fluorescence detection

离子交换色谱-荧光检测法快速测定枸杞子中噻菌灵残留量



全 文 :StudiesonfurmaridacidandisofraxidincontentinSarcandraglabraof
diferentprovenances
MINFang1,2,SIJinping2,HUANGWenhua3,HUANGHuahong2,LOUShaoqing2,ZHUGuanquan4
(1.ZhejiangNormalUniversity,Jinhua321000,China;
2.CentreforResearchandDevelopmentofNaturalMedicines,ZhejiangFoestryUniversityLin'an311300,China;
3.InstituteofMedicinalPlantDevelopment,ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalColege,
Beijing100094,China;4.ZhejiangGuojingMedicineLtd.,Longquan323000,China)
[Abstract] Objective:TostudythecontentvariationoffurmaridacidandisofraxidininSarcandraglabrafrom21diferent
provenancesandprovidethebasisforresourceutilizationandqualityoptimizationofS.glabra.Method:HPLCmethodwasdeveloped
todeterminethecontentsoffurmaridacidandisofraxidinin330samplesofS.glabrawhichwerecolectedrespectivelyfrom21difer
entprovenances.Result:ThereweresignificantdiferencesinthecontentsofisofraxidinandfurmaridacidinS.glabrafromdiferent
provenances.Thecontentsofisofraxidinandfurmaridaciddroppedoffromlowaltitudetohighaltitude,whichwerealsoclosewith
longitudeandlatitude.ThecontentofisofraxidininS.glabraatcentralareaofnaturaldistributionwasthehighest.Thediferentparts
oftheplanthaddiferentresults,theinfluenceonthecontentsoftheacitivecomponentsinstemweremoreobviousthantheleaf.Con
clusion:Thissimple,accurateandreproduciblemethodcouldbeusetodeterminethecontentsoffurmaridacidandisofraxidininS.
glabra.TheresultsrepresentedthestatusofmedicinesqualityanddiferenceofChineseS.glabra.Theseagreedwiththetraditional
viewsthatthemedicinesqualityofSarcandraglabrainJiangxi,Fujian,Zhejiangwasbeter.Theseprovenanceswereconsideredas
importantareasofmedicinesbreedingandbasesbuildingonS.glabrainfuture.
[Keywords] Sarcanbdraglabra;HPLC;furmaridacid;isofraxidin;provenance;variation
[责任编辑 王亚君]
[收稿日期] 20070829
[基金项目] 西安理工大学校基金(108210717)
[通讯作者] 赵洁,Tel:(029)82066360,Email:redflyingbird@yahoo.com.cn
离子交换色谱荧光检测法快速测定枸杞子
中噻菌灵残留量
赵 洁1,何 强2,孔祥虹2,李建华2
(1.西安理工大学 理学院,陕西 西安 710048;
2.陕西出入境检验检疫局,陕西 西安 710068)
[摘要] 目的:建立离子交换色谱荧光检测法快速测定枸杞子中噻菌灵残留量。方法:样品用01%磷酸溶
液提取,采用LCSCX离子交换色谱柱(46mm×25cm,5μm)分离,以01mol·L-1磷酸二氢钾溶液(pH30)乙
腈(70∶30)为流动相,流速10mL·min-1,荧光激发波长307nm,发射波长359nm。结果:样品中噻菌灵能得到良
好的分离,在00005~002mg·L-1峰面积与质量浓度呈良好的线性相关(r=09999),回收率及重复性良好。
结论:该法可用于枸杞子中噻菌灵残留的检测。
[关键词] 噻菌灵;离子交换色谱;荧光检测;枸杞子
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第33卷第15期
2008年8月
         
    中 国 中 药 杂 志
ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
Vol.33,Issue 15
August,2008
[中图分类号]R284.1 [文献标识码]A [文章编号]10015302(2008)15185303
  枸杞子为茄科植物宁夏枸杞的干燥成熟果
实[1]。近些年为了防治病虫害而大量使用农药,所
造成的农药残留成为影响枸杞子安全使用的重要因
素。噻菌灵(thiabendazole),是一种高效低毒内吸性
苯并咪唑类杀菌剂,防病谱广,应用广泛。近年来,
测定噻菌灵残留的方法主要为高效液相色谱法和液
质联用法[25],但前处理都比较复杂,而对于枸杞子
中噻菌灵的残留检测未见有文献报道。
本研究建立了离子交换色谱荧光检测法快速
测定枸杞子中噻菌灵残留量。本方法简便、快速、准
确、可靠,对枸杞子中噻菌灵的分离良好,回收率及
重复性均符合农药残留测定要求。
1 材料
高效液相色谱系统:Agilent1200型,配四元泵、
荧光检测器、自动进样器及色谱数据处理工作站
(美国Agilent公司);SUPELCOSILTMLCSCX离子交
换色谱柱(46mm×25cm,5μm,美国 Supelco公
司);Branson超声仪(必能信超声上海有限公司);
微孔滤膜(045μm,中国奥联科技)。
枸杞子购自西安市药材市场,经西安交通大学
牛晓峰副教授鉴定为正品药材;噻菌灵对照品(纯
度≥99%,Sigma公司);乙腈(色谱纯,Fisher公
司);所用其他试剂均为分析纯;水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 SUPELCOSILTM LCSCX离子交换
色谱柱(46mm×25cm,5μm);流动相01mol·
L-1磷酸二氢钾溶液(磷酸调 pH至30)乙腈(70∶
30);流速10mL·min-1;色谱柱温度35℃;荧光
检测器;荧光激发波长307nm,发射波长359nm;进
样量50μL。应用上述条件,001mg·L-1的噻菌
灵对照品溶液及枸杞子阴性样品色谱图见图1。
1.噻菌灵
图1 噻菌灵对照品(A)及枸杞子阴性样品(B)HPLC图
2.2 样品处理 称取充分均质化的枸杞子样品
25g(精确到001g),加入01%的稀磷酸40mL,
振摇混匀,浸泡2h,超声提取20min,冷却至室温,
用乙腈定容至 5000mL,3000r·min-1离心 10
min,取上清液,过045μm微孔滤膜,进样测定。
2.3 线性关系考察 分别配制 00005,0001,
0002,0005,001,002mg·L-1的系列对照品溶液,
按2.1项下色谱条件进行测定,并以对照品浓度(X,
mg·L-1)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标作图,同时
用最小二乘法进行线性回归,得标准曲线回归方程
Y=80036X+55386,r=09999,在00005~002
mg·L-1噻菌灵浓度与峰面积值有良好的线性关系。
2.4 精密度与重复性 取对照品和供试品溶液,连
续进样6次,对照品和供试品中噻菌灵峰面积的
RSD分别为039%,193%,精密度良好。
按照2.2项下方法,平行称取6份含有噻菌灵
残留枸杞子样品,制备供试品溶液,依法进样测定,
计算含量,结果为 0055,0047,0050,0046,
0048,0052mg·kg-1,RSD682%,重复性良好。
2.5 加样回收率试验 为了考察方法的回收率,对
已知噻菌灵残留量的枸杞子样品进行加样回收试
验,按照2.2项下方法,平行称取15份,加标水平为
005,010,020mg·kg-1,每个水平 5个平行样
品,计算加样回收率,结果见表1,色谱图如图2。
表1 噻菌灵加样回收率(n=5)
加入量
/mg·kg-1
测得量
/mg·kg-1
回收率
/%
RSD
/%
005 0093±0006 868±595 686
010 0140±0006 893±379 425
020 0240±0009 925±365 395
  注:残留量均为0050mg·kg-1
1.噻菌灵
图2 枸杞子样品(A)和样品加标020μg(B)的HPLC图
2.6 检测限 将对照品溶液稀释进样,以10倍噪
音(S/N=10)计,本方法最小检出限为00002mg
·L-1。以称取25g枸杞子样品,定容 5000mL
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ChinaJournalofChineseMateriaMedica
       
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计算,枸杞子中噻菌灵残留的最低检出浓度为
0004mg·kg-1。
2.7 样品测定 利用本方法测定了9批枸杞子样
品,提取回收率与色谱分离均良好,其中1批检出有
噻菌灵残留(0050mg·kg-1),其余8批均未检出。
3 讨论
3.1 色谱条件的选择 由于枸杞子样品的基质比
较复杂,干扰峰众多,利用常用的C18色谱柱检测时,
噻菌灵与干扰峰不能够达到有效分离,本实验利用
噻菌灵具有阳离子活性的特点,选用强阳离子交换
树脂柱进行分离,分离效果良好(图2)。
在本方法的荧光条件下,噻菌灵的色谱响应非
常灵敏,是文献报道检测条件[2,5]下色谱响应值的
50倍左右,选用本荧光条件可以在不降低最低检出
限的条件下简化样品前处理。
在流动相选择时,考察了离子浓度及 pH对色
谱分离的影响。流动相中磷酸二氢钾溶液浓度由
01mol·L-1变为005mol·L-1时,噻菌灵出峰时
间后移至24min左右,峰形变宽,灵敏度降低。流
动相的pH对噻菌灵的出峰时间和分离效果影响较
大,磷酸盐的pH为30时,噻菌灵色谱保留时间为
115min左右,在枸杞样品中的分离良好,磷酸盐
pH升高至50,则出峰时间前移置至4min左右,与
前面的干扰峰重叠,不能分离,pH降低至25后能
有效分离,但峰形变宽,灵敏度下降,所以选用 pH
为30。
3.2 提取净化过程 在提取噻菌灵的过程中,将枸
杞子样品充分粉碎并加入01%的稀磷酸充分浸泡
能够显著提高噻菌灵的回收率,是因为枸杞子样品
富含多糖类物质,易吸潮结块,用01%的稀磷酸浸
泡可以使多糖溶解,样品被充分分散、润湿,从而使
回收率显著提高,同时用01%的稀磷酸提取可以
减少低极性组分的提出,降低色谱干扰。最后使用
乙腈定容,则可使定容液组成与色谱流动相相近,防
止样品在进样流动相析出沉淀物,保护色谱系统。
[参考文献]
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Rapiddeterminationofthiabendazoleresidueinbarbarywolfberryfruitby
ionexchangechromatographyandfluorescencedetection
ZHAOJie1,HEQiang2,KONGXianghong2,LIJianhua2
(1.ColegeofScience,Xi'anUniversityofTechnology,Xi'an710048,China;
2.ShaanxiInspectionandQuarantineBureauforImportandExportCommodities,Xi'an710068,China)
[Abstract] Objective:Todevelopedamethodforthedeterminationofthiabendazoleresiduesinbarbarywolfberyfruitbyion
exchangechromatography(IEC)withfluorescencedetection.Method:Thesampleswereextractedwith01% H3PO4.Chromato
graphicanalysiswasperformedonaSupelcosilLCSCX(46mm×250mm,5μm)columnelutedwith01mol·L-1KH2PO4(pH
30)acetonitrile(70∶30)anddetectionatλex=307nmandλem=359nm.Result:Thiabendazoleinmeasuredsampleswassepara
tedcompletely.Thecalibrationcurvewaslinearattherangeof00005002mg·L-1withgoodprecisionandaccuracy.Conslusion:
Theproposedmethodwassatisfactorilyappliedtotheanalysisofthiabendazoleresiduesinbarbarywolfberyfruit.
[Keywords]thiabendazole;ionexchangechromatography;fluorescencedetection;barbarywolfberyfruit
[责任编辑 王亚君]
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